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结节性硬化症长期误诊为癫痫1例并文献复习
目的 分析结节性硬化症误诊的原因,进一步加深临床医师对该疾病的认识,以减少对其的误诊、误治,提高患者临床疗效.方法 回顾性分析1例以癫痫为主要表现的结节性硬化患者的误诊、误治情况.结果 该例患者终诊断明确,经雷帕霉素等方法治疗,效果较好.结论 雷帕霉素治疗以癫痫为首发表现的结节性硬化症,疗效确切.
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雷帕霉素洗脱支架系统中雷帕霉素的含量测定
目的:建立高效液相色谱法测定雷帕霉素洗脱支架中雷帕霉素含量测定的方法并对样品制备方法进行了验证.方法:用waters 1525高效液相色谱仪进行检测,色谱柱为C18柱(250mm ×4.6mm,5μm),流动相为甲醇∶乙腈∶水(67∶ 15∶ 18),流速1mL/min,紫外检测器,检测波长为280nm,外标法定量.结果:雷帕霉素的线性范围为19.2～77.6μg/mL(r=0.9993),检出限为0.388μg/mL,平均加样回收率为98.86％.结论:该方法简便、快速、准确,可用于雷帕霉素洗脱支架系统中雷帕霉素的含量测定.
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免疫抑制剂肾损害
随着医学的不断发展,特别是器官移植的广泛开展,免疫抑制剂的使用逐渐增多.而随着时间的推移,各种免疫抑制剂肾毒性逐渐被人们认识和重视.下面主要阐述有明显肾损害的几种免疫抑制剂:神经钙蛋白抑制剂(环孢素和FK506)和新的雷帕霉素靶点抑制剂(雷帕霉素).
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mTOR抑制剂抑制皮质发育不良小鼠癫痫发作
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)在皮质发育不良(Cortical dysplasia,CD)及癫痫动物模型中超活化.在神经元特异性Pten基因敲除(Neuronsubsetspecific Pten knockout,NS-Pten KO)小鼠模型中,尽管在早期癫痫发生过程中抑制mTOR信号通路能够减少癫痫样活动,但mTOR抑制剂在癫痫建立后的作用尚不清楚.文章通过建立伴有严重慢性癫痫的NS-Pten KO成年小鼠模型,探究mTOR抑制剂对其癫痫样活动和其他神经病理的作用.NS-Pten KO小鼠癫痫样活动、mTOR信号通路的异常调节和相关神经病理随年龄增长的变化通过视频脑电(video-electroencephalography,VEEG),蛋白免疫印迹和免疫组化检测.NS-Pten KO小鼠出生后9周开始接受mTOR抑制剂雷帕霉素治疗(10 mg/kg i.p,5d/周)并采用VEEG监测癫痫样活动.通过蛋白免疫印迹和免疫组化检测雷帕霉素的作用.试验发现,随着年龄增长,NS-Pten KO小鼠的癫痫样活动恶化,同时伴有mTOR复合物1和2(mTOR complex l and 2,mTORCl and mTORC2)调节异常和进展性的星形胶质细胞和小胶质细胞增生.雷帕霉素治疗抑制癫痫样活动,改善基线脑电活动并提高严重癫痫NS-PtenKO小鼠的预后.在分子水平,雷帕霉素治疗降低mTORC1和mTORC2水平并减少星形胶质细胞和小胶质细胞增生.研究表明在NS-Pten KO小鼠中,雷帕霉素成功治疗癫痫有较宽的时间窗.抑制mTOR可能是CD伴慢性癫痫及mTOR信号通路基因调节异常的潜在治疗手段.
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雷帕霉素药物洗脱支架置入对急性ST段抬高型心肌梗死患者心功能及预后探讨
目的:探讨雷帕霉素药物洗脱支架(SES)应用于急性ST段抬高型心肌梗死中,对患者心功能和预后的影响.方法:选取医院2017年2月～2018年2月收治的心肌梗死(急性ST段抬高型)患者100例,按照药物洗脱支架(DES)不同分成两组,为佐他莫司药物洗脱支架(ZES)组(49例)与雷帕霉素药物洗脱支架(SES)组(51例),比较两组治疗前后心功能指标、心功能分级与治疗不良反应情况.结果:手术后,两组左房内径(31.71±2.58)mm、(33.28±2.94)mm、心率(69.58±3.57)次/min、(71.26±3.42)次/min、射血分数(45.28±3.52)％、(43.81±3.21)％和NYHA评级差异均不显著(P>0.05);SES组不良心血管事件发生率(13.73％)显著低于ZES组(20.41％),P<0.05.结论:两种DES均在改善急性ST段抬高型心肌梗死患者心功能方面发挥了良好效果,但SES组治疗1年内产生不良心血管事件更少,安全性更高.
