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胸腺肽的提取与性质研究
目的:从冷冻的小牛胸腺中提取出来一种具有高活力的多肽类激素-胸腺肽.方法:通过水提取、部分热变性、醇沉、过Sephadex柱纯化而得.结果:据SdS-PAGE电泳和HPLC分析表明,胸腺肽中主要是分子量10000以下的肽类.结论:通过此法能获得小分子的胸腺肽.
关键词： 胸腺肽 提取及纯化 SDS-PAGE电泳 -
产金属酶合并外膜蛋白缺失的铜绿假单胞菌的检测
目的研究铜绿假单胞菌对亚胺培南(IMP)耐药机制,为临床合理选择抗生素提供确切的依据. 方法对20株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌,以EDTA、CuCl2、 FeCl2、2-MPA、IMP为酶抑制剂,头孢他啶(CAZ)、亚胺培南为底物,在M-H平板上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感性检测,并用聚合酶链反应(PCR) 检测金属酶基因;对3株耐亚胺培南(IMP)的菌株和3株敏感株,提取其菌株外膜蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析,比较两组菌株外膜蛋白的差异. 结果协同法检测20株铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶有1例阳性,结果与PCR法检测结果一致,PCR产物经测序证实为VIM-2型金属β-内酰胺酶;金属β-内酰胺酶阳性的菌株在2 种底物纸片中均与EDTA、2-MPA和IMP 纸片有协同作用,其中2-MPA效果好,与CuCl2、 FeCl2纸片无协同作用;在外膜蛋白SDS-PAGE电泳图谱上发现敏感株存在OprD2、OprE带,但耐药株缺乏OprD2,OprE带缺乏或者染色较淡;定量分析发现耐药株OprD2、OprE含量明显低于敏感株. 结论铜绿假单胞菌对IMP耐药的主要原因是外膜蛋白OprD2、OprE缺失或含量减少以及VIM-2型金属β-内酰胺酶的产生所致,或由两者共同作用所致.
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胶原海绵止血效果的动物实验研究
目的:检测胶原海绵的类型以及止血作用.方法:利用酸碱法从牛腱提取精制可溶性胶原蛋白,冻干制成海绵状止血材料;SDS-PAGE电泳分析胶原海绵的组分;动物内脏和肠系膜的止血处理方法.结果:胶原海绵由Ⅰ型胶原蛋白组成;胶原海绵不仅止血时间短、减少出血量、促进创面愈合,而且能被机体较好地吸收.结论:胶原海绵可作为创面止血修复材料应用于手术外科.
关键词： 胶原海绵 细胞外基质 动物体内试验 止血 SDS-PAGE电泳 -
白细胞介素-27与哮喘疾病的研究前景
白细胞介素(interleukin,IL)-27是2002年由Plfan等在基因库中找到的一个新基因,用SDS-PAGE电泳技术检测分离出基因的产物分子质量为28 ku,由此命名为p28,进一步的研究结果证实p28与EB病毒诱导基因3(Epstein-Barrvinls induced gene 3,EBI3)形成的异二聚体,被命名为IL-27,居于IL-12家族.
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人血红蛋白单抗的鉴定和免疫学特性分析
本实验采用8～12周龄BALB/C系的纯种小鼠,通过一系列的免疫反应来激活其免疫系统,取冲击后2～3d的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合.通过检测培养上清效价来筛选阳性克隆子并克隆化,共获得8株有效细胞株,对其进行特异性鉴定得Hb-2、Hb-3和Hb-4特异性抗人血红蛋白,其他5株有交叉反应;亚类测定结果 显示Hb-2为IgG2a,Hb-3和Hb-4均为IgGl;动物保护实验显示该3株细胞的中和活性较好;夹心ELISA测定抗原表位显示Hb-2和Hb-3、Hb-2和Hb-4的抗原识别表位均不相同,Hb-3和Hb-4的抗原识别表位相同;竞争性ELISA测单抗的亲和力常数kaff=1.4×10-10mol/L.
关键词： 血红蛋白 单克隆抗体 免疲学特性 SDS-PAGE电泳 -
芍药Actin基因在大肠杆菌中的高效表达
目的 构建芍药Paeonia lactiflora Actin (PlActin)基因原核表达载体,优化PlActin基因在大肠杆菌中的高效表达体系.方法 基于PlActin基因cDNA序列及原核表达载体pET-32a(+)多克隆位点序列,设计一对5'末端分别插入BamHⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的特异性PCR引物,基于RT-PCR技术亚克隆P1Actin基因;用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒pMD 18-T-PlActin和原核表达载体pET-32a(+),胶回收纯化目的基因和空载体,连接、转化后应用菌落PCR、质粒PCR和双酶切鉴定出重组子pET-32a (+)-PlActin,转化BL21 (DE3)菌株获得基因表达工程菌;分别设置诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度梯度、诱导的菌体起始密度梯度及表达时间梯度,诱导PlActin基因在大肠杆菌中表达,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝R250染色后制备干胶并比较重组Actin蛋白的表达量.结果 亚克隆测序结果表明PlActin与目的序列完全一致,且其编码区序列(CDS)上下游成功插入了BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点;成功构建了芍药原核表达载体pET-32a(+)-PlActin;诱导剂IPTG的佳浓度为0.1 mmol/L,诱导的菌体起始密度(A600)为0.4～0.6,佳表达时间为4h.结论 构建了P1Actin基因原核表达载体pET-32a (+)-P1Actin,建立了P1Actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系.
