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“一哥”达菲的故事
达菲(Tamiflu)是化合物奥司他韦(Oseltamivir)的商品名.Tamiflu在香港音译为"特敏福",在台湾意译为"克流感".这是一种流感病毒神经氨酸酶抑制剂,通过作用于流感病毒神经氨酸酶,抑制成熟的流感病毒脱离宿主细胞,从而抑制流感病毒在人体内的传播以起到预防和治疗甲型和乙型流感的作用,是公认的抗禽流感、甲型H1N1病毒有效的药物之一.继2003年SARS和2005年的H5N1禽流感爆发后,今年春天的H7N9禽流感又再次将达菲推到了疫情暴发时的"一线"药品行列.可以说,达菲的故事也是春天流感的故事,这个故事的闪光点映射出药物开发人员的学识智慧和制药大亨们的坚毅果断.
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甲型H1N1流感疫情防控救治体会25例
20009年10～11月收治甲型H1N1流感患者25例,确诊病例20例,临床诊断病例5例,其中男17例,女8例,重症患者4例,由于我院当时无神经氨酸酶抑制剂,对所有患者仅进行一般治疗,中成药治疗,对症支持治疗等措施,25例全部痊愈出院.
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抗流感病毒药物的回顾、现状和展望
抗流感病毒治疗作为救治流感感染的关键手段,但目前临床可及的有效抗病毒药物仅有神经氨酸酶抑制剂(neuraminidase inhibitors,NAIs).由于NAIs疗效的限制和耐药情况的出现,亟需研发疗效更优和耐药率更低的新型抗流感病毒药物.目前,诸多不同抗流感病毒机制的药物已处于上市前临床试验阶段.
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流感病毒神经氨酸酶广谱抑制多肽的筛选研究
以纯化的流感病毒颗粒H1N1、H3N2为靶点对噬菌体展示的随机12肽库进行了筛选.经ELISA、神经氨酸酶抑制活性鉴定,获得52个阳性噬菌体克隆.根据测序和氨基酸序列分析,挑选出不同克隆间同源性高的6条多肽进行化学合成.神经氨酸酶抑制活性实验显示,6条多肽中54-N1和69-N2的抑制活性强,对N1、N2和乙型流感病毒三种流感病毒神经氨酸酶均有明显的抑制活性,54-N1的IC50值为7.486～14.693 μmol/L,69-N2的IC50值为6.605～13.007 μmol/L.同时,54-N1和69-N2可抑制流感病毒在MDCK细胞中的生长.病毒空斑抑制实验显示,54-N1和69-N2可明显抑制空斑形成的大小和数目.通过分析,54-N1的IC50值为18.38～31.76 μmol/L,69-N2的IC50值为16.56～25.49 μmol/L.两条多肽的浓度在高达10mmol/L时仍对细胞无任何毒性.54-N1和69-N2作为新的流感病毒神经氨酸酶抑制剂,与现有NA抑制剂Oseltamivir进行了比较和讨论,为进一步研制局部应用的广谱抗流感病毒的鼻腔喷雾剂奠定了基础.
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2013～2014年流感流行季节中国大陆B型流感病毒对NAI的敏感性
为了解近期我国大陆流行的B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂类药物的敏感性,本文对2013年10月至2014年3月流感流行季节期间中国大陆分离的884株B型流感病毒进行了生物学耐药监测.884株B型流感毒株中所有毒株均对oseltamivir敏感,检测到2株(0.23％)对zanamivir敏感性降低的毒株,其他毒株均对zanamivir敏感.其中38株B/Victoria系毒株中B/Shandong-Kuiwen/1195/2014对zanamivir的IC50值为1.78 nM,较药物敏感参考株的IC50平均值(0.34 nM)高5.12倍,表明对zanamivir的敏感性降低,在NA基因上没有发现存在已知耐药位点变异,但有D35G,N59D和S402T(N2编码分别为39、64和399位)氨基酸位点的变异;846株B/Yamagata系毒株中B/Hunan-Lingling/350/2013对zanamivir的IC50值为2.72 nM,较药物敏感参考株的IC50平均值(0.34nM)高7.99倍,表明对zanamivir的敏感性降低,NA基因发生了D197N(N2编码为198位)氨基酸位点的变异.根据结果可以推断目前我国流行的B型流感毒株对神经氨酸酶抑制剂类药物敏感.
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流感病毒神经氨酸酶抑制剂药物耐药现状及机制研究进展
流感病毒可引起急性呼吸道传染病,严重危害人们的身体健康.神经氨酸酶抑制剂(NAI)是以神经氨酸酶为靶点的药物,可以有效抑制甲型和乙型流感病毒复制,是目前流感预防和治疗的一线用药.然而由于NA或者HA的突变,导致病毒对该药耐药.不同亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的耐药情况也不同,不同的检测方法也对判断病毒是否耐药有影响.
