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建立检测产气肠杆菌的TaqMan荧光定量PCR和普通PCR方法
目的 建立敏感、特异的普通聚合酶链反应(PCR)方法和TaqMan荧光定量PCR方法对产气肠杆菌进行快速检测.方法 以产气肠杆菌组氨酸脱氢酶基因(hdc)为靶基因设计引物以及TaqMan FAM探针,建立对产气肠杆菌进行检测的普通PCR方法和TaqMan荧光定量PCR方法,并评价该方法的特异性、灵敏性和稳定性.结果 普通PCR和TaqMan荧光定量PCR方法均能对产气肠杆菌进行特异检测;普通PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为100 copies/μl和1.0×105 cfu/g,TaqMan荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为33copies/μl和1.0×104 cfu/g;TaqMan荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本检测的扩增曲线良好;在稳定性评价试验中,普通PCR方法的重复性良好,TaqMan荧光定量PCR方法对质粒标准品检测Ct值的组内差异为0.15％～0.98％,组间差异为0.55％～1.63％.结论 本研究建立的检测产气肠杆菌的普通PCR方法和TaqMan荧光PCR方法特异性好、灵敏度高,能够用于产气肠杆菌的快速检测.
关键词： 产气肠杆菌 普通PCR TaqMan荧光定量PCR -
产气肠杆菌临床分布及耐药性检测
目的 了解医院感染产气肠杆菌临床分布及耐药情况,为临床用药提供参考.方法 采用临床标本检验和药敏试验方法,对某医院2013年住院患者送检标本进行病原菌检测和药敏试验.结果 从患者送检标本中分离到产气肠杆菌111例,主要分布于神经外科、肝胆外科和重症医学科的痰液和胆汁中.临床分离的产气肠杆菌对头孢西丁和头孢唑啉几乎100％耐药,对第四代头孢类比较敏感;对氨曲南产生耐药,但对亚胺培南和美罗培南等碳青霉烯类均比较敏感.结论 该医院分离的产气肠杆菌耐药现象日益严重,对高危病区应完善和落实各项预防措施,严格无菌操作,加强对易感患者的监测.
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海南分离出一株产新德里金属β-内酰胺酶-1基因的产气肠杆菌
目的 分离与鉴定海南地区临床发现的耐碳青酶烯类药物的产气肠杆菌是否携带新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-beta-lactamas-1,NDM-1)基因.方法 用法国梅里埃API 20E生化鉴定条和VITEK2全自动细菌鉴定仪及其配套CNS试剂,鉴定出临床耐亚胺培南和美洛培南的产气肠杆菌,并用亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验测定产金属酶类碳青霉烯酶;然后,对目的菌株进行NDM-1耐药基因聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)特异性扩增后,将扩增产物行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定及BLAST比对,以确定其NDM-1基因.结果 采用亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验,从10株耐亚胺培南或美洛培南的产气肠杆菌中,检出4株金属类碳青霉烯酶表型阳性菌株.对其中4株金属酶表型阳性的产气肠杆菌进行NDM-1基因PCR扩增后,对其产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序分析,确认1株为携带NDM-1的耐药基因菌株.结论 海南发现1株携带blaNDM-1基因的产气肠杆菌.
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产气肠杆菌中发现碳青霉烯酶KPC-2型
肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae Carbapenemase,KPC),属A类β-内酰胺酶.2010年3月25日我们从一家三等甲等医院老年患者的痰液中分离到1株碳青霉烯类耐药的产气肠杆菌(标本编号:20100323BAA049,经gyrA和parC基因扩增与测序,GenBank比对确认).为了解该菌株的β-内酰胺类耐药机制,我们采用E-test法检测了该菌对26种抗菌药物敏感性,并进行了A类、B类、C类、D类等4类41种β-内酰胺酶基因检测,用改良的三维试验法检测AmpC酶、ESBLs和金属β-内酰胺酶活性,用改良Hodge试验法检测碳青霉烯酶活性.
