首页 > 文献资料
-
放射联合基因治疗在肿瘤治疗中的研究进展
放射治疗是继手术治疗后应用广泛的肿瘤治疗方法之一,技术已经比较成熟,但长期以来,各种肿瘤的辐射抗性以及放疗过程中造成的肿瘤临近部位正常组织的损伤,一直制约着肿瘤放疗疗效与应用。基因治疗是目前肿瘤治疗的研究热点之一。目前更加实际的策略,就是与现有治疗手段相结合。基因治疗通过沉默异常细胞信号、DNA修复,促进免疫监视及细胞凋亡等增强辐射敏感性,降低放疗的辐射剂量,保护正常组织免受放射损害。另外,辐射诱导基因的成功构建也增强了基因治疗的靶向性和可控性。但目前的研究多在细胞水平,而且不同肿瘤的差异较大,本文就放射治疗联合基因治疗在以上各方面的研究进展做一综述。
-
运用抑制消减杂交构建辐射诱导EST库
目的 克隆并鉴定低剂量辐射诱导基因,为探讨低剂量辐射生物学效应分子机理提供有益信息。方法 0.5 Gy γ射线照射人胚肺细胞后,用抑制消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)构建低剂量辐射诱导EST库。用反向Northern杂交法对库中的EST片段进行筛选,挑取阳性克隆测序,并在GenBank序列数据库中进行同源性比较。结果 得到受照后表达升高90个EST序列,代表21个基因的转录产物,部分基因的功能已明确。从功能上分析,这些基因产物的生物学作用涵盖了细胞周期、信号转导、细胞骨架、代谢、蛋白合成等几个重要的细胞生物学代谢反应过程,显示出细胞对低剂量辐射反应过程的多样性。另外,实验还获得4个新cDNA序列。结论 利用抑制消减杂交技术,从辐射前后HEL细胞中,得到低剂量辐射诱导EST片段,它们与细胞周期、增殖、代谢、信号转导、应激反应等相关,这些基因可能在细胞的低剂量辐射效应中起到重要作用。
-
一低剂量辐射诱导新基因的转录调控和初步功能分析
目的克隆低剂量辐射诱导基因,研究辐射对其转录调控作用和生物学功能.方法用mRNA差异显示技术分离辐射诱导表达基因,用RACE技术获取cDNA旁侧序列,Northern杂交分析基因的转录调节,生物信息学分析基因的结构和功能.结果获得包括3'端在内的辐射诱导新基因LRIGx的cDNA片段,序列同源性比较显示与人染色体20q11.2-12一段DNA高度同源(>99%).Northern杂交结果揭示该基因转录子全长约8.5 kb,在0.2 Gy照射后2 h出现诱导表达,4 h后转录子水平为对照细胞的5倍多,也受0.02 Gy更低剂量照射诱导表达.2 Gy大剂量照射后1 h出现短暂诱导表达,但不如低剂量照射明显,2 h后恢复正常水平.生物信息学分析结果显示该基因编码产物含有解旋酶活性保守区.结论分离鉴定出一低剂量辐射反应基因,其编码蛋白可能参与DNA代谢(如修复)等细胞辐射反应过程.
-
Egr-1启动子基因调控FLT3配基基因表达的实验研究
目的探索辐射诱导基因调控序列启动造血生长因子基因表达及观察其对造血恢复的作用.方法本实验将带有Egr-1调控序列启动的FLT3配基(FL)和EGFP双顺反子基因表达载体(Egr-EF)转染骨髓基质细胞系HFCL(称HFCL/EF);用RT-PCR鉴定细胞内目的基因的mRNA表达;采用FACS观察EGFP绿色荧光表达的阳性细胞;用ELISA方法检测HFCL/EF细胞培养上清FL的含量;观察HFCL/EF培养上清液对CD34+细胞的增殖作用.结果在HFCL/EF细胞中证实有外源性基因EGFP和FL的整合和表达,在辐照16h后的HFCL/EF细胞培养上清液中表明FL含量较照射前明显增高(P<0.01);同时证实辐射10d后HFCL/EF培养上清液对CD34+造血祖细胞的作用较辐射前具有明显的扩增作用(P<0.01).结论Egr-1调控序列启动的造血生长因子基因在辐射后表达明显增高并促进造血祖细胞增殖作用.