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引起老年患者院内下呼吸道感染的肺炎克雷伯菌中质粒介导的AmpC酶基因型检测与分析
目的 探讨引起老年患者院内下呼吸道感染的肺炎克雷伯菌中质粒介导的AmpC酶基因型,为产AmpC酶细菌的监测和防治提供依据.方法 采用头孢西丁纸片对产AmpC酶菌株进行初筛;双纸片表型确证法确证产AmpC酶;采用UNIQ-10柱式质粒小量抽提试剂盒提取细菌质粒;采用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序检测分析质粒AmpC酶基因型.结果 双纸片表型确证试验检出17株产AmpC酶菌株,检出率为17.5％.经PCR扩增17株菌株均在405 bp处出现阳性条带,经DNA测序证实为DHA-1型质粒AmpC酶.结论 浙江省临海市中医院存在质粒介导AmpC酶流行菌株,质粒AmpC酶主要以DHA-1型为主.
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耐头孢西丁肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶的检测及耐药基因分析
目的 了解浙江省台州地区肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC β-内酰胺酶产生情况及AmpC酶的耐药基因型别特征.方法 采用VITEK-AMS60全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按CLSI推荐的确证试验检测ESBLs,采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产AmpC酶阳性菌株,通过酶粗提物三维试验确证产AmpC酶,并经PCR测序等实验分析该菌株的基因型.结果 在对头孢西丁不敏感的86株肺炎克雷伯菌中,ESBLs和AmpC酶检出率分别为88.37%和77.91%;以同产ESBLs和AmpC酶为主要形式,占47.67%,单产ESBLs和单产AmpC酶分别占40.70%和30.23%;AmpC酶阳性菌株的耐药基因型:62株为DHA-1型、5株为ACT-l型.结论 台州地区肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶检出率较高,AmpC酶以DHA-1型为主.
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重症监护病房患者医院感染产β-内酰胺酶和头孢菌素酶的肺炎克雷伯菌耐药性及基因型研究
目的 探讨重症监护病房(ICU)患者医院感染产β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC酶)的肺炎克雷伯菌耐药基因型及对常用抗菌药物的耐药特性,为临床合理用药提供参考依据.方法 细菌鉴定采用VITEK-60型全自动微生物鉴定仪鉴定；ESBLs和药敏试验K-B纸片法按CLSI推荐的方法；产AmpC酶菌株筛选采用头孢西丁纸片扩散法；产AmpC酶菌株确证试验采用三维试验；通过酶粗提物头孢西丁三维试验、PCR测序等实验分析该菌株的基因型.结果 97株肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶总检出率分别为31.96％和13.40％,其中,单产AmpC酶、同产AmpC酶+ESBLs及单产ESBLs菌株检出率分别为7.22％、6.19％和25.77％；13株产AmpC酶阳性菌株的耐药基因型均为DHA-1；产酶菌株对抗菌药物耐药率明显高于非产酶株.同产AmpC酶+ESBLs菌株耐药现象更为严重.结论 ICU患者肺炎克雷伯菌产AmpC酶和ESBLs菌株检出率较高,AmpC酶基因型均为DHA-1型,产AmpC酶和ESBLs菌株对多种抗菌药物呈耐药状态.
