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积雪草苷对足细胞骨架及 p38通路的影响
目的：探讨积雪草苷对阿霉素诱导的足细胞中的细胞骨架及 p38通路的影响。方法用1μmol/ L 阿霉素制造足细胞损伤模型，检测荧光显微镜观察足细胞骨架蛋白，Western blotting 检测足细胞 p38信号通路的磷酸化水平。结果与模型对照组相比，积雪草苷预孵育后足细胞骨架的结构得以很好的保存。p38抑制剂 SB203580拮抗阿霉素对足细胞的损伤，足细胞骨架结构较好。阿霉素（1μmol/ L）显著升高 p38的磷酸化水平，与空白对照组比较差异有统计学意义（P <0.05），提示阿霉素可诱导 p38通路的活化。积雪草苷预处理细胞后，能够有效地遏制阿霉素诱导的 p38通路活化，使 p38的磷酸化水平显著降低，与模型对照组比较差异有统计学意义（ P <0.05）。p38抑制剂SB203580能拮抗阿霉素诱导的足细胞 p38磷酸化，与模型对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）。结论积雪草苷可以通过抑制 p38磷酸化减少阿霉素对足细胞骨架的损伤作用。
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近红外漫反射光谱法快速测定积雪草总苷中积雪草苷的含量
目的：建立近红外漫反射光谱法快速测定积雪草总苷中积雪草苷的含量方法。方法：采用高效液相色谱法测定市场上流通的66批次积雪草总苷中积雪草苷的含量，同时采集近红外漫反射光谱，对原始光谱进行多元散射校正（ MSC）、二阶导数（2D）和Norris导数（ND）平滑等光谱预处理方法，采用偏小二乘回归法（PLSR）建立近红外定量校正模型，实现积雪草总苷中指标性成分积雪草苷含量的快速测定。结果：所建立的积雪草苷近红外定量校正模型，验证集相对误差RMSEP、标准偏差与标准误差的比值RPD分别为0.0352和6.47，表明所建近红外模型预测准确度高。同时，校正集均方根误差RMSEC和验证集均方根误差RMSEP接近，分别为1.17和1.25，交叉验证均方根误差RMSECV为3.43，表明所建近红外模型稳健性好。结论：所建立的积雪草苷近红外定量校正模型具有很好的预测准确度和稳健性，为市场上积雪草总苷质量的快速评价提供方法。
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积雪草苷对高脂饲料诱导的肥胖小鼠降脂作用研究
目的:观察积雪草苷对高脂饲料诱导的肥胖小鼠的降脂作用.方法:7周龄雄性C57BL/6J适应性饲养1周后,体质量随机分为正常组,高脂组,积雪草苷15、30、60mg/kg剂量组和非诺贝特40mg/kg组,正常组给予普通饲料,其余各组给予高脂饲料喂养,同时灌胃给予相应的药物或0.5％CMC-Na溶液.给药10周后,检测各组小鼠24h摄食量,血清三酰甘油(TG),总胆固醇(TC)浓度.分离脂肪组织,称湿重.RT-PCR法和Western Blot法检测附睾脂肪组织过氧化物酶体增值物激活型受体-γ (PPAR-y)和肝组织PPAR-α的mRNA和蛋白表达量.结果:与高脂组比较,积雪草苷30、60mg/kg剂量组小鼠的体质量,血清TG,脂肪组织湿重比较显著降低,肝脏组织PPAR-α mRNA和蛋白表达量显著升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:积雪草苷对于高脂饲料诱导小鼠具有一定的预防肥胖和降脂的作用,其机制可能与上调肝脏PPAR-α表达,干预内源性T℃合成有关.
