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HPV58 E6体外降解p53蛋白作用的研究
通过PCR方法从人乳头瘤病毒58型(HPV58)全基因克隆中扩增出HPV58E6基因片段,克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游,并在体外转录成mRNA后,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中成功表达了含有生物素标记的HPV58E6蛋白,并在体外成功发现HPV58E6能够降解p53蛋白,从而推断结合并降解p53蛋白是其致癌作用的关键环节,这为日后在细胞内对其致癌机理行进一步研究以及针对其进行治疗奠定下坚实的基础.
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人脑肿瘤组织中SV40感染及其临床意义
目的探讨猴病毒40（SV40）与人脑肿瘤发病的关系。方法采用聚合酶链反应 (PCR) 和原位杂交(ISH)同时检测30例正常人脑组织和198例人脑肿瘤组织以及SHG44和BT325两株人脑胶质瘤细胞系中SV40 DNA序列；并对SV40 DNA阳性肿瘤组织采用免疫共沉淀和Western blot检测大T抗原 (Tag) 的表达及Tag-RB复合物的存在。结果人脑肿瘤组织PCR SV40 DNA阳性率为48.5%（96/198），其中胶质瘤47.2% (42/89)，脑膜瘤48.8% (21/43)，脑垂体腺瘤51.4%(18/35)，神经鞘瘤43.8% (7/16)，先天性肿瘤53.3% (8/15)，正常人脑组织PCR SV40 DNA阳性率为 6.7% (2/30)。SHG44及BT325两株细胞中也分别检测出SV40的DNA序列。人脑肿瘤组织SV40 DNA阳性率显著高于正常人脑组织(P<0.01)。经ISH，仅在96例PCR SV40 DNA阳性的人脑肿瘤组织中检出87例阳性，2例SV40 DNA阳性的正常人脑组织中1例ISH阳性，SHG44及BT325两株细胞ISH SV40 DNA均阳性。SV40 DNA定位于肿瘤细胞核，阳性细胞呈弥漫或片灶状分布。96例SV40 DNA阳性脑瘤组织Tag表达阳性75例，所有Tag表达阳性瘤组织均发现Tag与RB形成特异性复合物。结论人脑肿瘤组织中存在SV40感染，提示SV40感染与人脑肿瘤有关；在人脑肿瘤组织中Tag广泛表达，Tag可能是SV40在人脑肿瘤发生发展中起作用的重要因素；SV40 Tag与RB 形成特异性复合物Tag-RB，导致RB活性丧失，可能是SV40致人脑肿瘤发生的一个重要机理。
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原卟啉Ⅸ在体外和野生型P53蛋白的相互作用及其诱导人结肠癌细胞以P53相关和非相关的方式死亡
背景与目的光动力学疗法(PDT)是对化疗和放疗已产生耐药的肿瘤的一种替代疗法.该方法主要通过激光照射光敏剂产生活性氧,继而杀死肿瘤细胞.有研究表明抑癌蛋白P53能使人类某些肿瘤细胞对PDT治疗更加敏感.但是,目前仍然没有直接的证据来证明这一观点.本研究旨在探讨肿瘤细胞中原卟啉Ⅸ(protoporphyrin Ⅸ,PpⅨ)和野生型P53蛋白的相互作用,及PpⅨ和PpⅨ-PDT诱导人结肠癌细胞发生死亡与P53蛋白的相关性.
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胃癌Fhit蛋白表达缺失的临床病理意义
目的:探讨76例胃癌Fhit蛋白表达与临床病理的关系.方法:采用免疫组化方法,检测76例胃癌、58例紧邻癌旁的异常增生和10例正常胃黏膜的Fhit表达并分析其与组织学分级、临床分期以及预后的关系.结果:癌组织Fhit表达缺失为48/76例(63.2%),紧邻癌旁的异常增生黏膜缺失为36/58例(62.1%),而正常胃黏膜为0/10,相差有非常显著性(P=0.000)Fhit蛋白缺失癌在癌组织学分级中的分布为Ⅰ-Ⅱ级癌35.7%(10/28),Ⅲ级癌79.2%(38/48),相差有非常显著性(P=0.000).Fhit蛋白缺失癌在临床分期中的分布为Ⅰ～Ⅱ期癌为43.8%(14/32),Ⅲ-Ⅳ期癌77.3%(34/44),相差有非常显著性(P=0.004).Fhit蛋白缺失癌在转移状况组的分布为转移癌74.1%(40/54),未转移癌为36.4%(8/22),相差有非常显著性(P=0.003).随访资料显示Fhit蛋白缺失癌的中位生存时间为33 mo,而Fhit蛋白表达癌者为71 mo,相差有非常显著性(Logrank=20.78;P=0.000).结论:Fhit蛋白为一种重要的抑癌蛋白,其表达缺失状况可能与胃癌的发生、侵犯、转移以及患者的预后相关.
