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抗氧化剂和低氧诱导醌氧化还原酶1基因的表达及其机制
目的探讨低氧和抗氧化剂诱导醌氧化还原酶1(NQO1)基因表达及其与细胞增殖的关系和诱导表达的调节机制.方法人肝癌细胞SMMC-7721经抗氧化剂[酪醇(p-Ty),丁基羟茴香醚(BHA),β-萘黄酮(β-NF)]、低氧或两者共同处理24 h,分别采用微孔板测定法、RT-PCR、结晶紫显色法、电泳迁移率变动试验(EMSA)测定MQO1活力,NQO1mRNA表达,细胞增殖和细胞核蛋白与抗氧化反应元件(ARE)的结合情况.结果常氧下BHA,β-NF和p-Ty均能诱导NQO1比活力增加,酪醇诱导NQO1mRNA表达呈剂量依赖性增加,且与酶比活力存在明显的相关性;酪醇在一定范围内,其抑制细胞增殖的能力呈剂量依赖性,且细胞增殖与酶比活力存在负相关.低氧与抗氧化剂共同处理比常氧下抗氧化剂诱导NQO1比活力有增加(r=-0.41,P＜0.01).EMSA试验表明,ARE能与低氧、抗氧化剂或低氧+抗氧化剂诱导的核蛋白特异结合.结论抗氧化剂在常氧下可诱导人肝癌细胞NQO1活力增加,低氧加强其诱导能力.其中酪醇诱导NQO1活力与NQO1mRNA表达量增加相关,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活力诱导增加有关.ARE参与介导抗氧化剂和低氧诱导NQO1基因表达的调节.
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1-15 3种化学物致CHL细胞DNA链断裂及酪醇的保护作用
目的检测H2O2、K2Cr2O2和阿霉素所致CHL细胞DNA的损伤效应及酪醇对DNA氧化损伤的影响.方法 (1)CHL细胞以不同浓度化学物作用一定时间(K2Cr2O2:1 h 45 min;H2O2:25 min,阿毒素:1 h 15 min),用SCGE(单细胞凝胶电泳)检测DNA链断裂情况;(2)CHL细胞以不同浓度酪醇作用1h 35 min后,再加入0.4 mmol/LH2O2培养25 min,用SCGE测定DNA链断裂情况,分析酪醇的抗氧化损伤作用.结果(1)0.1 mmol/L H2O2及K2Cr2O2及0.1 μmol/L阿霉素均可引起CHL细胞DNA链断裂;随三者浓度增加,链断裂更趋严重,平均尾长与浓度呈明显的剂量-反应关系;当H2O2、K2Cr2O2为1 mmo1/L,阿霉素为1 μmol/L时,所有细胞都有拖尾现象.(2)10、20μg/ml酪醇及0.33 mol/L DMSO(@OH清除剂)的预处理可明显抑制H2O2所致DNA损伤,使细胞拖尾率和平均尾长明显下降.结论 H2O2、K2Cr2O2和阿霉素均是强烈的DNA断裂剂,而酪醇能减轻H2O2所致CHL细胞DNA链断裂,证实了它对真核细胞DNA氧化损伤具有抑制作用,这可能部分与其对@OH的清除有关.
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1-16 酪醇对肝癌细胞NQ01的诱导及细胞增殖的抑制
目的研究酪醇使肝癌细胞Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)诱导表达和细胞增殖的抑制以及两者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种后24 h经β-酪醇处理24 h,分别测定酶活性、mRNA表达和细胞增殖情况.NQ01酶活性采用微孔板直接测定法,诱导结果用NQ01比活性(specific activity)=A(NQ01酶活性)/B(细胞数);mRNA水平的变化采用定量RT-PCR;细胞增殖采用结晶紫显色法.结果 NQ01酶活诱导上,酪醇大于60μg/ml时有明显的剂量-效应关系,且每一浓度点(60、70、80、μg/ml)与空白组比较,差异均有显著性(P＜0.05),80μg/ml的酪醇与80μnol/L的β-NF(阳性对照)诱导的酶比活性相当;mRNA表达量存在剂量依赖性增加(r=0.824,P＜0.05),且与酶比活存在明显的相关性(r=0.951,P＜0.01);酪醇在70～100μg/ml范围内,其抑制细胞增殖的能力随着浓度的增加而增加.另外,细胞增殖与酶比活存在负相关(r=-0.410,P＜0.01).结论酪醇在培养肝癌细胞SMMC-7721上能使NQ01在酶活性与mRNA表达量诱导性增加,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活性诱导增加有关.
