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猴/人免疫缺陷嵌合病毒(SHIV)的研究进展
SHIV是在SIV其因组框架的基础上利用基因重组技术以HIV部分基因片段来取代SIV相应基因而构建的一种重组病毒.SHIV与亲本株病毒有相似的生物学特性,能在CD4+细胞、PBMCs、巨噬细胞中复制,并能引起猴发生AIDS症状.另外SHIV能诱使机体产生中和抗体,可以作为侯选疫苗株,在AIDS预防中有广阔的前景.
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2003~2004年儿童和成人流感疫苗效果的评价(美国科罗拉多,2003)
2003~2004年流感季节较早出现特征性流感活动和严重疾病报告,特别是在儿童中发生以甲型流感(H3N2)病毒株占优势的流感流行,该病毒株与甲型流感(H3N2)疫苗株的抗原不同.2003年,在科罗拉多进行了儿童回顾性队列研究和成人病例对照研究,提供了2003~2004年流感疫苗效果的初步数据.研究结果表明,在成人和儿童中疫苗效果(VE)与以往的流感疫苗在成人中无效的研究结果不同.
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野生和疫苗株衍生脊灰病毒的实验室监测
全球脊髓灰质炎(脊灰)实验室网络(GPLN)持续支持全球脊灰根除倡议,包括100个国家的145个机构和所有6个WHO地区的操作运转.其主要责任是分析来自急性弛缓性麻痹症(AFP)病例的粪便样本,鉴定这些样本按照血清型和内在型分离物的任何脊灰病毒,并提供核苷酸序列,以便用分子流行病学研究调查病毒传播链.有些GPLN网络的机构已经在本国开展了一些临床诊断或研究工作.
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狂犬病毒毒株及抗原性研究进展
狂犬病是一种严重危害人类健康的人畜共患病,病死率极高,且目前尚无有效的治疗方法而只能着重于预防,故疫苗的有效保护极为重要,对毒株的研究分析可以了解其来源及变异,以确定疫苗株的筛选和使用.
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1998-2002年杭州市流感病毒的HA1序列及与推荐疫苗株的比较研究
近年来,杭州市在部分人群中进行了流感灭活疫苗的接种.为了解杭州市当前甲型和乙型流感毒株HA1区氨基酸序列的变化情况及与流感疫苗株相应序列的关系,我们对1998-2002年于杭州分离的甲1、甲3和乙型流感病毒毒株HA1片段进行核酸序列测定,并与WHO推荐的流感疫苗株HA1序列进行比较分析,现将结果报告如下.
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布鲁氏菌疫苗株与标准株的比较
布鲁氏菌鉴定需要标准株作为对照,标准株具有高致病性。本研究对牛、羊、猪种生物Ⅰ型的标准株(544A、16M、1330S)与疫苗株(S19、M5、S2)进行比较,探索疫苗株作为对照菌株用于鉴定的可能性。
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1988-2005年甲3亚型流感流行株与疫苗株的HA1区差异探讨
目的 从基因层面探讨18年来我国及欧美国家甲3亚型流感流行株与当时WHO疫苗推荐株之间的差异.方法 收集1988-2005年间我国以及欧美国家的甲3亚型流感流行株与疫苗株的血凝素重链(HA1)区域的氨基酸序列,用BioEdit生物软件进行比较,分析其与当时疫苗推荐株在HA1以及HA1抗原决定簇区域的氨基酸差异.结果 在HA1区以及HA1区抗原决定簇位点,我国甲3亚型流感流行株与当年疫苗株之间的差异,均大于它与下一轮疫苗株之间的差异,且已达到十分显著的程度(P<0.01).而欧美国家甲3亚型流感流行株与当年疫苗株之间的差异,虽然稍大于它与下一轮疫苗株之间的差异,但尚不显著(P>0.05).此外,使用多年的疫苗株,无论在我国还是欧美,随着疫苗使用年数的增加,流行株与疫苗株之间的差异不断增大.结论 WHO推荐的甲3亚型疫苗株与我国甲3亚型流行株之间,从基因层面进行分析,存在明显的滞后现象.
