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淋病奈瑟菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与gyrA和ParC基因突变关系的研究
目的 探讨江苏省淋球菌对氟喹诺酮的耐药状况、耐药基因突变型的分布情况及二者之间的关系.方法 采用琼脂稀释法检测淋球菌氟喹诺酮类药物(环丙沙星、左氧氟沙星)的小抑菌浓度(MIC),采用PCR法扩增含有喹诺酮耐药决定区的gyrA和parC基因片段,并进行测序分析.结果 根据所测MIC,本研究分离的95株淋球菌对环丙沙星100%的耐药;通过测序分析,在54株淋球菌中检测到gyrA和parC的18种突变形式,parC基因突变点越多,MIC相对也较高.结论 parC基因的突变导致淋球菌对喹诺酮类药物的高水平耐药.
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志贺菌喹诺酮类耐药株gyrA和parC基因突变研究
目的 检测志贺菌对喹诺酮类药的耐药情况,指导临床合理用药:探讨志贺菌喹诺酮类耐药株gyrA和parC基因的突变,分析GyrA和ParC氨基酸改变与喹诺酮类耐药的关系. 方法 2010～2012年从宿州市3家综合性医院收集志贺菌76株,进行分离培养和血清型鉴定;采用K-B纸片法进行药物敏感试验;采用PCR方法检测志贺菌喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关gyrA和parC基因1,并挑选部分PCR产物进行DNA测序分析. 结果 收集的76株志贺菌中福氏志贺菌74株(占97.4％),宋内志贺菌2株(占2.6％);药敏结果显示志贺菌耐药情况严重,其中对阿莫西林耐药率高,达100％;对头孢噻肟耐药率低,为6.5％.对gyrA基因的序列分析发现3个导致氨基酸改变的基因点突变:Ser83→Leu,Asp87→Gly及His211→Tyr;对pa rC基因序列分析发现2个导致氨基酸改变的基因点突变:parC Ser80→Ile和Asp197→Asn. 结论 宿州市志贺菌感染仍以福氏志贺菌为优势菌群,且耐药严重,临床治疗志贺菌感染可优先选择头孢噻肟.志贺菌属对喹诺酮类药物产生耐药性与gyrA和parC基因突变有关,GyrA His211→ Tyr和ParCAsp197→Asn氨基酸变异与喹诺酮类耐药的关系需进一步研究.
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神经外科患者感染肺炎克雷伯菌耐药株parC基因变异分析及抗生素合理选用
目的 研究神经外科患者感染肺炎克雷伯菌耐药株parC基因变异情况,分析菌株耐药性,以指导临床治疗的合理用药. 方法 收集2014年3月至2015年1月间神经外科院内感染患者的痰液等标本,作细菌培养后采用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪进行鉴定,采用K-B纸片法检测肺炎克雷伯菌对喹诺酮类抗菌药物耐药性.提取parC基因,电泳鉴定后测序,分析其变异情况. 结果 药敏试验显示,分离株肺炎克雷伯菌对诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、左氧氟沙星、依诺沙星以及环丙沙星的耐药率分别为88.57％、82.86％、60.00％、51.43％、40.00％和32.86％,对加替沙星敏感.PCR扩增肺炎克雷伯菌parC基因片段大小为423 bp.基因测序后与标准株对比,实验株80位氨基酸密码子由AGC突变为ATC,相应氨基酸由丝氨酸突变为异亮氨酸;实验株91位氨基酸密码子由AAT突变为GAT,相应氨基酸由天冬酰胺突变为天冬氨酸. 结论 肺炎克雷伯菌的耐药性产生与其parC基因位点突变有关.神经外科患者感染肺炎克雷伯菌的药物治疗应首选加替沙星.
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呼吸道感染患者肺炎克雷伯菌gyrA基因和parC基因突变情况及其耐药机制分析
目的 通过药敏试验探究肺炎克雷伯菌的耐药情况,分析其gyrA基因和parC基因突变与其耐药性的相关性,进而为呼吸道感染肺炎克雷伯菌的临床治疗提供指导. 方法 从呼吸道感染患者体内分离肺炎克雷伯菌并进行鉴定,然后测定其对各种抗生素的耐药情况,并通过基因测序研究gyrA基因和parC基因的突变情况与其耐药性关系.结果 药敏试验结果显示,肺炎克雷伯菌对诺氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、加雷沙星、加替沙星和莫西沙星的耐药率分别为45.65％、39.13％、30.43、27.17％、i3.30％、14.13％和10.87％.通过PCR方法成功地对gyrA和parC基因进行了扩增,并从电泳图得出gyrA基因分子量大小为449 bp、parC基因分子量大小为319 bp.通过基因测序比对发现,gyrA基因的83位、87位和parC基因的80位、91位都有不同类型的突变,这些突变与肺炎克雷伯菌的耐药性密切相关. 结论 gyrA基因和parC基因突变与肺炎克雷伯菌的耐药性密切相关,但是若要彻底解决其耐药性问题,应从源头卜控制抗生素的合理选用,从而更好地指导呼吸道感染的临床治疗.
