穿心莲内酯对白念珠菌群感效应及相关毒力基因的影响

目的:研究穿心莲内酯(andrographolide,AG)对白念珠菌群感效应(quorum sensing,QS)及相关毒力基因的影响.方法:气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)检测AG干预白念珠菌不同时间后法尼醇和酪醇的含量变化;qRT-PCR检测QS调节的相关毒力基因CHK1,PBS2,HOG1的表达.结果:白念珠菌生长2h时法尼醇和酪醇分泌量较少,AG作用后变化不明显;12 h后分泌量高,24 h回落.不同浓度AG干预后,法尼醇含量降低,酪醇升高,呈现剂量依赖性,其中1 000 mg·L-1AG效果均明显.qRT-PCR结果显示,1 000 mg· L-1AG在2,12,24 h时分别使CHK1下调2.375,3.330,4.043倍;PBS2下调2.010,4.210,4.760倍;HOG1变化不明显.结论:AG可抑制法尼醇的分泌及促进酪醇的分泌,下调QS相关的毒力基因CHK1,PBS2的表达.

群体感应分子Farnesol联合CSA对白色念珠菌生物膜作用的实验研究

目的 探讨群体感应分子法尼醇(Farnesol)联合钙调神经磷酸酶抑制剂环孢菌素A(CSA)对白色念珠菌的生物膜形成、形态转换、生长及活性、耐药性、凋亡反应和氧化应激反应的作用及其相关机制. 方法 体外构建生物膜状态白色念珠菌,分别经CSA、Farnesol、Farnesol联合CSA处理后,用qRT-PCR法检测生物膜状态白色念珠菌中生物膜形成过程中的相关基因CDR1、CEK1、CPH1、EFG1、ERG11、GPR1、HAT1、MDR1、HWP1、ALS3、TUP1 mRNA表达水平的变化. 结果 白色念珠菌均具有不同程度的产膜能力,且单用CSA、Farnesol抗真菌药物对白色念珠菌生物膜的抑制率很低,而联合使用时,受试菌生物膜生长状态受到明显抑制.从临床血流感染中分离获得1株强产生物被膜白色念珠菌,命名为CA NX05;经不同药物组处理后生物膜状态白色念珠菌中的生物膜菌丝形成相关基因CEK1、CPH1、EFG1、ERG11、GPR1、HAT1、HWP1、ALS3、TUP1与其耐药性相关基因CDR1、MDR1的mRNA表达量与空白处理组相比均显著降低(FCEK1=15.725,FCPH1=6.230,FEFG.1=87.817,FERG11=17.527,FGPR1=21.793,FHAT1=65.318,FHWP1 =550.531,FALS3=10.514,FTUP1=16.580,FCDR1=8.089,FMDR1 =7.228;F＞P,P＜0.05). 结论 群体感应分子Farnesol联合CSA处理较CSA及Farnesol处理能更有效地抑制白色念珠菌生物膜的形成,从而使其对抗真菌药物的敏感性增加,为临床合理使用抗真菌药物提供了科学导向.

胆汁酸在减重手术缓解2型糖尿病中的作用

胆汁酸是胆汁中的主要成分，在肝细胞内由胆固醇转化合成，通过胆道系统排入肠道，介导脂类、脂溶性维生素等物质的消化吸收。近年研究发现，胆汁酸不仅是食物消化吸收中的重要物质，也可作为信号分子通过法尼醇X受体（FXR）、G蛋白偶联胆汁酸受体（TGR5）等介导的信号通路，调控体内糖脂及能量的代谢[1]。减重手术是治疗肥胖及其合并症2型糖尿病(T2DM)有效的方法之一[2]，但其作用机制尚未完全明确。研究表明，胆汁酸可能在减重手术缓解T2DM的过程中具有重要作用，现就胆汁酸在减重手术中的作用机制作一综述。

法尼醇X受体对代谢调控作用的研究进展

法尼醇X受体(farnesoid X receptor，FXR)，又名胆汁酸受体，属于核受体超家族的一员（nuclear receptor subfamily 1 group H member 4，NR1H4），是配体激活的转录因子。胆汁酸作为FXR的内源性配体，不仅是脂类消化吸收中的重要物质，还可作为信号分子通过FXR介导的信号通路传递信息，参与体内代谢的调控。FXR不仅在调控机体胆汁酸、糖脂代谢中具有重要作用，而且与多种代谢性疾病有关，有望成为疾病治疗的靶点。现就FXR调控机体代谢的作用机制及FXR激动剂的应用作一综述。

胆囊-肝分流途径:胆囊真能保护肝脏?