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汉坦病毒Z10疫苗株M片段的克隆及在昆虫细胞表达的研究
汉坦病毒(HTNV)Z10株是从患者血清中分离到[1],现已用于生产肾综合征出血热(HFRS)Ⅰ型疫苗的毒株.自1995年投产供应市场后,已在全国二十几个省市推广应用,目前该疫苗已接种1 000余万人份,为控制HFRS的流行起了很好的作用.
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汉坦病毒中国疫苗株Z10核蛋白免疫原性的研究
汉坦病毒株Z10是浙江省卫生防疫站出血热重点实验室于80年代分离成功,具有血凝滴度高、抗原性强等特点[1],后用作生产肾综合征出血热(HFRS)Ⅰ型和双价疫苗的毒株,用该病毒株生产的疫苗接种疫区人群,经现场流行病学考核,保护率在95%以上,具有很好的防病效果[2].为研究Z10株核蛋白的生物学特性,我们将Z10株核蛋白基因插入到原核表达质粒pET28a,构建成重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),进行核蛋白的表达,并将表达产物免疫家兔,研究其免疫原性,为进一步研究基因工程疫苗打下基础.
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广东地区流感H3N2毒株血凝素基因特征、进化和变异分析
为揭示广东地区2007~2010年甲型H3N2毒株血凝素(HA)基因特征和变异,采用时空抽样方法抽样,检测广东2007~2010年甲型H3N2毒株HA基因核苷酸序列,同时检索全球HA基因序列作为对照,采用Lasergene 7.1和Mega 5.05软件对HA基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合流行病学资料,对变异毒株进行进化速度分析;同时进行抗原分析.结果发现,广东2007~2010年H3N2毒株HA基因同义进化(Ks)和错义进化(Ka)速度分别为2.06×10-3~2.23×10-3核苷酸/年和1.05×10-3~1.21× 10-3核苷酸/年,HA1较HA2的错义突变速率要高3.13倍.与疫苗株A/Perth/16/2009的HA基因比较,2009年广东毒株同源性达到98.8%~99.7%、2010年同源性达到98.0%~98.4%.在广东2007~2010年毒株中,HA1五个抗原表位均有氨基酸位点变异,尤其是2010年毒株B区(N160K)和D区(K174R/N)的变异;此外,广东2010年毒株受体结合部位(RBS)还发生K189E/N/Q和T228A置换变异;两个糖基化位点变异影响到抗原性;目前使用的H3N2疫苗株与目前流行毒株的抗原性有差异.广东地区2007~2010年的毒株中,血凝抑制抗体的抗原分析结果有差异.结果提示,目前广东乃至全球甲型H3N2毒株HA1B区和D区均有氨基酸位点变异,RBS的两个位点发生置换,糖基化位点变异影响到表位A区和B区抗原性;与WHO推荐2011年流感H3N2毒株疫苗株比较,目前流行毒株HA基因有抗原位点变异.
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A型流感病毒M2蛋白疫苗的研究进展
目前用于免疫人群的流感疫苗多为三价灭活疫苗,包含A型流感病毒H1N1亚型、H3N2亚型和B型流感病毒.多年来的实践表明,三价灭活疫苗是有一定保护效果的.但是,由于流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)经常发生抗原转变和抗原漂移,使其抗原性表现出很大的变异,所以根据流感疫情监测预测的疫苗株也很难产生理想的保护效果.但流感病毒基质蛋白M2的膜外区氨基酸序列高度保守,有可能发展成为具有交叉保护能力的流感疫苗的候选抗原.该文就A型流感病毒基质蛋白M2疫苗的研究作一综述.