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骨科患者感染大肠埃希菌parC基因突变与耐药性研究
目的 分析骨科患者感染大肠埃希菌的耐药性及其parC基因突变情况,了解其耐药机制,为临床合理选用抗生素提供参考. 方法 分离骨科患者感染大肠埃希菌,采用琼脂平板稀释法进行耐药性测定;采用煮沸法提取细菌DNA,对parC基因进行PCR扩增及测序分析. 结果 采用K-B法测定60株大肠埃希菌临床分离株对环丙沙星、头孢噻肟、加替沙星、头孢他啶、四环素、阿米卡星的耐药率分别为76.67％、71.67％、65.00％、60.00％、15.00％和5.00％.PCR扩增大肠埃希菌parC基因,大小为524 bp;测序显示,耐药株大肠埃希菌parC基因的80位TCG突变为TTG,84位GAG突变为AAG. 结论 骨科患者感染大肠埃希菌对常用抗生素普遍耐药,parC基因的突变与大肠埃希菌的耐药性有关.四环素和阿米卡星可作为治疗骨科患者大肠埃希菌感染的首选药物.
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产气肠杆菌中发现碳青霉烯酶KPC-2型
肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae Carbapenemase,KPC),属A类β-内酰胺酶.2010年3月25日我们从一家三等甲等医院老年患者的痰液中分离到1株碳青霉烯类耐药的产气肠杆菌(标本编号:20100323BAA049,经gyrA和parC基因扩增与测序,GenBank比对确认).为了解该菌株的β-内酰胺类耐药机制,我们采用E-test法检测了该菌对26种抗菌药物敏感性,并进行了A类、B类、C类、D类等4类41种β-内酰胺酶基因检测,用改良的三维试验法检测AmpC酶、ESBLs和金属β-内酰胺酶活性,用改良Hodge试验法检测碳青霉烯酶活性.
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鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药机制分析
目的 探讨鲍曼不动杆菌((Acinetobacter baumanii,Ab)对喹诺酮类药物的耐药机制.方法 收集2007年11月至2008年10月全国多省市21家医院院内下呼吸道感染住院患者痰标本2698份进行培养鉴定,对Ab分离株进行药敏检测,采用聚合酶链反应对Ab的不同耐药基因进行扩增,并进行序列分析.结果 2698份痰标本共计培养出39株Ab.对环丙沙星耐药率为61.54%,对左氧氟沙星耐药率为53.85%.39株Ab中有30株(76.92%)发生ParC 基因突变,19株( 48.72%)发生gyrA基因突变,15株同时发生ParC基因和gyrA基因突变.结论 Ab对喹诺酮类药物耐药机制主要与gyrA、parC基因突变有关.
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gyrA、parC及mdfA基因测序鉴定肺炎克雷伯菌
目的 探讨gyrA、parC和mdfA基因测序鉴定临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌的必要性.方法 采用gyrA、parC和mdfA基因测序方法对经法国生物梅里埃公司API 20 E系统(API LAB plus)和MicroScan WalkAway 96 Plus全自动细菌鉴定系统鉴定为克雷伯菌属或产气肠杆菌的19株临床分离株进行分子鉴定.结果 19株菌gyrA、parC、mdfA基因PCR扩增均阳性,基因序列经GenBank中的BLASTn程序进行同源性比较分析,表明与2株完成全基因组测序的肺炎克雷伯菌肺炎亚种NTUH-K2044(Accession:AP006725.1)和MGH 78578(Accession:CP000647.1)为接近,均为99.0％同源,证实19株均为肺炎克雷伯菌.结论 采用gyrA、parC和mdfA基因测序鉴定肺炎克雷伯菌结果准确.
