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左氧氟沙星无菌检查方法的研究
正常的无菌检查法:取本品适量,按薄膜过滤法过滤,以0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗.以金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003],大肠埃希菌CMCC(B)44102为阳性对照,依法检查(<中国药典>2005年版二部附录XIH),应符合规定.
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柠檬酸镧抑癌作用的实验研究
1979年法国Nancy大学Anghileri等报道了氯化镧、甘氨酸镧和天氡酸镧能抑制淋巴肉瘤和淋巴性白血病的生长.我国纪云晶等[1]在国内首次报道了混合硝酸稀土能抑制小鼠S180肉瘤和Lewis肺癌的生长,其抑制率均超过30%,有的接近40%.陈兴安等[2]报道了腹腔注射柠檬酸镧对小鼠S180肉瘤的抑癌率有的可以达到44.7%,但在实验中没有设置阳性对照.为此,我们在增设了阳性对照的条件下,对柠檬酸镧对小鼠S180肉瘤的抑癌效能再次进行了实验,结果报道如下.
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体外细胞毒性研究中阳性药物苯酚对试验系统的影响
医疗器械生物学评价包括体外细胞毒性实验,根据<国家医疗器械生物学评价国家标准选择苯酚做为医疗器械浸提物的阳性对照[1].在进行一项医疗器械生物学体外细胞毒性评价3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)中发现:相同处理条件下,于供试品浸提液相邻列中加与不加苯酚溶液,其细胞增值情况差别很大.于是进行了苯酚溶液对同一微孔内其他细胞的毒性评价,同时平行进行了水饱和酚和抗肿瘤药物阿糖胞苷(Ara-C)的细胞毒性评价.
关键词: 体外细胞毒性 阳性对照 小鼠成纤维细胞(L929细胞) -
环磷酰胺对大鼠生育力与早期胚胎发育毒性的比较研究
目的 比较不同剂量与给药途径对环磷酰胺致大鼠生育力与早期胚胎发育毒性.方法 雌雄SD大鼠,随机分为4组:环磷酰胺A组、B组(分别皮下注射40和20 mg/kg),环磷酰胺C组(腹腔注射20 mg/kg)和阴性对照组(空白).雄鼠合笼前给药5次(每周1次),雌鼠合笼前给药3次(每周1次),交配成功雌鼠于妊娠期第4天(GD4)再给药1次.雄鼠于交配成功后解剖,雌鼠于GD15解剖,考察精子浓度和活动度,生殖器官脏器重量和系数,胚胎发育指标,性激素水平等.结果 与阴性对照组比较,环磷酰胺A组雌雄大鼠体重,摄食量,子宫和卵巢脏器重量及系数,睾丸和附睾脏器重量,精子数量和活力各项指标,子宫连胎重、着床、活胎、吸收胎、着床前/后丢失数(率)等胚胎发育指标,雄鼠的睾酮和孕鼠的雌二醇水平等均显示明显毒性改变;而B组和C组仅部分指标出现毒性改变,且毒性程度弱于A组.结论 在本试验条件下,皮下注射40 mg/kg环磷酰胺可以得到较全面的明显的亲代雌雄大鼠生殖毒性和早期胚胎发育毒性阳性结果,可以作为阳性对照模型.
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致畸试验阳性对照的选择
一个完整的胚胎-胎仔发育毒性试验(Ⅱ段)实验剂量的设计包括阳性对照组和阴性对照组,设立对照组的目的在于屏蔽干扰因素,使其与试验组的非试验因素保持一致.只有设立了合适的对照,才能平衡非试验因素对试验结果的影响,从而把受试药物的效应充分显露出来,以观察药物带来的毒性效应,排除假阴性或假阳性.
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耐寒食品添加剂的急性毒性和致突变性
目的检测耐寒食品添加剂的急性毒性和致突变性.方法试验所用添加剂为粉剂,用蒸馏水配成混悬液,按<食品安全性毒理学评价程序和方法>进行.(1)小鼠急性经口毒性试验:选用体重为18~22g小鼠20只,雌雄各半,禁食6h后以15g/kg经口灌胃,连续观察7 d.(2)小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验选用体重24~30g小鼠50只,雌雄各半,设1.25、2.50和5.g/kg 3个剂量组,阴性对照组用蒸馏水,阳性对照组用环磷酰胺(CP40mg/kg).采用间隔24h两次灌胃,于末次给药后6 h处死动物,制片,每只鼠计数1000年PCE.(3)小鼠精子畸形试验:选用20~25g雄鼠40只,设1.25、2.50和5.00g/kg 3个剂量组,阴性和阳性对照物同微核试验,连续灌胃5 d,于第1次给药后35 d处死动物,取副睾制片,检查精子形态,计数精子畸形率和畸形分类.结果(1)小鼠给药后未见明显中毒症状,未出现死亡.
