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枸橼酸杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药机制
枸橼酸杆菌(Citrobacter)是一种条件致病菌,近年来在临床上造成的感染越来越多,随之而来的是枸橼酸杆菌对常用抗生素(如β-内酰胺类、氨基糖甙类和喹诺酮类等药物)的耐药性日益突出.枸橼酸杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药机制主要是产生特异性的β-内酰胺酶,而且不同种枸橼酸杆菌对抗生素的敏感性不同.因此,了解枸橼酸杆菌的耐药机制及进展,对预防和治疗由该属细菌引起的感染以及控制耐药性的蔓延有重要意义.
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儿科耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌携带β-内酰胺酶基因的调查
目的 调查温州医科大学附属第二医院儿科耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant enterobacteriaceae,CRE)携带β-内酰胺酶基因的情况,同时分析细菌的药物敏感性,指导临床合理使用抗菌药物.方法 采用全自动微生物鉴定系统对菌株进行鉴定和药敏;用改良Hodge试验进行产碳青霉烯酶检测;用聚合酶链反应方法扩增β-内酰胺酶基因,包括blaKPC、blaTEM、blaSHV、blaIMP-1、blaIMP-2、blaVIM-1、blaVIM-2、blaCTXM-1、blaCTXM-2、blaCTXM-9和blaNDM-1.结果 2011年1月至2012年12月该院儿科共分离到13株CRE.对常用的β-内酰胺类抗菌药物及其酶抑制剂均耐药,对复方新诺明耐药率达100％,对阿米卡星的耐药率低,为7.69％,其次为妥布霉素为15.38％.所有菌株均检测到blaTEM,blaKPC的检出率达84.62％,blaSHV、blaCTXM-1、blaCTXM-9和blaVIM-1的检出率分别为46.15％、46.15％、15.38％和7.69％.结论 温州医科大学附属第二医院儿科CRE菌株主要携带的β-内酰胺酶基因为blaTEM、blaKPC和blaSHV,产KPC型碳青霉烯酶是儿科CRE对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因;该类细菌均表现为多重耐药,阿米卡星可作为该类细菌引起感染的首选药物.
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尿液标本中大肠埃希菌的耐药性分析及其产超广谱β-内酰胺酶监测
目的:研讨大肠埃希菌在尿液标本中的耐药性并分析其产超广谱β-内酰胺酶的监测情况,从而指导临床科学合理的用药.方法:选取自2017年8月至2018年8月于本院检验科检测的泌尿系统感染的患者324例,对上述患者的尿液标本中存在的174例大肠埃希菌的耐药性及其超广谱β-内酰胺酶(全称:Extended Spectrum Beta-Lactamases,简称:ESB Ls)进行监测.结果:产ESB Ls的大肠埃希菌有83株,占总例数的47.4％,其中大肠埃希菌对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因和头孢替坦的耐药率低,分别为2.1％、3.1％、3.1％和8.2％,可在泌尿系统感染的治疗过程中优先考虑.比较产ESBLs菌株和非产ESBLs菌株对头孢唑林、环丙沙星、庆大霉素以及头孢他啶等抗菌药的耐药率可知,非产ESBLs菌株的耐药性显著低于产ESB Ls.结论:临床上对尿路感染的患者进行治疗时,应当检测其ESB Ls,并根据药敏实验选择科学合理的用药.
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呼吸道标本中流感嗜血杆菌的感染及耐药情况分析
目的:了解呼吸道标本中流感嗜血杆菌的感染及耐药情况,为临床合理用药提供指导.方法 对我院2012年1月至12月各科送检标本,严格按照《全国临床检验操作规程》进行菌株的分离培养鉴定,采用Nitrocefin纸片法进行β-内酰胺酶试验,检测其对12种抗菌药物的敏感情况,依据2012 CLSI标准判读结果.结果 从2044株呼吸道标本中分离出92株流感嗜血杆菌,检出率为4.5％,其中β-内酰胺酶阳性率为21.5％.该菌对头孢噻肟、左旋氧氟沙星的耐药性均非常低,分别为1.1％和2.2％,对头孢他啶和美罗培南均未呈现耐药菌株.结论 流感嗜血杆菌对多种抗生素呈现不同程度的耐药性,产β-内酰胺酶阳性率低于全国平均水平,应当继续加强病原菌的检测,根据药敏结果合理用药.