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表达乙型肝炎病毒表面抗原的非复制型重组痘苗病毒疫苗株RVJ123ΔCK的构建及其生物学性状鉴定
利用重组质粒pNeo-CK与pNeo-CKLacZ和表达乙型肝炎(乙肝)病毒S抗原的重组痘苗病毒RVJ123[1],构建了非复制型重组痘苗病毒RVJ123ΔCK.Southern blot证实,非复制型重组病毒RVJ123ΔCK基因组C和K片段间与宿主范围和毒力相关的基因稳定缺失,同时,J片段中插入的乙肝S抗原基因稳定存在.重组病毒RVJ123ΔCK在鸡胚成纤维母细胞中可良好繁殖,而在人源细胞系中不繁殖或仅低度繁殖,但都能表达HBsAg,并且在病毒一个复制周期内,复制型和非复制型病毒HBsAg表达水平无明显差别.
关键词: 乙型肝炎病毒表面抗原 非复制型痘苗病毒载体 疫苗株 遗传稳定性 -
运用限制性片段长度多态性分析方法鉴别麻疹疫苗株和野毒株病毒
目的 应用和验证快速鉴别麻疹疫苗株与野毒株病毒的方法.方法 采用逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)方法,对四川省2009~2011年分离的麻疹疫苗株和野毒株病毒进行鉴定,同时与序列分析进行对比验证.结果 5株RT-PCR扩增阳性产物,经AflⅡ酶切后,1株麻疹疫苗株病毒被切成两个片段,分别为287碱基对(Base Pair,bp)和151bp;4株麻疹野毒株病毒均不能被Afl Ⅱ酶切,仍呈单一条带.结论 RT-PCR-RFLP是一种快速、简便的鉴别麻疹疫苗株与野毒株病毒的方法.
关键词: 麻疹病毒 疫苗株 野毒株 逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析 鉴别 -
中国麻疹病毒疫苗株与野毒株鉴别方法的建立
目的 研究建立一种简便快速的鉴别中国麻疹病毒疫苗株与野病毒的方法.方法 在血凝素(Hemagglutinin)蛋白基因(H基因)上,寻找能将中国麻疹病毒疫苗株区别于野毒株的限制性内切酶酶切位点,并在包含此酶切位点的基因片段上设计逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)引物,同时对所建立的RT-PCR方法进行敏感性和特异性实验证明,对RT-PCR产物利用限制性片段长度多态性分析方法(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)进行酶切鉴定.结果 该一步法RT-PCR方法比较敏感,至少能够检测4.64 TCID50(50%组织培养感染剂量,Median Tissue Culture Infective Dose)麻疹病毒.而非麻疹病毒RT-PCR结果均未见阳性条带,说明RT-PCR方法特异.PCR产物经Afl Ⅱ酶切作用后,中国麻疹病毒疫苗株沪191与长47PCR产物均能被切成两个片段,分别为287bp和151bp,2株麻疹野病毒代表株均不能被Afl Ⅱ酶切.结论 新建立的RT-PCR-RFLP是一种快速、简便的鉴别中国麻疹病毒疫苗株与野毒株的方法.
关键词: 麻疹病毒 疫苗株 野毒株 逆转录-聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 -
杭州市水痘-带状疱疹病毒流行株基因型特征分析
目的 了解杭州市水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)流行株基因型别特征.方法 采集2012-2017年临床诊断水痘患者疱疹液,提取样本DNA,PCR扩增ORF 22、38、54、62基因片段.用单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)方法分析ORF 22基因片段,确定病毒基因型别;用限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)技术分析ORF 38、54、62基因片段,区分野毒株和疫苗株.结果 23例临床诊断水痘患者的疱疹液中21例样本VZV核酸阳性.SNP分析结果显示,21例阳性VZV的基因型均属于clade 2.RFLP分析结果显示,21例阳性VZV均为野毒株(PstI+ BglI+ SmaI-).结论 杭州市VZV流行株基因型别主要是clade 2,未发现疫苗株感染.
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俄联邦发生天花疫苗引起发病的事故
近,俄联邦海参崴的8名儿童由于玩耍弃置的天花疫苗的安瓿而患病,并已经俄联邦卫生部确认,目前正在寻找这些儿童患病的实验室证据.此事引起了人们的关注.在一些报告中对关于天花疫苗的成分、一些国家需要保留天花疫苗株的原因等问题存在着错误的认识.本文在于澄清这些问题.
