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产ESBL肺炎克雷伯菌中16S rRNA甲基化酶的分布与相关耐药性的研究
目的 调查我院产ESBL肺炎克雷伯菌临床分离株16S rRNA甲基化酶基因的分布以及与耐药谱的关系,并初步探讨其在分子流行病学分析中的作用.方法 收集我院临床2010年3月至9月分离出69株非重复产ESBL肺炎克雷伯菌,采用PCR法检测16S rRNA 甲基化酶基因,并对阳性菌株进行ESBL基因及整合子基因分析,通过DNA直接测序确定.质粒接合试验和质粒消除试验确定16S rRNA甲基化酶基因的传播途径,利用ERIC-PCR技术进行基因分型.结果 69株产ESBL肺炎克雷伯菌中有rmtB阳性菌株20株(28.9％),其中2株同时携带有rmtB和armA.在20株产16SrRNA甲基化酶菌株中,均携带有CTX-M基因,测序显示14株CTX-M-14基因,6株CTX-M-15基因；14株携带有TEM-1基因；8株携带有SHV基因,测序显示5株SHV-12基因,3株SHV-11基因；3株携带有OXA-10基因；3株携带有VBE-1基因.另有12株携带有int1阳性,含有5种不同的耐药基因盒,分别携带drfA25、drfA1、drfA12、aadA1、aadA2、sat和blaVEB-1基因.ERIC-PCR法显示20株16SrRNA甲基化酶基因阳性的肺炎克雷伯菌主要分为5型,A型为优势流行克隆株.质粒接合和消除试验发现A型克隆株KP5和KP16 rmtB均位于一质粒上并通过接合传播.结论 本院产ESBL肺炎克雷伯菌临床分离株中存在16S rRNA甲基化酶基因rmtB的普遍流行,导致对多种氨基糖苷类抗生素高水平耐药.rmtB可通过水平基因传播和克隆传播的两种方式进行播散,并且存在同时产ESBLs、16S rRNA甲基化酶和Ⅰ类整合子的肺炎克雷伯菌的传播.
关键词： 肺炎克雷伯菌 16S rRNA甲基化酶 整合子类 抗药性 细菌 -
多耐药鲍曼不动杆菌耐药性分析和部分耐药基因检测
目的 分析皖北地区多耐药鲍曼不动杆菌(MDR-Ab)耐药率和部分耐药基因携带情况.方法 用稀释法测定抗生素的低抑菌浓度(MIC),用PCR扩增OXA-51、OXA-23和Ⅰ~Ⅲ类整合子的整合酶基因.结果 MDR-Ab对替加环素、多黏菌素E和利福平体外药敏试验耐药率较低,分别是5.56%、6.94%、16.67%.临床常用16种抗生素中除舒普深(头孢哌酮/舒巴坦)耐药率为41.67%外,其他抗生素耐药率较高.72株MDR-Ab的OXA-51、OXA-23和Ⅰ类整合酶基因的携带率分别为100.00%、84.72%和91.67%,未检出Ⅱ和Ⅲ类整合酶基因.结论 MDR-Ab耐药形势严峻,替加环素、多黏菌素E和利福平是治疗MDR-Ab感染的有效药物.MDR-Ab携带Ⅰ类整合子阳性率较高,OXA-23是导致其对碳青霉烯类抗生素耐药的机制之一.