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硒和维生素A梭曼诱导大鼠过氧化损伤的影响
自由基诱发脂质过氧化损伤是导致许多病理改变的重要机制之一,而目前尚未检索到有关硒和维生素A抑制So-man的过氧化损伤报道.目的本文主要探讨Soman对大鼠急性中毒的自由基损伤作用及硒、维生素A的抗氧化作用,并进一步探讨硒和维生素A的抗氧化作用机制.方法雄性大鼠60只,按体重随机分为阴性对照水组(正常对照水组W-)、阳性对照水组(损伤对照水组W+)、阴性对照油组(正常对照油组0-)、阳性对照油组(损伤对照油组0+)、硒组(加Se保护组)和维生素A组(加维生素A保护组).每组10只,实验期10 d.测定指标有血清、大脑、肝脏的维生素E(VE)、总抗氧化力(T-AOC)和一氧化氮合成酶(NOS).
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人工蛇胆致突变性研究
目的研究华中科技大学同济医学院药学系专利产品人工蛇胆的突变性.方法按中华人民共和国卫生部药政局1993年7月公布的<新药(西药)临床前研究指导原则>汇编的要求,参照中华人民共和国国家标准GB15670-1995<农药登记毒理学试验方法>,实验菌株为TA97、TA98、TA100和TA102,由美国Ames实验室提供,经6项性状鉴定合格后投入使用,实验动物系昆明种小鼠,由同济医学院医学实验动物中心提供.Ames试验:以敌克松(Dexon)和2-氨基芴(2-AF)为阳性对照物,以蒸馏水为阴性对照物.由于受试物浓度高于100μg/皿,对试验菌株有抑菌作用,故采用浓度系列为100、50、2.5、和0.5 μg/皿.采用标准平板法,在加S9和不加S9及37℃条件下培养48h,观察结果.
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1-22 室内挥发性有机物对小鼠精子畸形的试验
目的通过小鼠精子畸形试验,探讨室内挥发性有机物对生殖能力的影响,为室内挥发性有机物的特殊毒性提供理论基础.方法空气采样,提取空气中有机物,作为剂量组.清洁级昆明种雄性小白鼠随机分成6组:3个剂量组、阴性对照双蒸水组、阳性对照环磷酰胺组、溶剂对照二甲基亚砜组,进行染毒,5周后检查小鼠精子形态,计算畸形率.结果异常精子形态包括无钩、香蕉形、胖头、无定形.环磷酰胺组小鼠精子畸形率为8.30%、二甲基亚砜组为4.81%、1.01mg/m3剂量组为4.91%、10.1 mg/m3剂量组5.14%、101 mg/m3剂量组5.58%,其中,环磷酰胺组小鼠精子畸形率高于其余各组(P<0.05),其余各组间差异无显著性(P>0.05).结论该浓度的室内挥发性有机物对小鼠精子形态无明显影响.
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2-05 小鼠多终点试验检测美他多辛的雌激素样作用
目的美他多辛(metadoxine,MTDX)是一种治疗酒精中毒性肝病的新药,化学名为吡哆素L-2-吡咯烷酮~5-羧酸酯.在毒理学安全性评价中发现该药可引起大鼠精子减少,交配率和受孕率下降.该试验的目的是探讨其雄性生殖毒性机制是否包括雌激素样作用.方法性成熟NIH雌性小鼠,体重20~25g,卵巢摘除后观察1周,剔除去势不全的小鼠.1周后将小鼠随机分成5组,每组10只.分别灌胃给予MTDX 0、640、1 500和4 000 mg/kg及雌二醇0.2 mg/kg(阳性对照),每天1次,连续5 d.每天阴道涂片观察动情周期.第6天处死,观察子宫/体重比、子宫积液、子宫上皮细胞高度和子宫基质细胞层厚度等指标.结果 MTIDX各剂量组小鼠在5 d中均未出现明显的动情周期,未发现子宫水肿和积液,子宫/体重比、子宫上皮细胞高度和基质细胞层厚度与对照组比较,差异均无显著性.结论在本试验条件下,MTDX在小鼠体内不具有雌激素样作用.