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社区获得性肠杆菌肺炎与普通肺炎的比较
目的通过对社区获得性肠杆菌肺炎与普通肺炎的临床对比研究,探讨社区获得性肠杆菌肺炎新的流行病学变化趋势及其特点.方法10例社区获得性肠杆菌肺炎与20例社区获得性普通肺炎进行配对研究,回顾性分析其临床特点、易患因素、病原学检查特点以及抗生素治疗特点.结果(1)社区获得性肠杆菌肺炎的临床症状、生化检查、胸部X线表现等无特殊性,两组病死率比较差异无显著性.(2)患有基础疾病者易发生社区获得性肠杆菌肺炎.(3)不适合抗生素使用时间的过度延长引起一个复杂的疾病过程,而适合抗生素使用的延迟未引起患者病死率的明显增加.结论(1)对因社区获得性肺炎住ICU的患者,如果具备年老,至少有一种基础疾病存在,有既往住院史,有既往抗菌素使用史等特点,应警惕社区获得性肠杆菌肺炎的可能.(2)对疑诊患者早期病原学检查有助于抗生素的合理的选择.
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超广谱β内酰胺酶的检测及耐药性
研究产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)细菌的检测及耐药性,对指导临床用药方面具有重要的意义.我们重点比较了3种ESBLs的检测方法,分析了37株产ESBLs细菌的耐药性,报告如下.一、材料和方法1.菌株:系 2000年1月～2001年6月,从门诊和住院患者的尿、痰、脓等标本中分离.大肠埃希菌232株;肺炎克雷伯菌 58株,产酸克雷伯菌38株;阴沟肠杆菌 21株,产气肠杆菌 12株,板崎肠杆菌和聚团肠杆菌各1株.质控菌株:大肠埃希菌 ATCC25922(阴性对照),肺炎克雷伯菌 GY2000(阳性对照),均由杭州天和微生物试剂有限公司提供.
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产气肠杆菌新德里金属β-内酰胺酶质粒分子特征分析
目的：分析产气肠杆菌携带 blaN DM‐1质粒的转移性、质粒复制子分型及 blaN DM‐1的基因环境。方法产气肠杆菌 HN‐NDM0711为研究对象，接合实验鉴定质粒转移性，PCR方法对质粒复制子分型，染色体步移技术对blaNDM‐1上下游测序，基因组序列比对使用BLASTN和BLASTP ，注释使用Vector NTI 11．5．1。结果产气肠杆菌 HN‐NDM0711接合实验阳性，质粒复制子为IncA／C型；blaNDM‐1位于不常见的插入序列ISAba14和IS91之间；在blaNDM‐1上游出现一个Tn3转座子和I型整合子，整合子上含有一个由庞大镶嵌序列构成的罕见耐药基因盒。结论 IncA／C型质粒pHN‐NDM0711携带blaNDM‐1及耐药基因盒来源于不同抗菌药物选择压力环境下的基因重组。只有严格控制临床、工业和农业抗菌药物的合理使用才能从源头上减少此类细菌的产生。
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2008-2010年产气肠杆菌分布特征与耐药性分析
目的 分析2008-2010年产气肠杆菌分离株的临床分布及耐药性特点,为临床医师诊断和治疗提供依据.方法 对2008-2010年住院患者各类标本分离到的产气肠杆菌,进行标本分布和耐药性回顾性统计分析.结果 3年内共分离出产气肠杆菌570株,主要来源于痰334株,占58.6％、尿液121株,占21.2％和血液32株,占5.6％,主要分布在呼吸内科220株,占38.6％、ICU174株,占30.5％和神经外科42株,占7.4％；药敏结果显示,对氨苄西林、头孢噻肟、头孢西丁、头孢唑林、头孢呋辛酯及头孢呋辛钠耐药率均＞50.0％,对阿米卡星、庆大霉素、亚胺培南和美罗培南有较好的敏感性.结论 产气肠杆菌多为多药耐药,临床医师应根据药敏结果合理选择抗菌药物,以延缓产气肠杆菌耐药性的产生.