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耐环丙沙星鲍氏不动杆菌的gyrA基因及parC基因突变分析
目的研究本地区临床分离鲍氏不动杆菌环丙沙星耐药表型与DNA旋转酶A亚单位gyrA基因及拓扑异构酶ⅣparC基因突变的关系.方法收集28株耐药株及2株敏感株,通过PCR扩增其gyrA基因及parC基因,并对扩增产物进行限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)及DNA序列分析.结果敏感株的gyrA基因产物经Hinf Ⅰ酶切后可产生两个片段,耐药株则产生1个片段;而parC基因产物经Hinf Ⅰ酶切后,敏感株及耐药株均产生两个片段;DNA测序显示,5株耐药株gyrA基因存在Ser83→Leu及Ala88→Thr突变,其中Ser83→Leu的突变是导致HinfI酶切位点消失的原因,而1株敏感株无突变;1株敏感株与1株耐药株的pcrC基因存在Ser108→Ile突变,另外14株耐药株存在多位点同义突变.结论与parC基因相比,gyrA基因突变是鲍氏不动杆菌对环丙沙星耐药的主要分子基础,环丙沙星的高水平耐药可能需要多种不同的突变.
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肺炎克雷伯杆菌对氟喹诺酮耐药的机制研究
目的 研究肺炎克雷伯杆菌对氟喹诺酮类药物(FQNs)的耐药机制.方法 筛选临床分离的对环丙沙星耐药的肺炎克雷伯杆菌共10株,采用微量肉汤稀释法检测菌株对5种氟喹诺酮类药物的MIC值；采用PCR方法检测菌株染色体和质粒携带的喹诺酮耐药基因(gyrA基因、parC基因和qnr基因)并测序；质粒接合试验验证qnr基因的转移性.结果 10株肺炎克雷伯杆菌对5种氟喹诺酮类药物均产生耐药性.扩增产物经测序发现10株肺炎克雷伯杆菌染色体的gyrA基因和parC基因均有突变；有2株菌株(K79和K107)携带qnrA基因,这2株菌的接合菌对喹诺酮抗菌药的MIC值上升了5～30倍；未检测到qnrB阳性的菌株.结论 gyrA和parC基因突变是肺炎克雷菌对氟喹诺酮类产生耐药机制的主要原因,质粒上qnrA基因的存在,也是产生喹诺酮耐药的一个重要因素.
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肺炎克雷伯菌gyrA基因与parC基因的突变研究
目的 探讨肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的药物敏感性,及对喹诺酮敏感和耐药菌株中gyrA与parC基因的突变情况.方法 收集肺炎克雷伯菌临床分离株231株,采用K-B纸片法测定肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的敏感性,随机选取对环丙沙星和左氧氟沙星均耐药菌株4株和均敏感的菌株3株,分别PCR扩增gyrA基因和parC基因的耐药决定区,扩增片段长度分别为625、319 bp,PCR扩增产物经纯化后测序并做序列分析.结果 肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为51.1%(118/231)和45.9%(106/231);gyrA和parC基因经序列分析显示,耐药株均有gyrA基因的突变,其中1株出现第83、87和27位氨基酸的改变,2株出现第83位氨基酸的改变,1株出现第47位点的改变;环丙沙星敏感株中未出现gyrA基因的突变.4株耐药株均有parC基因的突变,引起相应氨基酸Ser80 →Arg的改变,2株环丙沙星敏感株也发生了同样的改变.结论 哈尔滨地区肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药性显著,在喹诺酮耐药株中有gyrA和parC基因的同时突变,在敏感株中也发现了parC基因的突变.
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淋病奈瑟菌GyrA基因及ParC基因突变与耐喹诺酮类药物的关系
目的:探讨淋病奈瑟菌DNA回旋酶A亚单位GyrA基因及拓扑异构酶ⅣC亚单位ParC基因突变与耐喹诺酮类药物之间的关系.方法:采用DNA序列测定法对20株无锡地区淋病奈瑟菌临床分离株的GyrA及ParC基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关序列进行测序分析,并利用琼脂扩散法检测了该20株淋病奈瑟菌临床分离株对诺氟沙星药物的敏感性.结果:20株被检淋病奈瑟菌菌株在GyrA基因的两个常见突变位点之一的Ser91处均未发生突变,却在另一位点Asp95处则均有突变;而19株被检淋病奈瑟菌菌株中有16株发生了ParC基因的86、87、88、91位点突变.结论:GyrA基因的Asp95位点突变与ParC基因的Asp86、Ser87、Ser88和Glu91位点突变共同参与了淋病奈瑟菌对喹诺酮类药物产生的耐药.