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不同产地积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷含量测定
目的采用高效液相法测定不同产地积雪草药材中积雪草苷和羟基积雪草苷含量。方法采用VP-ODS色谱柱，流动相为乙腈-水梯度洗脱，流速1.0mL·min-1，检测波长204nm，柱温40℃。结果积雪草苷和羟基积雪草苷的平均回收率分别是99.7%、101.4%，RSD分别是1.68%、1.07%（n=6）。结论不同产地的积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷的含量差别较大，广西柳州和广东湛江所产的积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷含量较高。
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HPLC同时测定参积护胃颗粒中积雪草苷、延胡索乙素、柴胡皂苷d含量
目的 建立参积护胃颗粒中积雪草苷、延胡索乙素、柴胡皂苷d含量测定的HPLC分析方法.方法 采用广州研创C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-磷酸盐缓冲液(含磷酸二氢钾8.34‰、磷酸氢二钾0.87‰),梯度洗脱(0～15 min,20％A;15～30 min,20％→40％A;30～42 min,40％A;42～45 min,40％→48％A;45～50 min,48％A;50～70 min,48％→50％A),流速1.0 mL/min,检测波长210 nm,柱温30℃.结果 积雪草苷、延胡索乙素、柴胡皂苷d分别在0.173～2.770μg(r=0.9999)、0.021～1.320μg(r=0.9992)、0.151～9.660μg(r=0.9993)范围内呈良好线性关系.积雪草苷、延胡索乙素、柴胡皂苷d平均加样回收率分别为96.25％、97.02％、97.84％,RSD分别为2.31％、4.51％、1.87％.结论 该含量测定方法简便、分离效果好、专属性强,能同时测定参积护胃颗粒中积雪草苷、延胡索乙素、柴胡皂苷d的含量,为参积护胃颗粒质量标准的完善提供依据.
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三金片质量标准研究
目的:建立三金片的质量标准.方法:采用TLC法对处方中的金樱根、积雪草进行鉴别;采用TLCS法测定积雪草苷的含量.结果:在TLC色谱中均能检出金樱根、积雪草;含量限度积雪草苷不少于0.30mg/片.结论:所建立的方法简便可行,重复性好.
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HPLC-ELSD测定积雪草提取物中积雪草苷的含量
目的:用HPLC-ELSD测定积雪草提取中积雪草苷的含量.方法:色谱柱为HiQ siL KYA-C18分析柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱;漂移管温度105℃;载气流速2.9 L·min-1.结果:积雪草苷在0.35～7.0 μg呈良好线性关系;积雪草提取物中积雪草苷的回收率为94.9%(RSD 1.7%).结论:该方法简便、准确、分离效果好,无干扰,可用于积雪草提取物中积雪草苷的质量评价.
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积雪草苷防治支架再狭窄的生化调节机制
目的:探讨积雪草苷能否作为生化调节剂,有效减轻内皮细胞损伤,进一步抑制支架术后内中膜增生.方法:选取原代人主动脉平滑肌细胞和主动脉成纤维细胞各1株,每株细胞设空白对照组、雷帕霉素组(Rapa)、积雪草苷组(At)、积雪草苷+雷帕霉素组.利用qRT-PCR检测平滑肌细胞和成纤维细胞TGF-β1(转化生长因子1),Smad7,Ⅰ型胶原基因表达水平,通过ELISA检测Ⅰ型胶原蛋白表达量,计算积雪草苷和雷帕霉素两药相互作用指数(CDI).另将16只中华小型猪随机分为A,B2组,前降支球囊大压力预扩后,植入同型雷帕霉素支架1枚.术后A组予生理盐水30 mL·d-1静脉注射;B组予积雪草苷30 mg·kg-1·d-1(生理盐水稀释至30 mL)静注.术后7,14 d ELISA法检测2组血浆vWF(血管性血友病因子)表达水平;术后28 d复查冠脉造影,取支架血管段组织切片及染色,计算血管面积、支架内面积、管腔面积和新生内膜面积.结果:与对照组相比,两药联合组显著上调平滑肌细胞和成纤维细胞Smad7基因,下调TGF-β1,显著抑制Ⅰ型胶原基因表达(P＜0.01);平滑肌细胞中,两药联合组与Rapa组对Ⅰ型胶原抑制无显著性差异,CDI为0.83;成纤维细胞中,两药联合组优于Rapa组,存在显著性差异(P＜0.05),CDI为0.77.小型猪术后7,14 d,B组血浆vWF水平均显著低于A组(P＜0.05);术后28 d,2组血管面积和支架内面积无统计学差异;B组管腔面积显著大于A组(P＜0.05),B组新生内膜面积显著小于A组(P＜0.05).结论:积雪草苷通过上调Smad7蛋白表达,抑制TGF-β1表达,显著减少胞外基质合成与分泌,进一步抑制支架术后内中膜增生,减轻内皮细胞损伤,是雷帕霉素的有效生化调节剂.