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奥司他韦对我国A(H3N2)亚型流感病毒红细胞凝集和抑制试验的影响
比较加入神经氨酸酶抑制剂奥司他韦(Oseltamivir)对我国A(H3N2)亚型流感病毒红细胞凝集(Hemagglutination,HA)和凝集抑制(Hemagglutinin inhibition,HI)试验结果的影响,以期获得病毒更真实的HA和抗原性变异分析结果.选择2014年10月-2015年5月在中国大陆分离的395株A(H3N2)亚型流感病毒,在HA及HI试验中加入神经氨酸酶抑制剂Oseltamivir,对实验结果进行比较分析,根据HA试验,挑选其中部分毒株进行基因组测序,比较NA氨基酸位点变异情况.在HA试验中加入神经氨酸酶抑制剂Oseltamivir后,44.8％的毒株HA滴度未改变;43.8％的毒株HA滴度下降,仅有11.4％的毒株HA滴度升高.加入Oseltamivir后,与A/TX/50/2012鸡胚株抗原性类似的毒株的比例高于未加入Oseltamivir时,与A/SZ/9715293/13细胞株抗原性类似的毒株的比例低于未加入Oseltamivir时类似株的比例,统计学分析有显著性差异.以A/TX/50/2012细胞分离株和A/SZ/9715293/133鸡胚分离株作为参考病毒,Oseltamivir对实验结果的影响无显著性差异.挑选19株A(H3N2)亚型流感毒株进行基因组测序,进行NA蛋白氨基酸位点分析,与A/TX/50/2012鸡胚分离株相比加入20nM Oselta-mivir后,滴度降低超过4倍的5株毒株,没有共同氨基酸位点变异,但A/山东莱城/119/2015流感毒株有D151G氨基酸位点突变;A/吉林铁西/1194/2015流感毒株有V412I和T434A氨基酸位点变异.加入20nM Osehamivir后,滴度降低为2～4倍的毒株,具有I26T、G93S、V149I、N234D、T267K、S416G等位点突变.在对我国近年流行的A(H3N2)亚型流感病毒进行血凝滴度和抗原性分析中,加入Oseltamivir可获得更为真实的HA和HI结果,分析病毒的变异情况,评价疫苗的匹配性.
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2013～2017年中国大陆流行的A(H3N2)亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的敏感性分析
为了解我国大陆流行的A(H3N2)亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的敏感性,本文对2013年至2017年分离自30个省(自治区/直辖市)的4907株流感病毒进行了生物学耐药检测.4907株A(H3N2)亚型流感毒株均对Oseltamivir敏感,检测到7株(0.14％)对Zanamivir敏感性降低的毒株,其中2014年6株,检测的IC50值与参考IC50值(0.28nM)相比有24.03～49.21倍升高,序列分析发现6株毒株在NA基因上均有Q136K的变异;2017年l株,在NA基因上有Q136Q/K的混合变异,检测的IC50值与参考IC50值(0.31nM)相比有10.90倍的升高.上述检测毒株均来自MDCK细胞病毒分离培养物,由于未获得原始呼吸道咽拭子样本的序列,尚不能排除是细胞传代导致的Q136K位点突变.因此,上述监测数据表明2013～2017年我国大陆流行的A(H3N2)亚型流感毒株对神经氨酸酶抑制剂依然敏感,本研究为临床抗流感病毒药物的使用提供了科学依据.
