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地塞米松对大鼠肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响
目的 探讨地塞米松对体外培养大鼠肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响.方法 用不同浓度的地塞米松处理BRL-3A细胞,于12、24、48、72、120 h后用MTT检测地塞米松对BRL-3A细胞活性的影响,同时分别用Annexin V-FITC双染法、PI单染色法、实时定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)等方法检测地塞米松对BRL-3A细胞周期和凋亡的影响.结果 MTT检测表明,地塞米松能够抑制BRL-3A细胞的活性;Annexin V-FITC双染法分析显示,地塞米松具有显著促进BRL-3A细胞凋亡的效果;PI单染色法检测细胞周期分布情况表明,地塞米松处理后的细胞与对照组相比增殖能力减弱;用Real-time PCR检测促细胞凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和促增殖基因Ccnd1和Jun的mRNA表达情况,结果显示,用地塞米松处理后的细胞中Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9均表达上调,而Ccnd1和Jun均表达下调,说明地塞米松能促进BRL-3A细胞的凋亡.结论 地塞米松可以促进BRL-3A细胞的凋亡,并抑制其增殖.
关键词： 地塞米松 BRL-3A细胞 流式细胞术 实时定量-聚合酶链反应 大鼠 -
缺氧缺血对O-2A祖细胞膜铁转运蛋白1表达的影响
目的 观察膜铁转运蛋白1(FPNl)在O-2A祖细胞缺氧缺血损伤后的表达变化,探讨其在O-2A祖细胞缺氧缺血损伤中的作用.方法 体外培养O-2A祖细胞,以特异性抗体A2B5鉴定,观察FPN1在O-2A祖细胞上的定位表达；以糖氧剥夺(OGD)法建立缺氧缺血细胞模型,CCK8法检测细胞存活率；应用免疫荧光染色法、实时荧光定量PCR法和Western blotting法观察FPN1在细胞缺氧缺血后的表达变化.结果 FPN1定位表达于O-2A祖细胞的细胞膜、细胞质和突起；OGD3h、6h、12h及24h细胞存活率呈时间依赖性降低(P＜ 0.05);OGD12h内细胞FPN1免疫荧光强度进行性减弱；与OGD0h相比,FPN1 mRNA和蛋白水平在OGD3h表达下调,OGD6h进一步降低,OGD12h低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 O-2A祖细胞缺氧缺血损伤后FPN1表达明显下调,细胞存活率显著降低,提示FPN1可能参与O-2A祖细胞的缺氧缺血损伤过程.
关键词： 膜铁转运蛋白1 缺氧缺血 实时定量-聚合酶链反应 免疫印迹法 O-2A祖细胞 -
聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥对原代培养脊柱转移瘤细胞的影响和意义
背景:目前经皮椎体成形技术已广泛应用于治疗老年骨质疏松椎体压缩性骨折以及椎体肿瘤并取得良好疗效,但仍有一些问题需关注和探讨.目的:观察聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥对脊柱转移瘤细胞周期变化和细胞凋亡的影响,分析其对脊柱转移瘤的体外抗肿瘤效应.方法:原代培养脊柱转移瘤细胞,将其分为对照组、拉丝期聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥组、冷却后聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥组,药物处理24 h后利用流式细胞术观察凋亡率以及细胞周期,通过SYBR GreenⅠ荧光实时定量-聚合酶链反应法检测肿瘤细胞Bax和Caspase-3 mRNA表达的变化.结果与结论:聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥有促进脊柱转移瘤细胞凋亡的作用,对照组、拉丝期聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥组、冷却后聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥组的凋亡率分别为(3.80±1.09)%,(43.46±8.55)%,(28.77±9.39)%,两骨水泥组均能明显提高细胞凋亡率,拉丝期聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥组作用更明显(P < 0.05).两骨水泥组均能明显减少G0/G1期细胞,增加S期细胞(P < 0.05).拉丝期聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥组作用于脊柱转移瘤细胞后Bax、Caspase-3 mRNA的表达显著高于对照组(P < 0.05).提示聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥可在体外细胞水平诱导肿瘤细胞凋亡,拉丝期聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥作用更加显著.
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分泌性中耳炎模型大鼠中耳黏膜中上皮钠通道mRNA的表达及其意义
目的 探讨上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)mRNA在分泌性中耳炎模型大鼠中耳黏膜中的表达及其意义.方法 12只SD大鼠实验耳经鼓膜注入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制造分泌性中耳炎(otitis media with effusion,OME)动物模型,在造模后第二天取中耳黏膜,采用实时定量—聚合酶链反应(real time -polymerase chain reaction,Red time PCR)检测中耳黏膜中ENaC- mRNA的表达,并与对照耳(注入等量生理盐水)相比较.结果 实验耳α—、β—、γ—ENaC- mRNA的相对表达量分别为0.007 8、0.009 2、0.007 6,对照耳α—、β—、γ—ENaC- mRNA的相对表达量分别为0.012 1、0.012 6、0.0117;实验耳相α—、β—、γ-ENaC-mRNA 相对于对照组分别下调1.56倍(P＜0.05)、1.37倍(P＜0.05)、1.53倍(P＜0.01).结论 ENaC在分泌性中耳炎大鼠模型中耳黏膜中基因转录水平发生下调,这可能是导致OME早期积液形成的机制之—.
关键词： 中耳炎 分泌性 上皮钠通道 实时定量-聚合酶链反应 -
地塞米松对气压创伤性中耳炎模型大鼠中耳黏膜上皮钠通道mRNA转录的影响
目的 探讨地塞米松对气压创伤性中耳炎模型大鼠中耳黏膜中上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)转录的影响.方法 18只清洁级SD大鼠随机分为为干预组、模型组及正常对照组,每组6只(12耳).正常对照组未予任何处理,干预组及模型组通过增加环境气压制作气压创伤性中耳炎模型,干预组在造模后连续三天腹腔注射地塞米松(2 mg/kg,加入生理盐水0.5 ml).在造模后第1、3、7天分别观察各组鼓膜形态变化;在造模后第七天取中耳黏膜,采用实时定量-聚合酶链反应(real time-polymerase chain reaction,Real time-PCR)检测各组大鼠中耳黏膜中ENaC转录情况.结果 对照组大鼠各时间段鼓膜均未见明显异常.模型组第1天每只大鼠至少有一耳鼓室内充满琥珀色积液,鼓膜充血,松弛部膨出,可见小气泡;第3天时鼓室仍有琥珀色积液,以上鼓室为著,松弛部内陷,气泡消失;第7天时未见鼓室积液,鼓膜亦基本恢复正常.干预组第1天每只大鼠至少有一耳可见鼓室内充满琥珀色积液,鼓膜充血,松弛部膨出,可见小气泡;第3天时所有大鼠双耳均未见明显鼓室积液征,鼓膜浑浊;第7天时未见鼓室积液,鼓膜亦基本恢复正常.干预组大鼠中耳黏膜α-ENaC-mRNA、β-ENaC-mRNA、γ-ENaC-mRNA均上调,分别为模型组的2.04、2.56、2.00倍(P<0.01).结论 地塞米松能加速气压创伤性中耳炎模型大鼠中耳腔内积液的清除,增加ENaC在中耳黏膜中的基因转录,可能是糖皮质激素清除中耳腔积液的机制之一.
关键词： 上皮钠通道 动物模型 气压创伤性中耳炎 地塞米松 实时定量-聚合酶链反应
