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二硝基苯肼柱前衍生-HPLC法测定水中微量甲醛和乙醛
目的 探讨二硝基苯朋(DNPH)衍生化高效液相色谱(HPTC)法测定水中微量甲醛和乙醛的方法.方法 在60℃的水浴中,水样中的甲醛和乙醛经DNPH衍生化20 min,用环己烷提取,用高效液相色谱仪测定.结果 甲醛、乙醛在0 ～ 8.0 μg/mL浓度范围内,标准曲线线性关系良好,甲醛和乙醛的相关系数r分别为0.9997和0.9996;甲醛和乙醛的相对标准偏差分别为0.5％ ～2.4％和1.1％ ～3.2％；加标回收率分别为97.6％～99.3％和98.4％ ～ 101.7％；方法低检出浓度分别为0.002和0.005 mg/L.甲醛检测结果与国标方法比较无显著性差异(P大于0.05).结论 本方法不但可同时检测水中微量的甲醛和乙醛,具有灵敏度高、选择性好、精密度和准确度好等优点,而且简便、快捷,适合大批量样品分析.
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戴安使糖类化合物色谱分析更上一层楼
糖类化合物和多元醇由于挥发性和热稳定性较低,沸点较高,因此需经过衍生化后才能进行气相色谱分析,但是由于衍生化操作麻烦,容易引入较大误差,使气相色谱法在实际应用中受到了很大的限制.毛细管电泳法虽然在分离带电荷的糖类方面具有独特的优势,但是由于大部分糖类为中性化合物,必须首先通过络合、解离或衍生使糖呈带电状态,然后再用电化学法、紫外法或荧光法检测,因而也存在操作过程复杂、容易引入误差的缺点.
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采用GC/MS方法检测苹果汁和苹果酒中的天然棒曲霉素
随着苹果生长期的延长以及苹果和苹果浓缩汁出口能力的提高，它们摄入污染产品的可能性也随之增加。棒曲霉素是一种真菌霉素，在苹果腐烂过程中产生。本文描述了一种采用安捷伦超高惰性色谱柱检测棒曲霉素的方法，该方法无需样品衍生化。该色谱分析方法可以分离5-羟甲级糠醛（H M F），它是一种由苹果产品中的糖在过度加热时生成的产物。使用聚苯乙烯-二乙烯苯SPE柱执行固相萃取，然后在注入GC/MS系统检测前用乙酸乙酯进行液/液萃取，完成样品制备。
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固相萃取-衍生化-气相色谱-质谱法测定富脂调味品中3-氯-1,2-丙二醇
目的 建立固相萃取-衍生化-气相色谱-质谱法测定富脂调味品中的3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)的方法.方法 以豆瓣酱等为代表的富脂调味品采用超声提取,碱性硅藻土固相萃取柱净化、苯硼酸衍生后采用气相色谱质谱法(GC-MS)测定3-MCPD.结果 3-MCPD的线性范围为1～ 100 ng/mL,相关系数为0.9993,3-MCPD在酱油、黄豆酱、辣椒油3种基质中的检出限分别为0.6、0.5和7.0 μg/kg,定量限分别为1.9、1.6和18.8 μg/kg.在样品中添加2.5～1000 μg/kg 3-MCPD,平均回收率为78.3％ ～ 106.7％,相对标准偏差为1.9％ ～11.6％(n=6).结论 该方法净化效果好,灵敏度、准确度均满足检测要求,可作为富脂调味品中3-MCPD含量检测的确证方法.
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固相萃取-气相色谱-质谱联用法测定蔬菜和小麦粉的恶霉灵
目的 建立一种应用气相色谱-质谱联用法测定蔬菜、小麦粉、糙米和西瓜中恶霉灵残留量.方法 前处理用乙腈提取,提取液使用固相萃取柱(2 g/10 ml)净化,终提取液用硅烷化试剂(BSTFA)进行衍生化.气相方法以DB-5ms毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm)处理,质谱选择离子监测模式(SIM)测定.结果 小麦粉和多种蔬菜的恶霉灵在0.010和0.100 mg/kg两个浓度水平的加标回收率范围为63％～101％,不同样品回收率RSD＜10％,方法检出限为0.003 mg/kg,定量限为0.005 mg/kg.结论 该方法灵敏度高,重现性好,适用于快速检测蔬菜和小麦粉的恶霉灵残留量.
