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临床菌株中幽门螺杆菌主要蛋白抗原的表达及感染者血清抗体水平的调查
了解不同地区幽门螺杆菌(Hp)菌株主要蛋白抗原的分布及Hp感染者血清中抗体水平,为选择疫苗及诊断试剂盒抗原、了解Hp免疫性及其特点提供重要参考依据.1. 材料与方法:(1)标本来源:收集2003年1~9月浙江地区157例尿素酶阳性患者胃活检和血清标本,其中慢性胃炎88例(浅表性胃炎58例、活动性胃炎15例和萎缩性胃炎15例)、消化性溃疡69例(胃溃疡16例、十二指肠球部溃疡46例和复合溃疡7例).所有患者采样前2周内未接受抗炎、抗生素和抗酸药物的治疗.
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幽门螺杆菌临床分离株flaA和flaB基因的克隆、表达和鉴定
所有幽门螺杆菌(Hp)菌株均有鞭毛,由染色体基因组中的flaA和flaB两个基因编码,全长分别为1 533bp和1 545bp,其核苷酸或氨基酸序列高度保守,与其它细菌鞭毛蛋白无抗原交叉,多数Hp感染者血清中可出现FlaA和FlaB抗体[1],因而FlaA和FlaB可作为基因工程疫苗和诊断试剂盒的候选抗原.我们构建了Hp临床菌株Y06的高效原核表达系统,鉴定了重组FlaA(rFlaA)和重组FlaB(rFlaB)抗原性和免疫反应性,检测了Hp临床分离菌株FlaA、FlaB抗原表达和感染者血清抗体情况.
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E test测定酵母样真菌药物敏感试验初步应用
酵母样真菌已成为医院内感染的主要病原之一,体外药敏试验对合理筛选抗真菌药物、发现耐药菌株等有重要意义[1].NCCLS的"M27-T"酵母样真菌大量稀释法药敏试验方法比较繁琐[2].近,瑞典的AB.Biodisk公司推出了酵母样真菌药敏试验E test试纸条.我们以"M27-T"为参比方法,对标准菌株和临床菌株进行MIC测定,比较E test 与"M27-T"所测结果的符合程度,并对E test方法学特点和MIC检测的临床意义作了初步评价.
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ISEcp1-like插入序列与CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的水平播散
20世纪90年代后,中国多个地区不断发现产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(CTX-M-ESBL)肠杆菌科细菌的流行.近年,在4组CTX-M-ESBL(CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9和CTX-M-25)基因上游均发现存在ISEcp1-like插入序列,其对CTX-M-19、CTX-M-2以及氨基糖苷类耐药基因rmtC的转移能力亦得到证实.目前CTX-M-ESBL在我国临床菌株中的传播与ISEcp1-like插入序列的关系尚不清楚.本文旨在探讨ISEcp1-like序列与CTX-M-ESBL在肺炎克雷伯菌临床株中传播的关系进行研究.
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重组尿素酶B亚单位和黏附素双价疫苗对幽门螺杆菌SS1株感染BALB/c小鼠的免疫保护作用
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是人慢性胃炎和胃溃疡的病原菌,并与胃腺癌和胃淋巴瘤的发生有密切关系.接种疫苗是预防Hp感染和控制Hp感染相关疾病为有效的措施,但目前仍无Hp疫苗上市.Hp尿素酶B亚单位(UreB)和黏附素(HpaA)几乎存在于所有Hp临床菌株表面,高度保守且抗原性强.大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及其A亚单位的突变体(LTKA63)和霍乱肠毒素B亚单位(CTB)有较强的免疫佐剂作用.
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一种研究耐药性整合子整合功能体系的建立
遗传物质在菌种内以及菌种间的水平传播,是细菌获得新耐药性的重要手段.耐药性快速广泛地传播以及在不同菌种间出现非常相似的耐药方式,说明了上述机制的重要性.细菌可以通过基因突变的方式获得耐药性,然而整合子通过捕获多种耐药性基因盒在临床菌株产生多重耐药性上具有重要意义[1].Hall和Collis[2]将整合子定义为由一系列遗传元件构成的能够识别和捕获移动性基因盒的位点特异性重组系统.一个整合子包括编码整合酶(intI)的基因及其临近的重组识别位点(attI).