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肺癌细胞抑癌蛋白PTEN下调机制的研究
目的:探讨肺癌细胞中抑癌蛋白PTEN低表达的相关机制.方法:Western blot方法检测肺癌细胞和正常人肺上皮细胞BEAS-2B PTEN蛋白的表达；用放线菌酮(1 μg/mL)处理人肺腺癌细胞A549和正常人肺上皮细胞BEAS-2B阻断细胞翻译后,Western blot方法检测不同时相PTEN蛋白的表达.RT-PCR检测肺癌细胞与正常肺上皮细胞PTEN mRNA水平；放线菌素D(1 μg/mL)处理肺癌细胞与正常肺上皮细胞阻断新生RNA合成,RT-PCR检测不同时相PTEN mRNA的水平.结果:Western blot结果显示,肺癌细胞中PTEN蛋白表达与正常肺上皮细胞比较有不同程度的降低(0.38～1.32倍);使用放线菌酮处理A549和BEAS-2B后,24 h内A549及BEAS-2B细胞PTEN蛋白表达无明显改变.RT-PCR结果显示肺癌细胞中PTEN mRNA与正常人肺上皮细胞相比明显降低(0.41～0.68倍)；放线菌素D处理显示肺癌细胞PTEN mRNA降解速率比正常肺上皮细胞降解速率明显加快.结论:肺癌细胞中抑癌蛋白PTEN低表达的主要原因是其mRNA降解加速,这为进一步研究PTEN蛋白低表达的详细分子机制提供了线索.
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肺神经内分泌癌FHIT蛋白表达及其临床病理意义的研究
目的:探讨脆性三联组氨酸(FHIT)蛋白在肺神经内分泌癌中的表达及其临床病理意义.方法:采用二步法非生物素免疫组化技术检测90例肺神经内分泌癌组织中FHIT蛋白表达并分析其与各临床病理指标的关系.结果:FHIT蛋白表达定位于癌细胞质;并与组织学类型(P=0.006)、临床分期(P=0.003)、性别(P=0.031)、肿瘤大小(P=0.010)、淋巴结转移(P=0.000)以及预后(P=0.000)相关;与患者年龄(P=0.408)、大体类型无关,P=0.528;FHIT表达为肺神经内分泌癌的独立预后因子,P=0.000.结论:FHIT蛋白在肺神经内分泌癌的发生、演进过程中起着重要作用,并可作为分子指标检测患者预后.
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Cul1蛋白与肿瘤发生
细胞内各种功能蛋白如原癌蛋白、抑癌蛋白、周期素、细胞分裂周期蛋白、转录调节因子等动态地影响到细胞周期进程.这些细胞周期相关蛋白在细胞内水平的高低,受泛素-蛋白酶体降解途径的精细调控[1].
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军事医学科学院发现结直肠癌发病新机制
英国《自然-通讯》5月13日晚在线发表了军事医学科学院放射与辐射医学研究所张令强课题组在结直肠癌发病机制方面的新成果。此项研究首次在国际上揭示泛素连接酶Smurf1是促进结直肠癌发生发展，并且导致患者预后差的一个重要因子。谢萍、张明华、何珊等研究人员通过对336例患者的结直肠癌样本分析发现，泛素类蛋白通路的修饰酶体系在结直肠癌中也呈现高表达，它们与Smurf1协同作用，促进了对抑癌蛋白的快速降解，从而解释了Smurf1为何具有促癌功能。
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猴病毒40是脑肿瘤发生的重要机制
第四军医大学西京医院神经外科研究所，近日完成的一项国家自然科学基金资助项目证实，猴病毒40是致人脑肿瘤发生的一个重要机制。为探讨猴病毒40早期区域基因编码产物大T抗原的表达及抑癌蛋白p53、pRb的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义。该所研究人员采用免疫共沉淀结合银染色及West-ern印迹法检测65例人脑肿瘤及8例正常人脑组织中大T抗原的表达，并对18例和15例大T抗原阳性瘤组织分别检测大T抗原-p53和大T抗原-pRb复合物的形成。结果显示，猴病毒40大T抗原在人脑肿瘤中广泛表达，阳性率为66％(43/65)，而8例正常人脑组织均无大T抗原表达，两者差异显著(P＜0.05)；分别检测18例和15例大T抗原阳性瘤组织，均发现大T抗原可与p53、pRb形成特异性复合物。研究结果表明，猴病毒40大T抗原的表达与人脑肿瘤的发生有一定关系；猴病毒40大T抗原与p53、pRb形成特异性复合物并导致其失活，在猴病毒40致人脑肿瘤发生发展中发挥重要作用。 张中桥
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血清生物学标志物在心力衰竭诊断与预后评估中的作用
心力衰竭（HF）是各种病因所致心脏疾病的终末阶段。近年来，HF 的发病率呈逐年上升趋势，已成为世界范围内的主要公共卫生问题。因此，HF 的早期诊断、早期干预对改善 HF 患者的生活及生存质量，延缓病情恶化，减少其再住院率、死亡率至关重要。目前临床用于 HF 诊断与预后评估的血清标志物主要有：血浆脑钠肽（BNP）或 N 末端钠尿肽前体（NT-proBNP）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）和可溶性抑癌蛋白2（sST2）。美国于2004年批准 BNP作为 HF 诊断的指标之一，是上述三种血清标志物早应用于临床的，经大量临床研究证实，BNP 在心力衰竭的诊断与预后评估中具有重要的价值［1-2］，其作用已得到临床医师的认可。本文以 BNP 为标准，对 Galectin-3与 sST2在 HF 诊断与预后评估中的价值做一综述。
