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肾脏近端小管细胞内血管紧张素II的研究进展
细胞内的血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)包括细胞内合成的以及通过受体介导内陷入细胞外源性的Ang II,可通过与细胞内的受体相结合,诱导细胞产生各种生物学效应.阐明细胞内Ang II的作用、作用机制以及与胞外Ang II的协调作用,对临床上阻断局部组织Ang II的作用、延缓肾脏相关疾病发生或发展新药物的研发具有重要的意义.
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HBV感染人胎盘滋养层细胞机制的初步探讨
目的 采用透射电镜观察HBV体外感染人胎盘滋养层细胞的超微结构变化.方法 HBV体外感染人胎盘滋养层细胞.ELISA检测培养上清中HBsAg,PCR检测细胞培养上清和滋养层细胞中的HBV DNA.HBV荧光定量PCR检测细胞培养上清中HBV DNA量(拷贝/ml).透射电镜观察滋养层细胞的超微结构.结果 感染组滋养层细胞培养上清中HBsAg在PBS清洗后12 h时A值为0.942,96 h时上升为1.264.PCR检测感染组细胞培养上清和感染组细胞HBV DNA均为阳性.PBS彻底清洗后0、12、36、60、84 h感染组细胞培养上清的HBV DNA分别为:＜103,3×104,6×105,5×105,3×105拷贝/ml.透射电镜观察到感染组滋养层细胞膜附近存在包涵素(Clathrin)形式的内吞小体形成,并且发现内吞小体内存在病毒颗粒样结构.在感染组细胞粗面内质网内发现HBsAg特异性的纤维丝状结构.结论 HBV可能经包涵素依赖的细胞内吞形式进入滋养层细胞,进而实现感染细胞或通过胞释作用将病毒排至细胞的对侧而实现穿越滋养层细胞屏障.
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视网膜色素上皮受体介导的内吞作用
目的研究视网膜色素上皮(RPE)细胞内吞光感受器细胞外基质(IPM)内大分子可溶性物质的可能性及其机制.方法采用荧光标记的甲醛作用后的血清白蛋白(F-FSA),作为清道夫受体配体的指示物,与组织块培养的猪RPE细胞共同孵育,用荧光显微镜和电子显微镜观察RPE细胞对F-FSA的内吞情况.结果RPE细胞能够摄入F-FSA;这一作用随配体浓度增加而提高,随孵育时间延长而增强;相同或相似的配体之间存在竞争作用;F-FSA进入RPE细胞后,以微囊泡的形式存在于细胞中.结论RPE细胞能够摄入携带负电荷的大分子物质,这一作用是通过受体介导的内吞作用完成的,清道夫受体可能是介导这一作用的受体;受体介导的RPE细胞的内吞作用可能是IPM内大分子物质代谢的重要机制.(中华眼科杂志,2004,40:539-544)
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062 T细胞反应趋化因子提供新的药物靶标
近的研究结果表明,某些趋化因子如 CCL19和CCL21是T细胞增殖重要且有效的诱导物,两种因子趋化活性的研究证实,其能诱导T细胞和树突状细胞的迁移,并能促进胞吞作用的抑制细胞凋亡.
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中性红比色法检测大鼠小脑神经瘤活细胞
目的探讨中性红比色法测定细胞活性的有效性,优化实验参数,并初步探讨该方法测定细胞活性的机制.方法采用中性红比色法、MTT比色法及台盼蓝拒染法测定大鼠小脑神经瘤细胞(R2细胞)的活性.结果①中性红浓度为100 mg*L-1,孵育时间4 h,溶解液的pH值为2～4,细胞密度在每毫升(0.5～24)×105范围内,吸光度值(A530 nm)与活细胞数呈正相关,是较为合适的实验参数;②低温(4℃)明显抑制R2细胞对中性红的胞吞作用,使A530 nm值降低.结论中性红比色法灵敏准确,结果稳定,操作简便,可以用于细胞活性和毒性的评价.中性红进入细胞内的过程可能与细胞的胞吞功能有关.
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肝细胞对白蛋白纳米粒的胞吞作用研究
目的 研究L(0)2细胞对白蛋白纳米粒的胞吞作用.方法 采用钙黄绿素作为白蛋白纳米粒的荧光标记探针,用去溶剂化法制备钙黄绿素白蛋白纳米粒(calcein HSA-NPs),并考察粒径、体外释放、细胞摄取、胞内分布和细胞毒性.结果 Calcein HSA-NPs平均粒径为203.3 nm,体外释放96 h不到80％.白蛋白纳米粒的胞吞作用呈现时间、浓度、温度依赖性,可以显著提高水溶性小分子钙黄绿素的入胞能力(P＜0.01).Calcein HSA-NPs主要经clathrin介导的内吞途径和大胞饮入胞的,进入细胞后分布在细胞核外的胞内空间,主要集中在溶酶体内.白蛋白纳米载体对细胞基本无毒.结论 所制备的calcein HSANPs可作为有效的载体来研究胞吞作用机制.
