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小叶型太子参高产栽培配套技术的研究
太子参又名孩儿参Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.,为石竹科宿根性一年生草本药用植物.以块根入药,具有补肺气、健脾气、生津液之功效[1].野生太子参主要分布于福建、江苏、安徽、浙江、山东等地区;朝鲜、日本亦有分布.而太子参商品的主要产地则为福建、江苏、安徽、山东,栽培历史已过百年.按太子参品种资源的生态型差异,有3种品种类型:大叶型太子参、野生型太子参和小叶型太子参,其中,小叶型太子参是太子参道地主产区传统种植的主流品种资源之一[2].太子参人工栽培研究方面,大多数研究仅停留在常规栽培研究上,对太子参栽培的基础研究较少,低水平重复项目不断发生.关于主栽品种小叶型太子参高产栽培技术的研究尚未有人涉及.本研究总结了福建产区小叶型太子参高产栽培配套技术.
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EPEC野生型O119与H511对HEp-2细胞粘附力比较
肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli. EPEC)是引起婴幼儿腹泻的重要病原菌之一.粘附是EPEC感染宿主肠粘膜上皮细胞关键的第一步.因此准确测定EPEC对靶细胞的粘附能力,有助于判定其致病力.通过分析比较EPEC有菌毛株O119和无菌毛变异株H511对人喉癌上皮细胞HEp-2的粘附情况,以确定菌毛对EPEC粘附力的影响.
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PiT-1在血管平滑肌细胞中的磷摄取非依赖信号转导作用
血磷升高与慢性肾病患者血管钙化的发生密切相关。高磷诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMCs)向成骨表型转化及基质矿化需要Ⅲ型钠磷共转运体 PiT-1的参与,但 PiT-1在其中的具体作用机制尚不清楚。日前,美国华盛顿大学 Giachelli 的研究小组发现,诱导 VSMCs 向成骨表型转化及基质矿化所需要的磷浓度远远高于大量磷摄取所需要的磷浓度,提示除磷转运外 PiT-1可能还存在其他信号转导作用。进一步研究发现,高磷并不能诱导 PiT-1缺陷的 VSMCs 发生ERK1/2磷酸化,但转染野生型 PiT-1或磷转运缺陷 PiT-1突变体逆转录病毒后可活化 ERK1/2。野生型 PiT-1或磷转运缺陷PiT-1突变体均可促进 VSMCs 向成骨表型转化。磷转运缺陷 PiT-1突变体也可促进 VSMCs 基质矿化,但程度低于野生型 PiT-1。该研究表明,PiT -1所介导的磷摄取依赖性和非依赖作用,对于磷诱导的 VSMCs 钙化都是非常重要的。当细胞外磷浓度高于生理浓度时,PiT-1可作为一个磷感受器在调节 ERK1/2激酶的活性、VSMCs 向成骨表型转化及钙化中发挥信号转导作用。进一步阐明 PiT-1作为磷感受器的具体作用机制,有望为临床治疗血管钙化提供新的靶点。
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p53蛋白过表达对大肠肿瘤细胞增殖与凋亡的影响
p53抑癌基因在散发性大肠瘤"腺瘤-癌"多阶段发生模式中起着重要作用[1].野生型p53蛋白是细胞增殖、分化、修复、衰老及凋亡等机制中的关键调节因子[2-4].p53基因发生错义突变,将产生变异蛋白,抑制细胞凋亡[5,6],促进细胞增殖转化而发挥促癌作用.
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p53研究的新进展
肿瘤抑制基因p53是目前研究为广泛和系统的抑癌基因之一.野生型p53(wt-p53)参与了DNA损伤修复、细胞周期调控、细胞凋亡及抑制血管生成等过程.p53基因的突变使上述功能丧失,从而导致肿瘤的形成.在大约50%人类肿瘤中可发现p53基因的突变,且几乎可见于各种类型的肿瘤细胞中.本文就目前p53研究及相关基因治疗的进展作一综述.