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产气肠杆菌的临床分布及耐药性分析
目的 了解医院感染产气肠杆菌在临床的分布及其耐药现状,为临床合理使用抗菌药物提供依据.方法 对近3年临床分离的138株产气肠杆菌,用K-B法检测对16种抗菌药物的耐药性,用三维试验检测AmpC酶和ESBLs.结果 菌株分离多的临床科室是ICU、烧伤科、呼吸内科、泌尿外科和肝胆外科；检出率高的标本是痰液、咽拭子、血液和创面；产气肠杆菌对青霉素类和三代头孢菌素的耐药率74.6％～99.3％,四代头孢菌素的耐药率也高达53.6％,未发现对亚胺培南和美罗培南耐药株,头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦耐药率仅为8.0％和25.4％;此外,喹诺酮类药物药耐率较低,为2.9％～5.1％,氨基糖苷类药物在17.4％～48.6％,磺胺甲恶唑/甲氧苄啶的耐药率为74.6％；三维试验产ESBLs菌和产AmpC的检出率分别为22.5％和29.7％,有13株菌同时产ESBLs和AmpC酶.结论 产气肠杆菌已成为医院感染重要病原菌之一,且耐药率日趋严重,对高危病区应完善和落实各项预防措施,严格无菌操作,加强对易感患者的监测.
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产气肠杆菌中首次发现碳青霉烯酶KPC-2型
目的 调查1株耐碳青霉烯类产气肠杆菌中β-内酰胺酶基因的存在情况.方法 收集1株耐碳青霉烯类产气肠杆菌,先用改良三维试验检测β-内酰胺酶活性,用改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶表型,再用聚合酶链反应(PCR)的方法分析A、B、C、D4类40种β-内酰胺酶基因.结果 改良三维试验和改良Hodge试验分别检出耐碳青霉烯类产气肠杆菌的β-内酰胺酶活性,β-内酰胺酶基因检出KPC-2型(GenBank登录号:JF434018)和TEM-1型,其他基因均未检出.结论 该株产气肠杆菌耐碳青霉烯类药物与细菌产这2种β-内酰胺基因相关,在产气肠杆菌中查出KPC-2型基因为国内外首次.
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产碳青霉烯酶产气肠杆菌的ERIC-PCR图谱分析
目的 了解医院临床产碳青霉烯酶产气肠杆菌感染流行情况,为医院感染控制提供帮助.方法 对医院检验科微生物实验室在2009年6月-2010年3月临床分离出的16株产碳青霉烯酶产气肠杆菌及1株非产碳青霉烯酶产气肠杆菌,用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行基因分型.结果 17株菌株分为两个克隆型,其中16株产碳青霉烯酶产气肠杆菌为同一型,而另1株非产酶菌株为另一型.结论 医院存在产碳青霉烯酶产气肠杆菌克隆传播现象,医护人员应予以高度关注,并及时采取有效措施.