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病毒入胞机制对载药多肽设计的启示
目的 了解病毒入胞、内含体逃逸等机制,从中得到启发为进一步设计开发高效智能、仿病毒载药工具提供帮助.方法 纵观在长期的进化过程中病毒因宿主的杀伤压力,为生存、复制延续所形成的独特的跨膜、内含体逃逸以及亚细胞器定位等本领,揭示其给我们在仿病毒载药多肽设计开发方面的启示.结果与结论 对病毒感染机制全面、深入的了解,有助于我们利用病毒逃避宿主杀伤机制,为设计、研发高效率非病毒载药多肽提供新思路.
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低分子量蛋白尿——Dent病
近年来随着医学飞速的发展,低分子量蛋白尿逐渐受到人们的重视,所谓低分子量蛋白是指由尿中排出的分子质量小于40 000d的蛋白质,可通过正常肾小球基底膜或由肾单位分泌漏入尿中,包括尿β2-微球蛋白、α1,-微球蛋白、溶菌酶、视黄醇结合蛋白及多肽类激素如甲状旁腺素、胰岛素等.正常情况下,从肾小球滤过的低分子蛋白质流经肾小管时被近端小管上皮细胞通过胞吞作用重吸收,但当肾小管功能障碍时,尿中低分子量蛋白质排泄增加.引起低分子量蛋白尿的原因很多,其中以低分子量蛋白尿及高钙尿症为突出表现的Dent病是近年的研究热点.本文将从临床表现、发病机制及遗传学特点等方面对Dent病进行介绍,以期加深对以低分子量蛋白尿为主要表现的Dent病的认识,防止漏诊、误诊.
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Megalin和Cubilin在肾脏病中的作用
Megalin和Cubilin系多配体属低密度脂蛋白(LDL)受体家族成员,这两种多配体强烈表达在近端肾小管上皮细胞的顶端,在亚细胞水平它们共同定位于网格蛋白小窝和刷状缘小囊泡.起胞吞作用的这两种受体不仅在胞吞肾小球滤过的蛋白质、阻滞蛋白尿的发生中起着十分重要的作用,而且它们在维生素B12、铁等营养物质和微量元素的吸收也发挥十分重要的作用;它们的单独表达异常或共同表达异常出现在多种肾脏病中.本文就其在肾病中的作用作鼢一综述.
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Megalin和cubilin生理表达与相关疾病
Megalin和cubilin是两个大分子、多配体的受体糖蛋白,广泛分布于极化的上皮细胞内.在体内,尤其在肾脏,它们通过胞吞作用在介导蛋白质和许多维生素的吸收方面发挥着重要的生理功能.两受体任何一方功能异常或缺失会出现明显的蛋白尿和某些肾病,因此两种受体的病理生理作用越来越受到人们的关注.本文就Megalin和cubilin的生理功能及其相关疾病简要综述.
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纳米微粒跨细胞膜转运途径及机制的研究进展
纳米材料通过有效转运药物、生物分子或显像剂到病变部位的靶细胞,实现疾病的诊断和治疗.这种应用于诊断和治疗的纳米材料,通常需要进入细胞的特定部位,将其负载物转运至亚细胞中.目前普遍认为纳米微粒主要是通过胞吞作用入胞,根据形成囊泡大小或内容成分的不同可将胞吞作用分为吞噬作用和胞饮作用.纳米微粒的尺寸、形状、化学组成、表面电荷等理化性质对其入胞途径均有影响；此外,对于同一纳米微粒,所选细胞系不同时,其入胞途径也不相同.通过研究纳米微粒与细胞间的相互作用了解其转运机制,对于提高转运效率将产生重大帮助.本综述以纳米微粒跨细胞膜转运途径为基础,着重介绍了纳米载体跨细胞膜转运的机制,包括纳米载体如何进入细胞及不同途径的特点,影响纳米材料进入细胞的因素,以及提高转运效率的方法等方面的进展.
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细胞膜筏的结构及其在病毒复制和信号转导路径中的作用
膜筏是近年发现的广泛存在于细胞膜上的特定微区域,具有特殊的化学组成和生物学特性.膜筏参与了许多生命活动,如生物合成、胞吞作用、信号转导等,尤其在病毒感染、复制过程中,膜筏起到了重要的平台作用.对膜筏的深入研究,将为研究病毒感染过程、抗病毒治疗和详细阐述各种生命活动机制提供新的思路和启发.
