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铜绿假单胞菌检出特殊1型整合子结构
1型整合子是造成铜绿假单胞菌广泛耐药的重要原因,其基本结构为:5'端保守序列(1型整合酶)-特异识别位点(attI或attC)-3'端保守序列(qacE△1耐药基因盒-sul1耐药基因盒),在5'端与3'端之间可插入其他耐药基因盒,并将其整合在其中,形成各种组合的多重耐药整合子.
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沙门菌中第一类整合子的鉴定及特性分析
目的基于整合子在细菌耐药机制中的重要作用,对来自正常人体内耐药沙门菌的整合子分布及其结构特征进行分析. 方法应用PCR方法,设计第一类整合酶基因intI1和耐药基因盒的特异性引物,用PCR方法检测整合子阳性菌株并对其整合的耐药基因进行测序和序列分析. 结果发现1株S.hadar和3株S.tshiongwe为第一类整合酶阳性菌株.耐药基因盒进行扩增的结果,从2株中分别得到1009bp的扩增产物.1株得到1664bp的扩增产物.1株菌得到1009bp和1664bp的扩增产物.序列分析结果表明,1009bp的扩增产物为携带aadA2,对氨基糖苷类抗生素药物壮观霉素、链霉素产生耐药的基因盒;1664bp为携带aadA5和dfr17,对氨基糖苷类抗生素药物壮观霉素、链霉素和磺胺类药物甲氧氨苄嘧啶产生耐药的基因盒. 结论首次揭示了健康人携带由整合子介导的耐药菌这一现象,提示我们要从基因水平上监测细菌的耐药情况.
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耐药铜绿假单胞菌携带的整合子及其耐药基因盒检测分析
整合子系统是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)产生耐药的重要因素,其包括5'保守序列(CS,包括整合酶基因int、重组位点att Ⅰ和1个启动子)和3'CS(由qacE△1和sul1组成);整合子携带的耐药基因盒包括1个单独的基因和1个下游的重组位点attC;整合子通过att Ⅰ和attC位点之间或2个attC位点之间的重组而捕获耐药基因.本研究对临床分离的13株耐药PA菌行药物敏感试验后,对整合子和基因盒的携带情况进行检测,并对序列、定位及质粒接合试验进行分析.
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一株携带突变cmlA1基因绿脓假单胞菌流行株的检测
本研究对5株临床分离的Ⅰ类整合子阳性绿脓假单胞菌的耐药基因盒进行检测,分析其耐药基因及同源性.分析绿脓假单胞菌在医院的传播及整合子在细菌耐药中的作用.收搞日期:2006-01-28)
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O139群霍乱弧菌Ⅰ类整合子结构分析
O139群霍乱弧菌是一种引起严重腹泻的肠道病原菌.随着对常用抗菌药物耐药的霍乱弧菌出现,研究其耐药机制和传播也变得重要.Ⅰ类整合子是细菌获得和传播耐药基因的重要机制,携带位点特异性的重组酶系统,可特异性识别耐药基因盒结构,并将其整合在其中,形成各种组合的多重耐药整合子,转移到细菌基因组其他位点上或通过质粒等在细菌之间扩散.本科在2005年分离的1株O139群霍乱弧菌NB05030中检出发现携带aadA2耐药基因盒的Ⅰ类整合子结构.
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鲍曼不动杆菌流行株Ⅰ类整合子RFLP分析及耐药基因盒研究
鲍曼不动杆菌是引起医院感染的一种重要致病菌,随着抗菌药物以及免疫抑制剂的广泛使用,其引起的感染在临床上越来越常见,鲍曼不动杆菌的耐药机制复杂,包括基因突变、外膜孔蛋白改变、灭活酶以及药物外排系统等.近年来国内外大量的文献都表明细菌的多药耐药与整合子有关[1].为了解中山大学附属第一医院鲍曼不动杆菌整合子阳性菌株的耐药基因盒的结构及其与抗菌药物之间的关系,笔者用限制片段长度多态性PCR(RFLP-PCR)扩增法对26株Ⅰ类整合子保守区扩增阳性的鲍曼不动杆菌扩增其高变区,分析了鲍曼不动杆菌整合子中所携带的耐药基因的种类,报道如下.
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整合子中耐药基因盒的研究进展
迄今已报道约60多个基因盒[1],能介导对氨基糖苷类、青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类、磺胺增效剂、氯霉素、利福平、红霉素和四价铵化合物等的耐药(表1).基因盒一般由一个或多个编码不同抗性的基因组成,表达上形成类似操纵子的结构.编码未知功能与attC位点相关的开放阅读框能以基因盒的形式存在于几个整合子内[2].基因盒是小的可移动DNA分子,含基因编码区和3'端59碱基元件的重组位点[3,4].59bP由整合酶识别,在attI(邻近整合酶基因的独立整合酶识别位点[5])插入基因盒.本文就耐药基因盒的结构、种类、来源、整合、转录与表达等全面阐述如下.