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非标记探针结合高分辨熔解曲线分析快速区分第1类整合子可变区启动子
目的：建立一种基于非标记探针结合高分辨率熔解曲线分析快速区分第1类整合子可变区启动子种类的方法。方法 PCR扩增质粒pACW （PcW）、pACWP2（PcW－P2）含可变区启动子区域的DNA片段，再分别以纯化的PCR产物为模板，用扩增子高分辨率熔解曲线分析对P2启动子进行区分。以质粒 pACS （ PcS ）、pACH2（ PcH2）、pACH1（ PcH1）、pACW （ PcW ）及肺炎克雷伯菌HS07－68（PcWTGN－10）、HS05－1792（PcH2TGN－10）基因组DNA为模板，结合定点突变，PCR扩增获得分别含8种不同Pc启动子序列的DNA片段，再分别以纯化的PCR产物为模板，联合运用扩增子和非标记探针高分辨率熔解曲线分析对8种不同Pc启动子进行区分。运用上述方法对2004—2007年95株非重复分离自华山医院住院患者尿液标本的第1类整合酶阳性大肠埃希菌中可变区启动子进行分析，并与测序结果进行比对。结果 P2启动子扩增子熔解曲线的熔链温度（ Tm）值明显高于无活性的P2启动子，通过扩增子高分辨率熔解曲线分析可将两者区分开，95株大肠埃希菌109个第1类整合子中，有2个整合子中检测出P2启动子，与测序结果完全一致。8种不同的Pc启动子通过扩增子高分辨率熔解曲线分析分为3组：PcS、PcSTGN－10；PcW、PcWTGN－10；PcH1、PcH1TGN－10、PcH2、PcH2TGN－10。非标记探针高分辨率熔解曲线分析将8种不同的 Pc 启动子分为4组 PcS， PcH1；PcH2， PcW；PcSTGN－10， PcH1TGN－10；PcH2TGN－10，PcWTGN－10。联合运用扩增子和非标记探针高分辨率熔解曲线分析可将8种不同的Pc启动子相互区分开，95株大肠埃希菌109个第1类整合子中，共检测出5种不同的Pc启动子PcS，PcW，PcH1，PcH2TGN－10，PcWTGN－10，与测序结果完全一致。结论本研究成功建立了一种基于非标记探针结合高分辨率熔解曲线分析的方法，用于快速区分第1类整合子可变区启动子，该方法结果准确、费用低，可用于临床对第1类整合子可变区启动子多态性的研究。（中华检验医学杂志，2017，40：95－100）
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整合子中氨基糖苷-3″-腺苷酰基转移酶多克隆抗体的制备与初步应用
目的 制备氨基糖苷-3″-腺苷酰基转移酶[AAD(3″)]特异性抗血清,并探讨其在检测第1类整合子8种不同可变区启动子(PcS、PcH2、PcH1、PcW、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1 -P2和PcW-P2)下游基因盒中aadA2基因表达水平的应用价值.方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增aadA2基因,并克隆至表达载体pET19b中,诱导表达并纯化带组氨酸标签的重组AAD(3″)蛋白,免疫大耳白兔制备抗AAD(3″)特异性抗血清.以制备的抗AAD(3″)抗血清为一抗,用免疫印迹法(WB)检测不同可变区启动子下游基因盒中aadA2基因的翻译水平,用微量肉汤稀释法检测链霉素对含不同可变区启动子及其下游aadA2基因盒的大肠埃希菌JM109的低抑菌浓度(MIC).结果 成功构建重组的AAD(3″)蛋白表达质粒pET1 9b-aadA2,经测序确认转化大肠埃希菌BL21( DE3)获得1株高表达可溶性重组AAD(3″)蛋白的工程菌株,发酵后用镍柱纯化获得纯度＞90％的重组AAD(3″)蛋白,免疫大耳白兔获得效价＞ 1∶100 000的抗AAD(3″)特异性抗血清.WB检测8种不同可变区启动子下游aadA2基因翻译产物AAD(3″)蛋白的表达水平,设定启动子PcW下游AAD(3″)蛋白的相对表达水平为1,重复3次测得启动子PcS、PcH2、PcH1、PcS-P2、PcH2 -P2、PcH1-P2及PcW-P2下游AAD(3″)蛋白相对表达水平依次为12.9±2.3、9.1±1.0、2.0±0.4、16.0±1.3、14.1±1.3、10.5±0.7、8.9±1.7,且不同可变区启动子下游AAD(3″)蛋白的相对表达水平差异具有统计学意义(F=32.421,P＜0.01).微量肉汤稀释法重复3次测得链霉素对含启动子PcS、PeH2、PcH1、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1 P2、PcW、PcW-P2及其下游aadA2基因重组质粒的大肠杆菌JM109的MIC平均值依次为256、256、64、128、32、128、4、64 mg/L,表明不同可变区启动子下游aadA2基因的表达水平不同可赋予宿主细菌对链霉素产生不同水平的耐药.结论 成功纯化出可溶性重组AAD(3″)蛋白,免疫大耳白兔获得高效价的抗AAD(3″)特异性抗血清,为进一步研究整合子中整合酶基因与可变区基因盒表达之间的相互关系奠定基础.不同可变区启动子下游耐药基因盒的表达水平明显不同,赋予宿主细菌对相应抗菌药物的耐药水平明显不同,因此在对临床菌株进行第1类整合子分子流行病学调查时,应重视可变区启动子分类方面的研究.