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120例肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶酶的检测及耐药性
目的：研究克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）的检测结果及药敏分析，为肺炎患者的治疗提供依据。方法选取肺炎克雷伯菌患者120例，对患者的临床资料进行回顾性分析。结果120株肺炎克雷伯菌中检出单产ESBLs检出率为34.16%，单产AmpC酶检出率为6.67%，同时产AmpC酶和ESBLs检出率为2.50%，未产酶检出率为56.67%，肺炎克雷伯菌对亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦敏感度较高，产ESBLs和AmpC酶株与非产酶株对抗生素的耐药性比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶检测结果中产生的ESBLs和AmpC酶菌株对常用的抗生素药物耐药性高，临床上应加以重视。
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下呼吸道标本肺炎克雷白菌的耐药性分析及产ESBLs和AmpC酶的检测分析
目的:检测并分析下呼吸道标本中含有的肺炎克雷白菌耐药性和其产ESBLs及产AmpC酶情况.方法:收集下呼吸道感染患者所送检标本肺炎克雷白菌90株,分析其对10种抗生素的耐药性及其产ESBLs及产AmpC酶情况.结果:90株肺炎克雷白菌中,不产酶菌株(64.44％),产ESBLs菌株(28.89％),产AmpC酶菌株(4.44％),产ESBLs且产AmpC酶菌株(2.22％).产ESBLs菌株、产AmpC酶菌株、产ESBLs且产AmpC酶菌株对头孢他啶、头孢吡肟、环丙沙星、庆大霉素、头孢西丁、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、美罗培南、亚胺培南、阿米卡星、厄他培南、替加环素的耐药性都高于不产酶菌株.结论:下呼吸道标本中含有的肺炎克雷白菌对β-内酰胺类抗生素药物具有耐药性和其产ESBLs及产AmpC酶具有密切关系,肺炎克雷白菌对哌拉西林、头孢呋辛、头孢噻肟、氨苄西林/舒巴坦的耐药率均>40％,以上4种药物不能作为经验用药,不产酶菌株对哌拉西林/他唑巴坦、美罗培南、亚胺培南、阿米卡星、厄他培南、替加环素的耐药率均<19％,这些药物可推荐作为临床经验用药.
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CMY型AmpC酶新基因亚型的序列分析与表达载体构建
目的 对两株弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY型AmpC酶进行基因克隆、序列分析和重组表达载体的构建.方法 以产CMY型AmpC酶的弗劳地枸橼酸杆菌30、31号总基因组DNA为模板,PCR扩增CMY基因,将其克隆人pGEM-T载体后测定该核苷酸序列.30、31号菌与受体菌进行质粒接合实验,构建pBV220-CMY重组表达载体.对原菌株和重组菌株进行AmpC酶检测.结果 PCR扩增出大小为1146 bp的基因片段,与GenBank上多种CMY亚型的基因序列同源性为97%.质粒接合实验证实质粒上含CMY基因,为可转移质粒.三维实验结果显示30、31号菌和重组菌株所产的酶均能水解头孢西丁.结论 30、31号菌所产的CMY型AmpC酶为CMY新基因亚型.成功构建重组表达载体pBV220-CMY,为下一步酶的表达和纯化提供了依据.
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头孢西丁诱导产ACT-1型AmpC酶大肠埃希菌的比较蛋白质组学研究
目的 研究产AmpC酶大肠埃希菌在头孢西丁诱导前后的蛋白质谱差异,筛选有价值的靶位.方法 提取产ACT-1 AmpC酶大肠埃希菌在头孢西丁诱导前后的全菌蛋白,应用双向凝胶电泳技术分析和Blue silver法染色.凝胶图像分析后,对差异蛋白质进行MALDI-TOF质谱分析.结果 在所鉴定的8个差异蛋白当中,AmpC酶、外膜蛋白Ⅱ和转座酶表达显著上调,而磷酸转移酶系统的葡萄糖特异性组分ⅡA蛋白、抗碲酸盐蛋白、丙三醇磷酰基二酯酶、硫醇过氧化物酶及细菌分化蛋白FtsZ表达下调.结论 所鉴定的这些差异蛋白将为阐明产AmpC酶大肠埃希菌耐药产生的机制提供线索,也为筛选具有潜在价值的靶位提供理论依据.
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大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒中AmpC酶基因型的检测
目的 探讨台州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株质粒介导的AmpC酶基因型流行状况.方法 应用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按NCCLS推荐的确证试验测定β-内酰胺酶(ESBLs);采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产AmpC酶阳性菌株,并通过酶粗提物头孢西丁三维试验、接合试验和PCR测序等实验分析该菌株的基因型及基因表型.结果 299株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLS检出率为19.73%(59/299),AmpC酶纸片扩散法筛选阳性率为12.04%(36/299),且36株AmpC酶筛选阳性菌株均为ESBLs阳性株;该菌株中有15株经三维试验证实为AmpC酶阳性,阳性率5.02%(15/299);15株产AmpC菌经接合试验得到15株接合子,经PCR及测序证实与原菌株表型基本一致.质粒型AmpC基因中13株为CIT型,2株为DHA型.结论 台州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中已出现质粒携带的AmpC基因,基因型以CIT型为主,其次是DHA型.AmpC基因可能与编码ESBLs的基因存在于同一质粒上,编码的AmpC酶的质粒可在细菌间传递.