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保健食品中红景天甙的测定方法
红景天系景天科多年生草本植物,主要功效成分为红景天甙和酪醇,具有抗缺氧、抗辐射、抗衰老等作用.目前,以红景天为主要原料的保健品已有多种,对红景天属植物中红景天甙的测定方法已有报道.本文参照有关文献,利用高效液相色谱法对保健品中红景天甙的测定方法进行了研究.
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高效液相色谱法测定紫丁香叶中酪醇的含量
目的:高效液相色谱法测定紫丁香叶中酪醇的含量.方法:采用HPLC法测定紫丁香叶中酪醇的含量.色谱柱:SymmetryC<,18>柱(4.6mm×250mm,10μm);流动相:甲醇-0.125%冰醋酸溶液(10:90);流速:1.0ml/min;检测波长:275nm;柱温:室温.结果:酪醇在0.44～3.52μg范围内线性关系良好,回归方程为方程Y=616731x-9957.4,r=0.9993;平均回收率为97.83%.结论:该方法准确可靠,适用于紫丁香叶酪醇的含量测定.
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正常大鼠体内女贞子红景天苷制备物药代动力学表征研究
目的：建立超高效液相色谱法,PDA检测器同时测定大鼠血清中红景天苷及酪醇的含量分析方法,以研究女贞子红景天苷制备物药代动力学表征及其类药特性。方法采用UPLC-PDA色谱法,ACQUITY UPLC H-CLASS T3色谱柱(50 mm ×2．1 mm,1．8μm)；流动相：乙腈—水(3︰97),流速0．3 mL/min；柱温25℃。结果入血成分红景天苷Cmax19．29μg/mL、Tmax0．5 h、T1/23．28 h、K0．21,酪醇Cmax0．32μg/mL、Tmax0．75 h,血药浓度比值(酪醇︰红景天苷)大为2．99︰100,为体外含量比值的9．65倍。结论所建方法简便经济、稳定易行；以入血成分体内外浓度、含量比值动态变化与药代动力学表征关联分析,揭示了女贞子红景天苷制备物类药特性。
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失眠模型下女贞子红景天苷制备物药代动力学分析研究
目的：阐明女贞子红景天苷制备物作为治疗失眠病症药物的药代动力学表征特性。方法采用超高效液相色谱法, PDA检测器, ACQUITY UPLC H-CLASS T3色谱柱(50 mm ×2．1 mm ×1．8μm)；流动相：乙腈—水(3∶97),流速0．3 mL/min；柱温25℃。结果失眠模型下,入血成分红景天苷Cmax20．24μg/mL、Tmax0．5 h、T1/22．53 h、K0．27,酪醇Cmax0．49μg/mL、Tmax0．75 h,血药浓度比值(酪醇∶红景天苷)大值为3．90∶100,为体外含量比值的12．58倍。结论在失眠模型下,女贞子红景天苷制备物体内主要入血成分为红景天苷和酪醇,且表征出药代协同性；与正常状态比较,表现出体内成分生物利用度增加的药物亲和性。
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HPLC同时测定大花红景天提取物中没食子酸、红景天苷、酪醇、对香豆酸的含量
目的:建立同时测定大花红景天提取物中没食子酸、红景天苷、酪醇、对香豆酸4种成分含量的HPLC法.方法:Phenomenex Luna C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.3％冰醋酸溶液梯度洗脱,流速0.7 mL· min-,检测波长275,308nm,柱温40℃.结果:没食子酸、红景天苷、酪醇、对香豆酸分别在0.435 ～ 13.912 mg.L-1(r=1,n=6),22.813～730 mg·L-1(r =0.999 8,n=6),7.819 ～250.200 mg·L-1(r =0.999 8,n=6),1.618～51.760 mg·L-1(r=0.9998,＝6)呈良好的线性关系,加样回收率均符合含量测定要求.结论:该含测方法简便、准确,可以用于大花红景天提取物中4个成分的含量测定.
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青海产红景天中红景天苷及酪醇含量分析
目的:分析25个批次青海产红景天中红景天苷及酪醇含量.方法:红景天药材为2007年2009年采购自青海省大同县.采用HPLC法测定,Zorbax SB-C18(3.9 mm×150 mm,5μm)；流动相甲醇-水(9.5:90.5),流速1.2 mL·min-1；检测波长为275 nm；柱温35℃.结果:25个批次药材中红天苷含量为0.102％ 1.16％,酪醇含量为0.0116％ 0.116％,相差都约十倍.红景天苷含量符合药典规定的有十个批次,酪醇含量为0.026％～0.095％.结论:不同批次红景天药材中红景天苷及酪醇含量相差很大.
