HIV-1整合酶:艾滋病治疗的新靶点

目前,抗逆转录病毒的治疗虽然已经有了显著进展,但寻找价格低廉,活性更强的抗HIV药物仍在继续,以HIV pol基因的两个产物逆转录酶和蛋白酶为靶点,美国食品与药品管理局(FDA)批准了9种逆转录酶抑制剂和5种蛋白酶抑制剂作为临床抗艾滋病药物.目前对HIV的治疗主要是采取逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂合用的联合疗法.但此种方法不能完全清除病毒,停药后产生反跳,病情反复.HIV复制过程中还有另一个重要的酶一整合酶,使病毒基因组整合于宿主细胞染色体,病毒在体内长期潜伏.整合酶是HIV自身特有的酶,也是一个抗HIV药物设计的理想靶点.本文主要介绍HIV-1整合酶的结构,在病毒复制过程中的功能,以及整合酶抑制剂作为抗HIV药物设计靶点的研究进展.

O1和O139群霍乱弧菌超级整合子VchintIA基因的变异

目的 研究不同血清群(型)霍乱弧菌超级整合子整合酶基因(VchintIA)的变异及其与霍乱弧菌分类的关系.方法 使用聚合酶链反应(PCR)和序列测定的方法对VchintIA基因进行扩增和序列分析.结果 在实验菌株中,O1 E1 Tor和O139群霍乱弧菌产毒株以及毒素共调菌毛(toxin co-regulated pilus,tcp)基因簇阳性的O1群非产毒株的VchintIA序列完全一致,tcp基因簇阴性的O1群非产毒株的VchintIA序列在核苷酸水平上与产毒株不同,但是在氨基酸水平上相同.O139非产毒株的VchintIA序列在核苷酸和氨基酸水平上均与产毒株的VchintIA不同.结论 O1和O139霍乱弧菌超级整合子VchintIA存在核苷酸和氨基酸水平上的变异,O139非产毒株中VchintIA的变异与其整合子内部的结构可能相关.

HIV-1整合酶及其抑制剂的研究进展

HIV-1整合酶(integrase)是逆转录病毒复制所必需的酶,因而成为抗艾滋病(AIDS)药物设计的一个合理的靶点.本文综述了近几年的HIV-1整合酶及其抑制剂的发展现状,就如何将作用于整合酶靶点的先导化合物转变成有效的抗艾滋病药物进行了讨论.

黄花夹竹桃叶中的二氢黄酮苷、黄酮醇苷及其对HIV-1逆转录酶、HIV-1整合酶的抑制活性

043 鼎湖山胡椒中的倍半萜类和生物碱类成分及其对HIV-1整合酶的抑制活性

6种藏族药提取物体外抗HIV-1活性的初步探讨

目的:对斑花黄堇、木藤蓼、野棉花、黄花铁线莲、黑心虎耳草和短尾铁线莲6种藏药提取物的体外抗艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)病毒活性的评价及其作用机制的初步研究.方法:采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法细胞毒性实验和HIV-1假病毒单周期感染实验检测提取物的体外抗病毒活性和细胞毒性;利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术、蛋白酶、整合酶和逆转录酶体外活性抑制实验初步探讨药物的作用靶点.结果:在这6种藏药提取物中,木藤蓼、野棉花、黑心虎耳草提取物具有较好的体外抗HIV-1病毒活性,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为(6.47±0.78),(11.97 ±1.09),(11.7±0.79) mg·L-1,且细胞毒性较小,三者均具有较好的体外抑制整合酶活性.结论:木藤蓼、野棉花、黑心虎耳草提取物具有较好的抗HIV-1病毒的作用,其作用机制与整合酶的抑制作用有关.

天然产物中槲皮素类化合物的抗HIV作用研究

目的:综述天然产物中槲皮素类化合物的抗HIV作用方面的研究进展,为进一步临床应用和研究提供参考.方法:全面检索、查阅国内外近10年来有关天然产物中槲皮素类化合物抗HIV作用的文献与著作,并按照槲皮素类化合物的不同作用对其进行分析总结.结果:槲皮素类化合物是天然产物中具有较强抗HIV活性的一类化合物,主要作用于HIV复制所需的三个关键酶——蛋白酶、逆转录酶、整合酶,从而抑制HIV在体内的复制.结论:天然产物中的槲皮素类化合物在抗HIV方面中有着重要的作用,深入研究该类化合物具有重大意义.

中草药中HIV-1三大酶类抑制剂研究进展

艾滋病,即获得性免疫缺陷综合征(AIDS),是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所导致的人体防御机能的缺陷(尤其是细胞介导的免疫机能缺陷),患者易于发生机会性感染以及肿瘤的各种临床综合征.