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嗜麦芽窄食单胞菌两株临床菌株外排泵SmeDEF诱导表达的研究
近10年来嗜麦芽窄食单胞菌所致的感染不断上升,已成为医院感染的重要致病菌,其多重耐药可能与外排泵有关.SmeDEF泵外排包括氟喹诺酮类等多种抗生素.大肠埃希菌多药外排泵AcrAB表达,与耐药表型的诱导有关,是否嗜麦芽窄食单胞菌也有同样机制,待研究.
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多重耐药不动杆菌临床菌株中整合子的基因分析
多重耐药质粒的演变与抗菌药物耐药决定子特定位点的整合子有关.根据整合酶的不同有4类整合子,临床分离株中常见1类整合子.本研究是检测多重耐药不动杆菌分离株中1类、2类整合子的情况,以调查不动杆菌的分子流行病学.
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棒状杆菌菌种保存培养基的研制及应用
为了将临床分离的棒状杆菌保存起来进行菌种鉴定并探讨其与疾病的关系,我们研制了一种棒状杆菌菌种保存培养基,保存效果良好,现初步报告如下.一、材料和方法1.菌种及标本来源:临床菌株为门诊及住院患者的各种细菌培养标本分离的棒状杆菌,共57株11个种.标准菌株为白喉棒状杆菌中型亚种(38007)、白喉棒状杆菌重型亚种(38009)和假白喉棒状杆菌(38203),购自中国药品生物制品检定所.2.培养基的制备:脱脂奶粉15 g,明胶100 g,活性碳3 g,膀胱氨酸0.5 g,氯化钠5 g,蒸馏水1 000
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牙龈卟啉单胞菌临床菌株荚膜相关的表面性质分析
目的 分析牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)临床菌株的多种表面性质,初步探讨Pg菌株荚膜与其表面性质的关系.方法 利用透射电镜观测5株临床菌株(SJD2、SJD12、SJD4、SJD5和SJD11)和2株模式菌株(W83、ATCC33277)的荚膜结构和厚度,采用微生物烃类黏附实 验检测受试菌株的表面亲疏水性质,并使用自凝集实验观察受试菌株浮游生长的能力.采用生物膜半定量检测和激光扫描共聚焦显微镜检测各菌株形成生物膜的能力.应用Student-Newman Kewls检验对结果数据进行组间两两比较,以双侧P<0.05为差异有统计学意义.结果 Pg菌株的荚膜厚度各异,高毒模式菌株W83的荚膜厚度[(25.11 ±1.18) nm]显著大于低毒模式菌株ATCC33277[(14.87±1.01) nm] (P <0.05).临床菌株的荚膜厚度由厚至薄依次为:SJD4、SJD11、SJD5、SJD2、SJD12.荚膜较厚的W83、SJD4、SJD11菌株疏水率低,细菌不易自凝集,呈浮游生长;荚膜较薄的ATCC33277、SJD5、SJD2、SJD12菌株疏水率较W83显著上升,且差异有统计学意义(P<0.05),自凝集现象明显.生物膜半定量检测实验中,除SJD2和SJD4的生物膜染色后具有相同水平的吸光度之外,其余菌株吸光度差异均有统计学意义(P<0.05),各菌株生物膜中的细菌量并不与荚膜厚度的差异相吻合.各菌株生物膜厚度从(14.74 ±4.99)至(24.13 ±5.45) μm不等,差异均无统计学意义(p>0.05).激光扫描共聚焦显微镜观察可见W83、SJD11生物膜内荧光信号较弱,生物膜密度较低,其他菌株可生成较致密且荧光信号较强的生物膜结构,存在空隙或孔道结构.结论 Pg菌株表面性质的多样性与荚膜厚度存在一定关联.