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抗流感病毒药物研究进展
流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，具有流行面广、传染性强、发病率高等特点，其波及范围之广、造成经济损失之大位于传染性疾病之首[1]。近年来，随着全球物种活动范围的加大，人、禽、猪和其他种属间流感病毒基因重组的概率大大增加，使流感病毒变异性增强[2]，产生了具有高致病性的新变种病毒[3]。目前，应对流感病毒感染的主要措施是疫苗接种和药物治疗。疫苗接种很难使老人、儿童等高危人群产生有效免疫，且不能为机体提供广泛持久的免疫防护；同时流感病毒株不断的进化和新病毒株的出现，更大大降低了疫苗的有效性[4]；因此药物治疗仍然是好的控制流感病毒传播的手段[5]。目前 FDA已批准上市的抗流感病毒药物，包括2个神经氨酸酶抑制剂（奥司他韦和扎那米韦）和2个 M2离子通道抑制剂（金刚烷胺和金刚乙胺），CFDA除已批准上述4个药物上市外，还批准了一个神经氨酸酶抑制剂（帕拉米韦）上市。近十年来，这些抗流感病毒药物在体内外诱生出大量的耐药病毒株，如 H1N1病毒对奥司他韦产生了耐药、H1N1病毒和 H3N2病毒对金刚烷胺产生了耐药[6]，因此，设计研发新型抗流感病毒药物已迫在眉睫。
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深圳市2008-2009年A型H1N1季节性流感病毒神经氨酸酶抑制剂耐药性监测
目的 对深圳市2008-2009年分离到的H1N1季节性流感病毒神经氨酸酶(NA)抑制剂的耐药性进行监测.方法 根据原始临床样本的采集时间,按周抽取了55株2008-2009年分离到的H1N1季节性流感病毒,对其NA片段进行全长测序,选取WHO推荐的疫苗株和部分国内外分离到的H1N1季节性流感病毒作为参考株,运用Mega3.1软件进行种系发生树的构建、耐药相关位点及糖基化位点的分析.结果 对NA片段的序列分析发现2008年有2株(7.1%)出现了H275Y突变,但是2009年则有25株(92.6%)出现了该突变.提示H275Y达菲耐药突变株成为了2009年深圳市社区传播的优势株.同时还发现了一株Q136K变异株,显示对乐感清出现耐药.分子进化分析结果显示,H275Y变异成为了毒株在系统进化树上分布的主要依据.所有的深圳株NA片段上潜在的糖基化位点序列保守.结论 大量H275Y达菲耐药株的出现提示在今后的工作中应当密切关注流感病毒的耐药进展,进一步加强其耐药机制的研究.
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2014-2015监测年度中国B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的敏感性
目的：分析2014—2015流感监测年度我国B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的药物敏感性。方法选择本监测年度中国分离的1386株B型流感病毒,进行生物学耐药检测,检测病毒对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性。结果在检测的1386株B型流感病毒中,94株Victoria系病毒均为奥司他韦及扎那米韦的敏感株。1292株Yamagata系病毒中,有1株病毒只对奥司他韦敏感性降低,其NA基因存在I221T位点突变；有10株病毒仅对扎那米韦敏感性降低,此10株病毒中有4株病毒NA基因存在D197N氨基酸位点突变；有3株病毒对2种药物的敏感性均降低,此3株病毒的NA基因均具有D197N位点突变；另有1株病毒对奥司他韦敏感性降低,同时又对扎那米韦敏感性高度降低,其NA基因具有A245T位点突变。结论2014—2015流感监测年度我国B型流感病毒中绝大多数病毒对神经氨酸酶抑制剂敏感,临床上可继续使用此类药物对流感患者进行治疗。应持续进行耐药性监测,密切关注B型流感病毒D197N位点突变情况,及时发现耐药病毒。
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认识流感的疾病负担积极应对流感流行
2017年入冬以来,北半球温带地区流感活动继续上升,我国南、北方省份流感活动均处于冬季流行高峰水平.流感的局部暴发,对医疗机构造成巨大压力.要做到早期有效应对,要先认识流感的危害和疾病负担,因为流感不是"感冒".本文对流感的流行形式、并发症、易感人群、治疗及预防措施进行综述.在流感流行季节,医疗机构是流感患者集中的场所,只有早期采取包括早诊早治、医院感染控制等综合应对措施,才能大限度地减少重症病例,减少住院、死亡以及传播的风险.
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磷酸奥司他韦2日疗程治疗流行性感冒样病例的临床随机对照研究
流感是冬春高发的急性呼吸道传染病,由流感病毒引起.受流感波及的人群广泛,危害很大.于1994年研制成功的磷酸奥司他韦是流感病毒神经氨酸酶抑制剂,可用于流感的治疗和预防,其疗效已在国内外得到证实.
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抗流行性感冒病毒药物的应用进展
流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,其发病率居传染病首位.发病快,传播迅速,易引起世界范围的大流行,老年人及免疫力低下者更易出现合并症而死亡.目前流感仍威胁着人类的健康,因此,研究和开发新型更有效的预防和治疗流感的药物非常重要.神经氨酸酶抑制剂的临床使用,为流感的防治提供了更有效的手段[1].
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流行性感冒早期诊断的重要性
流行性感冒(流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染性疾病,人群具有广泛易感性,世界范围内每年都有流感流行,年发病率达10%～30%.历史上曾有4次大流行,对人类健康带来严重威胁,对社会经济造成巨大损失.流感病毒疫苗接种对预防流感流行有一定作用.随着近年来抗病毒药物神经氨酸酶抑制剂的应用,流感的治疗亦取得很大进展,使病程缩短,并发症减少,并且对减少流感传播亦起一定作用.关键在于早期诊断,因为药物治疗只有在早期(起病1～2天内)使用,才能发挥应有效果.