抗HIV药物及其靶点的研究进展

随着AIDS在全球范围内的迅速蔓延,寻找有效的抗HIV药物成为研究的重点任务.作者主要综述了近10年来抗HIV药物作用靶点的研究进展,特别是以侵入融合过程、逆转录酶、蛋白酶及整合酶这几个位点,以及在这几个靶点上的传统中草药中抗HIV的有效成分,和已经用于临床及正在研发的一些抗HIV药物.

荧光蛋白标记逆转录病毒整合酶及Brd2真核表达载体的构建

目的 构建绿色荧光蛋白标记的莫洛尼鼠白血病病毒 (MLV) 和人类免疫缺陷病毒 (HIV) 整合酶及红色荧光蛋白标记的Brd2的真核表达质粒, 为研究整合酶与Brd2相互作用打下基础.方法以Prr88-MLV、HIV质粒pNL4-3及含有Brd2的质粒为模板, 采用PCR技术扩增MLV-IN、HIV-IN、Brd2片段;利用酶切反应体系构建psectag2A-GFP-mIN、psectag2A-GFP-hIN、pDsred2-N1-Brd2质粒, 0.8％琼脂糖凝胶电泳后进行测序分析;用重组质粒转染293T细胞, 荧光显微镜观察目的蛋白表达情况, 并进行WB鉴定.结果 构建psectag2A-GFP-hIN、psectag2AGFP-mIN、pDsred2-N1-Brd2的真核表达质粒, 酶切以及测序结果与预期相符.将上述质粒分别转染293T细胞, WB及荧光显微镜均检测到目的蛋白的表达.结论 成功构建了绿色荧光标记的HIV、MLV整合酶真核表达质粒和红色荧光蛋白标记的Brd2真核表达质粒, 尽管Brd2真核表达质粒荧光相对较弱, 但这对整合酶与Brd2相互作用研究奠定了基础.

铜绿假单胞菌检出特殊1型整合子结构

1型整合子是造成铜绿假单胞菌广泛耐药的重要原因,其基本结构为:5'端保守序列(1型整合酶)-特异识别位点(attI或attC)-3'端保守序列(qacE△1耐药基因盒-sul1耐药基因盒),在5'端与3'端之间可插入其他耐药基因盒,并将其整合在其中,形成各种组合的多重耐药整合子.

应用高分辨熔解曲线法快速鉴定功能性第2类整合子

目的：应用高分辨率熔解曲线法快速鉴定功能性第2类整合子。方法收集99株2011年8月—2012年8月非重复分离自临床标本的第2类整合酶阳性变形杆菌，以基因组DNA为模板，PCR扩增包含第2类整合酶基因突变位点一段60 bp的片段，高分辨率熔解曲线分析后测序验证。结果功能性第2类整合子与普通第2类整合子高分辨熔解曲线具有显著差别，测序结果与高分辨率熔解曲线法鉴定结果一致。结论应用高分辨率熔解曲线法可快速准确进行功能性第2类整合子的筛查鉴定。

沙门菌中第一类整合子的鉴定及特性分析

目的基于整合子在细菌耐药机制中的重要作用,对来自正常人体内耐药沙门菌的整合子分布及其结构特征进行分析. 方法应用PCR方法,设计第一类整合酶基因intI1和耐药基因盒的特异性引物,用PCR方法检测整合子阳性菌株并对其整合的耐药基因进行测序和序列分析. 结果发现1株S.hadar和3株S.tshiongwe为第一类整合酶阳性菌株.耐药基因盒进行扩增的结果,从2株中分别得到1009bp的扩增产物.1株得到1664bp的扩增产物.1株菌得到1009bp和1664bp的扩增产物.序列分析结果表明,1009bp的扩增产物为携带aadA2,对氨基糖苷类抗生素药物壮观霉素、链霉素产生耐药的基因盒;1664bp为携带aadA5和dfr17,对氨基糖苷类抗生素药物壮观霉素、链霉素和磺胺类药物甲氧氨苄嘧啶产生耐药的基因盒. 结论首次揭示了健康人携带由整合子介导的耐药菌这一现象,提示我们要从基因水平上监测细菌的耐药情况.

HIV-1型整合酶蛋白的表达、纯化及复性研究

目的 对HIV-1整合酶蛋白进行原核表达、纯化以及复性研究.方法 从HIV-1 HXB2中PCR扩增出全长的整合酶基因,连入原核表达载体pET-30a中,得到pET-30a整合酶表达质粒.再将质粒转人大肠杆菌BL21中诱导表达,经镍柱纯化后得到整合酶蛋白.纯化后蛋白在FoldIt复性液中进行稀释复性确定佳复性液,然后蛋白在此条件下复性并用反相柱回收,后通过对复性蛋白抽干及再溶分析复性蛋白的物理稳定性.结果 HIV-1整合酶蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总量的10%.经镍柱纯化后蛋白的总浓度为0.9 mg/ml.蛋白的佳复性液是:Tris-Cl 55 mmol/L,NaCl 264 mmol/L,KCl 11 mmol/L,Gu-HCl 550 mmol/L,EDTA 1.1 mmol/L,以及附加成分中的GSH、GSSG.复性后蛋白抽干后再溶,溶液清亮透明,SDS-PAGE可见有寡聚体状态的蛋白.结论 成功构建了pET-30a整合酶表达质粒.纯化后蛋白的浓度较高.确定了佳的蛋白复性液.并且初步检测了复性蛋白的物理稳定性.这为蛋白体外活性研究和AIDS药物研究打下了基础.