关键词： 芍药 actin 大肠杆菌 SDS-PAGE电泳 高效表达 -
茯苓发酵液中蛋白质的电泳分离与质谱分析
目的 研究茯苓发酵液中的蛋白质,对其进行分离与鉴定.方法 采用液体发酵获得茯苓发酵液,Bradford法测定样品中蛋白质的质量浓度,有机酸沉淀法提取蛋白质,SDS-PAGE电泳分离蛋白质,蛋白质电泳片段进行胶内酶解、质谱分析和搜库鉴定.结果 茯苓发酵液中蛋白质的质量浓度为74.01 μg/mL,其相对分子质量(M)主要分布在2.8×104～1.3×105.通过质谱鉴定从茯苓发酵液中鉴定得到了51种蛋白质,如过氧化氢酶、蛋白激酶、碱性蛋白酶、糖化酶和溶菌酶等.结论 茯苓发酵液中蛋白质种类丰富,是开展茯苓蛋白质研究及开发茯苓发酵保健食品与饮料的理想材料.
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伴放线放线杆菌粗糙株外膜蛋白的电泳分析
目的 分析不同血清型伴放线放线杆菌粗糙型菌株外膜蛋白的差异.方法 于2009年8-9月,在青岛大学医学院选用3种不同血清型的伴放线放线杆菌粗糙型菌株D7S、SA716和SA1151,分别培养并收集菌细胞,采用超声破碎及超离心技术提取外膜蛋白,SDS-PAGE电泳方法分析其分子质量.结果 全细胞电泳显示,3个菌株蛋白带的分子质量在10～200ku之间分布,3个菌株之间蛋白带分布未见明显差异;提取的外膜蛋白电泳显示,3个菌株有共同的6个蛋白带,分子质量分别为100、75、64、45、34、31 ku;SA1151和SA716存在共同的分子质量为29ku的蛋白带;D7S和SA716存在共同的分子质量为27ku的蛋白带;SA1151存在清晰的分子质量为110ku的蛋白带.结论 不同血清型伴放线放线杆菌粗糙型菌株之间的外膜蛋白可能存在一定的差异.
关键词： 伴放线放线杆菌 外膜蛋白 SDS-PAGE电泳 -
质粒pGH/BL21在大肠杆菌中表达条件的研究
目的寻找质粒pGH/BL21在大肠杆菌中的佳表达条件.方法当它在大肠杆菌中表达时,考查不同IPTG诱导浓度及不同的诱导时间对表达产物的影响,表达产物的量以SDS-PAGE电泳方法分析.结果该基因的佳表达条件为:IPTG诱导浓度1.0 mmol/L,诱导时间4 h.结论 IPTG对不同的基因在不同的表达体系中需不同的诱导条件,只有找到它的佳诱导条件才能保证终产物的大产率.
关键词： 猪生长激素 包涵体 IPTG SDS-PAGE电泳 -
血清双向电泳研究中的失误分析及解决
双向凝胶电泳是蛋白质组学的一种基本技术,它以固相pH梯度等电聚焦进行第一向电泳,再用SDS-PAGE(sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis)进行第二向电泳[1-2].由于其稳定性高、重复性好等特点,故它在血清样品研究中有独特的优点.但该方法操作步骤多,包括样品的处理、等电聚焦、胶条的平衡及转移、SDS-PAGE电泳及凝胶的染色等,同时每个步骤的操作要求较高.
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太阴病脾阳虚证患者唾液分泌型IgA含量变化及舌苔蛋白双向电泳图谱研究
目的:探讨脾阳虚证和正常人口腔唾液分泌型IgA含量变化及舌苔蛋白SDS-PAGE电泳图谱差异,进而从免疫及蛋白表达方面揭示脾阳虚证的特征变化规律.方法:参照《中药新药临床指导原则》的临床实施标准,将确诊的脾阳虚证患者及正常人,纳入本实验.采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定分泌型IgA含量及采用蛋白双向电泳方法对舌苔蛋白电泳图谱进行差异分析.结果:分泌型IgA含量与正常人比较有显著差异(P＜0.05);而舌苔蛋白双向电泳图谱与正常人比较,两组间存在21个具有明显表达差异的蛋白斑点.结论:脾阳虚证患者口腔免疫水平显著下降是脾阳虚证的基本特征之一.脾阳虚证患者和正常人舌苔蛋白表达确实存在差异.
关键词： 脾阳虚证 分泌型IgA 舌苔蛋白 SDS-PAGE电泳 研究 -
Western-Blotting在粘放菌5519 I型菌毛鉴定中的应用
目的:检测粘放菌5519 I型菌毛的纯度及Western-Blotting方法的特异性.方法:采用SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法.结果:粘放菌5519 I型菌Mr大部分为54 000,少部分为38 000.Western-Blotting检测结果与SDS-PAGE结果相一致.结论:Western-Blotting在粘放菌菌毛鉴定中具有高度特异性.
关键词： 菌毛 SDS-PAGE电泳 粘放菌 -
牛带绦虫可溶性抗原SDS-PAGE电泳初步分析
目的分析牛带绦虫可溶性抗原蛋白组分.方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对牛带绦虫成虫、牛囊尾蚴及牛带绦虫虫卵的可溶性抗原进行分析.结果牛带绦虫不同抗原的蛋白质区带主要分布于14～116kD之间.成节显示37条,主带14条(分子量分别为100,68,63,45,43,41,37,35,29,25,20,17,15,13kD);孕节显示35条,主带11条(分子量分别为68,63,45,43,35,29,25,20,17,15,13kD);虫卵显示9条,主带3条(分子量分别为68,38,25kD);囊尾蚴显示12条,主带6条(分子量分别为68,36,35,16,14,12kD).结论成虫的成节和孕节的蛋白图谱差别不大但与囊尾蚴的蛋白图谱有显著差别, 成虫和囊尾蚴的抗原可能有差别.
关键词： 牛带绦虫 蛋白质 抗原 SDS-PAGE电泳
