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膀胱癌的基因治疗
随着细胞分子生物学的迅速发展,于20世纪70年代提出了"基因治疗"这一概念.早期,基因治疗是指将目的基因导入靶细胞后与宿主细胞内的基因组发生整合,成为宿主遗传物质的一部分,目的基因表达产物起到对疾病的治疗作用.随着基因治疗基础研究的发展,治疗研究的技术不断增加,研究内容也不断扩展,不仅可以将外源性正常基因导入到病变细胞中,替代或与缺陷基因共存,产生正常基因表达产物以补充缺失的或失去正常功能的蛋白质,而且可以采用适当的技术抑制细胞内过剩表达的基因,达到治疗疾病的目的;还可以将特定的基因导入非病变细胞,在体内表达特定产物,达到治疗疾病的目的;也可以向功能或生物学特性异常的细胞中导入细胞本来不表达的基因,利用其表达产物达到治疗疾病的目的.目前,基因治疗是指通过在特定靶细胞中表达该细胞本来不表达或低表达的基因,或采用特定方式关闭、抑制异常表达基因,达到治疗疾病目的的治疗方法,也就是"以基因作为靶点的治疗".
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蛋白质组学研究方法进展及在卫生防疫中的应用前景
蛋白质、多肽是生命科学中一类重要的生物大分子物质,是生物体实现其功能的物质基础.人类基因组计划实施至今已获得大量基因信息,但基因表达并不能完全代表蛋白质功能,大部分细胞生命活动发生在蛋白质水平而不是RNA水平.因此,需要直接研究基因表达产物--蛋白质.蛋白质组学(proteome)是在人类基因组计划研究发展的基础上形成的新兴学科,蛋白质组学的任务就是研究细胞内所有蛋白质的组成及其活动规律,是在细胞整体水平上研究蛋白质的属性(表达水平、翻译后修饰,相互作用).它的研究已涉及生命科学中的一系列热点领域,使人们对生命活动的机制认识由间接的基因层次深入到生命执行体--蛋白质层次.本文主要介绍蛋白质组学的研究方法进展以及在卫生防疫中的应用前景.
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双向电泳技术在蛋白质组研究中的应用
随着人类基因组计划完成日期的不断提前, 基因组全序列的测定也已经接近尾声.在基因组时代, 许多DNA序列信息让我们对其相关基因组的结构和功能有了一定的了解.然而DNA序列信息不是万能的,它不能预测[1]: 1)基因表达产物是否或何时被翻译; 2)基因产物的相应含量;3)翻译后修饰的程度;4)基因剔除或过表达的影响; 5)多基因现象的表型.
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P-gp对树突状细胞从皮肤迁移至引流淋巴结的影响
细胞膜P-糖蛋白(P-gp,P-glycoprotein)是多药耐药(mdr)基因表达产物,广泛分布在各种排泄器官包括肠道、肝、肾等上皮细胞,脑及胎盘血管内皮细胞、造血干细胞及外周血细胞的细胞膜上.人类mdr1基因,小鼠mdr1a基因表达产物与多药耐药有关.目前,有关P-gp的研究多集中在肿瘤化学治疗的药物抵抗方面,对其在免疫调节中的作用还不清楚.本文用FVB(H-2q)野生型(FVB/N)与FVB mdr1a敲除(mdr1a-/-)突变型小鼠,探讨P-gp对树突状细胞(DC)从皮肤向引流淋巴结迁移的影响.
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江西籍肝豆状核变性第八外显子突变的研究
肝豆状核变性又称Wilson's病(Wilson's disease,WD),是一种铜代谢障碍的常染色体隐性遗传病,该基因定位于13q14.3,它含有21个外显子及20个内含子,其基因表达产物为参与铜转运的三磷酸腺苷酶(ATP)7B,故该基因又称为ATP7B基因,ATP7B酶分为三个区,第一区为金属离子结合区,第二区为磷酸化区,第三区为跨膜区.基因突变方式多种,但以点突变为主.因基因突变导致ATP7B酶发生改变,从而不能有效地运输铜而形成铜蓝蛋白,因此使铜在组织器官存积,发生脑、肝、肾等多脏器受损.经国内外学者长期研究表明[1,2],在众多的点突变中,中国人肝豆状核变性以2273位点G→T突变为高发突变热点[3],上海二医大对60例WD患者进行了Arg778Leu突变的检测,突变频率达45.6%,因此我们对12例肝豆状核变性患者采用荧光定量PCR方法检测Arg778Leu基因突变,结果这12例江西籍肝豆状核变性患者中有10例存在该突变,他们均为杂合子.而5例正常体检者均正常.说明Arg778Leu突变为肝豆状核变性的高发突变位点,可作为肝豆状核变性众多突变中的首选.
