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两株乙型肝炎病毒基因组结构分析及其复制和抗原表达特性的比较
为从全基因组水平研究乙型肝炎病毒(HBV)的核苷酸结构及复制和抗原表达特性,分别从2例HBsAg和HBeAg阳性、HBV DNA滴度为1014和1013拷贝/ml的慢性乙型肝炎患者(编号为56和2-18)血清中扩增、克隆了HBV全基因组,并测定了核苷酸序列.两株病毒基因组转染HepG2细胞的培养上清中HBsAg表达水平基本相同,但#56毒株表达的HBeAg约为#2-18株的3倍,Southern印迹及核酸杂交显示,#56HBV株复制效率显著高于#2-18株,两株HBV DNA全长均为3215个核苷酸,同源性为98.7%,均为B基因型(adw亚型).两者相差的42个核苷酸分布在C、Pre-S1、Pre-S2、P及X基因编码区,其中有位于SPⅠ、SPⅡ、Xp和ENHⅠ基因调控序列区中.#56患者感染的毒株基因组中Pre-S2起始密码ATG变异为GTG,但由Pre-S1起始翻译形成的大蛋白中包括Pre-S2的部分氨基酸,故#56血清和#56株转染细胞的培养上清仍可与Pre-S2抗体出现阳性反应.
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猪骨髓间质干细胞分离培养及表面抗原鉴定
目的 建立猪骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)体外分离培养、纯化的方法,观察其生物学特性,为其作为组织工程学种子细胞提供实验基础.方法 取猪的胸骨骨髓6~8ml,用Ficoll淋巴细胞分离液提取单核细胞,采用贴壁法培养.接种后2h利用倒置显微镜观察细胞的大体形态,并利用流式细胞仪检测细胞抗原表达.结果 原代培养接种3~4h后细胞开始贴壁,24h后贴壁细胞数量明显增多,3~4d后细胞呈纺锤形且形成为单个或数个细胞克隆,7~9d后集落迅速增多,细胞融合,在10~12d细胞铺满全层.流式细胞仪监测到BMMSC表达CD29、CD44、CD105、KDR,不表达HLA-DR、CD11a、CD14、CD31、CD34、CD45.结论 采用密度梯度离心法培养猪的BMMSC生长稳定,增殖能力强,具有间质干细胞的表面抗原特征,该方法可作为培养猪BMMSC的常规方法.
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腹膜第二苗勒系统病变的病理诊断
女性盆腔及下腹腔腹膜与女性生殖器官有十分密切的关系,它们不仅与女性苗勒管上皮发生来源相同,即都来自于体腔上皮及其邻近的间充质,还具有向苗勒管上皮及其间质分化的潜能.因此,目前将这部分具有很强化生能力的腹膜苗勒管上皮及间质称为第二苗勒系统(Secondary mullerian system)[l,2].近年来,已揭示不少由女性腹膜发生的病变,其组织结构及抗原表达与女性苗勒管发生的病变相同.这些病变分为上皮性及间叶性二大类.上皮性病变包括浆液性、宫内膜样、粘液性及移行上皮等类型,间叶性病变包括腹膜蜕膜异位,宫内膜间质肉瘤,腹膜平滑肌瘤病等.
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应用流式细胞术检测HIV-1感染者外周血p24、gp41和gp120抗原表达的研究
目的 分析HIV-1感染者外周血CD4~+T淋巴细胞 p24、gp41和gp120抗原的表达状况,探讨流式细胞术用于检测HIV-1感染的可行性.方法 应用三色流式细胞术,对192例HIV-1感染者和29例健康者外周血CD4~+T淋巴细胞表达的HIV-1 p24、gp41和gp120抗原进行检测.结果 HIV-1 p24、gp41和gp120抗原阳性率HIV-1感染组与健康对照比较差异有统计学意义(P均<0.01);CD4~+T细胞数<200 cells/μl的HIV-1感染人群与CD4~+T细胞数>200 cells/μl的人群比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);静注吸毒途径感染人群与性途径感染人群比较差异有统计学意义(P<0.01).在HIV-1感染人群中,p24、gp41和gp120抗原阳性率四分位数25%~75%区间范围分别为1.67%~5.95%、1.61%~8.12%和0.56%~2.35%.结论 流式细胞术简便、快速、敏感,可用于HIV-1感染检测.