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碳青霉烯类抗生素体外抗菌活性及其耐药机制研究
目的:研究碳青霉烯类抗生素对临床分离菌的体外抗菌活性,分析其耐药机制.方法:采用平皿二倍稀释法测定4种碳青霉烯类抗生素对352株临床菌株的MIC值,应用PCR方法鉴定铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的耐药基因.结果:4种药物对除铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌外的其他菌种非常敏感.从两种耐药菌中分别鉴定出VIM-2和OXA-23基因.结论:碳青霉烯类抗生素对大部分临床分离菌株的抗菌活性较好.OXA-23基因为鲍曼不动杆菌耐药的主要机制之一.
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喹诺酮类抗菌药的耐药性及质粒介导耐药机制
喹诺酮类抗菌药物广泛用于治疗尿路感染、呼吸道感染、腹腔感染等,但随着临床应用的增多,细菌对喹诺酮类药物的耐药性上升迅速.研究发现,细菌对喹诺酮类的耐药机制主要为靶位改变及主动外排,两者均为染色体介导,近年发现了与前两者完全不同的质粒介导耐药机制,且在越来越多的临床菌株中得以证实.
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四种变形链球菌临床菌株的生长特性和粘附率比较研究
目的 探索从第三军医大学西南医院分离的四种变形链球菌临床株的生长特征和粘附能力.方法 采用传统和经典的玻璃试管粘附试验方法,对四种变形链球菌临床株在玻璃试管中粘附24h、48h后的生长特性和粘附率进行统计分析比较.结果 从第三军医大学西南医院分离并鉴定命名为11号临床菌株的生长速度稍快于标准株ATCC700610和1、8、14号临床菌株,但不存在显著性差异;11号临床菌株在玻璃试管上粘附24h和48h的粘附率均高于标准株ATCC700610和1、8、14号三株变形链球菌临床菌株;对四种变形链球菌临床菌株对玻璃试管粘附24h后粘附率比较,11号临床菌株和标准株ATCC700610间存在显著性差异;对四种变形链球菌临床株对玻璃试管粘附48h后粘附率比较发现,标准株ATCC700610和8号、14号临床株间差异显著,1号和8、11、14号临床菌株间差异显著.结论 本次研究结果提示从第三军医大学西南医院分离鉴定并命名为11号临床菌株具有较强的粘附能力,可以为后期有关变形链球菌疫苗研发和研究提供一定的理论参考和科学依据.
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金黄色葡萄球菌抗红霉素耐药基因由禽类菌株向人类临床菌株的转移
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上海瑞金医院1998年临床分离菌的耐药性分析
目前细菌耐药性问题日益突出,主要监测和研究的焦点集中在耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐青霉素的肺炎链球菌(PRP)、耐万古霉素的肠球菌(VRE)和产β-内酰胺酶的革兰阴性菌等.本文分析上海瑞金医院1998年临床菌株的分布及耐药性.
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大肠埃希菌临床菌株对氟喹诺酮类的耐药机制
NA旋转酶编码基因(gyrA和gyrB)和拓扑异构酶编码基因(parC和parE)的染色体突变、多重药物外排泵AcrAB表达水平升高以及存在质粒介导acc(6′)-Ib-cr和各种qnr基因等耐药机制均可导致氟喹诺酮类药物对大肠埃希菌的MIC升高.
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牙龈卟啉单胞菌临床菌株毒力相关性质分析
目的:以模式菌株作为对照,对来自中国人口腔牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)临床菌株进行多种致病性质的分析,对致病性质与其毒力高低之间的关系进行初步探讨.方法:在前期对临床菌株毒力性质分析的基础上,检测和比较各菌株黏附宿主细胞、牙龈素活性以及抵抗宿主免疫吞噬等致病性质.采用SAS 8.02软件包对数据进行统计学分析.结果:P.gingivalis低毒模式菌株表现出较高的黏附红细胞及较弱的抵抗宿主血清杀伤的能力,高毒模式菌株表现出较弱的黏附红细胞及较强的抵抗血清杀伤的能力;但临床菌株的表现却与模式菌株相反.另外,P.gingivalis菌株牙龈素活性与毒力性质间无明显关系.结论:P.gingivalis毒力性质的多样性与其致病性质之间的关系不明确.