胆汁酸不仅能促进脂类乳化及消化,对肝肠内疏水性化合物的吸收、清除和转运也有重要作用.胆汁酸代谢受多种因素的调节而使其在人体细胞和组织中的浓度维持在一定范围内.其中法尼醇X受体(farnesoidX receptor,FXR)是调节胆汁酸代谢的核心因子,它通过调节各种转运蛋白表达而影响胆汁酸的合成、肠肝循环及胆汁酸的解毒过程来维持胆汁酸的稳态,保护肝细胞免受胆汁酸的毒性作用.胆囊除具备储存、浓缩、排空胆汁等功能外,还具有复杂的化学功能和免疫功能.近来研究表明,可能存在一条胆囊-肝分流途径,使初级胆汁酸经胆囊直接重吸收入肝,从而减少了次级胆汁酸的生成及其对肝脏的毒性.

妊娠期和药物性肝内胆汁淤积的遗传因素

妊娠期肝内胆汁淤积(ICP)和药物性胆汁淤积是获得性胆汁淤积性肝病的两个重要类型.ICP与雌激素和黄体酮代谢产物有关,代谢产物通过一种间接机制抑制胆盐输出泵(BSEP)起作用.此外,多药耐药蛋白3(MDR3)和BSEP的遗传多态性,以及决定两者基因转录的法尼醇X受体(FXR)都与ICP有关.

法尼醇促氟康唑耐药白念珠菌死亡的实验研究

目的:初步探讨法尼醇促进氟康唑耐药白念珠菌死亡的可能机制.方法:使用药物浓度梯度法构建氟康唑耐药白念珠菌:采用实时定量PCR技术检测耐药、敏感白念珠菌中耐药相关基因的表达.四甲基偶氮唑盐(MTT法)比色法检测法尼醇对氟康唑耐药、敏感白念珠菌增殖的影响.应用流式细胞技术及激光共聚焦显微镜技术,比较2组菌株在细胞凋亡、坏死及细胞内氧化应激水平上的差异.结果:成功构建了氟康唑耐药白念珠菌菌株,氟康唑耐药白念珠菌中多药耐药基因1 (MDR1)的表达较敏感株明显增加(P＜0.01);而白念珠菌耐药(CDR)1、CDR2基因的表达在2组中并无明显差异(P＞0.05).与氟康唑敏感白念珠菌相比,法尼醇介导耐药白念珠菌细胞内活性氧类(ROS)积聚增多,并显著促进耐药白念珠菌发生坏死.结论:MDR1基因在氟康唑耐药白念珠菌中高表达;法尼醇可介导氟康唑耐药白念珠菌细胞内ROS积聚增多,并促进耐药菌株发生坏死.

胆汁酸核受体FXR在非酒精性脂肪性肝病中的作用

背景:肝细胞内三酰甘油堆积和胰岛素抵抗是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的基本特征,贯穿NAFLD的整个病程.胆汁酸对食物性脂类的吸收和胆同醇代谢具有重要调控作用.亦是平衡糖脂代谢的重要信号分子,其主要通过法尼酯衍生物X受体(FXR)发挥作用.目的:评估FXR激动剂GW 4064对肝细胞内脂质堆积和三酰甘油含量的潜在作用,同时探讨FXR在NAFLD患者肝组织中的表达情况.方法:以软脂酸和油酸(2:1)混合液处理人张氏肝细胞株,建立肝细胞脂肪变性模型,干预组予FXR激活剂GW 4064(10 μmol/L)处理.以油红染色测定细胞内脂质含量,并检测三酰甘油含量.以免疫组化法检测正常对照组和NAFLD患者肝组织中的FXR表达情况.结果:FXR激活剂GW 4064可明显减少脂肪变肝细胞中脂滴和三酰甘油含量.FXR在NAFLD患者肝组织中的表达率显著低于正常对照组(P＜0.01).结论:FXR激动剂GW 4064可有效缓解肝细胞的脂肪变程度;FXR在NAFLD患者中的表达受抑制.FXR改善NAFLD的分子机制值得进一步研究.