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抗菌药物浓度对整合子内耐药基因盒重组效率影响的研究
目的 研究在不同浓度链霉素下,aadA2基因盒在整合子attI位点的整合频率.方法将已知序列的1类整合子克隆到pACYC184质粒,该重组质粒命名为pACIDA;将该整合子上的整合酶基因克隆到pET28a质粒,该重组质粒命名为pETINT;这两重组质粒依次转化大肠杆菌BL21(DE3).转化后的大肠杆菌在加不同浓度的链霉素的LB液体培养基中,37℃过夜培养.使用荧光定量PCR技术分别测定aadA2基因盒在attI位点发生整合作用的整合子的拷贝数和总整合子的拷贝数,前者除以后者即可获得整合频率.结果高表达整合酶的情况下,在加入的链霉素浓度分别为0、20、30、40、50μg/ml时,aadA2基因盒在attI位点的整合频率依次为(1.97±0.24)×10-3、(3.23±1.77)×10-3、(3.27±0.67)×10-3、0.45±0.13、1.32±0.11.而在没有整合酶高表达的情况下背景频率低于(1.75±0.33)×10-7.结论高浓度的链霉素能够促进整合子中aadA2基因盒在整合子中attI位点的重组效率.
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肺炎克雷伯菌临床分离株aac(6')-Ib-cr基因的检测
目的 调查肺炎克雷伯菌临床分离株aac(6')-Ib-cr基因存在情况.方法 收集2006年1月至2007年9月从临床分离的337株非重复的肺炎克雷伯菌.挑选64株对庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素任何一种耐药的肺炎克雷伯菌临床分离株进行aac(6')-Ib-cr基因检测,采用PCR法检测aac(6')-Ib和Ⅰ类整合酶基因(intll),通过DNA直接测序确定aac(6')-Ib-cr.抗生素MIC值测定采用琼脂稀释法.ESBLs检测采用双纸片扩散法,通过接合试验检测质粒是否可以发生转移.结果 337株肺炎克雷伯菌临床分离株中,对庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素的耐药率分别为19.0%(64/337)、8.3%(28/337)和16.3%(55/337).共有24株细菌经PCR证实aac(6')-Ib基因阳性,经测序证实全部为aac(6')-Ib-cr基因,阳性率为37.5%(24/64).24株aac(6')-Ib-cr基因阳性株中,有13株对环丙沙星耐药(MIC≥2 mg/L)和11株环丙沙星敏感(MIC≤0.25～1.0 mg/L).aac(6')-Ib-cr基因在环丙沙星耐药菌株和环丙沙星敏感菌株中的检出率分别为54.2%(13/24)和27.5%(11/40),经X2检验,差异具有统计学意义(X2=11.056,P＜0.01).24株aac(6')-Ib-cr基因阳性株中,ESBLs和intl1基因的阳性率分别为79.2%(19/24)和91.7%(22/24).13株aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株的质粒成功转移至受体菌,以受体菌质粒DNA为模板进行aac(6')-Ib-cr检测,13株受体菌质粒全部为aac(6')-Ib-cr基因和intl基因阳性,全部为ESBLs阳性株.结论 aac(6')-Ib-cr基因广泛存在于肺炎克雷伯菌临床分离株中,aac(6')-Ib-cr可能通过Ⅰ类整合子和ESBL基因同时位于可转移的质粒上造成传播.