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积雪草苷的闪提工艺优选及不同提取方法的比较研究
目的:优选闪式提取工艺,研究积雪草的提取方法.方法:采用正交试验进行工艺优化,高效液相法测定积雪草苷的含量.结果:以积雪草苷的含量指标,优选的闪式提取的佳条件为时间4 min,80％乙醇,液料比为5:1；加热回流、超声波、闪式提取3种方法中闪式提取的浸膏收率高(4.39％),加热回流提取的积雪草苷质量分数高(1.99％).结论:从提取方式时间短、节约能源等方面考虑,3种提取方法中,闪式提取法是较好的提取积雪草苷的方法.
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积雪草苷对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化影响的研究
目的:为临床应用积雪草苷防治肾间质纤维化提供实验依据.方法:SPF级雌性SD大鼠32只,随机分为假手术组、模型组、积雪草苷组和地塞米松组,每组8只.除假手术组的其他各组大鼠行手术切断右侧输尿管,建立单侧输尿管梗阻大鼠模型,积雪草苷组进行灌胃输入药液0.65mg/100g体质量,地塞米松组进行灌胃输入药液0.05mg/100g体质量,假手术组和模型组组给予等体积生理盐水.术前1d用药,共15d.术后14d收获动物,分别测定24h血、尿生化指标;梗阻侧肾脏做免疫组化检测结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)、胶原Ⅲ(CollagenⅢ,ColⅢ).结果:积雪草苷组及地塞米松组24h尿蛋白定量均显著低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05),且积雪草苷组低于地塞米松组,差异有统计学意义(P<0.05);积雪草苷组及地塞米松组24h内生肌酐清除率均显著高于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05),且积雪草苷组高于地塞米松组,差异有统计学意义(P<0.05);积雪草苷组及地塞米松组肾间质CTGF、ColⅢ表达均显著低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05),且上述指标积雪草苷组均优于地塞米松组,差异有统计学意义(均P<0.05).结论:积雪草苷能显著改善单侧输尿管梗阻大鼠肾功能,其可能通过抑制肾间质CTGF、ColⅢ的表达,从而对肾间质纤维化起到防治作用.
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促透剂对积雪草苷体外经皮渗透的影响
目的：研究促透剂对积雪草苷经皮渗透的影响。方法用离体鼠皮研究积雪草苷溶液以及含5%氮酮、薄荷脑、冰片等3种促透剂的积雪草总苷溶液的体外经皮渗透性，计算累积渗透量和渗透速率，采用HPLC法测定接收液中积雪草苷浓度。结果积雪草苷在20μg/ml~100μg/ml范围内标准曲线为：A=3479.7C+571.93，r=0.9996，表明线性关系良好。日内精密度RSD为1.4％，1.5%，1.0%，日间精密度RSD为1.6％，1.3%，1.1%，稳定性实验的平均RSD为1.4%，低、中、高3个浓度的加样回收率分别为94.8%，101.1%，99.6%。随着积雪草苷溶液浓度增加，其透过量逐渐增加，几种促透剂对积雪草苷均有促透作用。结论HPLC可以准确地检测体外透皮接收液中积雪草苷的浓度，方法简便、快速；3种促透剂能促进积雪草苷的经皮透过量，5%薄荷脑和冰片促透效果好。
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建立测定积雪草苷溶解度的高效液相色谱法
目的 建立高效液相色谱法测定积雪草苷,为积雪草苷溶解度的研究提供基础.方法 采用反相高效液相法,色谱柱:BDS HYPERSIL C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈:水(30:70,v/v),流速0.8 ml·min-1,柱温35 ℃,检测波长220 nm,进样量20 μl.结果 积雪草苷的线性方程为:表明在26.65～426.4 μg·ml-1范围内线性关系良好.低、中、高三种浓度的积雪草苷的日内精密度RSD<1.4%(n=5);连续五天的日间精密度RSD<3.6%.积雪草苷的低检测浓度约为0.5 μg·ml-1.积雪草苷在水和缓冲液中的溶解度相近,生理盐水中溶解度小.结论 本研究建立的RP-HPLC方法简便、快速、准确,适用于积雪草苷的溶解度研究.