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β-内酰胺酶广谱特异性抗体制备及免疫分析方法建立
目的 制备能够识别多种β-内酰胺酶结构的广谱特异性抗体,并初步建立用于检测牛奶中违法添加β-内酰胺酶的间接竞争酶联免疫分析方法(ELISA).方法 以混合β-内酰胺酶作为全抗原,免疫动物获得β-内酰胺酶广谱特异性多克隆抗体,分离纯化后进行详细表征,确定佳使用条件,并开发适用于牛奶样品中β-内酰胺酶检测的免疫分析方法.结果 获得了能够识别多种β-内酰胺酶的多克隆抗体,血清中抗体浓度达到17.9-18.9mg/ml,抗体重链和轻链分子量分别为55和25kD,总分子量为160kD,亲和常数为3.6×108 L/mol,以该抗体为基础建立了检测β-内酰胺酶的间接竞争ELISA法,方法检出限为0.2ng/ml,线性范围0.2-200ng/ml,平均回收率在80％～115％之间,相对标准偏差小于20％.结论 获得了β-内酰胺酶多克隆抗体,并建立了间接竞争ELISA方法测定牛奶中β-内酰胺酶含量.
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346株流感嗜血杆菌分离及耐药性分析
目的了解广州地区儿童鼻咽部流感嗜血杆菌(Hi)的耐药情况,有效指导临床合理用药.方法用鼻咽拭子采集我院呼吸科门诊及住院急性上呼吸道感染患儿鼻咽分泌物,应用Hi选择培养基进行分离培养;用K-B法和Etest法检测Hi对9种抗生素的耐药性;头孢硝基噻酚显色反应法检测β-内酰胺酶.结果 1714份标本分离出346株Hi,分离率为20.2%,其中44株Hi β-内酰胺酶阳性,产酶率为12.7%.346株Hi对阿莫西林/克拉维酸、头孢呋辛、头孢曲松全部敏感、仅1株对头孢克洛耐药,对氨苄西林、氯霉素、四环素的耐药率分别为14.2%、11.7%、5.1%,复方新诺明的耐药率较高达到51.4%.阿奇霉素的耐药率较低,检测的171株Hi仅1株对阿奇霉素耐药.结论广州地区儿童鼻咽部Hi对氨苄西林的耐药性不太严重,但出现对氨苄西林、氯霉素、四环素、复方新诺明的多重耐药性,临床治疗Hi感染应以β-内酰胺类抗生素为首选药.
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产粘质凝固酶阴性葡萄球菌的耐药性
目的了解医院内感染标本产粘质凝固酶阴性葡萄球菌(PSCNS)的耐药状况.方法用刚果红琼脂法检测CNS产生的粘质,药敏试验采用K-B纸片扩散法和Vitek微生物自动分析仪检测MIC,按NCCIS规定的标准进行.结果58株PSCNS β-内酰胺酶产生率为91.4%.产粘质的表皮葡萄球菌占PSCNS的72.4%;对苯唑西林耐药率为53.4%,对奈替米星和万古霉素全部敏感;对青霉素全部耐药,对磷霉素和庆大霉素的耐药率分别为12.1%和24.1%.结论表皮葡萄球菌产粘质的能力强,粘质的产生与产酶及耐药性密切相关.万古霉素和奈替米星是治疗耐甲氧西林PSCNS感染的首选药物,对重症感染也可根据药敏结果联合应用磷霉素及庆大霉素等有效的抗菌药物.
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β-内酰胺酶测定及耐药性监测
目的研究我院肠杆菌科细菌产β-内酰胺酶及其耐药性分析.方法收集本院2000年8月-2002年7月分离的202株肠杆菌科细菌,用microscan autoscan-4型全自动细菌鉴定分析仪作细菌鉴定和药敏试验,同时用复合纸片法鉴定超广谱B-内酰胺酶(ESBLs),用头孢西丁三维试验法检测AmpC β-内酰胺酶(AmpC-BLA).结果202株肠杆菌科细菌中,高产ESBLs的细菌74株占36.6%,产AmpC-BLA的细菌39株占19.3%;产β-内酰胺酶对18种常用抗菌药物耐药率明显高于非产酶菌株.结论这两种β-内酰胺酶的耐药性非常严重且各具特点,各临床实验室应重视β-内酰胺酶的检测,这对指导临床合理使用抗生素具有十分重要的意义.
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阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药性监测
超广谱β-内酰胺酶是一类对包括第三代头孢菌素及氨曲南在内的β-内酰胺类抗生素具有水解作用的酶[1],由质粒介导的大多数肠杆菌科细菌均可产生ESBLs,常见于大肠埃希氏菌和肺炎克雷白氏菌,亦可见于阴沟肠杆菌,弗劳地枸橼酸杆菌,大多源于TEM-1,TEM-2和SHV-1的突变[2].为了解我院阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药状况,我室对我院临床分离出的169株阴沟肠杆菌进行超广谱β-内酰胺酶的检测并进行药敏分析,现报告如下.