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产AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中整合子与多重耐药的研究
目的探讨整合子介导的耐药机制在产AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌多重耐药中的作用.方法5株产AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离自2002年1月-2004年5月间我院呼吸科住院的患者,采用E-test试验条进行药敏试验、电转化试验,筛选、分离耐药质粒.PCR扩增Ⅰ型整合子基因盒插入序列,分子克隆和序列分析.结果所有产酶菌株通过电转化试验可将头孢西丁耐药性传递给受体菌,5个产AmpC酶耐药质粒中,有4个检出整合酶序列,其中3个携带2种抗药性基因盒,包括氨基糖苷乙酰转移酶基因aacA4;氨基糖苷腺苷转移酶基因aadA5;二氢叶酸还原酶基因dfrA17;氯霉素外排蛋白编码基因cmL44.结论整合子介导的抗药性基因盒参与了产质粒AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌多重耐药的形成,应引起高度重视.
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同时产 ESBLs 和 AmpC 酶志贺菌临床菌株的分离及鉴定
目的：确定头孢西丁耐药志贺菌临床菌株超广谱β-内酰胺酶（ ESBLs ）和头孢菌素酶（ AmpC）表型、基因型及毒力特征。方法 K-B扩散法筛选头孢西丁耐药志贺菌临床菌株并进行血清学分型。采用ESBLs确证试验和AmpC三维试验确定产酶表型， PCR及序列分析确定其ESBLs 和AmpC基因型。采用PCR检测上述志贺菌株毒力基因virA、ial、ipaH、set1A、set1B和sen，以确定其毒力基因型。结果从356株志贺菌临床菌株中检出8株头孢西丁耐药菌株，其中6株为福氏志贺菌（4株F2a、1株F2b、1株F2c）、2株为宋内志贺菌。8株头孢西丁耐药志贺菌中，5株ESBLs确证试验阳性，另2株AmpC酶三维试验阳性；7株携带ESBLs基因（ CTX-M-14、15、57和/或OXA-30），其中2株检出AmpC基因（ DHA-1和CMY-2）。8株头孢西丁耐药志贺菌中，5株携带所有6种受检的毒力基因，3株携带除set1A和set1B以外的4种毒力基因。两株同时产ESBLs和AmpC酶志贺菌仅对亚胺培南敏感。结论头孢西丁耐药志贺菌临床菌株产ESBLs为主且有较强毒力，但部分菌株同时产AmpC酶，其中DHA-1型AmpC酶为国内首次发现。
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深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶和／或AmpC 酶奇异变形杆菌的流行及其分子特征
目的：调查深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶（ ESBL ）和/或AmpC酶奇异变形杆菌的流行及其分子特征。方法使用ESBL表型初筛和确证试验以及AmpC酶纸片法检测产ESBL和/或AmpC酶奇异变形杆菌。 PCR扩增和DNA测序确定ESBL、AmpC酶基因型及其上游插入序列、质粒介导喹诺酮类耐药（ PMQR）基因型和染色体gyrA、gyrB和parC基因的喹诺酮类耐药决定区（ QRDRs）突变位点，以及整合酶基因和1类整合子基因盒。脉冲场凝胶电泳（ PFGE）分析菌株的同源性。结果2004-2010年我院临床共分离130株奇异变形杆菌，13株（10％）产 ESBL，3株（2．3％）产AmpC酶；产ESBL菌从0％～9．1％（2004-2009年）迅速上升至29．4％（2010年）。常见ESBL基因型为 blaCTX-M-14（n＝7），其他 ESBL 基因型包括 blaCTX-M-65（n＝3）、blaCTX-M-55（n＝1）、blaCTX-M-24（n＝1）和blaPER-1（n＝1），系国内首次临床分离出携带blaPER-1奇异变形杆菌；2株产AmpC酶菌基因型为blaCMY-2，1株产AmpC酶菌基因型未知。91．