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奥贝胆酸对非酒精性脂肪肝大鼠法尼醇X受体及细胞色素P450家族成员7A1基因表达的影响
目的 探讨奥贝胆酸对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠法尼醇X受体(FXR)蛋白、细胞色素P450家族成员7A1(CYP 7Al)蛋白及其基因表达的影响,及保肝作用.方法 雄性SD大鼠52只通过高脂饲料喂养建立大鼠非酒精性脂肪肝模型;设置对照组11只,模型组、奥低组、奥中组和奥高组共41只,给药4周后,取大鼠相同部位肝脏,免疫组织化学法测定FXR蛋白表达、RT-PCR检测FXR mRNA,Western blotting法检测CYP7A1蛋白、RT-PCR检测CYP 7A1 mRNA的表达水平;通过大鼠肝指数,外周血谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的浓度,及肝脏组织切片观察,评估肝功能.结果 高脂饲料喂养10周后,大鼠具有典型的NAFLD特征,模型建立成功.模型组的FXR蛋白和FXR mRNA表达水平显著低于对照组(P＜0.05),奥低组和奥中组的FXR蛋白和FXR mRNA表达水平与模型组相比,差异无统计学意义(P＞0.05),奥高组的FXR蛋白和FXR mRNA表达水平显著高于模型组(P＜0.05);模型组、奥低组和奥中组的吸光度值显著低于对照组(P＜0.05),奥高组显著升高,与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).模型组的CYP7A1蛋白和CYP 7A1 mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.05),奥低组和奥中组的CYP7A1蛋白和CYP7A1 mRNA的表达水平与模型组相比,差异无统计学意义(P＞0.05),奥高组的CYP7A1蛋白和CYP 7A1 mRNA表达水平显著低于模型组(P＜0.05).与对照组相比,模型组的肝指数(％)显著增大(P＜0.05);奥低组和奥中组的肝指数(％)与模型组相比,差异无统计学意义(P＞0.05),奥高组肝指数(％)显著低于模型组(P＜0.05).与对照组相比,模型组的ALT、AST和ALP的浓度显著升高(P＜0.05);奥贝胆酸组的ALT、AST和ALP浓度显著低于模型组(P＜0.05),且随着奥贝胆酸给药量的增加,ALT、AST和ALP的浓度逐渐降低;肝组织切片观察结果显示,奥贝胆酸呈剂量依赖性改善大鼠肝组织.结论 奥贝胆酸高剂量能显著上调FXR蛋白及其基因的表达,并抑制CYP7A1蛋白及其基因的表达,显著改善大鼠肝功能及肝组织病理状态.
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LC-MS/MS法测定大鼠血浆中奥贝胆酸的浓度
本文建立了一种快速、灵敏、准确、可靠的LC-MS/MS分析方法测定大鼠血浆中奥贝胆酸浓度,并应用于奥贝胆酸大鼠灌胃给药后的药动学研究.血浆样品以甲基叔丁基醚提取后,经ACE Excel 2 Super C 18色谱柱(50 mm×2.1 mm ID,1.7 μm)分离,以乙腈-2 mmol·L-1甲酸铵水溶液(含10％乙腈)作为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL.min-1.电喷雾离子化源(ESI)负离子条件下,采用多反应监测模式(MRM)进行定量分析,监测离子对分别为奥贝胆酸m/z 418.9 [M-H]→401.2,内标甘草次酸m/z 469.0 [M-H] →425.2.大鼠血浆中奥贝胆酸在5～5 000 ng·mL-1浓度内线性关系良好(r2＞0.99),定量下限为5 ngmL-1;日内、日间精密度(RSD)小于9.82％,准确度(RE)在±6.90％以内;血浆中无内源性物质干扰,内标归一化后的基质效应为78.9％～82.5％,提取回收率为85.4％～88.5％;奥贝胆酸的血浆样品经室温放置24 h、-70℃3次冻融循环、-70℃冻存1个月,处理后的样品在进样器内放置24h均稳定;药物浓度超出曲线范围的样品经空白血浆稀释10倍后,其准确度在±11.2％以内,精密度为7.25％.本方法经验证后,成功应用于大鼠灌胃给予奥贝胆酸后的药动学研究.
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原发性胆汁性胆管炎治疗药物奥贝胆酸
原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种慢性肝内胆汁淤积性疾病,患者胆汁分泌受阻,从而损害肝细胞,引发肝纤维化和肝硬化.目前PBC的患病率不断升高,但约40％的患者对传统治疗药物熊去氧胆酸(UDCA)并不敏感,导致疾病进展风险升高.奥贝胆酸可有效治疗对UDCA反应不足或不耐受的患者,且治疗耐受性良好.本文对PBC的流行病学、新治疗药物奥贝胆酸的药理学、毒理学以及临床安全性和有效性进行了概述.