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甲状腺乳头状癌中FHIT蛋白的表达及意义
目的:通过检测甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)及癌旁正常组织(non-carcerous epithelium,NCE)中脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)蛋白的表达率,探讨FHIT蛋白在PTC发生与发展中的意义.方法:选取郑州大学第一附属医院2010年6月至2013年6月手术切除标本,包括65例PTC组织及其配对NCE组织,运用免疫组化SP法处理,DAB染色法观察FHIT基因的表达情况,用显色深浅、比例乘积积分法处理数据并进行统计学分析.结果:NCE和PTC中FHIT蛋白表达阳性率分别为67.7％ (44/65)和38.5％(25/65),FHIT蛋白在PTC中的表达明显低于NCE(P ＜0.05).FHIT蛋白的表达与病理学分级、TNM分期及淋巴结转移均具有相关性,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:FHIT作为一种抑癌基因,可能在PTC的发生与发展中起到重要作用.
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DKK1和β-链接素表达与食管癌的相关性分析
目的:探讨DKK1和β-Catenin表达与食管癌临床病理特征的相关性.方法:采用免疫组化二步法检测DKK1、β-Catenin在54例食管鳞癌、35例食管腺癌及33例食管小细胞癌中的表达情况.结果:DKK1在食管鳞癌、腺癌和小细胞癌中的表达率分别为62.96％、28.57％、15.15％,β-Catenin在食管鳞癌、腺癌和小细胞癌的表达率分别为66.67％、45.71％、27.27％,差异均有统计学意义(P＜0.05).DKK1与TNM分期、浸润深度有关,而β-catenin除了与TNM分期、浸润深度有关外,在不同组织学分化组中的表达差异也具有统计学意义.结论:DKK1、β-catenin在食管癌发生发展中起着一定的作用.
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人脑肿瘤中猴病毒40大T抗原的表达及活性研究
猴病毒40(simian virus 40,SV40)与人脑肿瘤发生的病因学关系尚不清楚[1].我们通过研究SV40早期区域基因编码产物大T抗原(Tag)在人脑肿瘤中的表达及其与抑癌蛋白p53、pRb的相互作用,探讨SV40在人脑肿瘤发生发展中的意义,现将结果报道如下.
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FRY蛋白在不同恶性程度乳腺肿瘤中的表达与意义
目的：研究不同恶性程度的乳腺肿瘤病例中FRY蛋白的表达情况及其与临床病理参数之间的关系。方法对收集的104例乳腺肿瘤病例（其中纤维囊性乳腺病11例，不同分级的乳腺浸润性导管癌93例）中FRY蛋白的表达情况进行免疫组织化学检测，比较FRY蛋白表达情况与乳腺肿瘤恶性程度及不同临床病理参数之间的关系。结果11例纤维囊性乳腺病与93例乳腺浸润性导管癌病例中FRY蛋白表达阳性率分别为90.9%和54.8%，差异有统计学意义（<0.05）；93例乳腺癌病例中，FRY蛋白在乳腺癌不同组织分级、不同TNM分期、肿瘤直径大小、PR水平间的表达均有显著性差异（<0.05）。结论 FRY蛋白的表达与乳腺肿瘤的恶性程度相关，恶性程度越高，FRY蛋白表达越少，同时FRY蛋白的表达与体内激素受体水平也存在一定联系。
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人脑肿瘤中SV40大T抗原与pRb形成特异性复合物
目的:探讨SV40早期基因编码产物大T抗原(Tag)表达及与抑癌蛋白pRb的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义.方法:采用免疫共沉淀及Western印迹法检测43例人脑肿瘤组织及5例正常人脑组织中Tag的表达,并对15例Tag阳性瘤组织检测Tag-pRb复合物的存在.结果:Tag在5例室管膜瘤及2例脉络丛乳头状瘤中全部表达,垂体腺瘤(5/6)、星形胶质细胞瘤(7/10)、脑膜瘤(4/6)、多形性胶质母细胞瘤(2/5)及髓母细胞瘤(1/5)均有Tag的表达;3例少枝胶质细胞瘤、1例松果体瘤及5例正常人脑组织无Tag表达.15例Tag阳性瘤组织中均发现Tag与pRb形成特异性复合物.结论:在人脑肿瘤组织中Tag广泛表达,Tag可与pRb形成特异性复合物,Tag-pRb特异性复合物的形成导致pRb失活,可能是人脑肿瘤发生发展的一个重要机理.