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Ⅰ类整合子在多重耐药铜绿假单胞菌中的分布与结构分析
目的 了解分离于镇江地区的铜绿假单胞菌对13种常用抗生素的耐药率;明确Ⅰ类整合子基因盒结构及其在耐药基因播散中的作用.方法 采用K-B纸片法检测71株铜绿假单胞菌的耐药率;煮沸法提取71株铜绿假单胞菌基因组DNA;PCR扩增Ⅰ类整合子基因,并通过测序分析其所携带耐药基因盒.结果 71株铜绿假单胞菌对临床常用的13种抗生素的耐药率在18.3%～77.5%不等;Ⅰ类整合子检出率为38%,包括aadB、aac(6')-Ⅱ、PSE-Ⅰ、dfrA17和aadA5 5种基因盒,其中常见者为dfrA17和aadA5.Ⅰ类整合子阳性菌株对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、左氧氟沙星、环丙沙星等10种抗生素的耐药率明显高于整合子阴性菌株.结论 不同铜绿假单胞菌临床株对13种常用抗生素的耐药率各不相同,整合子阳性菌株耐药率明显高于整合子阴性菌株,提示Ⅰ类整合子是铜绿假单胞菌多重耐药的重要因素.
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不同年代铜绿假单胞菌1型整合子结构比较
目的 研究1992-1996年和2003-2005年两个时间段90份铜绿假单胞菌1型整合子结构,比较其结构差异,以了解不同年代1型整合子变化趋势.方法 用常规和长片段PCR方法扩增1型整合子及耐药基因,并对PCR产物进行测序和GenBank比对分析.结果 41份1992-1996年间样本有13份检出1型整合子结构,长片段PCR扩增1型整合子DNA平均长度为1 868 bp,平均包含2个耐药基因,包括qacE△1(n=6)、sul1(n=14)、aadA1(n=2)、aadB(n=1)、PSE-1(n=2)和tetA(n=1)等6种耐药基因,形成5种耐药基因盒组合.49份2003-2005年间样本中有19份检出1型整合子结构,长片段PCR扩增产物平均长度为3 383 bp,平均包含3.6个耐药基因,包括qacE△1(n=18)、sul1(n=25)、aadA1(n=6)、aadB(n=7)、aacA4(n=2)、PSE-1(n=3)、VEB-1(n=4)、OXA10(n=1)、cm1A(n=1)和tetA(n=2)10种耐药基因,形成9种耐药基因盒组合.结论 根据整合子碱基数量和所携带耐药基因盒数量,发现2003-2005年间检出的1型整合子结构比1992-1996间检出的复杂程度增加.
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整合子介导大肠埃希菌和克雷伯菌多重耐药机制的研究
目的 研究整合子参与大肠埃希菌和克雷伯菌多重耐药的分子机制.方法 纸片扩散法测定61株临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌的药物敏感性;整合酶基因扩增法检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子;整合子可变区扩增并测序.结果 73.8%(45/61)的菌株Ⅰ类整合子阳性,2株大肠埃希菌Ⅱ类整合子阳性,未检测到Ⅲ类整合子;88.9%(40/45)的Ⅰ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性,扩增片段大小从150～2 800 bp不等,有1株Ⅱ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性,大小为2 200bp;整合子可变区含有编码对氨基糖苷类抗生素耐药的基因(aadA1、aadA2、aadA5、aadB、aacA4、aac6'-Ib)、编码对磺胺类抗生素耐药的基因(dfrA1、dfr2d、dfrⅤ、dfrⅫ、dfr17)、编码对氯霉素耐药的基因(cat、catB8、cmlA1-variant)、编码对β-内酰胺类抗生素耐药的基因(blaoxa10)和编码对链丝菌素耐药的基因(sat1).结论 整合子在大肠埃希菌和克雷伯菌中广泛存在,参与了这两种菌多重耐药的形成.
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整合子在细菌耐药性研究中的新进展
整合子是一个新的细菌耐药基因水平传播元件，近年来学者们对其介导的病原菌耐药机制进行了大量研究。本文在阐述整合子介导细菌多重耐药机制的基础上，总结其在肠杆菌科细菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌等细菌中的检出情况及新发现整合子基因盒类型，并展望未来研究方向。（中华检验医学杂志，2017，40：7-10）
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耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及整合子分布
目的 了解耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及整合子分布情况.方法 收集天津医科大学总医院2008年1月至2010年3月期间,103株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌临床标本.用Vitek-2系统鉴定细菌,并进行药敏试验,通过改良Hodge试验、改良三维试验和2-巯基丙酸协同试验初筛碳青霉烯酶,多重PCR同时检测4种OXA型碳青霉烯酶基因、2种金属酶基因及整合酶基因,对整合子可变区进行PCR检测及序列分析.结果 103株鲍曼不动杆菌中,改良Hodge试验检出碳青霉烯酶阳性75株(72.8%),改良三维试验检出产碳青霉烯酶菌株80株(77.7%),未检出产金属酶菌株.PCR检出blaOXA-51-like+bsaOXA-23-like+int11基因84株,blaOxA-51-like+blaOXA-23-like阳性5株,blaOXA-51-like+intll阳性8株,blaOXA-51-like+blaOXA-24-like阳性2株,仅blaOXA-51-like阳性4株,blaOXA-58-like、金属酶基因(IMP-1、VIM-2)及Ⅱ类整合酶基因(intI2)均阴性.89株(96.7%)Ⅰ类整合酶阳性株均扩增出可变区,检出2种耐药基因盒组合形式:aacA4-catB8-aadAl(2 300 bp)81株,aacCl-orfX-orfX-orfX'-aadAla(3 000 bp)8株.结论 鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药及多重耐药主要与其携带的OXA-23型碳青霉烯酶和Ⅰ类整合子有关.