治疗原发性胆汁性胆管炎新药——法尼醇X受体激动剂奥贝胆酸

法尼醇X受体属核受体,在肝脏和肠道中表达,在胆汁酸的合成过程中发挥重要的调节作用.激活法尼醇X受体可抑制胆汁酸的合成,降低肝脏对胆汁酸的暴露.奥贝胆酸为鹅去氧胆酸的半合成衍生物,属法尼醇X受体的天然激动剂,由Intercept制药公司研制,于2016年5月在美国批准用于单用熊去氧胆酸效果不佳或不能耐受的原发性胆汁性胆管炎的添加治疗.本文从作用机制、药动学、临床疗效及不良反应等方面对奥贝胆酸进行介绍.

不同培养基中耐药株及标准株白念珠菌生物膜法尼醇分泌的比较研究

目的 比较不同培养基中白念珠菌耐药株及标准株生物膜法尼醇分泌量的差异,了解生物膜各时相法尼醇分泌变化趋势,探讨耐药株法尼醇产生的特点.方法 用氟康唑诱导形成白念珠菌耐药株.将白念珠菌标准株及耐药株分别接种到RPMI 1640、酵母浸出粉蛋白胨葡萄糖(YPD)、无氨基酵母氮源(YNB)+0.5％葡萄糖(Glu)和RPMI 1640+ 10％胎牛血清(FCS)4种培养基中培养,构建白念珠菌生物膜.倒置显微镜下观察培养24 h时白念珠菌生物膜形态,气相色谱-质谱联用(GC/MS)法检测培养1.5、3、6、12、24、36、48 h法尼醇分泌量.结果 在相同培养基中,耐药株及标准株生物膜形态没有明显差异,但不同培养基中生物膜形态各不相同.三因素重复测量方差分析显示,白念珠菌生物膜法尼醇的分泌有随时间变化的趋势(F=70.628,P＜0.001),耐药株和标准株生物膜形成过程中,法尼醇分泌量在RPMI 1640、YPD及YNB+ 0.5％ Glu培养基中均先逐渐增加,在生物膜形成后期至成熟期达到高峰值,随后降低.两种菌株在各培养基中法尼醇浓度达到高峰时间不同.两种菌株分泌法尼醇浓度在RPMI 1640+ 10％ FCS培养基中均在12 ～48h呈现缓慢上升趋势.培养基不同会影响法尼醇的分泌(F=176.665,P＜0.001),标准株及耐药株生物膜法尼醇分泌量在YNB+ 0.5％ Glu培养基中较高.此外,在RPMI 1640培养基(36 h:1.157±0.064比0.250±0.075,P＜0.05)及YPD培养基(6 h:0.262±0.036比0.055±0.062;12 h:0.730±0.030比0.482±0.024;均P＜0.05)中耐药株生物膜法尼醇分泌量显著高于标准株,但在YNB+ 0.5％ Glu培养基中(36h)标准株法尼醇分泌量显著高于耐药株(2.950±0.677比0.523±0.266,P=0.020).结论 培养基不同可影响白念珠菌生物膜法尼醇的分泌,且耐药株与标准株之间法尼醇分泌有一定差异.

法尼醇对不同状态白念珠菌氟康唑药物敏感性作用的比较研究

目的：探讨法尼醇处理对不同生长状态白念珠菌的氟康唑药物敏感性的影响。方法：体外构建浮游状态白念珠菌和成熟生物膜状态白念珠菌；法尼醇处理后，用甲基四氮盐（ XTT）法检测浮游状态和生物膜状态白念珠菌细胞活性的改变。结果：与对照组比较，法尼醇处理后的浮游状态白念珠菌对氟康唑的敏感性无明显改变（P＞0．05），而生物膜状态白念珠菌对氟康唑的敏感性增高（P＜0．05）。结论：法尼醇可以增加白念珠菌生物膜对药物的敏感性。

