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杭州市淋病奈瑟菌血清学分型研究
淋病奈瑟菌的血清型与其耐药性、血清抗性、营养分型、对免疫球蛋白A1蛋白酶的表达以及引起的淋病奈瑟菌感染类型均有密切关系.但淋病奈瑟菌的抗原结构非常复杂,与细菌表层结构有关的外膜蛋白、脂多糖和菌毛都可以作为血清学分类的基础.
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生物信息学在毒力岛研究中的应用
1986年Hacker等在泌尿道致病性大肠杆菌(UPEC)536株染色体上发现两个可以发生缺失的大片段,片段丢失后,细菌产生溶血素和P菌毛的能力随之丧失,细菌的毒力受到影响.在此发现的基础上于1994年提出了毒力岛(pathogenicity island)的概念,认为毒力岛是整合于细菌基因组的外源性DNA片段,这些特殊片段存在于致病型菌株上,赋予细菌毒力,却在与之亲缘关系密切的非致病菌株上不存在.
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热处理的Ⅰ型嗜肺军团菌细胞抗原作酶联免疫吸附试验检测抗体的应用
菌细胞为抗原的酶联免疫吸附试验(BCA-ELISA),不用提取抗原,可测定直接作用于宿主体内的菌细胞表面裸露抗原决定簇(蛋白质、脂多糖)激起的抗体,能更确切地反映机体的免疫状态,其敏感性较肥达氏等细菌凝集试验测得的这种抗体滴度高10~100倍,已用于检测许多细菌表面(或菌毛)抗原的抗体[1-4].
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EPEC野生型O119与H511对HEp-2细胞粘附力比较
肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli. EPEC)是引起婴幼儿腹泻的重要病原菌之一.粘附是EPEC感染宿主肠粘膜上皮细胞关键的第一步.因此准确测定EPEC对靶细胞的粘附能力,有助于判定其致病力.通过分析比较EPEC有菌毛株O119和无菌毛变异株H511对人喉癌上皮细胞HEp-2的粘附情况,以确定菌毛对EPEC粘附力的影响.
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革兰阳性细菌菌毛结构和功能研究进展
菌毛(pili)是细菌表面的一种多亚基蛋白聚合物.在革兰阳性菌中,菌毛亚基蛋白通过分选锚定酶(sortase,Srt)介导的反应进行共价聚合并锚定到细胞壁上.菌毛参与细菌对宿主组织和细胞的黏附、侵袭和定植等重要生理活动.本文综述革兰阳性菌菌毛结构、分子装配及其功能方面研究进展.
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脊髓病损患者留置尿管与尿路感染
脊髓病损(spinal cord lesion,SCL)是指脊髓受到创伤性或非创伤性损害,后者包括感染、肿瘤、椎间盘突出、血管异常等.
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PA菌毛株菌苗膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的研究
绿脓杆菌MSHA菌毛株菌苗(简称PA菌苗)是一种免疫调节剂,对肿瘤细胞有杀伤作用.我们经动物实验证实PA菌苗用于膀胱灌注的可行性后将其应用于临床,疗效显著,报告如下.
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肺炎克雷伯菌cAMP受体蛋白基因缺失株的构建及其在生物膜形成中的作用
目的:构建肺炎克雷伯菌cAMP受体蛋白基因(crp基因)缺失突变株与回补株,了解crp基因在肺炎克雷伯菌生物膜形成中的作用。方法设计位于crp基因(566 bp)上游698 bp片段及下游576 bp片段的两对引物,分别扩增出相应片段并通过融合PCR构建一个1274 bp片段的突变盒,利用双酶切克隆的方法将突变盒克隆至温度敏感性自杀载体pKO3-Km的NotⅠ位点间,电转化至肺炎克雷伯菌中构建肺炎克雷伯菌crp基因无痕缺失突变株(Δcrp)。扩增包含crp基因编码、启动子结合区及转录终止区的2063 bp基因片段并克隆至pGEM-T-easy质粒上,将此质粒电转至crp基因缺失突变株中构建crp基因回补株(C-crp)。采用RT-PCR方法检测crp基因在基因缺失株与回补株的表达情况,确定crp基因缺失突变株与回补株构建成功。利用结晶紫染色法检测crp基因对肺炎克雷伯菌生物膜形成的影响,并通过酵母凝集试验检测crp基因对肺炎克雷伯菌的菌毛形成影响。结果成功构建了肺炎克雷伯菌crp基因缺失突变株与回补株,RT-PCR结果显示,crp基因在缺失突变株中无表达,在回补株重新表达。体外试管静止培养48 h后,crp基因缺失株无明显生物膜形成,而在野生株及回补株的液体培养基表面形成宽厚生物膜。结晶紫染色定量发现,crp缺失突变株的生物膜相对形成量显著低于野生株(0.063±0.011 vs 1.020±0.056,P<0.001)。酵母凝集试验发现在crp基因缺失突变株中细菌菌毛生成能力下降,提示crp基因影响肺炎克雷伯菌菌毛的生成。结论肺炎克雷伯菌crp基因可能通过调控肺炎克雷伯菌菌毛生成而正调控细菌生物膜的形成。