7％（11/12）奇异变形杆菌的blaCTX-M上游和1株blaCMY-2上游均携带ISEcp1；1株blaPER-1上游携带ISPa12。66．7％（10/15）产ESBL和/或AmpC酶奇异变形杆菌携带qnrD（n＝5）和/或aac-Ib-cr（n＝8）。12株环丙沙星耐药产ESBL和/或AmpC酶菌在QRDRs中均携带GyrA上1个点突变（S83I）和ParC上1个点突变（S80I或S80R），其中6株还同时携带GyrB上1个点突变（E466D）。86．7％（13/15）产ESBL和/或AmpC酶菌携带1类整合子。15株产ESBL和/或AmpC酶奇异变形杆菌共获14种不同PFGE型别。结论产CTX-M型酶是我院奇异变形杆菌对超广谱头孢菌素耐药的主要机制，产ESBL和/或AmpC酶奇异变形杆菌大多携带qnrD和/或aac-Ib-cr基因。
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肺炎克雷伯菌DHA-1型质粒AmpC酶全编码基因克隆、表达及序列分析
目的以我院临床分离的肺炎克雷伯菌KP1为研究对象,对其所产生的质粒AmpC酶编码基因的序列进行研究. 方法采用聚合酶链反应(PCR),用DHA-1型AmpC酶引物扩增KP1接合子中AmpC酶全编码基因,并克隆到pUC118载体中进行表达,对PCR产物进行测序,分析其基因型别. 结果肺炎克雷伯菌KP1菌株的转移接合子所含有的质粒AmpC酶为DHA型,编码基因序列与GenBank中DHA-1编码基因序列的同源性为100%. 结论哈尔滨地区临床分离肺炎克雷伯菌有可转移性DHA-1型AmpC酶的存在.
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产气肠杆菌中发现碳青霉烯酶KPC-2型
肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae Carbapenemase,KPC),属A类β-内酰胺酶.2010年3月25日我们从一家三等甲等医院老年患者的痰液中分离到1株碳青霉烯类耐药的产气肠杆菌(标本编号:20100323BAA049,经gyrA和parC基因扩增与测序,GenBank比对确认).为了解该菌株的β-内酰胺类耐药机制,我们采用E-test法检测了该菌对26种抗菌药物敏感性,并进行了A类、B类、C类、D类等4类41种β-内酰胺酶基因检测,用改良的三维试验法检测AmpC酶、ESBLs和金属β-内酰胺酶活性,用改良Hodge试验法检测碳青霉烯酶活性.
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同时携带多种耐药基因导致一株弗劳地枸橼酸盐杆菌产生泛耐药
南昌大学第二附属医院分离到一株泛耐药的弗劳地枸橼酸盐杆菌,该菌对临床常用抗生素全部耐药.发现多种耐药基因同时位于该菌中,包括一种新型AmpC酶基因,现报道如下.
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临床常见产AmpC β-内酰胺酶菌株中染色质ampD基因的测定与分析
AmpC β-内酰胺酶(简称AmpC酶)的产生由其产酶基因所控制.细菌染色质上AmpC酶的基因包括结构基因ampC和多种调控基因ampR、ampD和ampG等.
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产超广谱β-内酰胺酶及AmpC酶的阴沟肠杆菌的耐药性分析
目的 分析产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum β lactamases,ESBLs)及AmpC酶的阴沟肠杆菌的分布情况及耐药特征.方法 选择49株阴沟肠杆菌,采用纸片扩散法进行药物敏感试验,按美国临床实验室标准化协会推荐的确证试验检测产ESBLs阳性菌株；头孢西丁纸片扩散法初步筛选产AmpC酶阳性菌株,采用PCR检测AmpC酶基因.结果 抗生素敏感试验结果显示阴沟肠杆菌对头孢西丁、替卡西林/克拉维酸、头孢曲松、氨曲南的耐药率均达79.6％以上,对美罗培南敏感率较高,达91.8％.49株阴沟肠杆菌中对头孢西丁耐药的菌株46株(93.9％)；产ESBLs菌株29株(59.2％),PCR 扩增产AmpC酶的阴沟肠杆菌36株(73.5％),同时产两种酶的菌株为13株(26.5％).结论 产ESBLs 及AmpC酶阴沟肠杆菌普遍且耐药现象严重.