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反相高效液相色谱法测定炎立消胶囊中原儿茶酸、原儿茶醛和酪醇的含量
目的:测定炎立消胶囊中原儿茶酸、原儿茶醛、酪醇的含量.方法:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法直接测定.YWG-C18.色谱柱(4.6 mm×250 mm,10 μm);流动相甲醇-0.125%冰醋酸水溶液(10:90),流速1.0 mL·min-1;检测波长275nm.结果:原儿茶酸在0.08 μg-0.56μg范围呈良好线性,回归方程为y=85 117x-15 733,r=0.999 5;原儿茶醛在0.01 μg～0.07 μg范围呈良好线性,回归方程为Y:111 700x-379 80,r=0.999 8;酪醇在0.42μg～2.94 ug范围呈良好线性,回归方程为Y=139 386x-29 146,r=0.999 6.原儿茶酸回收率96.0%,RSD为2.37%(n=6);原儿茶醛回收率98.4%,RSD为2.05%(n=6);酪醇回收率97.5%,RSD为1.93%(n:6).结论:该方法简便、快速、准确可靠,并可同时测定炎立消胶囊中原儿茶酸、原儿茶醛、酪醇多种成分的含量,适用于炎立消胶囊的质量控制.
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超声波提取红景天酪醇工艺研究及数学模拟
目的 研究红景天酪醇的超声波提取工艺,同时对提取过程进行数学模拟.方法 采用高效液相色谱法,以酪醇含量为指标,通过正交设计及数学模拟优化红景天酪醇的超声波提取工艺.结果 红景天酪醇佳超声波提取工艺为:80%乙醇为提取溶剂,料液比为1:35(g:mL),提取时间30 min,超声功率240 W.在此条件下,酪醇提取率可达0.150 1%.与加热回流法比较,提取时间缩短66.7%,提取效率提高12%.结论 该提取方法操作简单,有效成分提取率高.超声波提取的数学模拟值与试验结果吻合.
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SPE-HPLC测定注射用红景天(冻干)中红景天苷和酪醇的含量
目的:测定注射用红景天(冻干)中红景天苷和酪醇的含量.方法:选用C18固相萃取小柱对样品进行纯化后用高效液相色谱法测定红景天苷和酪醇含量.Irregular-H C18柱(4.6 mm×250 mm,10μm),流动相甲醇-乙腈-0.06%磷酸(10:10:80),流速1.0 mL·min-1,检测波长275 nm,柱温30℃.结果:红景天苷在2.24～22.4μg、酪醇在0.856～8.56μg呈现良好的线性相关性,r分别为0.999 7,0.999 6,平均回收率分别为101.3%,99.8%.结论:本方法简便快捷,分离度好,结果准确可靠.
关键词： 注射用红景天(冻干) HPLC 固相萃取 红景天苷 酪醇 -
穿心莲内酯对白念珠菌群感效应及相关毒力基因的影响
目的:研究穿心莲内酯(andrographolide,AG)对白念珠菌群感效应(quorum sensing,QS)及相关毒力基因的影响.方法:气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)检测AG干预白念珠菌不同时间后法尼醇和酪醇的含量变化;qRT-PCR检测QS调节的相关毒力基因CHK1,PBS2,HOG1的表达.结果:白念珠菌生长2h时法尼醇和酪醇分泌量较少,AG作用后变化不明显;12 h后分泌量高,24 h回落.不同浓度AG干预后,法尼醇含量降低,酪醇升高,呈现剂量依赖性,其中1 000 mg·L-1AG效果均明显.qRT-PCR结果显示,1 000 mg· L-1AG在2,12,24 h时分别使CHK1下调2.375,3.330,4.043倍;PBS2下调2.010,4.210,4.760倍;HOG1变化不明显.结论:AG可抑制法尼醇的分泌及促进酪醇的分泌,下调QS相关的毒力基因CHK1,PBS2的表达.
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不同生长季节紫丁香叶中丁香苦苷的含量变化
紫丁香叶为木樨科植物紫丁香Syringa oblataLindl.的干燥叶.活性物质基础主要为酪醇、3,4-二羟基苯乙醇、对羟基肉桂酸、3,4-二羟基苯甲酸、丁香苦苷等[1].以其为原料生产的胶囊、片剂治疗急性黄疸性肝炎收到较好疗效[2].由于中药材的质量与不同生长季节密切相关,本研究采用RP-HPLC测定不同生长季节紫丁香叶中丁香苦苷的含量[3],为适时采收及合理利用紫丁香叶资源提供依据.
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HPLC测定红景天注射液中酪醇的含量
红景天注射液处方为单味药大株红景天Rhodiola kirilowii(Regel)Maxim.,功能活血化瘀,通脉止痛,拟用于治疗冠心病心绞痛.大株红景天中含有香豆素、黄酮类、苷类、蒽酮类等多种化学成分,其中红景天苷、酪醇为已知有效成分[1].作者通过对原料药材及成品质量标准的系统研究,建立了灵敏、专属强的高效液相色谱法,可进行酪醇的分析定量.
