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HPLC测定银杏外种皮多糖的分子质量及含量
目的:建立银杏外种皮多糖的分子质量及含量的HPLC测定方法.方法:以葡聚糖为标样,采用HPLC法,PL aquagel-OH MIXED(7.5 mm×300mm,8 μm)色谱柱,柱温25℃,示差折光检测器,流动相为超纯水,流速1.0mL·min-1.结果:银杏外种皮多糖的分子质量为11 062.5,RSD 0.78%(n=6);含量为68.7%,RSD 3.4%(n=6),葡聚糖(分子质量为12 000)在1~20 μg呈良好线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为97.9%,RSD 2.5%.结论:本方法灵敏度高,操作简便,重复性好,可用于银杏外种皮多糖的分子质量和含量的测定.
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钉螺酚氧化酶分子质量测定
目的 初步测定并分析钉螺酚氧化酶天然蛋白的分子质量及其亚基组成. 方法 通过匀浆、离心取得钉螺粗制酚氧化酶酶液,经盐析、透析、凝胶过滤等方法纯化酚氧化酶,并采用凝胶柱层析法和SDS-PAGE测定酚氧化酶的分子质量,测算其亚基组成. 结果 凝胶柱层析法初步测得钉螺酚氧化酶分子质量单位为91 ku,SDS-PAGE 4条主带分别位于87、40、37和33 ku. 结论 钉螺体内酚氧化酶分子质量单位约为87~91 ku,可能为单体酶或由3个分子质量介于33~40 ku的亚基构成的寡聚酶.
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寄生虫酚氧化酶的研究进展
酚氧化酶(Phenol oxidse,PO)广泛存在于无脊椎动物、脊椎动物、植物、细菌和真菌等生物体内,人们已从多种动物体提取纯化并鉴定了PO.依据PO的不同,其分子质量、适温度、适pH、激活剂、抑制剂和催化功能均有所不同.本文就寄生虫酚氧化酶的命名、生化特性、组织学定位、生理功能和分子生物学等方面的研究进展作以下综述.
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Nogo与中枢神经元轴突的再生
中枢神经系统(central nervous system,CNS)再生障碍是脑和脊髓永久性损伤的主要原因.长期以来人们探讨各种途径试图突破这一障碍.1988年,分子质量分别为35KD和250KD的轴突生长抑制性蛋白NI-250与NI-35被分离出来,其特异性抗体IN-1能中和这种抑制因子,从而促进损伤轴突的再生[1].2000年,美国、英国、瑞士的3个实验室同时报道了编码这种抑制因子的基因-Nogo基因[2-4],成为这一领域令人鼓舞的研究成果.
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透析膜表面荷电性能的研究进展
血液透析器用于去除肾衰竭患者血液中的新陈代谢废物(溶质分子质量小于49 600 Iu)和过量的水.透析膜是血液透析器的关键.透析膜的设计主要考虑两方面的因素:膜的传递特性和膜表面性质.膜的传递特性决定了溶质的清除率和对液体的去除.
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腹膜透析患者腹膜转运特性变化的影响因素
腹膜透析是终末期肾病血液净化治疗的重要方式之一.在确定腹膜透析方案时,我们会发现不同的患者存在相当程度的差异,即存在个体差异.所谓个体差异的存在取决于多种因素,但其中腹膜溶质转运特性在其中发挥着重要的作用.所谓腹膜溶质转运特性是指腹膜透析患者中,不同分子质量的毒素通过人体腹膜所形成的半透膜,在腹膜和血液之间进行物质交换的能力.
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血液灌流治疗毒鼠强中毒的临床分析
毒鼠强化学名称为四亚甲基二砜四胺,又名没鼠命、三步倒,是分子质量为248D的有机氮化合物,化学结构为环状,性质稳定,微溶于水和丙酮.
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中分子的研究进展及总量测定
中分子物质是指存在于体液中分子质量在300~5000Daltons之间的一类具有毒性作用的中等分子质量的物质(middle molecular substance MMS),简称中分子,主要以寡肽类化合物为主,包括寡糖、核苷酸、维生素、精胺以及其它一些未被鉴定的化合物.1971年,Babb等提出了中分子物质假说,提出尿毒症中毒本源性物质是中分子,而不是传统中认为的血中尿素、肌酐、尿酸等小分子物质的含量.