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从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检测超广谱β内酰胺酶和AmpC酶
目的:研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的产酶及耐药模式,并对9种抗菌药做药敏试验,比较产酶菌与非产酶菌对9种抗菌药的耐药率,为临床治疗产酶菌感染提供理论依据.方法:菌株来源于2005年1月～2007年5月我院呼吸科住院患者送检合格痰标本中分离的大肠埃希菌43株、肺炎克雷伯菌67株.应用头孢西丁三维试验检测AmpC酶,采用美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)表型筛选和确认试验检测ESBLs菌株,以K-B琼脂扩散法做药敏试验.结果:在110株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,6株(5.45%)产AmpC酶,20株(18.2%)产 ESBLs,1株(0.90%)同时产AmpC酶和ESBLs.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC酶检出率分别为6.98%、5.97%,ESBLs检出率分别为16.3%、20.9%.产酶株对亚胺培南、头孢吡肟、阿米卡星耐药率低.结论:产AmpC酶和产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为多重耐药菌株,治疗产2种β内酰胺酶细菌引起的感染亚胺培南为首选,头孢吡肟和阿米卡星可作为选用药物之一.
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革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药相关性
目的 了解革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药性,指导临床合理用药.方法 K-B法检测184株革兰阴性杆菌对11种抗生素的耐药性;采用头孢西丁(FOX)药敏纸片进行AmpC酶的初筛,通过酶提取物三维试验方法确证产AmpC酶细菌;采用NCCLS推荐的纸片扩散确证试验检测184株革兰阴性杆菌中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs的情况.结果 184株革兰阴性杆菌中,AmpC酶阳性率为23.3%,主要产生菌为鲍曼不动杆菌57.7%,铜绿假单胞菌37.5%,AmpC酶阳性菌对头孢噻肟(CTX)、头孢曲松(CRO)、复方新诺明(SXT)、左旋氧氟沙星(LEV)、哌拉西林(PRL)、氨曲南(ATM)、头孢他啶(CAZ)、阿米卡星(AK)、头孢吡肟(FEP)、美洛培南(MEM)的耐药率分别为94.7%、86.8%、84.2%、81.6%、71.0%、68.4%、68.4%、55.3%、50.0%、5.3%;38株大肠埃希菌和26株肺炎克雷伯菌中ESBLs阳性率分别为42.1%、23.1%,ESBLs阳性菌对头孢噻肟(CTX)、头孢曲松(CRO)、哌拉西林(PRL)、氨曲南(ATM)、复方新诺明(SXT)、头孢他啶(CAZ)的耐药率较高,对头孢吡肟(FEP)、阿米卡星(AK)、头孢西丁(FOX)、美洛培南(MEM)的耐药率较低,对左旋氧氟沙星(LEV)的耐药率大肠埃希菌则远高于肺炎克雷伯菌.结论 在革兰阴性杆菌中,AmpC酶和ESBLs产生情况已相当严重,应重视对其的检测;产酶菌与非产酶菌对抗生素的耐药性有明显区别;临床用药以碳青霉烯类如美洛培南(MEM)为首选.
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肺炎克雷伯菌产ESBL和AmpC酶菌株基因分型
随着抗生索在临床应用的不断增多,革兰阴性杆菌引起的多重耐药问题已成为全球关注的焦点,其中尤以β内酰胺类抗生素耐药为主~([1]).我国是世界上滥用抗生素为严重的国家之一,耐药菌引起的医院感染人数,已占到住院感染患者总人数的30%左右~([2]).
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质粒介导KPC-2型碳青霉烯酶弗劳地柠檬酸盐杆菌的研究
碳青霉烯类抗生素对革兰阴性杆菌具有强大的抗菌活性,是治疗由多重耐药革兰阴性杆菌导致的医院感染的有效药物,尤其适用于产超广谱β内酰胺酶(ESBL4)和AmpC酶的肠杆菌科细菌引起的严重感染.随着碳青霉烯类抗生素在临床上使用增加,革兰阴性杆菌临床株对该类药物的耐药性不断增加,特别是非发酵菌的耐药率升高明显,但在肠杆菌科细菌中少见.