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耐氟喹诺酮类铜绿假单胞菌gyrA及parC基因突变研究
目的研究临床分离的耐氟喹诺酮类铜绿假单胞菌gyrA及parC基因突变情况.方法测定临床分离的55株铜绿假单胞菌MIC值,从中筛选出1株敏感菌和8株耐药菌,以标准敏感菌株ATCC27853作为质控菌株.用聚合酶链反应(PCR)扩增gyrA及parC基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR),扩增产物片段长度分别为351bp、397bp.用限制性内切酶SacⅡ消化gyrA PCR产物,同时对上述10株菌的gyrA及parC基因的喹诺酮决定区(QRDR)进行PCR-DNA直接测序分析.结果有8株耐菌株的gyrA基因在83位(ACC→ATC)有突变,导致氨基酸Thr→Ile的改变;有3株高度耐药菌gyrA基因同时在87位(GAC→GGC)有突变,导致氨基酸Asp→Gly的改变;有4株耐药菌株的parC基因在87位有TCG→TTG突变,导致氨基酸由Ser→Leu的改变.同时具gyrA和parC突变MIC值是仅具gyrA突变菌株MIC值的2～16倍.未发现parC突变单独存在.另外,有6株耐药菌gyrA的132位有CAC→CAT的突变;所有耐药菌株parC基因115位有GCT→GCG的突变,该突变未引起氨基酸的改变.结论 gyrA83、87位突变及parC基因87位突变都可引起铜绿假单胞菌对氟喹诺酮类药物产生耐药,但以gyrA基因83位突变为主,合并gyrA基因87位及parC基因87位突变可增加耐药程度.
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嗜麦芽窄食单胞菌对氟喹诺酮类抗菌药的耐药机制研究
目的 探讨嗜麦芽窄食单胞菌的DNA解旋酶和拓扑异构酶Ⅳ与氟喹诺酮类抗菌药物的耐药关系.方法选择氟喹诺酮类抗菌药物耐药且主动外排表型机制阴性的临床分离菌株19株和氟喹诺酮类抗菌药物敏感株10株,对其gyrA和parC的喹诺酮决定区域的基因进行PCR扩增,扩增产物进行测序,BLAST比对分析其氨基酸序列.采用SPSS软件进行统计学分析.结果19株耐药菌的gyrA和parC基因各有7株菌核苷酸发生了碱基替换改变但均为同义突变,有2株菌在gyrA基因中124位氨基酸发生了突变由谷氨酸变为天冬氨酸(GAA→GAC),在氟喹诺酮类抗菌药物敏感组中也同样有1株发生同样的突变,两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论嗜麦芽窄食单胞菌对氟喹诺酮类抗菌药物耐药与主动外排泵、外膜的通透性降低有关,但与解旋酶和拓谱异构酶Ⅳ的靶位点改变无显著关系.
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淋球菌氟喹诺酮耐药性的分子机制探讨
目的:探讨GyrA、ParC基因变异与淋球菌氟喹诺酮耐药性的相关关系.方法:首先对78株淋球菌临床分离株环丙沙星低抑菌浓度(MIC)进行检测和GyrA、ParC基因进行PCR扩增,然后分别将2株敏感菌、2株中介菌和8株耐药菌的GyrA、ParC基因进行DNA序列测定.结果:所有78株淋球菌均扩增出GyrA、ParC基因;2株敏感菌和1株中介菌的GyrA、ParC基因未发现突变,另外1株中介菌中和8株耐药菌中GyrA、ParC基因发现有一个或多个位点突变.结论:GyrA、ParC基因变异可能是导致淋球菌氟喹诺酮耐药的重要分子机制.