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柱前衍生HPLC分析酸枣仁汤中多糖的单糖组成
目的:建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑琳酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法分离检测4种单糖和2种糖醛酸的方法.方法:采用水提醇沉法提取酸枣仁汤中多糖,中空纤维超滤膜法纯化,然后用硫酸水解,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生后,利用反相高效液相色谱法,分析单糖的PMP衍生物.以单糖PMP衍生物的峰面积大小为指标,分别对衍生化反应中反应时间、PMP与NaOH的用量、中和温度和盐酸用量进行考察,从而得到较佳的样品衍生化制备条件.并将该方法应用于酸枣仁汤中总多糖(SDP)、相对分子量＜10 kDa多糖(SDP-1)、相对分子量为10 ～ 50 kDa多糖(SDP-2)、相对分子量＞ 50 kDa多糖(SDP-3)的单糖组成分析和含量测定.结果:SDP和SDP-1均由Man-GlcUA-GalUA-Glc-Gal-Ara组成,摩尔比分别为1∶0.8∶0.7∶3.4∶3.3∶2.1和1∶0.5∶0.3∶0.6∶0.6∶0.4.SDP-2由Man-Glc-Gal-Ara组成,摩尔比为1∶2.0∶0.2∶0.3;SDP-3由Man-Glc组成,摩尔比为1∶5.4.结论:方法准确、灵敏度高,适用于酸枣仁汤中多糖的单糖组成测定.
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柱前衍生化RP-HPLC测定鸡内金中16种氨基酸的含量
采用酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生化后进行HPLC分析.采用Ultimate Prime C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A0.1 mol·L-1醋酸钠溶液(调pH至6.5)-乙腈(93∶7),流动相B乙腈-水(8∶2);流速1.0 mL· min-1;柱温40℃;检测波长254 nm;梯度洗脱.氨基酸衍生溶液在36 h内保持稳定,16种氨基酸线性相关系数均大于0.9995,加样回收率在98.01％～101.8％.该方法操作简便,精密度和重复性良好,可用于鸡内金中16种水解氨基酸含量的测定.
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衍生化LC-MS/MS测定大鼠血浆中新型抗流感药物帕拉米韦及其在药代动力学研究中的应用
目的:建立灵敏、可靠的衍生化LC-MS/MS新方法测定大鼠血浆中帕拉米韦的浓度.方法:血浆样品前处理包括蛋白沉淀和用盐酸(10 mol/L)-甲醇(10∶90, 体积比)为衍生化试剂的衍生化反应,测定采用LC-MS/MS.通过电喷雾电离源以选择反应监测(SRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m /z 343→284(帕拉米韦衍生物)和m /z 299→152(内标Ro 64-0802衍生物).色谱分离采用Zorbax RX-C8 柱(2.1 mm × 150 mm, 5 μm),以乙腈-水-甲酸(30∶70∶0.1,体积比, 0.2 ml/min)为流动相.结果: 测定帕拉米韦的线性范围为10～10 000 ng/ml,相关系数r~2为0.9940,定量下限为10 ng/ml,批内和批间RSD%分别在5.0%和7.1%以内,准确度控制在89.9%～106.1%.结论:本方法通过衍生化反应,使帕拉米韦保留时间增加,基质抑制降低并使检测灵敏度提高.该方法成功应用于帕拉米韦非临床和临床研究中.
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LC-MS法测定大鼠全血4-DMAP浓度及其在药代动力学中的应用
目的:建立测定大鼠全血4-二甲氨基苯酚(4-dimethylaminophenol,4-DMAP)的液相色谱/质谱联用法(LC-MS).方法:全血样品经乙腈蛋白沉淀后,用丹磺酰氯衍生化,LC-MS法测定其血药浓度.以乙腈-0.1%甲酸水溶液(70/30,V/V)为流动相, 用Venusil XBP-C18柱(50 mm×2.1 mm,5 ìm)分离,通过电喷雾电离源(ESI)选择性离子检测.检测离子为m/z:370.8(4-DMAP衍生物),m/z:373(内标衍生物).对Wistar大鼠(n=5),于肌注4-DMAP(15 mg/kg)后进行了血药浓度测定.结果:4-DMAP在0.02~5 ìg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9987),批内和批间精密度RSD均小于10%.结论:本法操作简单、灵敏、准确,可用于4-DMAP的临床血药浓度测定和药代动力学研究.
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衍生化液质联用法测定大鼠血浆中丹皮酚的浓度
目的 建立灵敏、可靠的衍生化液质联用法测定大鼠血浆中丹皮酚的浓度.方法 血浆样品前处理包括蛋白沉淀和用对甲苯磺酰肼为衍生化试剂的衍生化反应,测定采用液质联用法.通过电喷雾电离源以选择离子监测方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 335(丹皮酚衍生物)和m/z 479(内标孕二烯酮衍生物).色谱分离采用ZORBAX RX-C8柱(2.1 mm×150 mm,5μm),以乙腈-水-甲酸(55∶45∶0.1)为流动相,流速:0.2 ml/min.结果 测定丹皮酚的线性范围为2～2000 ng/ml,r 2为0.9993,定量下限为2 ng/ml,批内RSD为3.2％,准确度控制在89.7％～115.1％以内.结论 该法通过衍生化反应,使丹皮酚保留时间增加,基质抑制降低并使检测灵敏度提高,成功地应用于大鼠血浆中丹皮酚的药代动力学研究.