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我国部分地区市售巴氏杀菌乳中β-内酰胺酶含量调查
目的 采用酶热生物传感器法对我国部分地区巴氏杀菌乳样品中β-内酰胺酶进行快速检测及本底含量调查.方法 在巴氏杀菌乳样品中预先加入一定量青霉素G,室温震荡反应3h,使样品中的β-内酰胺酶充分酶解青霉素G底物,直接通过酶热生物传感器测定青霉素G含量.根据反应前后样品中青霉素G含量的变化,间接计算巴氏杀菌乳样品中β-内酰胺酶的活性.2013年6～8月在13个省市采集巴氏杀菌乳样品106份,对其β-内酰胺酶含量进行本底调查.结果 该方法线性范围为4 ～ 20 U/ml,检出限和定量限分别为2和4 U/ml.全国106份样品的总检出率为3.8％,其中北京市的47份样品中β-内酰胺酶活性均＜2 U/ml;其他12个省市的59份样品中β-内酰胺酶活性均＜4 U/ml,其中4个样品在2～4 U/ml之间.结论 我国13个省市106份巴氏杀菌乳样品的测定结果表明样品中β-内酰胺酶含量普遍较低,一定程度上表明我国巴氏杀菌乳中违法添加β-内酰胺酶的问题已得到较大改善.
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新乡市生乳中菌落总数和金黄色葡萄球菌及β-内酰胺酶调查
目的 了解新乡市规模化奶牛养殖场生乳中菌落总数、金黄色葡萄球菌和卢-内酰胺酶的基线数据,为生乳安全性风险评估及国家标准更新提供资料.方法 以新乡市3家规模化奶牛养殖场(A、B、C场)为观测基地,2016年5月-2017年4月每月采集2家生乳样品各29份和1份混合样品.分别按照GB 4789.2-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》和GB 4789.10-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》测定菌落总数和金黄色葡萄球菌,胶体金法测卢-内酰胺酶残留.结果 3家奶牛养殖场单份样品菌落总数的中位数分别为13 000、4 450、130 000 CFU/ml,明显低于GB 19301-2010《食品安全国家标准生乳》中的限量(2×106 CFU/ml),差异有统计学意义(P＜0.01),3家奶牛养殖场的菌落总数之间差异有统计学意义(P＜0.05).各奶牛养殖场单份样品的菌落总数与混合样品比较,仅B场差异有统计学意义(P＜0.05).7～8月菌落总数较高.3家奶牛养殖场样品中金黄色葡萄球菌检出率分别为1.1％ (4/360)、16.7％(30/180)和0.0％(0/180),计数结果为50 ～ 42 000 CFU/ml.3家奶牛养殖场的所有样品中均检出β-内酰胺酶,检出率为6.1％～10.6％.结论 GB 19301-2010生乳菌落总数限量远高于新乡市实际情况,建议修订标准;个别奶牛养殖场生乳中存在一定程度的金黄色葡萄球菌污染,需加强监管;筛查出的β-内酰胺酶需进一步鉴定其来源,同时要加强对卢-内酰胺酶检测方法的研究.
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金黄色葡萄球菌β-内酰胺酶检测方法的应用比较
目的：比较头孢硝噻吩液体(Cefinase)、头孢硝噻吩纸片(Dryslide)、三叶草实验(Cloverleaf)、青霉素边缘实验(Penicillin disk zone edge)检测金黄色葡萄球菌β-内酰胺酶的敏感性和特异性。方法：分别用 Cefinase，Dryslide， Cloverleaf，Penicillin disk zone edge 检测金黄色葡萄球菌β-内酰胺酶。结果：4种方法敏感度分别为83%、66%、91%、91%。特异度分别为100%、97%、100%、100%。结论：4种方法在检测应用上都能为临床提供可靠的结果，但Cloverleaf和Penicillin disk zone edge检测β-内酰胺酶的试验较敏感，在操作上用头孢硝噻吩纸片法更能被实验室所接受。
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汕头成人下呼吸道感染流感嗜血杆菌的耐药性分析
目的:探讨汕头地区成人下呼吸道感染流感嗜血杆菌(Hi)的耐药现状,为临床治疗提供参考依据.方法:收集成人下呼吸道感染患者中分离的流感嗜血杆菌,集中后经VITEK-2compact系统和Ⅴ+Ⅹ、Ⅴ、Ⅹ因子试验作复检,K-B法测定其药敏结果,以Nitrocefin试剂做β-内酰胺酶测定.结果:144株流感嗜血杆菌中耐药率以氨苄西林、复方新诺明和四环素较高,分别为53.5%、60.4%和20.8%.对阿莫西林/棒酸、头孢呋辛、三代头孢、环丙沙星、左氧氟沙星、和氯霉素耐药率较低2.8%～14.6%,未出现亚胺培南、阿奇霉素耐药株.产β-内酰胺酶62株,产酶率43.1%.结论:本地区流感嗜血杆菌对氨苄西林的耐药率较高,氨苄西林和复方新诺明已不适于本地区成人流感嗜血杆菌感染的经验治疗,临床上应根据本地区耐药监测数据合理选用抗菌药物.