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临床分离肺炎克雷伯菌中整合酶基因的检测分析
近年来肺炎克雷伯菌已成为医院感染的重要病原菌,同时院内分离的肺炎克雷伯菌往往有较高的产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)率并呈现多重耐药性[1,2].在肠杆菌科细菌耐药机制中,整合子起着非常重要的作用[3],通过位点特异性基因重组机制使细菌耐药基因盒( gene cassette)整合在一起,形成多种耐药基因的组合和排列,导致不同耐药基因的水平传播.
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整合子与细菌耐药性
整合子是携带编码抗生素耐药基因盒的DNA片段，在细菌获得和传播耐药基因方面起着重要的作用。本文对整合子和基因盒种类、结构以及在耐药基因获得和传播中的作用机制进行了综述。
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革兰阴性菌中整合子携带超广谱β-内酰胺酶的研究进展
整合子是一种主要存在于革兰阴性菌中的基因捕获和表达的遗传单位,能够选择性捕获或去除各种特异性耐药基因盒,从而加速了细菌耐药性的扩散.近年来,整合子介导的细菌耐药机制引起了研究人员的极大关注,成为研究细菌耐药传播机制的一大热点.目前已明确的位于整合子上的抗性基因已超过70多种[1],其中包括相继发现的一些超广谱β-内酰胺酶(ESBL)被整合在整合子上,这无疑加速了ESBL的传播速度.本文就整合子的分类、结构,革兰阴性菌中整合子携带ESBL的流行病学特征、检测和协同耐药基因的表达等作一综述.
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大肠埃希菌中新的耐药基因盒aadA23的变异
目的基于整合子-细菌耐药系统在细菌耐药机制中的重要作用,对成人腹泻患者的大肠埃希菌Ⅰ类整合子阳性菌株携带的耐药基因盒的基因特征进行分析.方法应用聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合酶基因intⅠ阳性菌株并对其整合的耐药基因进行测序及用生物信息软件对序列进行分析.结果5株Ⅰ类整合酶基因阳性菌株的耐药基因盒PCR扩增得到1009 bp的产物.序列分析结果表明,1009 bp序列含有780 bp的开放阅读框,与已知的aadA23和aadA21分别有99.6%和99.5%的相似性,与aadA5只有66.4%相似,为对氨基糖苷类抗菌药物壮观霉素、链霉素产生耐药的基因盒,建议命名为aadA23b.结论随着选择环境不同,整合子整合的基因盒会发生变异,提示我们要用分子生物学的手段从基因水平分析耐药基因的遗传与变异.
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肠道杆菌耐药性及其耐药相关Ⅰ类整合子可变区结构与进化
目的:了解大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌临床菌株耐药性,及其Ⅰ类整合子分布、可变区耐药基因盒与分子进化关系 方法:采用K-B法检测大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌对12种药物的敏感性.采用PCR及其产物测序检测上述菌株中Ⅰ类整合子携带率及可变区耐药基因盒.采用Clustal X和MEGA软件分析Ⅰ类整合子基因盒中耐药基因分子进化关系.结果:鲍曼不动杆菌对临床常用青霉素类和头孢菌素类抗生素耐药率为54.2％ ～ 100％,大肠埃希菌和阴沟肠杆菌对菌素类抗生素耐药率也高达41.6％ ～ 62.5％.62.5％(15/24)大肠埃希菌、67.9％(19/28)阴沟肠杆菌、83.3％ (20/24)鲍曼不动杆菌检出Ⅰ类整合子,81.5％ (44/54)Ⅰ类整合子呈现为4种单条带谱型,其余为3种双条带谱型.Ⅰ类整合子可变区耐药基因盒中存在aac(6′)、sad(3″)、aad(2″)、cat(4′)和dfr(7、A13和15)耐药基因,可分别介导细菌对氨基糖苷类、氯霉素和磺胺类抗生素耐药.根据二氢叶酸还原酶基因序列差异,上述菌株携带的Ⅰ类整合子可分成4个分子进化组.结论:上述肠道杆菌耐药情况严重并携带高含多种耐药基因盒的Ⅰ类整合子,Ⅰ类整合子有4条不同的进化途径.
关键词： 肠杆菌属/药物作用 鲍氏不动杆菌/药物作用 埃希氏菌属/药物作用 抗药性 细菌 肠道杆菌 耐药 整合子 耐药基因盒 进化 -
重症监护室多重耐药鲍曼不动杆菌整合子与耐药相关性研究
目的:了解鲍曼不动杆菌整合子分布情况,探讨发现的整合子与其耐药性的关系.方法:分离2014-2015年重症监护室(ICU)多重耐药鲍曼不动杆菌,用VITEK2全自动微生物鉴定系统进行菌种鉴定及药敏检测,聚合酶链反应(PCR)检测整合子可变区.结果:鲍曼不动杆菌对ICU常用药物除头孢哌酮舒巴坦外耐药率均超过50％,整合子结构的检出率为82.81％,可变区包含arr-3+ aacA4和aacA4+ catB8+ aadA1,属于两种工类整合子.结论:ICU的多重耐药鲍曼不动杆菌广泛存在Ⅰ类整合子结构,介导对氨基糖苷类、氯霉素和利福平耐药,对ICU多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药基因有待进一步检测.