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志贺菌属整合子系统研究进展
志贺菌属（Shigella）是感染性腹泻的主要病原，对公共健康造成严重威胁，也给国家带来巨大的疾病负担。随着临床治疗上抗生素的不合理应用，志贺菌耐药问题越来越凸显，其中整合子-基因盒系统在其多重耐药性传播发展过程中起重要作用。以往单一针对志贺菌属整合子-基因盒系统的传播规律和流行特点的研究较少。本文拟对志贺菌属整合子系统及其耐药调控机制和耐药性的传播特点进行综述。
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阴沟肠杆菌外膜孔蛋白基因缺失合并β-内酰胺酶和Ⅰ类整合子所致多重耐药性分析
目的 了解临床分离阴沟肠杆菌膜孔蛋白基因缺失合并β-内酰胺酶和Ⅰ类整合子所致耐药的特点及其分布.方法 收集2008年1月至2011年5月自临床感染患者分离的112株阴沟肠杆菌.应用Vitek-2 Compact鉴定细菌,K-B法进行药敏试验,改良Hodge试验、美罗培南改良三维实验和EDTA-美罗培南纸片协同试验筛选产碳青霉烯酶菌株.多重PCR分别检测4种ESBLs基因、6种AmpC酶基因、4种碳青霉烯酶基因及4组OXA-like基因,单一PCR检测ISEcpl、OmpK35/36、NDM-1、OXA-48,并对Ⅰ类整合子可变区进行PCR扩增及序列分析.结果 6株(5.4％)改良Hodge试验阳性,14株(12.5％)美罗培南改良三维试验阳性,未检出碳青霉烯酶基因.29株(25.9％)ESBLs基因阳性,其中,CTX-M基因上游均检测到ISEcpl,并检测到2株产OXA-1型ESBLs阴沟肠杆菌.AmpC酶基因阳性45株(40.2％),以MIR-3型为主(37/45,82.2％).共检出22株Ⅰ类整合子基因阳性菌株,其中16株可变区扩增阳性.扩增出4种耐药基因盒,aadB-aadA2(1 000 bp)9株,dfrA 15 (700 bp)5株,aadAl(1 000 bp)2株,有l株菌同时携带4种耐药基因盒.所有菌株均合并有膜孔蛋白OmpK35和/或OmpK36基因缺失,并呈现多重耐药.结论 阴沟肠杆菌对碳青霉烯类抗生素的敏感性降低主要与其高产AmpC酶、ESBLs并存在膜孔蛋白OmpK35和/或OmpK36基因缺失有关,且Ⅰ类整合子参与阴沟肠杆菌的多重耐药.