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Rv2031c、38kDa及融合蛋白CFP10-ESAT6用于结核病血清学诊断的评价
目的 对Rv2031c、38kDa以及融合蛋白CFP10-ESAT6三种结核分枝杆菌抗原和抗原的混合物进行检测效能评价,筛选佳抗原并分析其应用价值. 方法 以结核分枝杆菌标准株H37Rv菌株基因组为模板,PCR扩增目的基因;利用pET-30a、pET-32a载体构建重组质粒,在宿主E.coli BL21(DE3)细胞中诱导表达,利用His标签亲和镍柱纯化重组蛋白.分别用单种重组蛋白和几种蛋白混合后包被酶标板,采用ELISA对129份血清(39份结核病患者血清和90份健康者血清)进行检测.结合受试者工作特征曲线法计算不同抗原和混合抗原的佳临界值(Cut-off value)包被浓度,得出检测的灵敏度、特异度和曲线下面积,对其诊断效能和应用价值进行综合评价. 结果 以Rv2031c、38kDa和CFP10-ESAT6为包被抗原的ELISA法检测相应抗体的灵敏度分别为41.0%,51.3%和46.2%,特异度分别为90.0%、88.9%和79.1%,曲线下面积分别为0.640、0.761和0.690,以3种蛋白混合物为包被抗原的3项指标分别为66.7%、77.8%和0.746. 结论 Rv2031c、38 kDa以及融合蛋白CFP10-ESAT6 3种抗原混合物的诊断效能较好,具有一定的临床应用价值.
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急性髓细胞白血病淋系分化抗原表达及临床意义
为了探讨淋系分化抗原在急性髓细胞白血病(AML)的表达及其临床意义,采用淋系和髓系单克隆抗体,用间接免疫荧光法对62例原发性AML进行免疫表型分析.结果表明:¨例除表达髓系抗原外尚有淋系抗原表达(Ly+AML).Ly+AML初诊时肝脾结肿及血像特点与Ly-AML组无显著差异,用标准诱导化疗仅有1例获长期缓解.结论:Ly+AML对常规诱导缓解方案不敏感,选择兼顾ALL+ANL的方案可望提高治疗效果.Ly+AML患者长期生存率低可能与CD34+高表达有关.
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胆囊良恶性疾病组织中癌干细胞抗原表达及其意义
前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)和Oct-4干细胞抗原均为癌干细胞特异性标记物,其表达水平与恶性肿瘤发生、进展及预后等密切相关[1-7].我们应用免疫组织化学EnVision法研究胆囊腺癌、癌旁组织和慢性胆囊炎组织中PSCA和Oct-4表达水平及其临床病理意义.
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组织芯片技术在检测正常组织和肿瘤组织抗原表达中的应用
组织芯片(tissue chip) [1]技术具有高产出(high-throughput),实验误差小和省时、省力、节约经费的优点,并能应用于科研、教学、生物试剂测试、质量监控及标准化等领域[2 ,3]. 我们采用了组织芯片这项技术并选用了5种常用抗体(AE1/3、波形蛋白、CD45、结蛋白和 S- 100蛋白)对54例正常组织及60例肿瘤标本进行了抗原表达的检测,以了解该技术在这方面的使用价值.
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HBV抗原在乙型肝炎肝硬化患者脑组织中的表达及意义
目的探讨乙型肝炎肝硬化患者脑组织中乙型肝炎病毒(HBV)感染的状况及意义.方法应用免疫组织化学链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S-P法)对70例乙型肝炎肝硬化死亡患者脑组织进行了HBsAg、HBcAg检测,分析HBV抗原的表达与临床、病理的关系.结果 HBV抗原患者30例(42.89%),其中HBsAg阳性24例(34.29%),HBcAg阳性18例(25.71%).抗原主要定位于细胞质,分布于神经元、神经胶质细胞及血管内皮细胞内.阳性细胞呈单个、散在或灶性、小片状分布.HBV抗原的表达与血清HBV水平无关,而与肝性脑病(HE)的有无及HE患者脑组织病理损害的程度相关.结论乙型肝炎肝硬化患者脑组织中存在HBV感染,并可能存在复制.脑组织中HBV感染,可能对乙型肝炎肝硬化患者HE的发生发展具有重要作用.
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慢性肝病患者外周血单个核细胞CD95抗原的检测意义
CD95(Fas)抗原与CD95配体(CD95L)是人体多种细胞表面的一种膜蛋白,目前已证实在细胞凋亡过程中CD95系统起了重要作用,并参与机体的免疫反应.CD95较广泛的分布于全身淋巴细胞及重要组织细胞,当这些细胞经活化后可诱导表达CD95抗原.CD95抗原在慢性肝炎患者肝脏组织中的表达已被广泛报道,并认为肝病患者肝细胞凋亡现象普遍存在.CD95L主要表达于活化T细胞和NK细胞,在肝脏组织中也发现有CD95L的表达.我们应用流式细胞术(FMC)对慢性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)CD95抗原表达情况进行分析,旨在探讨其意义.