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1-16 酪醇对肝癌细胞NQ01的诱导及细胞增殖的抑制
目的研究酪醇使肝癌细胞Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)诱导表达和细胞增殖的抑制以及两者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种后24 h经β-酪醇处理24 h,分别测定酶活性、mRNA表达和细胞增殖情况.NQ01酶活性采用微孔板直接测定法,诱导结果用NQ01比活性(specific activity)=A(NQ01酶活性)/B(细胞数);mRNA水平的变化采用定量RT-PCR;细胞增殖采用结晶紫显色法.结果 NQ01酶活诱导上,酪醇大于60μg/ml时有明显的剂量-效应关系,且每一浓度点(60、70、80、μg/ml)与空白组比较,差异均有显著性(P<0.05),80μg/ml的酪醇与80μnol/L的β-NF(阳性对照)诱导的酶比活性相当;mRNA表达量存在剂量依赖性增加(r=0.824,P<0.05),且与酶比活存在明显的相关性(r=0.951,P<0.01);酪醇在70~100μg/ml范围内,其抑制细胞增殖的能力随着浓度的增加而增加.另外,细胞增殖与酶比活存在负相关(r=-0.410,P<0.01).结论酪醇在培养肝癌细胞SMMC-7721上能使NQ01在酶活性与mRNA表达量诱导性增加,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活性诱导增加有关.
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1-12 盐酸西替利嗪对鼠伤寒沙门氏菌诱变性试验
目的检测盐酸西替利嗪对鼠伤寒沙门氏菌的诱变性.方法用鼠伤寒沙门氏菌诱变性试验标准平皿掺入法,采用TA97、TA98、TA100和TA102组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌,菌株经鉴定合格,在±S9mix条件下测试.盐酸西替利嗪5 000.0μg/皿浓度抑菌,因此,高浓度为1 000.0μg/皿.结果阳性对照敌克松在-S9mix,二氨基芴、1,8-二羟蒽醌在+S9mix条件下,能明显增加测试菌株的回变菌落数,均高于阴性对照的2倍以上,说明测试系统可靠.盐酸西替利嗪0.1、1.0、10.0、100.0和1 000.0μg/皿各浓度对4株测试菌株回变菌落数均未超过阴性对照组2倍.结论盐酸西替利嗪在0.1~1 000.0μg/皿浓度范围内对鼠伤寒沙门氏菌无诱变性.
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1-11 碱性成纤维细胞生长因子的染色体畸变试验
目的检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的致突变性.方法采用CHL细胞染色体畸变试验.bFGF大浓度为CHL细胞50%抑制浓度.在±S9mix条件下,24及48 h收获细胞做染色体畸变分析.结果溶媒、S9mix对照染色体畸变率正常,bFGF 25、50、100、200μg/ml浓度染色体畸变率为1.5%~4.5%(正常<5%).阳性对照丝裂霉素C染色体畸变率显著增高,环磷酰胺无S9mix染色体畸变率正常,有S9mix染色体畸变率显著增高,表明本试验系统可靠.结论在本试验系统条件下,bFGF在25~200 μg/ml浓度范围内未见诱发CHL细胞染色体畸变率增高.
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盐酸特拉唑嗪对仓鼠肺细胞染色体畸变试验
目的检测抗高血压药盐酸特拉唑嗪的致突变性.方法采用中国仓鼠肺(CHL)细胞体外染色体畸变试验.盐酸特拉唑嗪的大浓度为CHL细胞50%抑制浓度,再依次递减共设4个给药浓度.同时设溶剂、S9混合液阴性对照及阳性对照(丝裂霉素C).试验在±S9混合液条件下,于24及48 h,分别收获细胞做染色体畸变分析.每一试验浓度在油镜下分析100个中期分裂相细胞.结果无论是24及48 h收获细胞,溶剂、S9混合液阴性对照染色体畸变率为0~4%(正常CHL细胞染色体畸变率<5%),盐酸特拉唑嗪17.5、35.0、70.0、140.0μg/ml浓度染色体畸变率为0~3%,与阴性对照比较,差异无显著性(P>0.05).阳性对照染色体畸变率显著增高为81%和82%,与溶剂对照比较,差异有显著性(P<0.01).环磷酰胺无S9混合液染色体畸变率在正常范围(0~2)%,有S9混合液染色体畸变率显著增高为73%和84%,与S9混合液对照比较,差异有显著性(P<0.01),表明本试验系统可靠.结论在本试验系统条件下,盐酸特拉唑嗪在17.5~140.0μg/ml浓度范围内未见诱发CHL细胞染色体畸变率增高.