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流感病毒对神经氨酸酶抑制剂耐药性的研究进展
流感病毒是流行性感冒的病原体,该类病毒传播速度快、感染性强,对公共卫生造成重大威胁.目前,一线抗流感病毒药物神经氨酸酶抑制剂已在临床上广泛使用,相应的耐药株逐渐出现,为流感的防治带来困难.本文对流感病毒结构特点、耐药分子机制、耐药株流行现状和耐药性检测方法作了综述,旨在为今后的流感病毒耐药性研究和临床用药提供参考.
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重症病毒性肺炎的抗病毒治疗
儿童重症病毒性肺炎病因主要包括腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒A和B型、巨细胞病毒等.新型病毒如甲型H1N1流感病毒、禽流感病毒(H5N1、H7N9)等也可能引起流行.利巴韦林是治疗呼吸道合胞病毒、腺病毒肺炎等的有效药物.阿昔洛韦或更昔洛韦常用于EB病毒或免疫缺陷和免疫抑制患者的巨细胞病毒肺炎.目前认为流感和季节性流感尽早使用神经氨酸酶抑制剂(neuraminidase inhibitor,NAI)奥司他韦,可减轻流感样症状、缩短发热时间,减少流感合并症.耐药或口服困难时使用扎那米韦和帕拉米韦.某些中药制剂如麻杏石甘汤-银翘散等治疗流感病毒感染可以获得类似于奥司他韦的效果.
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北京地区37例流感患者的病毒遗传变异及耐药突变分析
目的 分析2013-2014年度北京地区A型H1N1、H3N2和B型流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传变异情况,以及流感病毒对金刚烷胺类和NA抑制剂类(NAIs)抗病毒药物的耐药变异情况.方法 从37例流感病毒感染患者的鼻/咽拭子样本中提取RNA,采用荧光定量PCR检测流感病毒的基因型/亚型;反转录PCR方法扩增A型流感病毒的NA和基质蛋白M2(M2)基因片段及B型流感病毒的NA和血凝素(HA)基因片段,直接DNA测序.采用Mega软件构建系统进化树分析病毒的演变情况,Vector NTI软件分析耐药变异情况.结果 37例患者中共检出A型流感病毒29例,其中H1N1 23例,H3N2 6例;B型流感病毒8例.所有A型流感病毒均发生M2基因S31N金刚烷胺类药物耐药位点变异.A型和B型流感病毒均未发现NAIs耐药位点变异.系统进化分析显示,B型流感病毒有5例样品NA基因和HA基因分型不一致,NA基因均为B-Victoria系,而HA基因为B-Yamagata系.结论 北京地区人群A型流感病毒均对金刚烷胺类药物耐药,但A型和B型病毒均未检测出NAIs耐药变异.B型流感病毒流行株中存在B-Yamagata系和B-Victoria系重组病毒株.
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衍生化LC-MS/MS测定大鼠血浆中新型抗流感药物帕拉米韦及其在药代动力学研究中的应用
目的:建立灵敏、可靠的衍生化LC-MS/MS新方法测定大鼠血浆中帕拉米韦的浓度.方法:血浆样品前处理包括蛋白沉淀和用盐酸(10 mol/L)-甲醇(10∶90, 体积比)为衍生化试剂的衍生化反应,测定采用LC-MS/MS.通过电喷雾电离源以选择反应监测(SRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m /z 343→284(帕拉米韦衍生物)和m /z 299→152(内标Ro 64-0802衍生物).色谱分离采用Zorbax RX-C8 柱(2.1 mm × 150 mm, 5 μm),以乙腈-水-甲酸(30∶70∶0.1,体积比, 0.2 ml/min)为流动相.结果: 测定帕拉米韦的线性范围为10～10 000 ng/ml,相关系数r~2为0.9940,定量下限为10 ng/ml,批内和批间RSD%分别在5.0%和7.1%以内,准确度控制在89.9%～106.1%.结论:本方法通过衍生化反应,使帕拉米韦保留时间增加,基质抑制降低并使检测灵敏度提高.该方法成功应用于帕拉米韦非临床和临床研究中.
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抗流感病毒药物的研究进展
流感是流感病毒引起的急性呼吸道传染病.由于抗原变异频繁,疫苗的预防效果不理想,所以,抗流感病毒药物研究显得更加重要.目前,离子通道阻断剂和神经氨酸酶抑制剂正式应用于临床,但有耐药性和部分不良反应;流感病毒吸附抑制剂、细胞-病毒膜融合抑制剂和反义寡核苷酸正处于实验室研究阶段,在体内外实验中有良好的抗病毒活性;RNA干扰在抗流感病毒方面具有诸多优势,已有实验证实小干扰RNA具有抑制流感病毒作用,可能成为新一代抗流感病毒药物.