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结直肠癌KRAS基因突变检测方法的应用和评价
西妥昔单抗、帕尼单抗等靶向药作为结直肠癌有效治疗药物已广泛应用于临床。临床资料表明, KRAS基因突变患者对这种单抗药物并无明显效果,只有野生型患者才能从中获益。因此,临床上将KRAS基因突变状态作为一个重要的治疗标志物,它与结直肠癌的预后和治疗效果具有很强的相关性[1]。2009年美国国立癌症综合网络( NCCN)结直肠癌临床实践指南规定,所有转移性结直肠癌患者必须检测KRAS基因突变状态,只有KRAS野生型才建议接受EGFR靶向治疗[2]。同年,美国临床肿瘤学会( ASCO)也发布了同样的临床治疗建议,将其作为肿瘤靶向治疗的分子标志物,可见其重要指导意义[3-4]。目前,KRAS基因检测在临床已普遍开展。我们主要就国内KRAS基因突变检测方法作一评价,供临床选择时参考。
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p53及p21蛋白在胆囊癌及肝外胆管癌的表达
p21WAF1(p21)是细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinases, CDKs)抑制蛋白,为野生型p53基因下游激活产物.p53突变及p21蛋白异常表达在肿瘤的发生发展中起重要作用,见于多种人类恶性肿瘤[1,2].我们应用免疫组织化学的方法检测胆囊癌及肝外胆管癌组织中p53及p21的表达情况,探讨p53及p21蛋白表达的意义以及与临床病理指标的关系.
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呼吸道合胞病毒诱导人上皮细胞趋化因子差异表达
本研究采用分离野生型(wt)和标准株RSV感染上皮细胞,对宿主细胞mRNA差异表达进行检测,研究病毒复制与细胞趣化因子表达关系.
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抗肺炎链球菌溶血素蛋白单克隆抗体的制备及表征
肺炎是导致全球5岁以下儿童发病或死亡的常见疾病[1]。目前市售疫苗均为多糖或多糖结合组分,难以对90多种肺炎链球菌进行广谱的覆盖,且随着疫苗的广泛应用,血清型替代现象也日趋严重[2]。为解决这些问题,以肺炎链球菌蛋白作为疫苗组分的蛋白疫苗被寄予厚望。肺炎链球菌溶血素蛋白( Ply)在所有肺炎链球菌株中均表达且高度保守,成为广谱肺炎蛋白疫苗的候选组分。前人研究表明,Ply在肺炎链球菌感染模型上,与野生型相比较,Ply的缺失与肺部损伤的降低、细菌菌落数的降低、肺部中性粒细胞的减少及延长生存时间等具有直接关联[3]。天然结构的 Ply (Plywt)溶血活性极强,对细胞毒性很大,无法直接作为免疫原,本实验室制备了Plywt的减毒突变体Plym2。本研究利用Plym2研制了Ply的单克隆抗体,用于建立准确简便的检测Ply的方法。
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中国佤族人群MBL基因SNP及其单倍型与基因型的研究
甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin, MBL)通过激活补体凝集素途径和调理吞噬作用清除病原体及受感染细胞,在机体天然免疫中起关键作用[1].已发现MBL基因上存在至少20个单核苷酸多态性(SNP)位点,仅其中6个SNP位点对MBL血清水平有较大的影响,他们分别是启动子区-550(G/C)、-221(C/G)、+4(C/T)3个位点(分别称H/L、X/Y和P/Q等位基因)和结构基因第一外显子CGT52TGT、GGC54GAC、GGA57GAA 3个密码子点突变(分别称为D、B、C等位基因,即A野生型).按照排列组合的规律这6个SNP可随机组合成26种单倍型,但由于结构基因3个SNP位点与不同的启动子单倍型连锁不平衡,至今只检测到7种常见的单倍型.