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脑蛋白质组学研究进展
人类和多个物种的基因组全序列测定即将完成,生命科学研究逐渐从结构基因组学转向功能基因组学;在了解基因功能的同时,对基因表达产物--蛋白质的研究愈发重要.蛋白质是整个生命活动的基础,目前至少有40% ~60%的基因编码蛋白质功能是未知的[1].
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Clostridium difficile细胞毒素B羧基末端功能区的克隆与表达
目的:克隆并表达Clostridium diifficile(C difficile)细胞毒素B羧基末端功能区基因,为探索高效的防治C difficile感染的疫苗和诊断抗原奠定基础.方法:提取C difficile染色体基因,用PCR方法扩增ToxinB3基因,将其克隆至表达载体PET22b(+),用重组质粒转化大肠杆菌[E.coli BL21(DE3)],并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用 SDS-PAGE方法对表达产物进行分析.结果:从C difficile基因组DNA中成功地克隆了毒素B的羧基末端重复区域的1848 bp基因,经过双酶切、PCR和测序鉴定分析,插入到载体的基因与GenBank中公布的C difficile VPI10463的ToxinB3基因序列的同源性为99%.SDS-PAGE显示,目的基因表达产物的分子质量为71.3 ku,利用表达载体PET22b(+)表达出蛋白质,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%.结论:含C difficile Toxin B3基因的PET22b(+)重组质粒能高效表达目的基因.该重组子的构建为Clostridium diffiicile相关性疾病的诊断及后期制备疫苗,提供了有力的保障.
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丙型肝炎病毒核心蛋白与白介素-2启动子的调节
丙型肝炎病毒(HCV)持续感染,增加了肝纤维化和肝细胞癌(HCC)的危险性,其机制与HCV引起机体免疫调节障碍有关.HCV基因表达产物中,高度保守的HCV核心(core)蛋白具有免疫调节功能.辅助性T细胞产生白介素(IL-2),HCV患者IL-2表达分泌异常,与痊愈有明显相关性.研究表明HCV核心蛋白具有转录激活IL-2启动子的作用,本文对此方面的研究作一综述.
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基质金属蛋白酶9基因多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性的关系研究
基质金属蛋白酶(MMPs)基因是颇受关注的慢性阻塞性肺疾病(COPD)候选基因,MMP-9即是其中之一[1].有学者发现MMP-9启动子区域的多态性(-1562C/T)会影响酶的转录活性[2].探索酶基因表达产物活性的影响因素亦可能有助于阐明COPD的发病机制,为此我们应用限制性片段长度多态性(RFLP)方法,对江西籍汉族人COPD患者及健康对照者的MMP-9的启动子-1562位点基因型进行检测分析,报道如下.
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人类白细胞相关抗原B27在免疫相关性血细胞减少患者诊疗中的意义
为探讨人类白细胞相关抗原B27(HLA-B27)基因与免疫相关性血细胞减少(IRH)和全血细胞减少(IRP)发病的相关性,本研究观察了106例IRH/IRP患者血清中HLA-B27基因表达产物HLA-B27抗原含量,分析HLA-B27升高与该类疾病造血细胞损伤的可能关联及其临床意义.
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胰腺癌组织中细胞凋亡及相关基因bcl-2和bax表达的研究
为了探讨细胞凋亡及相关基因bax和bcl-2表达在胰腺癌形成和发展中的作用,我们对31例胰腺癌和14例慢性胰腺炎组织中细胞凋亡情况及bax和bcl-2基因表达产物进行检测,现报告如下.
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CDglyTK双自杀基因腺病毒系统的构建及其对瘢痕疙瘩成纤维细胞的杀伤作用
胸腺嘧啶核苷激酶(thymidine kinase,TK)基因和胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)基因整合形成的双自杀基因CDglyTK,通过适当的载体导入靶细胞内,同时给予两种基因前体药物,前体药物在自杀基因表达产物作用下转化为有毒性的代谢产物,通过干扰DNA和RNA的合成抑制细胞增殖,促进靶细胞凋亡.我们利用改良细菌内同源重组法构建CDglyTK双自杀基因的腺病毒,并观察其对瘢痕疙瘩成纤维细胞的杀伤效应,为进一步研究重组CDglyTK双自杀基因对瘢痕疙瘩的治疗作用提供依据.