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滞留时间法评价促透剂对积雪草苷体外经皮释药特性的影响
目的 考察薄荷油、冰片和氮酮对积雪草苷体外经皮渗透的影响.方法 使用改良Franz体外透皮装置,采用反相高效液相色谱法检测接收液中积雪草苷的浓度并计算药物的经皮累积渗透量,采用滞留时间法评价不同促透剂对积雪草苷的经皮释药特性的影响.结果 氮酮对积雪草苷的经皮促透作用好,24h内累积经皮渗透量为7.120μg/cm2,滞留时间适中为0.366h.1％冰片和1％的薄荷24h内累积经皮渗透量分别为5.025μg/cm和4.660μ g/cm2,滞留时间分别为0.195 h和0.547 h.结论 氮酮、冰片均能够提高积雪草苷的透皮效率,薄荷油对积雪草苷的促透作用较差.
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羟基积雪草苷对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡影响的实验研究
目的：研究羟基积雪草苷（ AC）对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用，初步探讨其机制。方法：24只雄性SD大鼠，随机分为假手术组（ SH组）、心肌缺血再灌注模型组（ IR组）、羟基积雪草苷治疗组（ AC组），每组8只。 AC组在冠状动脉左室支结扎60分钟前以6mg／100g体重的剂量静脉滴注羟基积雪草苷15分钟，其它2组同时点静脉滴注等剂量生理盐水。除SH组外，其它2组结扎冠状动脉左室支，使心肌缺血30分钟，再灌注60分钟。用7020全自动生化分析仪检测血清中乳酸脱氢酶（ LDH）、肌酸激酶（ CK）活性；TUNEL法检测各组大鼠缺血心肌细胞凋亡；RT－PCR法检测凋亡基因Bcl－2和Bax的mRNA表达。结果：与IR组比，羟基积雪草苷能降低血清中LDH、CK活性（P＜0．05）；降低心肌细胞凋亡指数（P＜0．05）；羟基积雪草苷组凋亡基因Bcl－2表达水平上升（P＜0．05），Bax表达水平下降（P＜0．05），Bcl－2／Bax比值升高（P＜0．05）。结论：羟基积雪草苷预处理能通过减少心肌细胞凋亡、抗脂质过氧化物产生等机制，对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用。
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曲尼司特联合积雪草苷治疗肥厚性瘢痕的疗效观察
目的：探讨曲尼斯特联合积雪草苷治疗肥厚性瘢痕的效果。方法将在我院皮肤科接受治疗的50名肥厚性瘢痕患者作为研究对象，并将其随机平均分为观察组和对照组，观察组采用曲尼斯特联合积雪草苷治疗法，对照组单纯使用曲尼斯特治疗。比较两组的治疗效果。结果观察组的治疗有效率为92%，显著高于对照组的治疗有效率64%。结论曲尼斯特联合积雪草苷治疗肥厚性瘢痕具有显著效果，且无不良反应，具有重要的临床推广价值。
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载积雪草总苷同轴和混纺纳米纤维膜的制备和缓释性能评价
目的 采用静电纺丝法制备同轴及混纺载积雪草总苷的纳米纤维膜,研究其形貌及体外释药行为,为深Ⅱ度烧伤提供新型功能性敷料.方法 采用静电纺丝工艺,制备芯层载积雪草总苷的同轴海藻酸钠／聚乙烯醇-壳聚糖纳米纤维膜.进行处方工艺优化,包括壳层、芯层中聚合物浓度、制备工艺等,同时制备海藻酸钠／聚乙烯醇混纺载积雪草总苷纳米纤维膜.用扫描电子显微镜、透射电子显微镜和X射线衍射表征纳米纤维.考察载积雪草总苷混纺和同轴纳米纤维膜的体外释药行为.结果 载积雪草总苷同轴纳米纤维膜的优处方是壳层由0.8％海藻酸钠、7％聚乙烯醇混合溶液制备,芯层由含2.5％积雪草苷的3％壳聚糖溶液制备.优工艺是静电电压23 kV,针头和接收屏距离15 cm,壳层溶液推注速度0.8 ml/h,芯层溶液推注速度0.2 ml/h.混纺纳米纤维膜与同轴纳米纤维膜的处方和工艺类似.同轴纳米纤维膜有明显壳核结构,其芯层直径为99.2nm,整个纤维直径为166.8 nm.与混纺纳米纤维比较,同轴纳米纤维膜有药物缓释效果,机制以Fick's扩散为主.结论 同轴纳米纤维膜有明显药物缓释效果,有利于积雪草苷发挥促愈合效果,可用于深Ⅱ度烧伤的治疗.