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中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1基因的克隆与表达
目的:克隆和表达中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1;ⅡMP-1)基因,获得具有抗原性的人TIMP-1蛋白.方法:用RT-nest-PCR扩增TIMP-1编码区基因片段,用基因重组技术构建含该片段的重组质粒并进行序列分析.在大肠杆菌E.coli中表达融合蛋白MBP-TIMP-1,用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析鉴定,并用亲和层析试剂盒纯化融合蛋白MBP-TIMP-1.结果:经核苷酸序列分析表明,本研究克隆的中国人TIMP-1为624bp,与报道的国外TIMP-1基因序列同源.经SDS-PAGE和Western blot表明,表达的融合蛋白MBP-TIMP-1分子质量为66Ku,具有TIMP-1的抗原性,并可进行亲和层析纯化.结论:克隆了中国人TIMP-1基因,表达和纯化了具有免疫原性的融合蛋白MBP-TIMP-1,他将对肝纤维化的诊断有一定作用.
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Clostridium difficile细胞毒素B羧基末端功能区的克隆与表达
目的:克隆并表达Clostridium diifficile(C difficile)细胞毒素B羧基末端功能区基因,为探索高效的防治C difficile感染的疫苗和诊断抗原奠定基础.方法:提取C difficile染色体基因,用PCR方法扩增ToxinB3基因,将其克隆至表达载体PET22b(+),用重组质粒转化大肠杆菌[E.coli BL21(DE3)],并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用 SDS-PAGE方法对表达产物进行分析.结果:从C difficile基因组DNA中成功地克隆了毒素B的羧基末端重复区域的1848 bp基因,经过双酶切、PCR和测序鉴定分析,插入到载体的基因与GenBank中公布的C difficile VPI10463的ToxinB3基因序列的同源性为99%.SDS-PAGE显示,目的基因表达产物的分子质量为71.3 ku,利用表达载体PET22b(+)表达出蛋白质,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%.结论:含C difficile Toxin B3基因的PET22b(+)重组质粒能高效表达目的基因.该重组子的构建为Clostridium diffiicile相关性疾病的诊断及后期制备疫苗,提供了有力的保障.
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人鼠嵌合Fab抗体通用表达载体的构建和抗人肝癌相关抗原HAb18G嵌合Fab抗体的表达
目的:构建一个在大肠杆菌中表达人鼠嵌合Fab抗体的通用载体,并用于抗人肝癌相关抗原HAb18G人鼠嵌合Fab抗体的表达.方法:利用特异引物PCR扩增人IgG3的CHl和Ck基因,分别克隆到表达载体pComb3中,从而构建成人-鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体pComb3C.然后将扩增的mAbHAbl8的VL和VH基因分别组装到通用表达载体中,酶切去除gⅢ片段后,连接成为HAb18嵌合Fab抗体的分泌型表达载体pComb3C/cFab.转化大肠杆菌后诱导其表达,通过ELISA检测产物的表达和定位.后,利用亲合层析纯化表达产物,进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,同时采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的亲和力和特异性.结果:测序及酶切鉴定表明,人IgG3的CHi和Ck基因正确插入到pComb3中,大小分别为324bp和333 bp,同时mAb HAb18的嵌合Fab基因也分别获得正确组装和表达.表达产物的分子质量约为45 ku,主要位于周质腔中.另外,ELISA和免疫荧光检测证实,表达产物含有人的抗体片段,并具有与相应抗原特异结合的活性,亲和力约为亲本抗体的10%.结论:成功构建了人鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体并制备了抗人肝癌小分子嵌合Fab抗体,为其进一步在肝癌诊断与治疗中的应用奠定了基础.
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硫化氢对急性坏死性胰腺炎及相关肺损伤作用的初步探讨
硫化氢(H2S)是一种小分子质量脂溶性气体分子,可以自由渗透入细胞膜发挥生物效应.在哺乳动物体内,以L-半胱氨酸为底物,通过激活5’-磷酸吡哆醛依赖性酶-胱硫醚-γ裂解酶(cystathionine γ-lyase,CSE,EC 4.4.1.1)和胱硫醚-β合成酶(cystathionine β-synthase,CBS,EC 4.2.1.22)生成H2S[1].H2S在体内主要有2种存在形式,约1/3以气体H2S形式存在,约2/3以NaHS (HS-)形式存在.大量证据显示[1-2],H2S在调节血管、胃肠道、心肌收缩、神经传递和胰岛素分泌等方面起着重要的作用.
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加贝酯防治急性胰腺炎应用现状
甲磺酸加贝酯(gabexate mesilate, GM)是20世纪70年代日本研制的一种新的非肽类蛋白水解酶抑制剂,是第一个用于治疗胰腺炎的化学合成药物,分子质量为417,无免疫原性,副作用小.GM在人血中半衰期为55 s,由肝脏代谢,肾脏排泄,易于渗入胰腺组织.临床上常用于治疗急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)、慢性胰腺炎急性发作,还可用于治疗弥散性血管内凝血(DIC).本文就其防治AP作用机制、疗效评价、剂量及用法作一综述.