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326株大肠埃希菌临床分离株分布特征及耐药性分析
目的:对2010年分离出的326株大肠埃希菌的临床分布特征和耐药性的情况进行回顾性分析,为临床合理应用抗生素以及院内感染的监测提供参考依据.方法:采用梅里埃公司的VITEK2全自动微生物分析仪对标本进行细菌鉴定和药敏分析.对产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌确证实验,采用美国临床检验室标准化委员会(CLSI)推荐的纸片扩散法,并严格按照其制定的标准进行确证实验.结果:在326株大肠埃希菌中,来自痰液和咽拭子的占60.80%,中段尿占24.28%;在病房中,主要分布在新生儿重症监护室、呼吸科和重症监护室,分别占比率为20.55%、15.33%、14.72%.在这些科室内,来自婴幼儿和严重患者的标本所占的比例较多.在326株大肠埃希菌中,检出产ESBLs的大肠埃希氏菌共有135株,阳性菌株占41.41%.在药敏检测中,大肠埃希菌对亚胺培南(泰能)和美罗培南的敏感率分别是100%和98%,ESBLs的菌株对亚胺培南和美罗培南的敏感率均为97.7%.对其他抗生素的敏感性二者差别不明显.结论:在标本类型分布中,以痰液和咽拭子以及中段尿所占比例高.在病房分布中,以新生儿重症监护室、呼吸科和重症监护室排在前三位.大肠埃希菌以引起婴幼儿和危重患者的呼吸道,泌尿道感染为主,大肠埃希菌的检出率很高,且多重耐药严重,ESBLs阳性的菌株对亚胺培南和美罗培南显示了极高的敏感性.对检测的其他抗生素敏感性和文献报道的有所不同,存在有一定的地域差别,这可能跟不同地区用药习惯不同,造成细菌耐药情况也有所不同.
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2010年深圳市光明地区产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科细菌的监测和耐药性分析
目的:探讨2010年深圳市光明地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的发生率及耐药性分析,为临床合理选择、使用抗菌药物提供可靠依据.方法:对临床分离出的G-杆菌,主要是肠杆菌科细菌在进行药敏试验的同时进行ESBLs的检测,药物敏感性试验多数采用分析仪检测,少数采用纸片扩散法敏感试验(改良K-B法),产ESBLs细菌的检测采用1999年NCCLS建议的确证试验.结果:334株检出91株产ESBLs菌,总检出率27.2%,其中,179株大肠埃希菌检出产ESBLs菌51株,检出率28.5%;104株克雷伯菌检出产ESBLS菌34株,检出率32.7%.两种主要产ESBLs菌的药敏结果,大肠埃希菌对常用10种抗生素的敏感率高低依次为:亚胺培南西司他丁＞哌拉西林/他唑巴坦＞阿米卡星＞头孢西丁＞复方新诺明＞庆大霉素＞环丙沙星＞头孢他啶＞头孢噻吩＞哌拉西林.肺炎克雷伯菌对10种常用抗生素的敏感率依次为:亚胺培南西司他丁＞哌拉西林/他唑巴坦＞复方新诺明＞头孢西丁＞阿米卡星＞头孢他啶＞庆大霉素＞环丙沙星＞头孢噻吩＞哌拉西林.结论:应加强重视对产ESBLs细菌发生率的监测和耐药性分析,对临床合理选择、使用抗生素、防止院内产ESBLs细菌的传播、流行具有重要的临床意义.