关键词: 肺炎克雷伯菌 cAMP受体蛋白基因(crp基因) 生物膜形成 菌毛 -
不同标本来源大肠埃希菌分布菌毛及基因分型研究
目的 调查医院不同标本分离大肠埃希菌P菌毛基因分型,探究基因分型与标本来源之间的关系.方法 收集2009年1-12月温州医学院附属第二医院分离大肠埃希菌120株,采用Microscan Walk away 96SI微生物鉴定仪进行鉴定和药敏试验,按CLSI 2009年标准判定;用PCR法检测P菌毛和Ⅰ型菌毛基因;采用X2检验,P<0.05为差异有统计学意义.结果 papC基因阳性率为39.19%,其中尿液分离株阳性率为54.50%,显著高于痰液、引流液以及脓液分离株(P<0.05);pa pG分型率为64.20%,pa pGⅡ型检出率为46.67%,其中尿液分离株阳性率为70.54%,显著高于痰液和血液分离株(P<0.05);pa pGⅢ型检出率为17.50%,其中尿液分离株阳性率为25.00%,显著高于痰液分离株(P<0.05);未检测出pa pG Ⅰ型.结论 不同标本分离大肠埃希菌pa pC基因携带率不同,尿液中肾盂肾炎大肠埃希菌(UPEC)的分离率高,pa pG分型以pa pGⅡ型为主,存在部分pa pGⅢ型.
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伴放线放线杆菌粘附特性研究
目的 分析伴放线放线杆菌的粘附特性及茵毛结构基因flp-1的遗传多样性对菌株粘附活动的影响.方法 检测不同孵育条件下5种flp-1基因型临床分离菌株和光滑型菌株的粘附活动.结果 临床分离菌株的粘附量随菌液浓度,孵育时间的增加而增加.flp-1基因型Ⅱ型菌株的粘附量高于其它4型菌株,光滑型菌株的粘附量低于临床分离菌株.生理温度下菌株粘附数高,低温下明显降低.厌氧条件和有氧条件下的粘附量无显著性差异.结论 伴放线放线杆菌临床分离菌株的粘附存在时间和菌量依赖性,并要求一定新陈代谢活性,粘附效率在氧浓度改变时没有明显变化.伴放线放线杆菌表型影响菌株的粘附作用.不同flp-1基因型菌株粘附能力存在差异,Ⅱ型菌株粘附能力强.
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伴放线放线杆菌flp-1基因遗传多样性分析
目的:分析伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)临床分离菌株菌毛结构基因flp-1的遗传多样性和flp-1基因与菌株表型之间的关系.方法:对从不同牙周状况患者口腔中分离的60株Aa(57株粗糙型,3株传代转变成光滑型)和6株Aa标准菌株(光滑型)进行flp-1基因扩增,并通过PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法分析临床分离菌株flp-1基因的遗传多样性.结果:所有57株粗糙型菌株和9株光滑型菌株都检测到flp-1基因;60株临床分离菌株检测到5种flp-1基因型,其中基因型2型占67%,共有40株.结论:Aa菌株表型的改变不伴有flp-1基因缺失;Aa临床分离菌株flp-1基因具有遗传多样性,基因型主要为2型.
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牙周致病菌中毒力岛的研究进展
近年来,随着分子生物学研究的不断深入,在细菌学领域出现了一些新的概念,毒力岛即为其中之一.1986年Hacker等[1] 在泌尿道致病性大肠杆菌(LJPEC)536的染色体上发现两个可以发生缺失的大片段,片段丢失后,细菌产生溶血素和P菌毛的能力随之丧失,细菌的毒力受到影响.
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口腔轻型链球菌黏附性的研究进展
轻型链球菌是在口腔生物膜形成中的早期定植菌,通过黏附,产酸和耐酸,促进窝沟龋的发生.其中黏附是致龋的重要原因,本文就轻型链球菌的黏附性相关蛋白及基因作一综述.
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尿路致病性大肠埃希菌和宿主膀胱防御反应的相互作用
尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)是大部分尿路感染的病原菌.大多数UPEC表面具有纤毛状的粘附器官1型菌毛.1型菌毛介导细菌与膀胱上皮细胞接触,且侵入其中.UPEC侵入细胞后获得一个保护性环境,或在其中繁殖,或处于静止潜伏状态.具1型菌毛的UPEC侵入细胞引发了宿主的一系列反应:细胞激酶的产生,炎症反应和受感染膀胱上皮细胞的片状脱落.宿主反应和抗生素治疗虽能有效清除尿中细菌,但致病菌可顽固地存在于膀胱组织中,从而成为复发性尿路感染的难治根源.