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柱前衍生化HPLC法测定积雪草及三金片中积雪草苷的含量
目的建立积雪草中积雪草苷的柱前衍生化高效液相色谱测定法,并用该法测定积雪草和三金片中积雪草苷的含量.方法以吡啶-苯甲酰氯为衍生化试剂,对积雪草苷分子中的羟基进行苯甲酰化后,采用RP-HPLC法测定.色谱柱:Spherisorb ODS C18柱;流动相:甲醇-四氢呋喃-水(90∶4∶6,0.1%三乙胺);柱温:25℃;流速:0.8 ml.min-1;检测波长:235 nm;内标物:VD3.结果积雪草苷0.396～3.960 μg与峰面积比呈线性关系,相关系数为0.9985.用此法对不同产地的积雪草和三金片中积雪草苷进行测定,结果积雪草中积雪草苷的平均回收率为99.6%,RSD为2.3%(n=6);三金片中积雪草苷的平均回收率为99.2%,RSD为2.7%(n=6).结论此法准确、灵敏度高、重现性好,为中药积雪草和中成药三金片的质量评价提供了科学依据.
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人参皂苷衍生化及其抗肿瘤构效关系研究进展
人参皂苷为三萜类化合物,其某些衍生物在抑制肿瘤细胞生长或转移、诱导肿瘤细胞凋亡和分化、逆转肿瘤多药耐药等药理活性方面强于人参中主要的原生皂苷,人参皂苷衍生物作为抗肿瘤药物具有研究价值和开发前景.本文对人参皂苷衍生化的方法、主要衍生物及其抗肿瘤构效关系进行归纳总结,为新的抗肿瘤药物研究和开发提供参考.
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基于超滤反应器的蛋白质N-糖基化快速分析方法
随着生物科技的发展,蛋白质药物正越来越多地被应用在疾病诊疗的各个方面.但是蛋白质的匀质性,特别是蛋白质N-糖基化修饰成为限制蛋白质药物发展的瓶颈,因此蛋白质N-糖基化修饰的分析方法正逐渐成为蛋白质药物研发的关键技术.为了提高蛋白质N-糖基化修饰分析效率,本文建立了基于超滤反应器的N-糖分离纯化方法.新处理方法大幅提高了含N-乙酰基葡萄糖N-糖的提取效率(10％～20％),避免了唾液酸结构的降解(20％～100％),同时将处理时间缩短至30 min.通过与HPLC-HRMS分析方法联用,提高了样品分析效率.本文建立了高效、可靠,适合蛋白质药物的N-糖基化修饰分析方法.
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柱前衍生化结合UHPLC-MS/MS法同时测定Beagle犬血浆中的红景天苷和酪醇
本文建立了同时测定Beagle犬血浆中红景天苷及酪醇浓度的柱前衍生化结合UHPLC-MS/MS的分析方法.血浆样品用乙腈沉淀蛋白后,上清液与丹磺酰氯进行衍生化反应,终止反应后采用甲基叔丁基醚进行提取,提取物复溶后经反相色谱分离,色谱柱为ACQUITY UPLC(R) BEH C18,(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),流动相为乙腈(含0.1％甲酸)-水(含10％乙腈,0.1％甲酸),梯度洗脱,分析时间为9 min.在正离子条件下采用多反应监测模式对两种待测物进行同时测定.用于定量分析的离子对分别为m/z 534.2→372.0(红景天苷衍生物),m/z 372.0→171.0(酪醇衍生物)和m/z 506.0→171.0(内标熊果苷衍生物).在上述条件下,红景天苷和酪醇分别在0.02～20和0.1～10 μmol·L-1内线性良好,定量下限分别为0.02和0.1 μmol·L-1;批内、批间精密度均小于8.68％;准确度在±11.4％范围之内.本方法灵敏度高,专属性好,适合用于Beagle犬灌胃给药后血液中红景天苷、酪醇的药动学研究.
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高效液相色谱法测定多粘菌素B1在大鼠体内的浓度
目的 建立高效液相色谱法测定大鼠血浆和尿液中多粘菌素B1(多肽类抗生素)的含量.方法 用Onyx Monolithic C18色谱柱,Torrance C18预柱,流动相为乙腈-四氢呋喃-水(50∶ 25∶25),流速1.0 mL·min-1,激发波长260 nm,发射波长315 nm.结果 血浆和尿液中多粘菌素B1的线性范围分别是0.12～4.00 μg·mL-1(γ =0.998)和0.12～4.00 μg·mL-1 (γ =0.9964),日间与日内精密度均＜15％.结论 该方法快速、准确、稳定、特异,适用于多粘菌素B1在大鼠体内的药代动力学研究.