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艾滋病实验室工作探讨
ELISA是指酶联免疫吸附试验,检测HIV抗体时可使用血液、唾液、尿液样品,HIV抗原或抗体包被于固相载体,加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体,加底物显色,用酶标仪测定结果,试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定,经过6年的HIV抗体检测工作,总结体会如下.
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胸腺肽α1体内抗流感病毒作用的实验研究
材料与方法实验材料:①实验药物:胸腺肽α1(Tα1),受试药物,1.5mg/支,试验时用生理盐水分别配成0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.08mg/ml低、中、高三个浓度,分装三个青霉素小瓶中备用.病毒唑(利巴韦林注射液),阳性对照药物,含量为100mg/ml.试验时用生理盐水配成13mg/ml浓度的药液.病毒株为流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1),本实验室保存.在MDCK细胞中的组织半数感染量(TCID50)为10-4.细胞为狗肾细胞(MDCK),本实验室保存.②实验动物:健康昆明小鼠,雌雄各半,3~4周龄,体重18~20g,雌雄分别分组,由实验动物中心提供.
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两种压力蒸汽灭菌化学指示卡监测效果比较
为了选择准确监测压力蒸汽灭菌效果的化学指示卡,在本区一家医院的供应室对国产新华牌压力蒸汽灭菌化学指示卡与3M压力蒸汽灭菌化学指示卡指示结果的准确性进行了比较试验.每次试验时,将两种指示卡与生物指示剂[嗜热脂肪杆菌(ATCC 7953)芽孢]各1份,同时放入1个标准试验包中心,一式3个标准试验包,分别置于灭菌柜室上、中层中央和下层排气口处.试验组设计分别在下排式压力蒸汽灭菌器内进行121℃30 min与121℃10 min的试验,在预真空压力蒸汽灭菌器内进行132℃6 min与132℃2 min的试验,试验重复进行3次.试验后,观察两种指示卡颜色变化情况,生物指示剂(连同阳性对照)经56℃培养48 h后观察结果.
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氯化磷酸三钠对布片上与悬液中细菌的杀灭效果
将氯化磷酸三钠(有效氯含量为3.44%)溶于无菌蒸馏水中制成消毒液.用其对悬液中或染于脱脂布片(10 mm×10 mm)上的金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)作用后(阳性对照以无菌蒸馏水代替消毒液),经中和剂(含0.2%卵磷脂、2.0%吐温80和0.3%硫代硫酸钠的溶液)中和残余消毒剂.随后作活菌计数,计算杀灭率.
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高氧化还原电位酸性水贮存稳定性的试验观察
为观察由ST-6A型强氧化离子水生成器(北京水都商贸有限责任公司提供)生成的高氧化还原电位酸性水(亦称强氧化离子水,氧化还原电位为1 134 mV,pH 2.41,含有效氯20 mg/L)的贮存稳定性,将其盛于密封的医用方盘内,置室温下避光保存24 h.于保存前、后,分别取样,检测对枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞的杀灭效果.检测时,将含10 g/L蛋白胨的芽胞悬液0.1 ml与5.0 ml该酸性水原液(阳性对照为磷酸盐缓冲液)混匀.作用至规定时间,取0.5 ml菌药混合液,加入4.5 ml中和剂(为含1 000 mg/L硫代硫酸钠与1 000 mg/L卵磷脂的磷酸盐缓冲液)中,混匀.中和作用10 min,作活菌计数,计算杀灭率. 结果,该酸性水原液存放前对枯草杆菌
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臭氧水溶液杀菌效果的试验观察
向臭氧水发生器注入自来水,通电5min,可产生水温24~26℃、含臭氧3.0~5.0 mg/L的臭氧水溶液。将其稀释为含臭氧0.4 mg/L的溶液用于试验。试验时,将大肠杆菌(8099)和含1%蛋白胨的金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)悬液0.5 ml与消毒液(阳性对照为磷酸盐缓冲液)4.5 ml混匀。作用至预定时间,取0.5 ml菌药混合液,加入4.5 ml中和剂(含0.5%硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲液)中,混匀。中和作用10 min,作活菌计数,计算杀灭率。