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朊病毒--传染性蛋白质颗粒、人早老性痴呆、疯牛病(之一)
朊病毒(Prion或-PrP)是一种与病毒和类病毒都很不同的蛋白质传染病原.早提出"朊病毒"一词的是1982年美国加州大学Prusiner等人,当时他们将该病原描述成蛋白性传染颗粒.在此之前朊病毒曾经有过许多不同的名字,如非寻常病毒、慢病毒、瘙痒病伴随纤维(scrapie associated fibrils,SAF)、传染性大脑淀粉样变等.多年来大量的实验说明,这是一组至今不能查到任何核酸、对各种理化作用都有很强的抵抗力、传染性很强、分子质量在27 KD~30KD的蛋白质颗粒,它们能在人和动物中引起可传递的海绵脑病.
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瘦素对女性生殖内分泌影响的研究进展
1994年Ob基因定向克隆成功,掀开了瘦素研究的序幕.Ob基因位于人类染色体7q31.3,Ob基因编码产物的蛋白分子质量为16kD.瘦素受体有5种同型异构体,其中长型(Ob-RL)介导了至今发现的绝大部分生物学效应.瘦素受体广泛存在于大脑、丘脑、垂体、心、肺、肝、肾、骨骼肌、造血系统和脂肪组织、小肠、卵巢、子宫、胎盘、睾丸、附睾等.瘦素被认为是联系营养状况、能量储备与生殖系统之间的"代谢闸门",尤其在生殖内分泌领域受到广泛关注.现就其研究进展综述如下.
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瘦素及其与肥胖、糖尿病的关系
1994年首次成功克隆出肥胖基因及人类的同源序列[1],Halaas等[2]又于1995年合成出人和小鼠ob基因的表达产物.该产物是一种分泌蛋白,其前体由167个氨基酸残基组成,N末端有21个氨基酸残基信号肽,该前体的信号肽在循环血液中被切掉而成为146个氨基酸,分子质量为16 000,Halaas等将其命名为瘦素(leptin).现将leptin及其与肥胖、糖尿病的关系的研究作简述如下.
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碘与甲状腺疾病
1 碘的生理意义、来源和代谢1.1碘是人体微量元素,是制造甲状腺激素的主要原料.碘是甲状腺激素的必需成分,分别占T4和T3分子质量的65%和59%,甲状腺激素通过相应受体选择调节靶器官的基因表达,它对脑发育、肝脏、垂体、肌肉的作用尤为重要.甲状腺激素对机体的生命活力十分重要.
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巨噬细胞移行抑制因子与肾小球疾病关系的研究进展
1 巨噬细胞移行抑制因子(MIF)的来源及功能MIF基因位于人22号常染色体(22q11.2),哺乳动物间同源性为90%.MIF蛋白含114个氨基酸,分子质量为12.5 ku,由α链和β链组成三维晶体结构.初,T淋巴细胞被认为是免疫系统中MIF的主要来源,后来发现单核细胞、巨噬细胞、血液树突细胞、B 淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性细胞、杆状细胞、嗜碱性细胞都可以表达MIF[1,2].
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白细胞介素-27与哮喘疾病的研究前景
白细胞介素(interleukin,IL)-27是2002年由Plfan等在基因库中找到的一个新基因,用SDS-PAGE电泳技术检测分离出基因的产物分子质量为28 ku,由此命名为p28,进一步的研究结果证实p28与EB病毒诱导基因3(Epstein-Barrvinls induced gene 3,EBI3)形成的异二聚体,被命名为IL-27,居于IL-12家族.
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TopBP1在DNA损伤修复及乳腺癌发生中的作用
一、概 述人类DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(DNA to-poisomeraseⅡβ-binding protein 1,TopBP1)是初于1997年由Yamane等人经双杂交筛选分离得到的一种能结合到DNA拓扑异构酶Ⅱβ蛋白C末端区域的蛋白[1].TopBP1基因定位于人类染色体3q22.1,含29个外显子,编码的TopBP1蛋白含1522个氨基酸,分子质量180kDa.人类TopBP1蛋白的同系物包括爪蟾的Xcut5/Xmus101,果蝇的Mus101,线虫的MUS-101,拟南芥的Mei1,啤酒酵母的Dpb11,裂殖酵母的Cut5/Rad4等[2].