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内源性一氧化氮对致敏大鼠淋巴细胞凋亡的影响
观察致敏大鼠支气管肺组织Fas抗原表达、支气管肺泡灌洗液中淋巴细胞及脾T淋巴细胞凋亡的情况及左旋精氨酸(L-arg)、硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)对其影响.探讨哮喘炎症发生不易被消除的原因与淋巴细胞凋亡情况及与内源性NO的关系.
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幽门螺杆菌临床分离株flaA和flaB基因的克隆、表达和鉴定
所有幽门螺杆菌(Hp)菌株均有鞭毛,由染色体基因组中的flaA和flaB两个基因编码,全长分别为1 533bp和1 545bp,其核苷酸或氨基酸序列高度保守,与其它细菌鞭毛蛋白无抗原交叉,多数Hp感染者血清中可出现FlaA和FlaB抗体[1],因而FlaA和FlaB可作为基因工程疫苗和诊断试剂盒的候选抗原.我们构建了Hp临床菌株Y06的高效原核表达系统,鉴定了重组FlaA(rFlaA)和重组FlaB(rFlaB)抗原性和免疫反应性,检测了Hp临床分离菌株FlaA、FlaB抗原表达和感染者血清抗体情况.
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乙型肝炎病毒S基因变异对人白细胞抗原表达的影响
人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA),可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类分子.HLAⅠ在正常肝细胞表达很弱或全无表达,HBV感染肝细胞时,表达量与炎症程度呈正相关.我们将所构建的野生型和变异型乙肝表面抗原中蛋白基因重组质粒转染HepG2细胞,以研究HBV/S基因变异株对宿主细胞HLA表达的影响,从而对变异株造成的肝脏炎症程度作出初步的推论.
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Fas抗原在肝移植术后急性排斥中的动态变化
Fas(CD95)为肿瘤坏死因子受体超家族成员之一,通过Fas/FasL途径触发激活细胞凋亡,参与器官移植免疫过程.文献报道,在移植术后急性排斥受者活检组织中可检测到Fas抗原表达的改变,外周血淋巴细胞的表型改变能够反映移植物内浸润性淋巴细胞的状态.本研究动态监测肝移植术后急性排斥受者外周血中T淋巴细胞表面Fas抗原的定量表达.
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AIRE基因单核苷酸多态性与中国陕西汉族类风湿关节炎关联分析
类风湿关节炎( rheumatoid arthritis, RA)是一种自身免疫性疾病,成年人发病率约为1%。至今RA病因学及发病机制还不清楚。遗传因素和环境因素及二者的交互作用在RA的发病中起到重要作用。 AIRE基因是一种重要的转录调节器,在胸腺髓质细胞中表达,在胸腺细胞发育及控制胸腺中外周抗原表达负向调节中发挥作用。在日本人群和欧洲人群已证明 AIRE 基因相关易感标签SNP 位点( rs2075876、 rs1800520、rs760426、rs878081)与 RA 密切相关。本研究通过病例-对照关联研究,分析AIRE基因4个标签SNP位点是否是中国陕西汉族RA人群易感基因位点。
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CD56抗原与老年急性髓系白血病疗效及预后的相关性
目的 探讨CD56抗原与老年急性髓系白血病患者疗效及预后的相关性.方法 选取138例老年急性髓系白血病患者进行前瞻性研究,根据CD56抗原表达情况分为阳性组(74例)与阴性组(64例).所有患者治疗方案均为蒽环类药物联合阿糖胞苷,比较阳性组与阴性组患者的完全缓解率、无病生存时间(DFS)、总生存时间(OS)、3年DFS率与3年OS率,对CD56抗原表达与患者DFS、OS进行相关性分析.结果 阳性组与阴性组患者的完全缓解率分别为86.49%、93.75%,差异无统计学意义(χ2=0.993,P=0.319).阳性组DFS与OS分别为(1.64±0.57)年、(2.70±0.81)年,均短于阴性组(t=2.026,P=0.047;t=2.050,P=0.044),3年DFS率与OS率分别为22.22%、38.89%,均低于阴性组(χ2=4.600,P=0.032;χ2=4.848,P=0.028).CD56抗原表达与DFS(r=0.425,P=0.002)、OS(r=0.557,P=0.000)均有显著正相关,与复发情况之间呈显著负相关(r=-0.756,P=0.001),阳性患者的复发风险更大.结论 CD56抗原表达与老年急性髓系白血病患者预后之间存在明显相关性,表现为CD56抗原阳性患者DFS与OS短于阴性患者,复发率更高.