关键词： 碳青霉烯酶 产气肠杆菌 肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应 -
产气肠杆菌氨基糖苷类药物获得性耐药基因研究
目的：研究医院产气肠杆菌临床分离株氨基糖苷类药物获得性耐药机制，了解该细菌对氨基糖苷类药物的耐药性，为临床资料提供参考依据。方法24株产气肠杆菌分离自2012年1月-2012年12月住院患者，采用VITEK-2 Compact分析系统的药敏卡AST-GN13及K-B法测定抗菌药物的敏感性，聚合酶链反应（PCR）检测6种氨基糖苷类修饰酶基因和两种16SrRNA甲基化酶基因。结果24株产气肠杆菌对头孢替坦100．0％耐药，有16株对头孢曲松的耐药率为66．7％，14株对环丙沙星的耐药率为58．3％；PCR检出氨基糖苷类修饰酶基因 aac（3）-Ⅱ1株，阳性率为4．2％，aac（6′）-Ⅰb 6株阳性率为25．0％，其余4种氨基糖苷类修饰酶基因未检出。结论氨基糖苷类修饰酶基因检出阳性率与产气肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药率基本相符。
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2008-2011年产气肠杆菌的临床分布及耐药性分析
目的 分析产气肠杆菌临床分布特点及对常用抗菌药物的耐药性变化,以更好地指导临床的合理使用抗菌药物.方法 采用WHONET5软件统计分析2008年1月-2011年12月临床分离的产气肠杆菌临床分布和耐药率.结果 4年内共分离到产气肠杆菌459株,其中2008-2011年分别检出108、101、130、120株；病原菌主要来源于住院患者的痰液213株占46.4％、胆汁70株占15.3％、血液51株占11.1％、尿液50株占10.9％;4年耐药监测显示,亚胺培南和美罗培南的耐药率在2.0％～7.9％,呈明显的逐年上升趋势；头孢类抗菌药物除头孢唑林耐药率较高约90.0％外,其他如头孢替坦、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟等耐药率由高的55.5％下降至低28.5％,氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦等复合制剂耐药率也由高70.2％下降至低21.1％,同时阿米卡星、庆大霉素等氨基糖苷类等药物的耐药率亦呈下降趋势,高30.4％,低为0,对喹诺酮类的耐药率约30.0％,保持相对稳定.结论 4年产气肠杆菌对头孢菌类、氨基糖苷类、复合制剂等药物的耐药率有所降低,而碳青霉烯类药物的耐药率呈上升趋势,说明细菌耐药性存在动态的变化,及时对细菌耐药性进行分析,依据药敏结果合理选用抗菌药物,严格掌握适应证,可减少或延缓耐药菌株的播散.
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RAPD用于新生儿病房产气肠杆菌分子流行病学研究
目的 建立产气肠杆菌RAPD技术,用于新生儿病房产气肠杆菌分子流行病学研究.方法 在具有10张床位的新生儿病房,于同一时间采自4例同期住院患儿分离出5株产气肠杆菌,做RAPD分析及药敏试验,找出流行相关菌株及分析耐药情况.结果 两株具有相同RAPD指纹图谱的产气肠杆菌是流行相关菌株,分别采自住院第4天和第10天的两例患儿,在新生儿病房内获得;所有菌株不同程度地对氨基苷类、哌拉西林、三代头孢菌素耐药.结论 RAPD技术为产气肠杆菌分子流行病学研究提供了简便、可靠的手段,菌株的耐药情况可能与标本采集之前抗菌药物的应用有关.
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94株产气肠杆菌的临床分布与耐药性分析
目的 了解产气肠杆菌的临床分布及耐药性.方法 用常规方法检出可疑菌落,用法国生物梅里埃公司ID 32E条和ATB G-5条做菌种鉴定与药敏试验；分别用复合纸片表型确认试验和FOX琼脂平板试验检测ESBLs和AmpC酶.结果 临床标本主要来自痰液,占52.1％,其次为中段尿,占16.0％；临床科室中呼吸内科和肝胆外科检出多,分别占43.6％和17.0％；亚胺培南、美罗培南对所有菌株均敏感；头孢吡肟和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率＜16.0％;产气肠杆菌对阿莫西林、头孢噻吩、头孢西丁的耐药率均＞95.0％,对其余β-内酰胺类抗菌药物均有一定程度的耐药,对氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率较低；ESBLs和AmpC酶的检出率分别为16.0％和11.7％.结论 产气肠杆菌临床主要来自痰液标本及呼吸内科；所有菌株均对亚胺培南、美罗培南敏感,对阿莫西林、头孢噻吩、头孢西丁的耐药率高；产ESBLs和AmpC酶菌株已占一定比例.
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应用随机扩增多态性DNA技术分型产气肠杆菌
目的:建立产气肠杆菌(A)随机扩增多态性DNA(APD)技术基因分型谱.方法:以优化的反应体系和单一随机引物对临床分离的108株EA进行RAPD法基因分型并绘制基因分型图谱.结果:08株临床分离EA共得72种RAPD型.结论:APD技术可将临床分离的EA分为72型.