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抑癌蛋白p27在乳腺浸润性导管癌细胞质中的表达及临床意义
目的:探讨p27蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义.方法:免疫组化检测251例乳腺浸润性导管癌中p27蛋白的表达.结果:细胞质p27蛋白表达与乳腺浸润性导管癌组织学类型和雌激素受体表达相关,细胞质高表达p27蛋白的患者预后较好.结论:乳腺浸润性导管癌细胞质p27的表达是患者的预后因素,临床检测其表达水平将对乳腺癌恶性程度、复发转移的可能性以及患者预后的评估均具有重要的参考价值.
关键词： 细胞周期蛋白激酶抑制因子1B p27 乳腺癌 抑癌蛋白 -
pRb、p16、p53和PCNA在膀胱移行细胞癌表达的临床病理意义
目的和方法:应用免疫组织化学的方法对50例膀胱移行细胞癌作pRb、p16、p53和PCNA表达意义的研究.结果:pRb、p16、p53和PCNA的阳性表达率分别是30%、58%、14%及44%.pRb和p16的表达与肿瘤的病理分级呈负相关,而与肿瘤的临床分期无明显关系.p53和PCNA的表达与肿瘤的病理分级和临床分期均呈正相关.结论:pRb、p16、p53和PCNA的异常表达在膀胱移行细胞癌的发生、发展过程中起重要的作用.p53和PCNA可作为判断其肿瘤的恶性程度和预后的重要指标.
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去泛素化酶-USP7通过影响相关癌蛋白参与肿瘤的发生与发展
蛋白质的泛素化程度决定着蛋白质的命运,细胞内存在两类针对蛋白质泛素化修饰的酶,一类是让某个特定蛋白泛素化增强的酶,另一类是让某个特定蛋白去泛素化的酶,这两类酶维持着正常细胞内80％ ～ 90％蛋白的新陈代谢.越来越多的证据支持这两类酶的异常与肿瘤的发生发展有较强的关联.其中USP7,一个去泛素化酶,有大量的文章报道显示它广泛参与影响肿瘤的进程.我们检索了近年来USP7与肿瘤关系的文献,系统回顾了它在肿瘤发生、发展中的作用与机制,并指出研究中存在的问题及将来的发展方向.
关键词： USP7 肿瘤 致瘤疱疹病毒相关蛋白 癌蛋白 抑癌蛋白 -
SV40大T抗原在人脑肿瘤中与p53形成特异性复合物
[甄海宁,章翔,步星耀,黄文晋,张萍,梁景文,王西玲,陈镔复,张志文,易声禹. 中华实验和临床病毒学杂志,2001;15(1):73-76]目的探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原(Tag)表达及与抑癌蛋白p53的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义. 方法采用免疫共沉淀及Western印迹法检测43例人脑肿瘤组织及5例正常人脑组织中Tag的表达,并对18例Tag阳性瘤组织检测Tag-p53复合物的存在. 结果 Tag在5例室管膜瘤及2例脉络丛乳头状瘤中全部表达,垂体腺瘤(5/6)、星形胶质细胞瘤(7/10)、脑膜瘤(4/6)、多形性胶质母细胞瘤(3/5)及髓母细胞瘤(2/5)均有Tag的表达,3例少枝胶质细胞瘤、1例松果体瘤及5例正常人脑组织无Tag表达;检测18例Tag阳性瘤组织均发现Tag与p53形成特异性复合物. 结论在人脑肿瘤组织中Tag广泛表达,Tag可与p53形成特异性复合物,Tag-p53特异性复合物的形成导致p53失活,可能是SV40致人脑肿瘤发生的一个重要机制.(井晓梅)