XTT减低法检测法尼醇对白念珠菌生物被膜的抑制作用

目的：体外研究法尼醇对白念珠菌生物被膜的抑制作用。方法：采用微量平板法制备12和24 h白念株菌生物被膜，每组膜分别加入不同浓度法尼醇（100～900μmol/L）培养24 h，甲基四氮盐（XTT）减低法检测法尼醇对白念珠菌生物被膜的抑制作用效果，倒置显微镜下观察生物被膜形态。结果：不同浓度的法尼醇对白念珠菌生物被膜均有抑制作用（P＜0．05），法尼醇浓度增加，抑制强度呈上升趋势。培养12 h，抑制白念株菌生物被膜50％活性的低药物浓度（sessile minimal inhibitory concentration 50％，SMIC50）为600μmol/L；培养24 h，SMIC50为200μmol/L。结论：法尼醇对白念珠菌生物被膜生长具有明显抑制作用。法尼醇对白念珠菌生物被膜抑制强度与法尼醇浓度和生物被膜时相相关，高浓度法尼醇的抑制效果高于低浓度法尼醇。

不同培养基对白念珠菌生物被膜产生法尼醇的影响

目的:检测不同培养基对白念珠菌生物被膜产生法尼醇的影响.方法:白念珠菌标准株SC5314分别接种到含有RPMI1640、YPD、RPMI1640+10%胎牛血清(fetal calf serum,FCS)培养基的培养皿中,形成白念珠菌生物被膜.在接种1.5~48 h内,使用气相色谱-质谱联用法检测法尼醇产生的情况.结果:在RPMI1640、YPD培养基中,法尼醇分泌量随生物被膜的成熟而逐渐增加,在生物被膜形成后期至成熟期达到高峰;在RPMI1640+10%FCS培养基中,法尼醇的产生在48h内呈增长趋势.12 h时,YPD培养基中法尼醇的分泌量高于其它两组(P<0.05);48 h时,RPMI1640+10%FCS培养基中法尼醇分泌量高(P<0.05).结论:白念珠菌生物被膜法尼醇分泌量与培养基种类存在相关性.

法尼醇对白念珠菌作用的研究进展

法尼醇是白念珠菌重要的群体感应分子，它参与抑制白念珠菌的出芽及生物膜形成，并且一定浓度的法尼醇可抑制白念珠菌的生长及诱导凋亡。本文主要综述法尼醇对白念珠菌的生物膜形成、形态转换、生长及活性、耐药性、凋亡反应及氧化应激反应的作用及其相关机制的研究进展。

密度感应分子对白色念珠菌生物被膜形成作用的研究

目的:白色念珠菌生物被膜形成受密度感应分子调控,法尼醇和酪醇是白色念珠菌产生的两种密度感应分子.本研究探讨不同生物被膜时相,密度感应分子对白色念珠菌形态及生物被膜形成的作用.方法:体外构建白色念珠菌生物被膜.研究分为法尼醇处理组、酪醇处理组、法尼醇和酪醇联合处理组、对照组.首先采用XTT检测不同生物被膜时相酪醇和法尼醇对白色念珠菌细胞活力的作用.扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察酪醇和法尼醇对白色念珠菌生物被膜的作用.同时采用气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC/MS)检测白色念珠菌生物被膜法尼醇的产生,高效液相色谱(high press liquid chromograph,HPLC)检测白色念珠菌生物被膜酪醇的产生.结果:XTT结果显示,与对照组比较,酪醇可促进6h白色念珠菌生物膜活力(P＜0.05),法尼醇抑制早期(3h和6 h)生物被膜活力(P＜ 0.05),联合作用组抑制6h生物被膜活力(P＜ 0.001).扫描电镜观察发现,酪醇促进3h和6h白色念珠菌细胞的出芽,法尼醇抑制3h和6h菌丝形成,两者联合作用以后者对菌丝形成的抑制作用为主.GC/MS及HPLC结果表明在早期(3h和6h)生物被膜,2种密度感应分子产生少且无明显升高趋势(P＞0.05);随着生物被膜成熟(24 h及36 h),酪醇产生明显增多(P＜0.05),法尼醇产生也明显增多(P＜0.05).24 h生物被膜产生酪醇多,36 h生物被膜产生法尼醇多.结论:酪醇可以促进白色念珠菌出芽和菌丝伸长,促进早期生物被膜形成.法尼醇抑制出芽和菌丝形成,抑制早期生物被膜形成.两者联合作用以法尼醇对菌丝形成的抑制作用为主.