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高效液相色谱法测定人工脑脊液中谷氨酸的浓度
目的 建立高效液相色谱测定大鼠脑脊液中谷氨酸含量的方法.方法 微透析实验收集到的脑脊液样品用邻苯二甲醛、β巯基乙醇衍生化反应后,高效液相色谱法分离.用RP18色谱柱,流动相A为50 mmol·L-1乙酸钠(乙酸调pH为6.7),流动相B为甲醇/四氢呋喃(97.5/2.5,v/v),用二元梯度洗脱,梯度程序为(T,B％)(0,30)(7,45)(14,30) (20,30),流速1.0 mL·min-1,荧光检测器定量,激发波长340 nm,发射波长450 nm.用高钾脑脊液灌流,考察大鼠纹状体内谷氨酸的变化.结果 谷氨酸的线性范围为3.12×10-2～1.00 mg· L-1(γ=0.9998),日内、日间精密度均＜15％,低、中、高浓度回收率分别为(96.6±6.1)％,(99.1±7.7)％,(96.2±4.1)％.高钾人工脑脊液灌流后,谷氨酸明显升高后降低,随后又有升高的趋势.结论 本方法准确,稳定,灵敏,适用于微透析样品中谷氨酸的定量分析.
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液相色谱法串联质谱法测定人血浆中雌二醇含量
目的：建立血浆中雌二醇含量测定的液相色谱串联质谱方法。方法以雌二醇－d3为内标，用正己烷－甲基叔丁基醚（50∶50）对血浆中雌二醇进行提取，在碱性条件下经丹磺酰氯衍生化。色谱柱：Atlantis T3（2．1 mm ×100 mm，5．0μm），流动相：乙腈－0．1％甲酸，流速：0．5 mL? min－1，柱温：30℃，检测器：API5500，进样量：10μL。用电喷雾离子化源以正离子模式，用多重反应监测模式进行检测。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、稳定性。结果雌二醇在1．0～100．0 pg? mL－1内线性良好（ r＝0．9985），低定量下限为1．0 pg? mL－1，其标准曲线为y＝5．47×10－2 x＋4．67×10－2。日间、日内精密度均小于15％，绝对回收率在97％以上，稳定性良好。结论本方法准确度好，灵敏度高，专属性强，适用于雌二醇透皮贴片的药代动力学研究。
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GC/NPD检测尿液中丁丙诺啡
目的 建立尿液中丁丙诺啡GC/NPD分析方法.方法 尿液中添加丁丙诺啡,加β-葡萄糖醛酸酶溶液0.15 ml,50℃水解2 h,加入内标长春西汀,加pH 7缓冲溶液,用三氯甲烷提取,提取物经BSTFA衍生化后进行GC/NPD分析.结果 方法的线性范围为5～100 μg/L,检出限为1 μg/L.结论 该方法灵敏度高,可用于涉毒案件尿液中丁丙诺啡的分析.
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顶空气相色谱法测定塞来昔布中硫酸二乙酯基因毒性杂质
目的:建立塞来昔布中硫酸二乙酯基因毒性杂质的气相色谱测定方法.方法:采用DB 624毛细管色谱柱(30m×0.53 mm,3μm)分离,氮气为载气,碘化钠衍生-顶空进样,甲磺酸异丙酯使用内标法,电子捕获检测器测定塞来昔布中硫酸二乙酯的含量.结果:硫酸二乙酯在40 ～ 200 ng· mL-浓度范围内线性关系良好;平均回收率为90.37％,RSD为5.38％;低检测限为20 ng· mL-1,低定量限为40 ng· mL-.在3批塞来昔布供试品中均未检出硫酸二乙酯杂质.结论:建立的硫酸二乙酯基因毒性杂质检测方法专属性好、灵敏度高,适用于塞来昔布及其合成中间体中硫酸二乙酯的测定.
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柱前衍生化高效液相色谱法测定全蝎中游离牛磺酸的含量
目的:建立全蝎中游离牛磺酸的含量测定方法.方法:采用50％乙醇超声提取全蝎中的游离氨基酸,异硫氰酸苯酯柱前衍生化后进行反相高效液相色谱分析.色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(150mm×4.6 mm,5μm),以0.07 mol·L-1醋酸-醋酸钠缓冲液-2.5％乙腈(pH=6.5)为流动相A,乙腈-甲醇-水(40:15:45)为流动相B,流速1.0 mL· min-1,检测波长254 nm.结果:牛磺酸在0.0083～0.4148 μg范围呈良好的线性关系(R2=0.999 9)；平均回收率为102.1％,RSD为1.6％(n=6)；全蝎中游离牛磺酸含量在0.0269％～1.27％之间.结论:该方法灵敏度高,重复性好,结果准确可靠,可用于全蝎的质量控制.