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3α-羟基-7-氧代-胆烷酸有关物质分析方法的建立
目的:建立3α-羟基-7-氧代-胆烷酸有关物质的分析方法.方法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以0.05％的磷酸水溶液和乙腈为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为202 nm.结果:3α-羟基-7-氧代-胆烷酸样品溶液的色谱图中主峰与已知杂质之间和各已知杂质之间均能有效分离,3α-羟基-7-氧代-胆烷酸、杂质01、杂质04、杂质05和杂质06-A分别在1.00 ～ 24.97 μg·mL-(r=0.999 9),1.00 ～50.05μg· mL-1(r =0.999 9),0.75 ～ 25.04μg·mL-1(r=0.999 9),1.01 ～5.02 μg·mL-1(r =0.999 8),1.00 ～9.98 μg· mL-1(r =0.999 9)的浓度范围内与峰面积成良好的线性关系;检测限分别为12.5、12.5、10、12.5、12.5 ng.结论:经验证,该方法简单易行,且专属性、灵敏度、线性和精密度良好,适用于本品有关物质的测定.
关键词： 奥贝胆酸 3α-羟基-7-氧代-胆烷酸 有关物质 高效液相色谱法 -
法尼醇X受体激动剂奥贝胆酸
奥贝胆酸是一种治疗原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪肝的新型候选药物，由美国Intercept制药公司研发，其机制主要是通过激动法尼醇 X 受体，调节相关基因，影响胆汁酸的合成、分泌、转运和吸收。临床研究表明，对熊去氧胆酸不能完全耐受的患者，通过服用奥贝胆酸能够明显改善碱性磷酸酶和血清胆红素的水平，提示奥贝胆酸的临床效果可能优于现有药物熊去氧胆酸。将从奥贝胆酸的药物概况、相关背景、合成路线、药理作用、临床前及临床试验研究以及安全性评价方面进行简述。
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奥贝胆酸的合成工艺
目的 以鹅去氧胆酸为原料合成奥贝胆酸,以期得到更好的奥贝胆酸合成工艺.方法 经氧化、酯化、亲电加成、催化加氢和水解还原共5步反应得到奥贝胆酸(6α-乙基鹅去氧胆酸)新的合成工艺,总收率达38％.其结构经1 H-NMR、MS分析测试技术确认.结果 通过考察各步反应条件,得出佳工艺条件:氧化反应中,鹅去氧胆酸与N-溴代琥珀酰亚胺物质的量比为1∶1.5;亲电加成中,3α-羟基-7-酮-5β胆烷酸-24-甲酯与三乙胺与叔丁基二甲基氯硅烷物质的量比为1∶2∶2.2;还原反应中,3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β--胆烷酸-24-甲酯与硼氢化钠物质的量比为1∶6.
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法尼醇X受体在原发性胆汁性胆管炎治疗中的作用
原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种常见的胆汁淤积性肝病.熊去氧胆酸(UDCA)是目前惟一被批准并能有效治疗PBC的药物,但高达40%的PBC患者对UDCA应答不佳.法尼醇X受体(FXR)具有抑制胆汁酸合成、调控胆汁酸转运和抗肝纤维化的作用.本文就FXR在PBC治疗中的作用作一综述.
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治疗原发性胆汁性胆管炎新药——法尼醇X受体激动剂奥贝胆酸
法尼醇X受体属核受体,在肝脏和肠道中表达,在胆汁酸的合成过程中发挥重要的调节作用.激活法尼醇X受体可抑制胆汁酸的合成,降低肝脏对胆汁酸的暴露.奥贝胆酸为鹅去氧胆酸的半合成衍生物,属法尼醇X受体的天然激动剂,由Intercept制药公司研制,于2016年5月在美国批准用于单用熊去氧胆酸效果不佳或不能耐受的原发性胆汁性胆管炎的添加治疗.本文从作用机制、药动学、临床疗效及不良反应等方面对奥贝胆酸进行介绍.
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奥贝胆酸及其有关物质的合成
3α-羟基-7-酮-5β-胆甾烷-24-酸经甲酯化,与乙醛缩合得到3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆甾烷-24-甲酯,再经氢化还原,水解,选择性还原反应制得奥贝胆酸,总收率为31.9％.并合成了工艺中可能存在的2个有关物质,6α-乙基熊去氧胆酸和6β-乙基鹅去氧胆酸.