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志贺菌对氟喹诺酮的耐药机制及流行状况研究
目的:研究志贺菌对氟喹诺酮的耐药机制及其流行状况.方法:对氟喹诺酮耐药志贺菌的gyrA基因和parC基因进行扩增、测序,查找突变点;用重复基因外回文序列-聚合酶链式反应(REP-PCR)对志贺菌进行基因分型.结果:两株耐氟喹诺酮的菌株都存在gyrA基因87位Asp(GAC)→Asn(AAC)和177位Gly(GGT)→Ser(AGT)的点突变,一株另有120位Met(ATG)→Leu(CTG)、203位Ile(ATC)→Leu(CTC)、204位Ser(AGC)→Thr(ACC)和205位Ile(ATF)→Leu(CTY)的点突变,另一株还有204位Ser(AGC)→Ile(AAC)的点突变.除87位点突变外,其余突变位点均未见报道.parC基因未发现点突变.REP-PCR基因分型结果提示16株宋内志贺菌有7种指纹图谱,12株福氏志贺菌有两种指纹图谱.结论:两株志贺菌对氟喹诺酮耐药是由gyrA基因点突变所致,耐药表型对突变的类型有一定的预见性,但耐药程度与突变频率的相关性不确定.2004年夏秋季武汉地区散发流行的志贺菌有相同或相似的克隆,血清型单一的宋内志贺菌存在基因多样性,福氏志贺菌中f2a比f4c的遗传多样性高.REP-PCR是一种快捷有效的基因分型法,可用于志贺菌同源性分析及暴发流行时的追根溯源.
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耐环丙沙星鲍曼不动杆菌gyrA和parC突变模式分析
目的 对临床耐环丙沙星的鲍曼不动杆菌进行gyrA和parC基因突变模式的分子流行病学调查.方法 采用E-test法测定环丙沙星对94株临床分离鲍曼不动杆菌的低抑菌浓度(MIC);对鲍曼不动杆菌的gyrA和parC基因进行聚合酶链反应(PCR)-限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析及DNA测序.结果 在94株鲍曼不动杆菌中,只有38株(40.43%)对环丙沙星敏感(MIC≤1mg/L),而对环丙沙星的耐药率接近60%;PCR-RFLP分析结果表明,对环丙沙星耐药的56株菌都发生了gyrA和parC基因突变,且parC基因的突变率(87.50%)略高于gyrA基因(82.14%).结论 鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐药与gyrA和parC基因突变相关,其中parC基因突变的明显增长值得重视.
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淋球菌对氟喹诺酮类药物敏感性及其耐药机制的研究
目的 了解长沙地区淋球菌流行株对氟喹诺酮类药物的耐药现状,探讨淋球菌对氟喹诺酮类药物耐药的分子机制.方法 纸片扩散法检测126株淋球菌对4种氟喹诺酮类药物的敏感性.E-test法定量检测其中63株淋球菌环丙沙星的小抑菌浓度(MIC).对淋球菌喹诺酮类药物作用靶位编码基因gyrA和parC的喹诺酮耐药决定区(QRDR)进行PCR扩增和直接测序分析.结果 淋球菌对氧氟沙星、氟罗沙星、洛美沙星、依诺沙星耐药率分别为70.6%、81.7%、72.2%和82.5%.环丙沙星MIC为0.004～12.0μg/mL,耐药率65.1%.对环丙沙星敏感的菌株gyrA和parC基因均未发生突变,而中介或耐药菌株均出现gyrA突变或同时伴有parC 突变,且所有parC突变均发生在gyrA突变基础上.突变位点包括gyrA上Set91→Tyr,Set91→Phe,Asp95→Gly,Asp95→Ala,Asp95→Ash以及parC上Gly85→Cys、Asp86→Asn、Set87→,Arg、Ser87→Ile、Ser87→Asn、Ser88→Pro、Glu91→Lvs、Glu91→Gly.其中以gyrA Ser91→Phe频率高.结论 长沙地区淋球菌流行株对氟喹诺酮类药物耐药已十分严重.淋球菌对氟喹诺酮类药物耐药与gyrA和parC基因突变密切相关;GyrA Ser91→Phe是形成该耐药性的关键突变.多位点突变具有协同作用,可使耐药性进一步增强.
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gyrA和parC介导的淋病奈瑟菌对环丙沙星耐药机制研究
目的 探讨淋病奈瑟菌对环丙沙星的耐药机制.方法 采用K-B纸片法检测27株淋病奈瑟菌的耐药率,PCR扩增gyrA和parC基因,测序分析DNA序列.结果 27株淋病奈瑟菌对青霉素、四环素以及环丙沙星的耐药率均为100%,而大观霉素和头孢曲松100%敏感;DNA序列分析表明:环丙沙星耐药株均存在gyrA和parC基因的突变,其中gyrA基因的突变位点发生在第91位、95位氨基酸,parC基因的突变发生在第86位、87位、88位和91位氨基酸.结论 淋病奈瑟菌的耐药与gyrA和parC基因突变有关.