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促进细胞穿透肽及其介导的生物分子从内含体逃逸的几种策略
细胞穿透肽(CPPs)是一类可穿透细胞膜、向细胞内输送各种大分子生物活性物质的短肽.几乎所有CPPs及其介导的生物活性分子都是以内吞形式进入细胞,之后局限于内含体内,以至于终被溶酶体消化降解,从而影响了CPPs的运输效率,故寻找辅助CPPs及其介导的生物活性分子从内含体中逃逸进入胞浆的方法尤为重要.目前的体外研究多用氯喹或Ca<'2+>处理以提高CPPs的运输效率.近有学者报道使用天然多肽或微生物的某些"元件"(如,流感病毒的HA2肽)来协助CPPs从内含体逃逸,将有助于CPPs作为高效运载工具向细胞内输送生物活性分子.
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Rab5在胰岛素抵抗机制中的作用
糖尿病是以胰岛素抵抗(IR)为特征的代谢紊乱性疾病,其发病机制十分复杂,多环境因素和大量易感基因共同参与其致病过程,对IR的研究是探索糖尿病发病机制的重要切入点之一.Rab5为一种调节胞吞作用的小GTP酶,近的研究发现其不仅参与调节细胞膜上葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)的转运上膜,与胰岛素信号通路中多种分子相互作用,还与肥胖的发生相关.此外,Rab5 还参与自噬体的形成,而肝细胞自噬作用的缺陷将促进内质网应激和IR[1-2].这些结果均提示Rab5可能是机体IR发生分子机制中的一个重要环节.
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陷窝蛋白-1参与白蛋白改善蛛网膜下腔出血后血脑屏障通透性
目的 探讨人血清白蛋白(albumin,Alb)对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的影响以及内皮细胞摄取Alb的途径.方法 在Transwell小室中培养小鼠脑内皮细胞(bEnd.3细胞系)建立BBB模型,在培养基中加入10 μmol/L氧合血红蛋白构建SAH体外模型,将细胞分为对照组、SAH组和Alb组(10 mg/ml).采用跨细胞电阻(transendothelial electric resistance,TEER)检测BBB通透性,共聚焦显微镜观察荧光标记的Alb能否被bEnd.3摄取,免疫共沉淀检测Alb能否与细胞中的陷窝蛋白-1(caveotin-1,Cav-1)相互作用.根据siRNA原理,将Cav-1 siRNA转染人bEnd.3细胞抑制Cav-1表达,采用蛋白质印迹分析检测bEnd.3细胞能否摄取Alb,采用TEER检测BBB通透性.结果 与SAH组相比,Alb组TEER值显著升高(P=0.011).Alb可被bEnd.3细胞摄取,并且在bEnd.3细胞中与Cav-1相互作用.Cav-1 siRNA转染可显著抑制bEnd.3细胞Cav-1表达,降低细胞对Alb的摄取能力(P=0.025),导致Alb对BBB的保护作用显著降低(P ＜0.001).结论 Alb可能在Cav-1参与下被内皮细胞摄取并改善SAH后BBB通透性.
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问号钩端螺旋体磷脂酶C的活性及其内化时细胞内游离Ca2+水平的变化
目的:了解不同毒力的钩端螺旋体(简称钩体)对细胞内游离Ca2+水平的影响及其磷脂酶C(PLC)活性与细胞内游离Ca2+水平的关系.方法:建立问号钩体Vero和J774A.1细胞感染模型.采用fluo-3/AM胞内Ca2+特异荧光标记激光共聚焦技术,检测强毒力的问号钩体黄疸出血群赖型56601株和弱毒力的波摩那群波摩那型56608株及无毒力的双曲钩体Patoc Ⅰ株作用的Vero和J774A.1细胞胞内游离Ca2+水平.以[3H]PIP2为底物,采用同位素法检测上述3株钩体培养物上清、胞浆和胞膜中PLC的活性.结果:正常Vero和J774A.1细胞胞内游离Ca2+基础值分别为(102.3±8.2)%和(105.9±7.3)%,在观察时间内Patoc Ⅰ株钩体作用细胞的荧光强度变化百分数一直波动于(102.3±8.2)%～(102.2±8.3)%.问号钩体56601株感染的Vero和J774A.1细胞胞内游离Ca2+浓度呈双峰型增高,第一峰荧光强度变化百分数分别为(430.5±35.7)%和(747.5±18.5)%,第二峰荧光强度变化百分数分别为(380.6±17.4)%和(804.6±22.4)%.问号钩体56608株感染Vero和J774A.1细胞,其胞内游离Ca2+浓度均呈缓慢的单一坡型升高,其大荧光强度变化百分数分别为(235.0±19.3)%和(402.4±17.4)%,明显小于56601株问号钩体(P<0.01).问号钩体56601株和56608株及双曲钩体Patoc Ⅰ株的培养物上清、胞浆蛋白和胞膜蛋白成分中均显示PLC活性(P<0.05).结论:不同毒力的问号钩体所感染细胞的胞内游离Ca2+水平及其峰型有明显差异,而且与被感染细胞的种类有关,与PLC活性无关.