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红景天中红景天苷、酪醇、大花红天素及没食子酸提取工艺优选
优选大花红景天中红景天苷、酪醇、大花红天素及没食子酸的提取工艺.采用正交试验,以红景天苷、酪醇、大花红天素及没食子酸4种化合物的提取率为指标,选取乙醇体积分数、料液比、提取时间及提取次数为考察因素,优选4种化合物的佳提取工艺.结果表明,以药材质量8倍量的70％乙醇回流提取2次,每次提取3h为佳提取工艺.该工艺所得红景天苷、酪醇、大花红天素及没食子酸的提取率均较高.优选的提取工艺稳定可行,4种化合物的收率高,可用于工业生产的放大.
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同时制备克级高纯度酪醇、大花红天素及红景天苷的工艺研究
酪醇、大花红天素及红景天苷3种化合物均是红景天的主要活性成分,具有广泛的药理活性.该实验首次从大花红景天中同时分离出克级高纯度的酪醇、大花红天素及红景天苷,红景天经70％乙醇提取后,以3种化合物的收率为指标,对树脂工艺进行优化筛选,再利用硅胶柱分离纯化,终同时得到克级高纯度的酪醇、大花红天素及红景天苷,经HPLC测定,3种化合物的纯度均超过98％.该方法工艺简洁、操作简单、有机溶剂用量少、收率及重复率都很高,适合3种化合物的同时制备.
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柱前衍生化结合UHPLC-MS/MS法同时测定Beagle犬血浆中的红景天苷和酪醇
本文建立了同时测定Beagle犬血浆中红景天苷及酪醇浓度的柱前衍生化结合UHPLC-MS/MS的分析方法.血浆样品用乙腈沉淀蛋白后,上清液与丹磺酰氯进行衍生化反应,终止反应后采用甲基叔丁基醚进行提取,提取物复溶后经反相色谱分离,色谱柱为ACQUITY UPLC(R) BEH C18,(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为乙腈(含0.1％甲酸)-水(含10％乙腈,0.1％甲酸),梯度洗脱,分析时间为9 min.在正离子条件下采用多反应监测模式对两种待测物进行同时测定.用于定量分析的离子对分别为m/z 534.2→372.0(红景天苷衍生物),m/z 372.0→171.0(酪醇衍生物)和m/z 506.0→171.0(内标熊果苷衍生物).在上述条件下,红景天苷和酪醇分别在0.02～20和0.1～10 μmol·L-1内线性良好,定量下限分别为0.02和0.1 μmol·L-1;批内、批间精密度均小于8.68％;准确度在±11.4％范围之内.本方法灵敏度高,专属性好,适合用于Beagle犬灌胃给药后血液中红景天苷、酪醇的药动学研究.
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红景天苷及其苷元酪醇的心血管保护作用
本文综述了红景天苷及其苷元酪醇对心血管的主要保护作用:①抗氧化作用,促进一氧化氮合成和抑制炎症介质前列腺素合成.②激活PI3K/Akt信号转导通路,上调缺氧诱导因子-1和血管内皮生长因子表达及Bcl-2/Bax比值.③抑制线粒体通透性转换孔开放,维护线粒体跨膜电位,阻滞半胱天冬酶-3激活,保护心肌细胞和血管内皮细胞.红景天苷和酪醇对抗缺血、缺氧、缺血再灌注或氧化应激引起的心血管细胞损伤,抑制氧化修饰的低密度脂蛋白形成、血管平滑肌细胞增殖和血小板聚集,降低血液粘度等,阻碍动脉粥样硬化发生和发展,产生心血管保护作用.
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胶束毛细管电泳测定女贞子饮片中6种指标成分的含量
目的 建立胶束电动毛细管色谱二极管阵列检测法(MEKC-DAD)同时测定女贞子饮片中红景天苷、酪醇、女贞苷、特女贞苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法.方法 60 mmol·L-1硼砂-10 mmol·L-1十二烷基硫酸钠(SDS)-30 mmol·L-羟丙基-β-环糊精-10％的甲醇(pH 9.03)为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(75 μm×64.5 cm,有效长度56 cm)为分离通道,分离电压为20 kV,检测波长为210 nm,毛细管温度为25℃,压力进样为5 kPa×6 s.结果 6种指标成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r＞0.95);加样回收率为94.57％～ 102.07％(RSD ＜5％);用此法测定了女贞子饮片中6种指标成分的含量,结果满意.结论 该方法准确、可靠,重复性较好,可用于女贞子饮片内在质量的评价和控制.