关键词: 尿路致病性大肠埃希菌 大肠埃希菌 尿路感染 菌毛 -
绿脓杆菌MSHA菌毛株菌苗对肾病患儿免疫功能的影响
儿童难治性肾病综合征与免疫功能紊乱及反复感染密切相关.我科采用一种新的免疫调节剂--绿脓杆菌MSHA菌毛株菌苗(绿慕安)注射液治疗22例难治性肾病综合征(NS),兹对其临床效果及细胞免疫功能的影响作一分析.
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铍对牙龈卟啉单胞菌菌毛基因型的影响
背景:含铍合金口腔修复体在口腔湿润的环境中合金易被腐蚀、溶解而释放出铍离子,铍离子对牙周病主要致病菌--牙龈卟啉单胞菌菌毛基因型是否有影响?目的:检测铍离子对牙龈卟啉单胞菌菌毛基因型的影响。方法:将复苏后的牙龈卟啉单胞菌置于含铍离子浓度为10×10-6,5×10-6,1.25×10-648 h,采用PCR扩增、测序的方法从分子水平检测铍离子对牙龈卟啉单胞菌菌毛基因型的影响。结果与结论:在实验条件下培养后的牙龈卟啉单胞菌fimA基因出现突变现象,表现为:当铍离子浓度为5×10时,DNA 217、和257位点处出现G/A套峰,与其他组测得的碱基G不同,表明此处有可疑的碱基变化,部分碱基由G转变为A;所有浓度都发现DNA 101位点处插入由7个A碱基组成的碱基(段),目前研究尚未发现突变的发生与铍离子浓度存在直接相关关系。铍离子可影响牙龈卟啉单胞菌fimA基因发生变化,可能引起其阅读框架的移位及编码的蛋白合成异常,进而引起牙龈卟啉单胞菌黏附能力及致病力的改变。的人工唾液中厌氧培养-6
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牙龈卟啉单胞菌分子生物学研究进展
牙龈卟啉单胞菌已公认为是牙周炎的致病菌,它的一些表面结构诸如细胞外囊泡,菌毛,外膜蛋白,凝集素介导该菌对牙周组织粘附、定植,或作为毒性因子破坏牙周组织,随着分子生物学技术的发展,已对这些结构进行了分子克隆,本文拟就牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)简称Pg)分子生物学进展作一简要综述.
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内氏放线菌株ATCC 19246菌毛诱导成纤维细胞L929产生IL-1β,IL-6 TNR-α的研究
目的 提取内氏放线菌菌毛,并检测内氏放线菌菌毛是否能引起成纤维细胞表达释放IL-1β,IL-6,TNF-α.方法 用搅拌法提取内氏放线菌19246菌毛,电镜鉴定菌毛的纯度,用提取的菌毛诱导小鼠成纤维细胞L929.48 h 后收集细胞培养上清,Western-blotting分别检测细胞培养上清中IL-1β,IL-6,TNF-α.结果 电镜负染观察显示内氏放线菌菌毛与菌体充分分离,得到菌毛粗提物.Western-blotting结果显示菌毛处理过的细胞培养基中可检测到IL-1β、TNF-α、IL-6,而未经菌毛处理过的细胞培养基中未见IL-1β、TNF-α、IL-6.结论 内氏放线菌19246菌毛初提物可以诱导L929细胞产生IL-1β、TNF-α、IL-6.
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鸡源肺炎克雷伯菌菌毛的分型
目的 对临床分离的5株鸡源肺炎克雷伯菌进行菌毛类型的鉴定.方法 首先利用传统的D-甘露糖血凝特性(MSHA/MRHA)试验对临床分离的5株鸡源肺炎克雷伯菌进行菌毛分型,同时以该菌Ⅰ型和Ⅲ型菌毛的主要结构亚单位(fimA/mrkA)基因序列为靶序列,分别设计一对引物,利用PCR扩增的方法对该5株菌进行菌毛分型.结果 MSHA/MRHA方法鉴定其中的4株菌具有Ⅲ型菌毛,另外1株无法鉴别,而PCR方法鉴定5株菌均具有Ⅲ型菌毛.结论 该5株鸡源肺炎克雷伯菌均具有Ⅲ型菌毛.MSHA/MRHA具有方便、快速的特点,但不敏感;PCR则具有快速、敏感、准确的优点.研究结果对于肺炎克雷伯菌的流行病学调查及该菌的临床诊断具有指导意义.
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不同培养基对肠毒素大肠杆菌疫苗株产生茵毛的影响
目的通过比较不同培养基对疫苗株产生菌毛的影响,获得一种有利于细菌生长和菌毛产生,而且费用低廉的培养基.方法通过测定培养物的密度,观察疫苗菌株的生长规律,用斑点ELJSA和全菌ELIsA检测菌毛抗原的表达情况.结果LB培养基既有利于疫苗株的生长,又有利于细菌菌毛的表达.结论LB培养基可以用于疫苗株中试和大规模培养.