小鼠肝脏再生早期胆酸代谢相关基因SHP和 Cyp7A1的动态改变

目的 探讨小鼠肝脏70%切除术后再生早期,核受体SHP参与调控Cyp7A1基因表达的机制.方法 应用逆转录实时定量PCR检测野生型小鼠和FXR-/-小鼠肝脏70%切除术后1h和6h Cyp7A1基因和SHP基因的表达.结果 2组肝脏Cyp7A1基因表达在术后1h和6h明显降低;SHP基因表达在术后1h显著上升,术后6 h急剧下降.结论 小鼠肝脏70%切除术后再生早期,非依赖FXR的通路参与胆酸介导的Cyp7A1基因转录的抑制.SHP可通过非FXR介导的途径参与调节Cyp7A1基因的表达.

T0901317通过法尼醇X受体调节人肠癌细胞载脂蛋白M表达

载脂蛋白M(ApoM)是一种脂质运载蛋白家族的血浆蛋白质,主要存在于HDL中[1].本研究旨在观察TO901317通过法尼醇X受体调节人肠癌细胞载脂蛋白M表达.

功能性法尼醇X受体缺失增加载脂蛋白E缺陷小鼠动脉粥样硬化损伤

法尼醇X受体对L02细胞脂肪代谢的调节作用

目的 观察法尼醇X受体(FXR)对人肝细胞株L02细胞脂肪代谢的调节作用.方法 油酸钠建立L02细胞脂肪变模型(脂肪变组),油酸钠及鹅去氧胆酸钠建立干预模型(干预组),设对照组(培养基中不加药物),3组均设立24、48、72 h时间点.油红O染色,细胞内甘油三酯含量测定,检测肝细胞脂肪变程度;Westem blot和RT-PCR方法检测核受体FXR及固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)的表达变化.结果 脂肪变组随着肝细胞脂肪变性的发生发展,FXR表达呈逐渐降低趋势,但差异无统计学意义.SREBP-lc mRNA的表达明显升高,24、48,72 h图像半定量分析结果分别为0.495±0.062、0.579±0.064、0.612±0.067,SREBP-1c蛋白表达分别为0.394±0.044、0.488±0.066、0.543±0.064,均明显高于干预组和对照组,差异有统计学意义.干预组FXR mRNA表达明显上调,24、48,72 h分别为0.253±0.041、0.298±0.042、0.334±0.051,FXR蛋白分别为0.221±-0.022、0.313±0.041,0.341±0.046,与脂肪变组比较,,值为6.41～50.93,Jp值均<0.05或0.01,差异有统计学意义.脂变组甘油三酯含量各时间段均明显增加,干预组甘油三酯含量各时间段均明显降低.差异有统计学意义.结论 FXR表达下调与肝细胞脂肪沉积密切相关;刺激FXR表达增加可能通过抑制其靶基因SREBP-1c表达而改善L02细胞脂肪变性.

群体感应分子Farnesol联合环孢菌素A对白念珠菌生物被膜的作用初探

目的 探讨群体感应分子法尼醇(Farnesol,FOH)联合钙调神经磷酸酶抑制剂环孢菌素A(Cyclosporin A,CSA)对白念珠菌生物膜形成、形态转换、生长与活性相关基因表达水平的影响,并对相关作用机制进行研究.方法 体外构建生物膜状态白念珠菌;以未加药为对照组,CSA、FOH、FOH联合CSA为处理组,经不同处理后,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测白念珠菌在生物膜形成过程中相关基因在mRNA表达水平的变化.结果 62株白念珠菌均具有不同程度的产膜能力.经过不同药物组处理后,白念珠菌生物膜形成的相关基因中,除了转录抑制因子TUP1基因的mRNA表达量上调,其它基因:ALS3、BCR1、HWP1、TEC1、Ume6、CPH1、GAT2、CEK1、CSH1的mRNA表达量与对照组相比均显示不同程度降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 群体感应分子Farnesol联合钙调神经磷酸酶抑制剂CSA较CSA与Farnesol单一用药在白念珠菌生物膜形成过程中能够更有效的抑制其生物被膜的形成,从而增加其对抗真菌药物的敏感性.