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成熟T细胞肿瘤与T细胞反应性增生抗原表达对比研究
目的 比较成熟T细胞肿瘤与T细胞反应性增生白细胞共同抗原CD45、全T细胞抗原CD2、CD3、CD5、CD7及CD4、CD8等的表达差异,探讨上述抗原表达变化在成熟T细胞肿瘤诊断中的价值.方法 对36例成熟T细胞肿瘤及36例T细胞反应性增生流式细胞免疫分型资料进行回顾性分析.根据抗原表达及其与正常T细胞的比较,将T细胞抗原表达模式分为抗原丢失及抗原强度变化.强度变化包括表达减弱、表达增强、双峰表达、表达不均匀等.结果 63.9%的成熟T细胞肿瘤有1项或多项全T细胞抗原丢失(23/36),明显高于对照组的8.3%(3/36),两者差异具有显著性(χ2=21.772,P<0.0001).36.1%的成熟T细胞肿瘤病例有3项或4项全T抗原强度变化(13/36),明显高于对照组的8.3%(3/36).两者差异具有显著性(χ2=6.525,P=0.0106).97.2%的成熟T细胞肿瘤CD4/CD8比例异常(35/36),明显高于对照组的22.2%(8/36),两者差异具有显著性(χ2=39.024,P<0.0001).27.8%的成熟T细胞肿瘤CD45表达异常(10/36),明显高于对照组的2.8%(1/36),两者差异具有显著性(χ2=6.859,P<0.0088).结论 成熟T细胞肿瘤与T细胞反应性增生在全T细胞抗原、CD4、CD8及CD45表达方面具有明显不同的特点,上述抗体的检测有助于成熟T细胞肿瘤的诊断及鉴别诊断.
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流式细胞仪单平台技术调查成年人外周血T淋巴细胞亚群绝对计数参考范围
根据淋巴细胞的生物学功能和细胞表面抗原表达,可以将人类淋巴细胞分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞.
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C基因型多重耐药乙型肝炎病毒稳定复制表达小鼠模型的建立
目的 建立高嗜肝性重组8型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus 8,rAAV8)介导的C基因型多重耐药乙型肝炎病毒(multidrug resistant hepatitis B virus,MDR HBV)稳定复制表达小鼠模型.方法 分别构建rAAV8-1.3倍C基因型多重耐药型(HBV逆转录酶区含有rtL180M+S202G+M204V+N236T位点)和野生型HBV重组质粒,然后包装纯化并筛选高滴度重组病毒(rAAV8-1.3HBV-C-MDR和rAAV8-1.3HBV-C-WT),将病毒经尾静脉注射至6~8周龄的C57BL/6小鼠,建立C基因型多重耐药型(实验组,n=6)和野生型(对照组,n=6)HBV稳定复制表达小鼠模型,监测病毒复制和抗原表达至9周并于第9周末处死小鼠,取肝脏组织进行HE染色和免疫组化染色,观察肝组织病理改变并分析HBsAg和HBcAg的表达.结果 小鼠注射重组病毒后第2、3、5、7、9周,血清HBV DNA表达较稳定,实验组和对照组小鼠血清HBV DNA波动范围分别为3.67~4.06 lg IU/ml和4.36~5.11 lg IU/ml.血清HBsAg和HBeAg在观察期间均高表达,第2周实验组和对照组血清HBsAg和HBeAg OD值分别为3.501±0.230和2.989±0.250,3.967±0.230和3.384±0.230.2组小鼠肝组织未见明显的炎性细胞浸润及组织结构异常,但可检测到HBsAg和HBcAg蛋白表达.结论 利用高嗜肝性rAAV8载体携带1.3倍C基因型MDR HBV基因组体内转导C57BL/6小鼠,成功建立了稳定复制并持续表达C基因型MDR HBV的小鼠模型,为后续评价抗MDR HBV药物疗效提供实验平台.
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PD98059对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增生的影响
目的:探讨特异性MEK1阻断剂PD98059对乙醛刺激的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增生及其细胞增生核抗原表达的影响.方法:用PD98059对乙醛刺激的HSC进行处理,分别以MTT比色、免疫细胞化学法检测细胞增生及其细胞增生核抗原表达.结果:PD98059在20μm0l/L时即对HSC增生出现抑制作用(P<0.05,C组0.109±.020 vs B组0.146±0.030),50、100 μm0l/L时抑制作用逐渐增强(P<0.05,D、E组0.081±0.010、0.056±0.020 vs B组0.146±0.030);HSC中PCNA表达也随PD98059剂量增加而减弱(P<0.05,C、D、E组0.62±0.09、0.47±0.04、0.34±0.04 vs B组0.74±0.05)结论:PD98059对HSC增生及细胞增生核抗原表达具有抑制作用,提示Erk信号传导通路是调控肝星状细胞增生的重要通道.