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柠檬提取物抑菌及抗病毒作用的研究
目的 研究柠檬提取物抗微生物和保鲜作用.方法 采用纸片法和稀释法对其抑菌效果和抗病毒作用进行了实验室观察.结果 将柠檬提取物原液作1:3200稀释液,对金黄色葡萄球菌标准株抑菌环直径为18 mm;1:10稀释液对大肠埃希菌标准株抑菌环直径20 mm,1:12800稀释液,抑菌环直径11 mm.柠檬提取物1:10稀释液对大肠埃希菌耐药株和克雷伯菌耐药株(产β-内酰胺酶)抑菌环直径分别为30 mm和20 mm,对白假丝酵母菌和啤酒酵母菌抑菌环直径分别为17 mm和14 mm.将1:12800稀释度的柠檬提取物与单纯泡疹病毒混合作用,显示出明显的抗病毒效果.结论 柠檬提取物对细菌及真菌有显著抑制作用,对产β-内酰胺酶菌株也有较强抑制作用;1:12800稀释度的该提取物对单纯疱疹病毒Ⅰ型有明显的抗病毒作用.
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儿童重症监护病房产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性分析
目的 了解宁波地区儿童重症监护病房和新生儿重症监护病房产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药情况,为临床防治感染提供依据.方法 2012年7月-2015年5月收集宁波市妇女儿童医院两类ICU常规分离的大肠埃希菌株,采用全自动微生物鉴定仪进行细菌鉴定;纸片法进行药敏试验;双纸片协同试验检测ESBLs.结果 共检出大肠埃希菌临床分离株102株,标本主要来源于痰液(61.8％);大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率较高(87.3％);其次为头孢菌素类(69.6％ ～71.6％);对磺胺类、喹诺酮类及四环素类均有不同程度的耐药(32.4％～79.4％);对氨基糖苷类及氯霉素类耐药率较低,分别为19.6％和13.7％;未发现碳青霉烯类耐药情况.共检出产ESBLs大肠埃希菌70株,检出率68.6％.产ESBLs菌株对大多数抗菌药物耐药率明显高于非产ESBLs株.新生儿患者非产ESBLs大肠埃希菌检出率较高.结论 在儿童重症监护病房感染中大肠埃希菌耐药较严重,应重视细菌耐药监测,针对性选择敏感抗菌药,降低医院感染发生.
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三种消毒剂对ESBL阳性和阴性大肠杆菌杀灭效果的观察
产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠杆菌是医院内常见耐药菌株,为了解其对常用消毒剂的抗力,采用悬液定量试验对戊二醛、碘伏、含氯消毒剂(921消毒剂)杀灭ESBL阳性和阴性大肠杆菌的效果进行丁比较.结果,用含有效碘500 mg/L碘伏作用3 min对ESBL阴性大肠杆菌杀灭率为99.95%,含3 000 mg/L戊二醛和1:100倍稀释的921消毒剂作用3 mm对ESBL阴性大肠杆菌杀灭率达100%;用同样含量和作用时间,三种消毒剂对ESBL阳性大肠杆菌杀灭率依次分别为82.75%、100%和91.46%;但将作用时间延长至5 mm,上述剂量的三种消毒剂对两种菌杀灭率均可达到100%,对表面擦拭3遍消毒亦得到同样的效果.结果说明,ESBL阳性大肠杆菌对碘伏和含氯消毒剂抗力比ESBL阴性者强;二者对戊二醛抗力基本一致.
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老年人肺炎克雷伯菌耐药性和β-内酰胺酶基因分析
目的 分析老年人肺炎克雷伯菌的耐药谱及其携带的β-内酰胺酶基因.方法 抗菌药物敏感试验采用微量肉汤稀释法测定临床分离的肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药性,采用PCR法检测β-内酰胺酶耐药基因型.结果 20株肺炎克雷伯菌对阿莫西林、替卡西林、哌拉西林、头孢噻吩、头孢他啶、头孢吡肟的耐药率均为100%,复方阿莫西林60%、头孢西丁40%、复方哌拉西林30%.PCR扩增后有19株均发现有产酶基因,阳性率为95%,多的一株有4种基因.基因型主要是TEM型,20株中有19株为TEM型,少数为CTX-M型.结论 肺炎克雷伯菌株大多携带β-内酰胺酶耐药基因,其对β-内酰胺类的高耐药率与TEM型基因有关.
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肺炎克雷伯菌主要耐药机制研究进展
肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)是导致医院内感染的常见病原菌之一,可引起呼吸道、消化道和泌尿系统感染,曾在新生儿病房、泌尿科病房和监护病房暴发流行.多重耐药肺炎克雷伯菌给临床抗生素的治疗带来极大的困难,本文从肺炎克雷伯菌β-内酰胺耐药机制;外膜蛋白的缺失和靶位的改变;生物膜的耐药机制;外排泵机制耐药作用;整合子等五个方面对肺炎克雷伯菌主要耐药机制研究进展进行阐述,通过全面了解肺炎克雷伯菌的主要耐药机制,合理使用抗菌药物,从而有效预防和监测耐药菌的播散.