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牙龈卟啉单胞菌临床菌株的毒力分析
目的:利用啮齿动物模型,比较分析中国人群口腔中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonos gingivalis,P.gingivalis)临床菌株的毒力.方法:采用小鼠脓肿形成实验,将6株从牙周炎患者牙周袋中分离获得的P.gingivalis临床菌株L2、L3、L4、L5、L11和L12分别注射至小鼠后背中央,观察其临床症状,并与国际标准菌株ATCC33277和W83进行比较,分析临床菌株的毒力特性.采用SPSSLL5软件包对数据进行统计学分析.结果:L3、ATCC33277和W83诱发小鼠产生原发性脓肿和轻微的全身反应L2、L5、L11、L12则诱发小鼠产生远处转移性病变和严重的全身反应.结论:中国牙周炎患者口腔中的P.gingivalis临床菌株与国际标准菌株相比,在诱发实验鼠发生局部脓肿方面,具有一定程度的相似性.但临床菌株间的毒力特征具有较大差异.
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牙龈卟啉单胞菌临床分离株的生化反应检测与分析
目的 以模式菌株作为对照,对口腔中牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)临床菌株进行生化反应检测,初步探讨其糖代谢性质.方法 利用API 20A和ATB Rapid ID 32A生化反应检测系统,以模式菌株W83和ATCC 33277为对照,对5株P.gingivalis 临床分离菌株SJD2、SJD4、SJD5、SJD11、SJD12进行生化代谢反应检测和分析.结果 5株P.gingivalis临床菌株均具有β-半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性;具有水解多种氨基酸残基的能力,并能水解游离的色氨酸和精氨酸;各菌株的生化反应存在异质性.API 20A与ATB Rapid ID 32A生化反应板条的检测结果存在一定差异.结论 P.gingivalis可以多肽或氨基酸作为主要碳源或氮源,但存在部分糖代谢的能力;各菌株的生化代谢反应存在差异.ATB Rapid ID 32A可能更适合应用于龈下菌斑中革兰阴性厌氧菌的生化反应检测和鉴定.
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牙龈卟啉单胞菌临床菌株的分离、鉴定及生长特性分析
目的 对口腔中牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)进行分离和鉴定,初步分析P.gingivalis的生长特性.方法 采集慢性牙周炎患者和牙周健康者临床龈下菌斑标本并行厌氧培养,采用PCR和16S rDNA序列分析方法鉴定P.gingivalis,分析检出率;观察P.gingivalis临床菌株的菌落特征和生长特点,分析生物学特征.结果 从35名采样对象的146个龈下菌斑标本中分离获得6株P.gingivalis临床菌株,分别命名为L2、L3、L4、L5、L11、和L12;牙周健康者龈下菌斑中P.gingivalis的检出率为27.4%,慢性牙周炎患者的牙周健康部位的龈下菌斑中P.gingivalis检出率为86.7%,探诊深度为4~6 mm的牙周袋龈下菌斑中P.gingivalis检出率为95.6%,探诊深度>6 mm的牙周袋龈下菌斑中P.gingivalis检出率为96.0%.L2、L5、L11和L12在BHI平板上培养1周后均形成特征性黑色菌落,而L3和L4在培养1周后形成灰色菌落,10 d后形成特征性黑色菌落;L2、L4、L5和L12在传代30 h后进入对数期生长期,L3和L11则在传代60h后进入对数生长期.结论 P.gingivalis是慢性牙周炎患者的优势致病菌之一,其在慢性牙周炎患者健康位点的检出率显著高于牙周健康者,且随着牙周探诊深度的加深,检出率呈现逐渐升高的趋势.P.gingivalis各临床菌株的生长存在差异,提示其生物学特征和致病性可能不同.