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埃及1982~1993年脊髓灰质炎疫苗Ⅱ型衍生病毒的流行情况
1988~1993年在埃及的27个行政区中的8个行政区发现了32例与口服脊髓灰质炎(脊灰)疫苗(OPV)Ⅱ型衍生病毒有关的病例。虽然初的分离检测表明,它们和疫苗株有不同的成分和不同的核苷酸序列,但核苷酸分析表明:1999年所有的病毒分离结果(核苷酸序列同源性为93%~96%)与OPV的Sabin疫苗株Ⅱ型有关。这一分离结果与埃及发现的脊灰Ⅱ型野病毒不同(核苷酸序列同源性<81%),埃及后分离到脊灰Ⅱ型野病毒的时间是1979年;与其它地区发现的脊灰Ⅱ型野病毒也不同;这一分离结果与其它患急性弛缓性麻痹的病例分离到的脊灰Ⅱ型病毒(其与SabinⅡ型核苷酸序列同源性>99.5%)也不同。
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全球麻疹实验室网络
1背景麻疹是一种传染性极高的呼吸道传染病.感染麻疹病毒后IgM抗体出现较早,在出疹后7~10d达到高峰,之后迅速下降.所以IgM抗体的出现通常被作为早期麻疹感染(包括野病毒和疫苗株)的证据。
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麻疹流行性腮腺炎和风疹联合疫苗(下)
5 临床上应用某种腮腺炎减毒活疫苗累及中枢神经系统的问题腮腺炎野病毒广泛累及其所能够感染的脏器和组织[31,54],但主要的临床表现是在腮腺、性腺和中枢神经系统.在80年代末90年代初,有人观察到某些腮腺炎病毒疫苗,不管是单价疫苗还是与麻疹和风疹的联合疫苗 ,由于其病毒株减毒不足,造成了无菌性脑膜炎或脑膜脑炎.早在1986 年就有报道[55]Leningran-3疫苗株由于减毒不足,造成每1 000名接种对象中约发生1例脑膜炎.在西欧[42~45]、加拿大[ 46]和日本[47、48],主要的注意力则集中在由欧洲和日本疫苗厂家生产的含有Urabe腮腺炎疫苗株的疫苗所造成的神经病理致病性.世界卫生组织估计[42,44],每4000名接种对象约发生1例脑膜炎,并且通过病毒核酸的基因测序,确定了在接种过疫苗的患者身上所获得的病毒分离株就是Urabe疫苗株.在日本[47,48],Urabe疫苗脑膜炎的发病率约为1∶400~1∶1200.同时,还有1例怀疑由接种疫苗的儿童将病毒传播给易感弟妹的报道[56].在日本Urabe病毒脑膜炎的发病率如此之高,促使生产厂家改变了其生产工艺[48].全世界许多国家都停止使用Urabe株疫苗[40,45,46],尽管与自然感染所造成的严重后果相比,Urabe疫苗的风险效益比仍然相当高.
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湖北地区季节性H1N1流感病毒HA基因特性分析
目的 调查分析湖北地区季节性H1N1流感病毒血凝素(HA)的基因特性.方法 收集2000年以来临床样品中分离鉴定的H1N1流感病毒毒株,运用RT-PCR扩增病毒HA基因,对扩增片段进行序列测定和分析.结果 H1N1流感病毒HA基因与同期世界卫生组织推荐的疫苗株相应基因的同源性为95.8%~99.6%,分离株HA基因中潜在的抗原性位点和糖基化位点与2000~2008年的疫苗株基本相同,但与2009年疫苗株有一定差异.HA基因进化分析表明在不同年份分离出的流感毒株呈现出不同的亲缘关系.结论 湖北地区2000~2008年分离的季节性H1N1流感毒株与世界卫生组织同期推荐的疫苗毒株的HA核苷酸序列有高度同源性,HA基因重要抗原位点的氨基酸没有改变,但与2009年疫苗株有所不同,序列同源性和进化关系表明历年疫苗株可以给人群提供一定程度的保护.