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多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子的检测
目的研究整合子在多重耐药革兰阴性菌中的分布和所起的作用.方法用Kirby-Bauer(K-B)药敏法分析80株多重耐药革兰阴性菌的耐药性,再用可变引物与兼并引物进行聚合酶链反应(PCR),分别扩增革兰阴性菌整合子.结果用兼并引物可检出50株革兰阴性菌携带有整合子,有21.2%的菌株同时对10种抗生素都耐药,依次为氨苄西林(72.5%)、头孢曲松(62.5%)、头孢唑啉(61.2%)、头孢他啶(56.2%)、哌拉西林(55.0%)、复方磺胺嘧啶(51.2%)、环丙沙星(50%)、庆大霉素(48.8%)、头孢吡肟(48.8%)、头孢西丁(33.8%),显著高于整合子阴性的菌株.用可变引物检出29株携带有Ⅰ类整合子,可扩增出1000 bp,1450 bp,1600 bp,1700 bp,1850 bp,1900 bp,大于2000 bp等6种不同长度的脱氧核苷酸(DNA)片段,相同菌属可携带有不同长い度的耐药基因片段,不同细菌种属间携带有相同长度的耐药基因片段.结论Ⅰ类整合子广泛分布于革兰阴性杆菌中,在多重耐药机制中起着重要的作用.
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亚胺培南耐药铜绿假单胞菌I类整合子检测
目的:了解本院临床分离的亚胺培南耐药铜绿假单胞菌(IRPA)I类整合子基因携带情况,分析其携带的基因盒与细菌耐药的相关性.方法:采用聚合酶链反应(PCR)检测86株IRPA的I类整合酶及I类整合子,测序确定整合子携带的耐药基因盒,采用PCR检测携带整合子耐药基因盒中的金属酶耐药基因、氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因、16SrRNA甲基化酶基因和OprD2基因;采用VITEK-2全自动微生物鉴定系统检测整合子阳性菌株的耐药特性.结果:在86株IRPA中,整合酶的检出率为23.3%(20/86),I类整合子的检出率为8.14%(7/86),共检出5种I类整合子耐药基因盒;I类整合子阳性菌株对12种抗菌药物存在不同程度耐药并携带数量众多的耐药基因.结论:I类整合子中携带的多种耐药基因盒与IRPA的多重耐药有关.
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整合子介导细菌耐药调控机制的研究进展
自从青霉素出现的半个多世纪以来,抗菌药物一直都是临床抗感染治疗的重要、有力武器.然而,近年来,随着抗菌药物的广泛使用甚至是滥用,细菌在抗菌药物的选择性压力作用下不断地产生耐药菌株,并且多重耐药菌株也在不断增加.在对细菌耐药机制的研究中,1989年Stokes和Hall提出了整合子-基因盒耐药系统的概念.整合子是细菌特别是革兰阴性菌中的一种可移动性基因元件,通常位于转座子、接合性质粒、噬菌体或染色体上.它能够识别外源性基因盒,通过位点特异性重组捕获或切除耐药性基因盒,并能使捕获的耐药性基因盒表达.在耐药基因的水平转移中,整合子起到了至关重要的作用.
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临床大肠埃希菌第Ⅰ类整合子检测及耐药基因盒分析
目的 对来自临床腹泻患者大肠埃希菌的第Ⅰ类整合子分布及其耐药基因盒的结构特征进行分析.方法 应用聚合酶链反应(PCR)方法检测第Ⅰ类整合酶基因intⅠ阳性菌株,并对其整合的耐药基因进行测序及序列分析.结果 在40株大肠埃希菌中有28株(70%)第Ⅰ类整合酶基因阳性.耐药基因盒扩增结果,13株菌得到1 664 bp的扩增产物,10株得到1 586 bp的产物,3株得到1 009 bp的产物,2株得到1 009 bp和1 586 bp两种不同产物.序列分析结果表明,1 664 bp携带aadA5和dfr17,1 586 bp携带aadA1和dhfrⅠ,均为对氨基糖苷类抗生素壮观霉素、链霉素和磺胺类药物甲氧苄氨嘧啶产生耐药的基因盒;1 009 bp为aadA23b,为对氨基糖苷类抗生素壮观霉素、链霉素产生耐药的基因盒.结论 测出的28株第Ⅰ类整合子阳性菌株携带耐氨基糖苷类抗生素的基因,应从基因水平上对细菌耐药及其传播进行监测.