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小鼠野生型和突变型透明质酸受体RHAMM的抗血清制备及其初步应用
目前,小鼠第11号染色体的 RHAMM(Receptor of Hyaluronic Acid Mediated Motility)基因的研究多限于体外或啮齿类动物实验系统,有关该基因在人癌组织中的表达形式及其肿瘤生物学意义仍所知甚少.利用多种分子生物学技术,制备针对RHAMM 的生物/免疫试剂将会推动这方面研究的进展.
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P-gp对树突状细胞从皮肤迁移至引流淋巴结的影响
细胞膜P-糖蛋白(P-gp,P-glycoprotein)是多药耐药(mdr)基因表达产物,广泛分布在各种排泄器官包括肠道、肝、肾等上皮细胞,脑及胎盘血管内皮细胞、造血干细胞及外周血细胞的细胞膜上.人类mdr1基因,小鼠mdr1a基因表达产物与多药耐药有关.目前,有关P-gp的研究多集中在肿瘤化学治疗的药物抵抗方面,对其在免疫调节中的作用还不清楚.本文用FVB(H-2q)野生型(FVB/N)与FVB mdr1a敲除(mdr1a-/-)突变型小鼠,探讨P-gp对树突状细胞(DC)从皮肤向引流淋巴结迁移的影响.
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产IMP-4和KPC-2碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌PMQR基因检测及分子流行病学研究
产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌是近些年来导致医院内感染常见的条件致病菌之一,其耐药特征、产生碳青霉烯酶的基因型、质粒介导喹诺酮耐药基因( PMQR)的分布及流行的克隆株等会随地域的差异而不同。我们研究发现本地区24株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中均携带 KPC-2基因,还有5株携带IMP-4基因,且24株产酶菌株中均携带PMQR,包括 qnrS112株, qnrA111株, qnrB411株,其中3株同时携带有包括qnrS1、qnrA1、qnrB4基因,1株同时携带qnrS1、qnrA1、qnrB4、acc (6′)-cr 基因;另外17株携带有acc(6′)-Ib基因,其中9株为acc(6′)-Ib-cr基因,7株为acc(6′)-Ib-suzhou基因,1株为acc(6′)-Ib基因野生型。不携带碳青霉烯类酶基因肺炎克雷伯菌的携带1种PMQR基因以上的阳性率(23.7%)显著低于携带碳青霉烯类酶基因菌株(91.7%),差异有统计学意义(χ2=62.00,P<0.01)。
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密度感应对铜绿假单胞菌运动能力及其生物被膜形成调控的研究
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerugu-nosa,P.a)生物被膜(BF)的形成主要受密度感应(quorum sensing,QS)系统调控,尤其在BF形成早期,QS对P.a泳动、丛集运动和颤搐运动起着非常重要的作用.因此本研究以P.a野生型中PAOI菌株及其OS相关基因缺失菌株为实验菌株,检测其泳动、丛集和颤搐运动,测量菌落生长形成的云雾状区域半径,观察菌落生长形态.以无菌1 cm×1 cm聚氯乙烯气管导管为载体,建立体外P.a静止BF模型,扫描电镜观察载体表面BF.采用SPSS13.0软件包进行分析,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义.
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乙型肝炎病毒S基因变异对人白细胞抗原表达的影响
人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA),可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类分子.HLAⅠ在正常肝细胞表达很弱或全无表达,HBV感染肝细胞时,表达量与炎症程度呈正相关.我们将所构建的野生型和变异型乙肝表面抗原中蛋白基因重组质粒转染HepG2细胞,以研究HBV/S基因变异株对宿主细胞HLA表达的影响,从而对变异株造成的肝脏炎症程度作出初步的推论.