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问号钩端螺旋体诱导的Vero和J774A.1细胞的凋亡和超微结构病变
目的:探讨不同毒力的钩体黏附和侵入宿主细胞能力及其病理变化.方法:建立Fontana镀银染色法用于观察问号钩体黄疸出血群赖型56601株、波摩那群波摩那型56608株和双曲钩体三堡隆群patoc型Patoc Ⅰ株黏附Vero和J774A.1细胞的能力;采用电镜技术观察感染细胞的超微结构病变;采用FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术,检测紫外线灭活前后的上述钩体菌株诱导Vero和J774A.1细胞凋亡或坏死的情况.结果:问号钩体56601和56608株对Vero细胞的黏附率分别为24.2%和22.9%(P＞0.05);对J774A.1细胞的黏附率分别为49.0%和46.9%(P＞0.05);双曲钩体Patoc Ⅰ株不能黏附细胞.两株问号钩体侵入细胞后形成含有钩体的特殊吞噬泡,并引起相似的细胞超微结构病变,如细胞核染色质浓缩或溶解、细胞空泡变性、线粒体肿胀及线粒体嵴消失、内质网肿胀和膜旁核糖体消失等.灭活前的56601和56608株引起的Vero细胞凋亡率分别为84.4%和82.8%,灭活后则分别为77.9%和86.1%.灭活前后的56601株均以诱导Vero细胞晚期凋亡为主,其凋亡率分别68.0%和52.9%.灭活前后的56608株均以诱导Vero细胞早期凋亡为主,其凋亡率分别为64.1%和50.1%.在J774A.1细胞中,紫外线灭活前后的56601和56608株主要引起细胞坏死,其次是细胞凋亡,均以晚期凋亡为主.结论:所建立的Fontana镀银染色法可用于观察问号钩体的细胞黏附.问号钩体以内吞方式侵入细胞,并导致细胞超微结构病变.问号钩体诱导细胞坏死或凋亡可因细胞种类不同而异,与其毒力无明显关系.
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问号钩端螺旋体致病机制及其属特异性基因工程疫苗研究进展
不同毒力的问号钩端螺旋体(问号钩体)均可黏附细胞,引起胞内游离Ca2+升高,并以内吞方式侵入细胞,导致相似的细胞超微结构病变.强毒力的问号钩体可引起高幅度、双峰型胞内游离Ca2+升高,并可侵入细胞核;弱毒力的问号钩体则否.紫外线灭活前后的问号钩体可引起相似的细胞凋亡率,这提示问号钩体诱导细胞凋亡有特殊的机制.问号钩体外膜中的穿膜蛋白ompL1、脂蛋白lipL32和lipL41基因广泛存在于不同血清群、型问号钩体中,呈高频率表达,其产物均为有良好抗原性和免疫反应性的属特异性表面蛋白抗原,可用于研制问号钩体属特异性基因工程疫苗.
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人乳头瘤病毒感染细胞机制研究进展
人乳头瘤病毒(Human papilloma viruses,HPVs)是一类无包膜双链小DNA病毒,它通过破损的皮肤黏膜进入上皮基底细胞层,随着角质形成细胞的不断分化发生复制并引起感染,造成皮肤和黏膜的多种病变.随着对HPV结构的深入了解以及培养模型的建立,HPV感染细胞机制的研究取得了一定进展.HPV感染上皮基底细胞的过程主要包括吸附、入胞以及核内运输等3个环节,本文对这一过程进行综述.
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CD205的结构与功能研究
CD205是一种分子量205 kD的C型凝集素,为Ⅰ型膜蛋白,含有l0个糖识别域,系巨噬细胞甘露糖受体家族成员.人CD205基因位于染色体2q24,其cDNA长5 166 bp,编码产物1 722个氨基酸残基.CD205主要表达于树突状细胞和胸腺上皮细胞,在介导胞吞、抗原提呈中起关键作用,还参与稳定胸腺微环境,在胸腺发育及肿瘤免疫中具重要意义.