利用表型筛选法测定整合子对耐药性基因盒的整合频率

目的 建立一种利用表型筛选的方法来测定整合子对耐药性基因盒的整合频率. 方法 将整合子和aadA2耐药性基因盒克隆到同一质粒pACYCl84的不同位点,该重组质粒和高表达整合酶的重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),挑选阳性克隆过夜培养后,取适量菌液涂布含有链霉素的LB琼脂平板,同时取适量菌液涂布不含链霉素的LB琼脂平板,过夜培养后计数菌落个数,用以计算整合频率.同时以链霉素平板上的阳性克隆为模板,进行PCR扩增.对扩增产物切胶回收纯化,然后进行测序,以确定aadA2耐药性基因盒整合位点. 结果 在大肠杆菌BL21(DE3)宿主中,整合子对aadA2耐药性基因盒的整合频率为1.1×103,主要的整合位点为attI. 结论 该系统可以用于整合子对基因盒捕获频率的测定.

细菌耐药机制的研究热点--整合子系统

在探讨细菌耐药机制的研究中,用基因突变和耐药性质粒介导细菌耐药性来解释似乎不够完全.近年来,细菌耐药机制--整合子(integron)系统得到研究者们的广泛注意[1],并取得了很大的进展.细菌通过整合子系统,通过整合酶的作用,捕获外来的耐药基因,并在位于整合子上游的启动子的作用下得到表达,使细菌具有耐药及多重耐药性.本文就近年国外相关文献及我们在对印度霍乱弧菌整合子分析的基础上,对整合子介导细菌耐药特性的研究进展进行简述.

一种研究耐药性整合子整合功能体系的建立

遗传物质在菌种内以及菌种间的水平传播,是细菌获得新耐药性的重要手段.耐药性快速广泛地传播以及在不同菌种间出现非常相似的耐药方式,说明了上述机制的重要性.细菌可以通过基因突变的方式获得耐药性,然而整合子通过捕获多种耐药性基因盒在临床菌株产生多重耐药性上具有重要意义[1].Hall和Collis[2]将整合子定义为由一系列遗传元件构成的能够识别和捕获移动性基因盒的位点特异性重组系统.一个整合子包括编码整合酶(intI)的基因及其临近的重组识别位点(attI).

临床致病菌整合子检测及耐药基因盒序列分析

目的对临床菌株中的第一类整合子分布及其耐药基因盒的结构特征进行分析.方法应用PCR方法检测33株临床菌株中的第一类整合酶基因intI,并对intI阳性菌株整合的耐药基因进行测序及序列分析.结果 33株临床菌株(100%)均为第一类整合酶基因阳性.耐药基因盒特异PCR扩增发现,29株菌得到1 913 bp的扩增产物,2株得到1 664 bp的产物,1株得到1 009 bp的产物,1株得到1 913 bp和1 009 bp两种不同产物.序列分析结果表明,1 913 bp 的扩增产物携带基因盒dhfr、orfF和 aadA2,1 664 bp的扩增产物携带基因盒aadA5和dfr17,1 009 bp的扩增产物携带基因盒aadA2,aadA2 和aadA5均为编码对氨基糖苷类抗生素产生耐药的基因盒,dhfr和dfr17均为编码对磺胺类药物甲氧苄氨嘧啶产生耐药的基因盒;orfF为未知功能的开放阅读框.结论第一类整合子介导的耐药基因广泛存在于临床致病细菌中,提示要加强对耐药基因在细菌种属间水平转移的监测工作.

多重耐药不动杆菌临床菌株中整合子的基因分析

多重耐药质粒的演变与抗菌药物耐药决定子特定位点的整合子有关.根据整合酶的不同有4类整合子,临床分离株中常见1类整合子.本研究是检测多重耐药不动杆菌分离株中1类、2类整合子的情况,以调查不动杆菌的分子流行病学.

关于抗HIV活性香豆素类化合物进展的探究

HIV（人类免疫缺陷病毒）感染是引发AIDS（艾滋病）的主要因素。目前，用于治疗AIDS的抗HIV化合物种类有20多种，其中香豆素类化合物是一种新型的抗HIV药物，其能有效抑制HIV整合酶、蛋白酶、逆转录酶活性，达到良好的抗HIV 效果。本文首先分析了香豆素类化合物的种类、来源，对抗HIV活性香豆素类化合物的研究进展进行了综述。