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原卟啉Ⅸ在体外和野生型P53蛋白的相互作用及其诱导人结肠癌细胞以P53相关和非相关的方式死亡
背景与目的光动力学疗法(PDT)是对化疗和放疗已产生耐药的肿瘤的一种替代疗法.该方法主要通过激光照射光敏剂产生活性氧,继而杀死肿瘤细胞.有研究表明抑癌蛋白P53能使人类某些肿瘤细胞对PDT治疗更加敏感.但是,目前仍然没有直接的证据来证明这一观点.本研究旨在探讨肿瘤细胞中原卟啉Ⅸ(protoporphyrin Ⅸ,PpⅨ)和野生型P53蛋白的相互作用,及PpⅨ和PpⅨ-PDT诱导人结肠癌细胞发生死亡与P53蛋白的相关性.
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p53结合蛋白对细胞周期阻滞与细胞凋亡调控的研究进展
p53基因是人体内重要的肿瘤抑制基因,位于人类染色体17p13.1,含有11个外显子,编码的野生型p53蛋白由393个氨基酸残基组成,包含N-末端的转录激活结构域、生长抑制结构域、序列特异的DNA结合结构域(DNA binding domain,DBD)、核定位信号(nuclear localization signal,NLS)、四聚体化结构域和C-末端非专一DNA调节结构域.p53在监视细胞基因组损伤及维持基因组的稳定性中发挥重要作用.当紫外线、电离辐射、氧化应激及癌基因表达等刺激因素引起细胞内DNA损伤时,p53蛋白迅速聚集活化,并作为序列特异性转录因子对一系列靶基因进行调控.
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焦磷酸测序法检测结直肠癌患者k-ras基因突变
研究证明,k-ras癌基因的激活在CRC发生发展过程中起重要作用[1].k-ras基因常见的激活方式为点突变,其中90%以上的突变发生在1号外显子第12位密码子(野生型:GGT)和第13位密码子(野生型:GGC)[2],突变率约30%~49%[3].近年来,k-ras基因是否突变已成为西妥昔单抗能否用于CRC分子靶向治疗的用药评判标准[4].因此,如何快速准确检出k-ras 基因突变对这类药物的应用及疗效预测显得尤为重要.焦磷酸测序法是一种酶促级联测序技术,特别适用于SNP常规检测[5].
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等位基因特异性多重聚合酶链反应技术对载脂蛋白E基因多态性检测的评价
载脂蛋白E(apolipoproteinE,apoE)是血浆主要载脂蛋白之一,具有明显的遗传多态性,3种常见的等位基因(ε2、ε3、ε4)分别编码3种主要异构体(E2、E3、E4),产生6种不同的基因型(ε2/ε2、ε2/ε3、ε2/ε4、ε3/ε3、ε3/ε4、ε4/ε4).apoE基因多态性不仅是心血管疾病的一种重要易患因素,而且与Alzheimer病密切相关.目前国内外检测apoE基因多态性的方法很多,因而快速简便的检测方法也就成为研究中关注的焦点.等位基因特异性多重聚合酶链反应(PCR)技术(multi-ARMS)是利用TaqDNA聚合酶对引物3′端核苷酸的特异性,在不同的反应体系中分别加入与待检测位点野生型、突变体相配的一对引物,通过扩增产物的有无来判定该位点是否突变.
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错配PCR技术在快速检测耐药结核分枝杆菌中的应用
耐药结核病的早期快速诊断是结核病控制中亟待解决的关键问题之一.利用基因型检测耐药性包括PCR产物直接测序法,错配PCR法等[1-2].错配PCR技术早由Newton等于1989年建立并用于人抗胰岛素基因缺陷的检查,目前已广泛应用于基因点突变的检测[3-4].根据PCR引物设计的不同,可将其分为间接错配PCR,即引物与野生型完全互补,以突变株为模板不能扩增得到PCR产物,和直接错配PCR,即引物与特定的点突变完全互补,以野生株为模板不能扩增得到PCR产物.已有用间接错配PCR方法检测结核分枝杆菌利福平耐药的报道[5-6].本研究以检测耐利福平的结核分枝杆菌rpoB基因531位点的点突变为对象,建立了直接错配PCR法,并与间接错配PCR法进行了比较.