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卵巢恶性肿瘤的蛋白质组学研究现状与展望
1995年,Wasinger等[1]发表在Electrophoresis的文章中首次使用了由澳大利亚学者Wilkins和Williams于1994年提出的蛋白质组(proteome)的概念,这标志着蛋白质组学(proteomics)的诞生.这一全新学科的诞生有着深刻的时代和科学发展的背景.随着人类基因组计划的顺利完成,生命科学研究已进入了后基因组时代.由于基因只是遗传物质的载体,蛋白质才是生理功能的执行者;基因转录水平的研究只能在一定程度上反映基因表达产物的变化,而真正发挥功能的蛋白质要经过转录后加工、翻译调控以及翻译后加工等许多步骤和调控才能形成;因此,对基因组的研究有时并不能完全反映机体功能的变化,为了减少这种客观存在的相对误差,蛋白质组学作为快捷、有效的蛋白质分析技术应运而生.
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nm23基因家族及其与肿瘤转移相关性的临床研究进展
肿瘤转移是肿瘤临床诊断与治疗的难题.被称为肿瘤转移抑制基因的nm23自1988年Steeg首次发现以来,国内外均对此进行了广泛的临床研究.目前已知该基因家族有5个成员,即nm23H1(1988-1990)、nm23H2(1991)、nm23H3(DR-nm23)(1995)、nm23H4(1997)、nm23H5(1998)[1-5].其中nm23H3~nm23H5被称为nm23基因家族新成员,但临床研究多的是nm23H1,研究对象已涉及人体各个系统肿瘤,研究方式主要是检测肿瘤标本中nm23基因表达产物水平或基因异常的发生情况,分析其与肿瘤临床病理特征之间的相关性,评价其在肿瘤发生、发展尤其是转移中的作用.现就nm23基因家族新成员及近年来nmH1与肿瘤转移相关性的临床研究进展作一综述.
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精神疾病与蛋白质组学研究进展
在人类基因组计划完成后,研究重点已从结构基因组学转向功能基因组学,对基因表达产物蛋白质的研究愈显重要.
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涎腺肿瘤C-erb B-2 mRNA表达的研究
以往有关C-erb B-2表达的研究缺乏癌基因表达产物的确切定位.我们用原位杂交技术研究各涎腺肿瘤及正常涎腺C-erbB-2 mRNA的表达.
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肝癌自杀基因治疗新进展
自杀基因治疗是指利用基因工程技术将某些细菌或病毒基因<目的基因)与载体相结合,并导入肿瘤细胞中,在一定条件下目的基因持续高效表达,从而杀伤肿瘤细胞,所以又称为"病毒导向酶解药物前体疗法.这些病毒或细菌的基因表达产物(酶)能导致受体细胞的死亡,因此将这些基因称为自杀基因.本文就肝癌自杀基因治疗的新进展作一综述.
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药物滥用研究中蛋白质组学技术应用进展
流行病学研究表明药物滥用成瘾是一个具有高度遗传性的疾病[1,2].大约40%~ 60% 酒精、可卡因、阿片成瘾的风险是遗传性的,然而,鉴定药物成瘾的遗传基因却至今未能取得明确进展[1,3].蛋白质组学对成千上万的基因表达产物-蛋白质"并行"分析, 从"组"水平上对蛋白质变化规律及其相互作用进行研究,为阐明药物滥用的机制提供了前所未有的机遇[4].可以预期,该类技术的应用将为药物滥用研究带来一次质的飞跃.本文就药物滥用相关蛋白质组学进展作一综述.
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肿瘤标志的基础与临床应用(二)
3.2肿瘤标志分类一般根据肿瘤标志的来源可分为细胞肿瘤标志(Cellular Tumor Marker)和体液肿瘤标志(humoral Tumor Marker).细胞肿瘤标志主要是指肿瘤组织或肿瘤细胞膜上表达的标志,如生长因子、激素受体、癌基因以及抗癌基因表达产物P53等.体液肿瘤标志是由肿瘤组织分泌到外周血和尿等体液物质中的标志,其浓度高于正常生理水平,如肿瘤相关抗原(CEA、AFP和CA系列抗原)以及由肿瘤诱导产生的物质(如CRP).这种分类较为简单.
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多发性骨髓瘤患者的p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究
16及p15基因是细胞周期依赖激酶(CDK4/6)的抑制因子,通过抑制pRb(视网膜母细胞基因表达产物)的磷酸化,阻滞细胞进入S期.若p16及p15基因发生纯合子缺失、甲基化或点突变,导致其功能失活,CDK4/6与cyclin D1结合,活化pRb,使细胞进入DNA合成期,肿瘤细胞进行无序增殖,形成克隆性疾病.在多发性骨髓瘤(MM)的基因学研究中发现p15和p16在其发生中起重要作用[1-3].为此,我们探讨了p16及p15基因在MM中失活的发生率及临床意义.