关键词： 产气肠杆菌 随机扩增多态性DNA 基因型 -
综合ICU多重耐药产气肠杆菌流行特点分析
目的 了解笔者医院综合ICU病房多重耐药产气肠杆菌的流行特点.方法 收集笔者医院2014年5月1日～7月30日综合ICU病房内检出产气肠杆菌的患者,统计其相关临床资料,并对检出菌株进行药敏分析.结果 24例患者共检出33株产气肠杆菌,其主要来源为呼吸道标本,占72.7％(24/33).其中多重耐药菌株(multi-drug resistant,MDR)检出32株,占97.0％,广泛耐药(extensive-drug resistant,EDR)菌株检出7株,占21.2％.产气肠杆菌除对替加环素全部敏感外,对喹诺酮类、氨基糖苷类、β内酰胺复合制剂及β-内酰胺类抗生素的耐药率分别达到97.0％、78.8％、93.9％及90.9％.对碳青酶烯类抗生素亚胺培南、厄他培南及美罗培南的耐药率分别达到93.9％、90.9％和100％.结论 多重耐药产气肠杆菌对常用抗生素均具有很高的耐药率,临床工作者应予以重视并采取积极措施降低其耐药率.
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450例下呼吸道感染患者痰菌的临床检验分析
目的 分析下呼吸道感染患者病原性细菌的分布情况.方法 对我院自2010年9月～2011年9月收治的450例下呼吸道感染患者的临床检验资料进行分析,分析病原性细菌的种类及耐药性情况.结果 本组患者中病原菌检测结果450例痰液标本中常见感染菌株为铜绿假单胞菌、耐甲氧西林表皮葡萄球菌及产气肠杆菌.药敏试验结果显示,G+杆菌耐药率十分高,只有复方新诺明呈现部分耐药,其余药物均表现为完全耐药;G-杆菌中氨苄西林、头孢唑林完全耐药,其余药物也呈现不同程度的耐药性;真菌耐药性较低,为部分耐药和敏感.结论 当前临床上耐药菌株较为常见,应加强抗菌药物的合理使用管理、提高临床用药水平,以缓解当前临床多重耐药性的危机.
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住院患者产气肠杆菌的分离情况及耐药性分析
目的：分析产气肠杆菌的分离情况及对各类抗菌药物的耐药状况，为临床合理用药提供参考依据。方法通过全自动细菌鉴定仪对2013年1月至2014年12月住院患者标本中分离出的143株产气肠杆菌进行细菌培养和药敏试验，并进行统计分析。结果产气肠杆菌菌株来源以痰液标本为主占70．6％，患者多来自重症监护病房；药敏结果为阿米卡星、亚胺培南、美罗培南对产气肠杆菌的耐药率低，左氧氟沙星、环丙沙星、庆大霉素、头孢吡肟的耐药率较低为10．0％以下，而对氨苄西林、阿莫西林／棒酸、氨苄西林／舒巴坦、头孢唑林耐药率均为100％。结论产气肠杆菌引起的临床感染呈上升趋势，临床医生经验治疗应首选氨基糖苷类、碳青霉烯类、喹诺酮类抗生素，好根据药敏结果对不同患者进行有效的药物治疗。
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产气肠杆菌引起爆发感染的调查分析
目的:分析我院呼吸科病房产气肠杆菌爆发感染的原因.方法:对我院呼吸科病房患者作支气管镜检查时采集的支气管灌洗液(BALF)用细菌鉴定仪进行鉴定,分析药敏结果.结果:患者采集的支气管灌洗液(BALF)均培养出产气肠杆菌,产气肠杆菌对90%以上的抗菌药物耐药.对环境标本检测时,消毒液和支气管镜经检测均为阳性.结论:支气管镜消毒不合格导致本组患者医院感染.应加强医务人员对医院感行染的认识,严格执行无菌技术,减少侵袭性操作对于控制医院感染的发生至关重要.