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积雪草苷平衡溶解度和油水分配系数的测定
目的 测定积雪草苷在不同pH介质中的平衡溶解度和正辛醇-水/缓冲液体系中的表观油水分配系数(Papp).方法 采用RP-HPLC法测定积雪草苷浓度,研究其在水和不同pH介质中的平衡溶解度；采用摇瓶法测定积雪草苷在正辛醇-水/缓冲液体系中的Papp.结果 25℃下积雪草苷在水中的平衡溶解度为305.02 μg·ml-1,在pH 5.0缓冲液中平衡溶解度更低；积雪草苷在正辛醇-水中Papp为0.908(logPapp=-0.042),在pH 5.0缓冲液中Papp高.结论 积雪草苷为亲水性药物,但其在水中的溶解度较小.在pH 5.0 ～8.0范围内,积雪草苷的平衡溶解度随pH的增加而增加,相反油水分配系数随pH的增加而减少.
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优化微柱离心法提高脂质体包封率测定的准确性
目的 优化脂质体包封率测定的方法,提高脂质体包封率测定结果的准确性.方法 以积雪草苷为模型药,建立HPLC法测定积雪草苷的含量;采用薄膜分散法分别制备空白脂质体与载药脂质体,利用微柱离心法分离脂质体与游离药物.分别将空白脂质体与纯化后的载药脂质体以及两者的稀释液过微柱,比较脂质体的过柱回收率.终采用纯化脂质体的过柱回收率对所得包封率进行修正.结果 在所选定的分离条件下,空白脂质体的过柱回收率为95％,纯化后的载药脂质体的过柱回收率为88％,二者存在显著性差异(P＜0.05);脂质体稀释后,空白脂质体的过柱回收率无明显变化,而载药脂质体的过柱回收率则降至72.80％.结论 两种方法测定脂质体的过柱回收率差异较大.采用过柱回收率修正包封率,可使测得结果更为准确.
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柱前衍生化HPLC法测定积雪草及三金片中积雪草苷的含量
目的建立积雪草中积雪草苷的柱前衍生化高效液相色谱测定法,并用该法测定积雪草和三金片中积雪草苷的含量.方法以吡啶-苯甲酰氯为衍生化试剂,对积雪草苷分子中的羟基进行苯甲酰化后,采用RP-HPLC法测定.色谱柱:Spherisorb ODS C18柱;流动相:甲醇-四氢呋喃-水(90∶4∶6,0.1%三乙胺);柱温:25℃;流速:0.8 ml.min-1;检测波长:235 nm;内标物:VD3.结果积雪草苷0.396～3.960 μg与峰面积比呈线性关系,相关系数为0.9985.用此法对不同产地的积雪草和三金片中积雪草苷进行测定,结果积雪草中积雪草苷的平均回收率为99.6%,RSD为2.3%(n=6);三金片中积雪草苷的平均回收率为99.2%,RSD为2.7%(n=6).结论此法准确、灵敏度高、重现性好,为中药积雪草和中成药三金片的质量评价提供了科学依据.