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奥贝胆酸合成工艺优化
本研究对奥贝胆酸(1)的合成工艺进行了优化.3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸(2)经酯化和3-位硅烷化得3 0-三甲基硅氧基-7-氧代-5β-胆烷酸甲酯(4).以三氟甲磺酸三甲基硅基酯代替传统的烯醇化试剂三甲基氯硅烷,在-10℃即可将4完全转化为30,7-二(三甲基硅氧基)-6-烯-5β-胆烷酸甲酯(5),收率由64.3％提高至98.0％.使用三氟化硼乙腈代替三氟化硼乙醚作羟醛缩合剂,使5与乙醛反应得3α-羟基-6-亚乙基-7-氧代-5β-胆烷酸甲酯(6),收率由70.0％提高至93.2％.6经加氢还原、水解和7-位羰基还原得1.优化后的工艺操作简便,反应条件温和,成本低,总收率由24.6％提高至73.6％(以2计).
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胆汁酸性腹泻的诊治进展
胆汁酸性腹泻(BAD)是由过量的胆汁酸进入结肠引起.但人们对该腹泻病因的认识仍然比较局限.目前临床上将75Se-牛磺胆酸潴留试验(75SeHCAT)为诊断BAD的首选方法,其他方法包括血清中7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮(C4)、血清成纤维细胞生长因子19(FGF19)和粪便中胆汁酸的检测,以及胆汁酸多价螯合剂(BAS)的诊断性治疗.以考来烯胺为主的BAS为BAD的一线治疗,新的BAS包括考来替泊和考来维仑有较少的副作用,奥贝胆酸(OCA)作为一种新药物,未来可能有很好的发展前景.文章就目前BAD的病因、发病机制及诊治进展进行综述.
关键词： 胆汁酸性腹泻 75Se-牛磺胆酸潴留试验 胆汁酸多价螯合剂 奥贝胆酸 -
奥贝胆酸在原发性胆汁性胆管炎治疗中的应用
原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种慢性进行性自身免疫性肝病,其药物治疗往往依赖于熊去氧胆酸(UDCA).而UDCA曾是唯一获美国FDA批准治疗PBC的药物.虽然UDCA在治疗过程中有着显著的临床效果,但仍有将近40％的患者应答不佳或出现耐药.奥贝胆酸(OCA)作为一种法尼醇X受体(FXR)激动剂,已由临床试验验证具有降低血清肝生化指标的重要作用.瘙痒是OCA明显的药物不良反应,并且随着用药剂量的增加而加剧.本文就OCA在PBC治疗中的疗效和常见的不良反应作一综述.
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非酒精性脂肪性肝病相关肝细胞癌的发病机制及FXR和OCA的研究进展
非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)进展为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发病机制是相当复杂的,其中涉及多个方面,包括高胰岛素环境、细胞学机制、遗传多态性等.为预防NAFLD进展为HCC,干预和治疗NAFLD是必然的选择.法尼醇X受体(Farnesoid X receptor,FXR)的活化可以改善NAFLD的组织学特征.作为FXR激动剂奥贝胆酸(Obeticholicacid,OCA)又名6-乙基鹅去氧胆酸,是目前一种治疗NAFLD的新药物.本文就NAFLD相关HCC发病机制、FXR和OCA的研究进展作一概述.
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原发性硬化性胆管炎的药物治疗进展
原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)是一种以肝内外胆管破坏、炎症和纤维化为特征的慢性胆汁淤积性肝病.多数患者会进展为肝硬化和终末期肝病.本文概述了PSC的药物治疗进展,认为多种治疗PSC的药物处于临床试验阶段并初步显示出应用前景,但目前尚无有效药物上市,多数患者终需要进行肝移植.
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原发性胆汁性胆管炎治疗进展
原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种主要累及肝内小叶间胆管的自身免疫性肝脏疾病,可发展至肝纤维化、肝硬化甚至肝衰竭.熊去氧胆酸(UDCA)是用于PBC的一线治疗药物,可缓解疾病进程,但仍有高达40％的患者对UDCA应答不佳.2016年美国食品药品监督管理局批准法尼酯X受体激动剂奥贝胆酸(OCA)用于治疗UDCA无应答或不耐受的PBC患者.其他药物如贝特类药物、糖皮质激素、免疫抑制剂、生物制剂及间充质细胞已逐步开展临床应用,为难治性患者带来希望.