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六家医院整合子介导宋内志贺菌多重耐药的形成和传播机制研究
目的 探讨我国多个地区宋内志贺菌的同源性与整合子介导其耐药的机制.方法 连续收集2010年我国六家医院分离的22株宋内志贺菌,采用纸片扩散法测定其对抗菌药物的敏感性.采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子同源性检测,PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)进行整合子检测及分类,联合RFLP和DNA测序技术分析整合子携带的耐药基因.结果 宋内志贺菌多重耐药率高达90.9％ (20/22),对四环素和复方磺胺甲噁唑耐药率高,为95.5％,对青霉素类抗生素(氨苄西林、哌拉西林、阿莫西林)也呈高水平耐药,耐药率分别为86.4％,90.9％和90.9％.PFGE聚类分析结果显示,22株宋内志贺菌可分为10种PFGE亚型,且均属于同一群,其中优势型为F6型,在济南、长春和上海三市传播.59.1％(13/22)的宋内志贺菌中检出Ⅰ类整合子,其中7株Ⅰ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性;86.4％(19/22)的宋内志贺菌检出Ⅱ类整合子,Ⅱ类整合子可变区扩增全部阳性;未检测到Ⅲ类整合子.22株宋内志贺菌中仅有1株(4.5％)检测到非典型Ⅰ类整合子,其可变区扩增亦阳性.DNA测序发现Ⅰ类整合子中携带耐药基因盒dfrA17-aadA5,Ⅱ类和非典型Ⅰ类整合子可变区分别携带耐药基因盒dfrA1-sat1-aadA1和bla oxa-30-aadA1.结论 多重耐药宋内志贺菌在我国不同地区间传播,整合子在宋内志贺菌中广泛存在,参与多重耐药的形成.
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铜绿假单胞菌中OXA基因的分布与耐药性研究
目的 调查医院铜绿假单胞菌临床分离株苯唑西林酶(OXA)基因的分布以及与铜绿假单胞菌耐药谱的关系,并初步探讨其在分子流行病学分析中的作用.方法 收集临床2010年1-9月分离的铜绿假单胞菌75株进行OXA基因检测,采用PCR法检测OXA和整合酶基因,通过DNA直接测序确定OXA;统计铜绿假单胞菌的药敏结果,并分析基因型和耐药性之间的关.结果 根据PCR产物片段大小及测序分析,75株铜绿假单胞菌中共有OXA-10基因阳性菌株35株,阳性率为46.7%;含有OXA-10基因的铜绿假单胞菌菌株整合酶基因阳性率为71.4%.结论 OXA-10基因广泛存在于铜绿假单胞菌临床分离株中,并可能通过整合子和其他基因同时定位于传递性质粒上造成传播,导致细菌多药耐药.
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儿童福氏志贺菌Ⅰ类整合子的检测及其与耐药性的关系
目的 了解儿童福氏志贺菌是否存在Ⅰ类整合子及其发生率以及与耐药性的关系.方法 对2004年6-11月从本院细菌性腹泻患儿大便培养标本分离到的福氏志贺菌共51株,应用PCR检测Ⅰ类整合子的5′保守区int Ⅰ 1、基因盒区ant(3″)-Ⅰ和3′保守区qacE△1-sul1;用K-B(Kriby-Bauer)法测定志贺菌对7种抗菌药物的敏感性.结果 51株福氏志贺菌中46株检出int Ⅰ 1,Ⅰ类整合子阳性率90.2%;24株检出qacE△1-sul1,阳性率47.1%;int Ⅰ 1、ant(3″)-Ⅰ和qacE△1-sul1区段均阳性的为22株,阳性率43.1%;46株int Ⅰ 1阳性福氏志贺菌ant(3″)-Ⅰ基因均阳性;46株intⅠ 1阳性福氏志贺菌中qacE△1-sul1同时阳性的菌株为22株,占47.8%(22/46)、qacE△1-sul1阴性的菌株24株,占52.2%(24/46).Ⅰ类整合子阳性志贺菌对多种抗生素耐药,尤其是对氨苄西林(χ2=10.13,P＜0.01)和氯霉素(χ2=19.97,P＜0.01)的耐药性明显高于Ⅰ类整合子阴性志贺菌.结论 从福氏志贺菌检出Ⅰ类整合子,携带率为90.2%;携带Ⅰ类整合子阳性志贺菌与抗生素耐药相关.
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可移动性遗传元件介导的产ESBLs大肠埃希菌耐药机制的研究进展
近年来,由于抗生素的广泛使用,临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌越发常见,对其耐药机制的研究也已成为国内外研究热点.病原菌的耐药机制是由于病原菌自身抗菌药物作用靶位的基因突变和病原菌俘获携带耐药基因的可移动性遗传元件(horizontal mobile elements,HMEs)(质粒、转座子、插入序列、整合子)所致.目前,由可移动遗传元件介导的细菌间基因的水平转移屡见不鲜.作者主要对HMEs与产ESBLs大肠埃希菌耐药性的关系进行综述.
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产ESBLs肺炎克雷伯菌中整合子和耐消毒剂基因的研究
目的:研究产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌整合子携带耐药基因状况及其对常用消毒剂的耐药性.方法:采用PCR方法检测77株产ESBLs和71株非产ESBLs肺炎克雷伯菌I整合酶基因,分析I类整合子与耐药性关系,并用耐消毒剂试验对耐消毒剂基因予以证实.结果:产ESBLs和非产ESBLs菌株中I类整合酶扩增阳性率分别为66.2%(51/77株)和10.0%(2/20株),两者差异有统计学意义(P<0.05).整合子阳性株对磺胺类、氨基糖苷类和环丙沙星的耐药率较高,与整合子阴性相比差异具有统计学意义(均P<0.01);耐消毒剂基因阳性株对常用消毒剂耐药能力高于阴性株.结论:I类整合子在产ESBLs肺炎克雷伯菌中的分布明显高于非产酶株,并参与产ESBLs株多重耐药性的形成,携带耐消毒剂基因的菌株具有抗常用消毒剂的能力.
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天津地区志贺菌耐药性及整合子携带调查
目的:了解天津地区志贺菌抗生素耐药性变迁及1、2类整合子携带状况.方法:K-B纸片法测定1981-1983年及2009年天津地区临床分离的57株志贺菌药敏情况.以煮沸法制备细菌总DNA作为PCR扩增模板.PCR方法扩增1、2类整合子整合酶及可变区并测序分析.PCR产物直接测序,结果经BLAST程序与GenBank数据库标准菌株比对分析.结果:1981-1983年组志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素及复方新诺明敏感率低,3种及3种以上抗生素多重耐药率为66.67%;2009年组志贺菌对氨苄西林、链霉素、复方新诺明、哌拉西林和四环素敏感率低,3种及3种以上抗生素多重耐药率为83.33%.1981-1983年组1类整合子阳性率为87.88%(29/33),27株可变区含氨基糖苷类药物耐药基因aadA;1株宋内志贺菌可变区含甲氧苄啶耐药基因dfrA 17和氨基糖苷类药物耐药基因aadAS;未发现2类整合子阳性株;2009年组1类整合酶阳性率为79.17%(19/24),可变区及3'末端扩增均阴性;2类整合子阳性率87.50%(21/24),可变区含dfAl+satl+aadAl,介导甲氧卞啶、链丝菌素和链霉素耐药;其中17株1、2类整合酶均阳性.结论:2009年分离的志贺菌抗生素耐药较上世纪80年代分离的志贺菌增强,多重耐药菌株增加.天津地区志贺菌携带1、2类整合子.
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志贺菌1、2类整合子及ISCR1携带情况与耐药性的关系
目的：了解天津地区志贺菌1类、2类整合子及插入序列共同区(ISCR1)携带情况及其与耐药性的关系。方法 K-B纸片扩散法测定临床分离的159株志贺菌的药敏情况。以煮沸法制备细菌总DNA作为PCR扩增模板。采用PCR方法扩增1类、2类整合子及ISCR1并测序分析。PCR产物直接测序，结果经BLAST程序与Gen?Bank数据库标准株比对分析。结果159株志贺菌中，53株福氏志贺菌对四环素的耐药率高88.68%，其次是链霉素81.13%、氯霉素及SMZco均为56.60%，多重耐药率77.36%；106株宋氏志贺菌对氨苄西林的耐药率高97.17%，其次是SMZco95.28%、四环素83.96%、庆大霉素76.42%，多重耐药率98.11%。1类整合子阳性118株，其中典型1类整合子23株，共有5种基因盒，分别为aadA2、aadA1、dfrⅠ、blaoxa-10及blaoxa-1；非典型1类整合子95株，基因包括intI1、aadA、blaoxa-1和IS1等；2类整合子阳性89株，其基因盒有dfrA1、satl及aadA1；1类、2类整合子同时阳性的菌株70株。未发现ISCR1阳性菌株。整合子阳性菌株中多重耐药率高于整合子阴性菌株(90.65%vs 50%， P<0.05)。结论1、2类整合子广泛存在于志贺菌中且与志贺菌的多重耐药相关。