关键词： 雷帕霉素 药物洗脱支架 急性ST段抬高型心肌梗死 心功能 -
丹参注射液对大鼠脊髓损伤后PI3K/Akt/mTOR信号转导通路活性及后肢运动功能的影响
目的:探讨脊髓损伤(SCI)后丹参注射液促进大鼠脊髓神经功能恢复的机制.方法:大鼠(清洁级)随机分为正常组、模型组、给药组、信号通路阻断组和空白组(n=10).除正常组外,其余各组大鼠均建立重力打击SCI模型.模型组伤后常规饲养;给药组伤后1h腹腔注射丹参注射液(1 mL·kg-1);信号通路阻断组伤后1h腹腔注射丹参注射液(1 mL·kg-1,含雷帕霉素3 mg·kg-);空白组伤后给予腹腔注射生理盐水(1 mL·kg-1).上述各组均按1次/d注射.14 d后处死动物,处死前采用联合行为评分法(CBS)评价大鼠脊髓神经功能恢复情况,并取损伤节段上下1 cm的脊髓组织.分别采用免疫组化SP法,蛋白质免疫印迹(Western blot)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测各实验组大鼠PI3K,Akt和mTOR蛋白及mRNA的表达水平.结果:与模型组、信号通路阻断组和空白组大鼠比较,给药组大鼠CBS评分显著降低(P＜0.05);与正常组比较,模型组大鼠PI3K,Akt,mTOR mRNA的含量,以及PI3K,Akt,mTOR蛋白免疫阳性细胞数和表达量均升高(P＜0.05);与模型组比较,给药组大鼠的上述指标均显著升高(P＜0.05);与给药组比较,信号通路阻断组大鼠的上述指标均显著降低(P＜0.05);上述指标在模型组与空白组大鼠之间的差异不具有统计学意义.结论:丹参注射液有助于大鼠SCI后脊髓神经功能的恢复,其机制可能与升高PI3 K/Akt/mTOR信号转导通路的活性有关.
关键词： 脊髓损伤 丹参注射液 PI3K/Akt/mTOR 雷帕霉素 信号转导通路 -
丹参注射液对大鼠脊髓损伤后低氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子表达的影响
目的:观察丹参注射液对大鼠脊髓损伤(SCI)后低氧诱导因子(HIF)-1α和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其参与脊髓损伤修复的机制.方法:选取50只SD大鼠(SPF级)建立Allens'重力打击SCI模型(正常组除外)后,随机分为正常组、模型组、丹参治疗组、丹参加雷帕霉素组和甲泼尼龙琥珀酸钠组(每组10只).正常组常规饲养,其余实验组均按1 mL· kg-1·d-1剂量分别腹腔注射生理盐水、丹参注射液、丹参注射液(含雷帕霉素3 mg·kg-1)和尾静脉注射甲泼尼龙琥珀酸钠溶液30 g·L-1.伤后1,3,7,14 d时采用联合行为评分法(CBS)评价大鼠脊髓神经功能恢复情况.伤后14 d处死动物,采用免疫组化染色和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各实验组HIF-1α和VEGF的表达差异.结果:SCI后14 d,与正常组比较,模型组大鼠CBS评分升高,HIF-1α和VEGF表达升高(P＜0.05);与模型组比较,丹参治疗组CBS评分降低,HIF-1α和VEGF表达升高(P＜0.05);与丹参治疗组比较,丹参加雷帕霉素组CBS评分升高,而HIF-1α和VEGF表达降低(P＜0.05);上述指标在丹参治疗组和甲泼尼龙琥珀酸钠组之间的差异不具有统计学意义.结论:丹参注射液可通过调节HIF-1α和VEGF的表达从而参与脊髓的损伤修复.
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阻断JAK/STAT信号转导通路对克雷伯杆菌肺炎老龄大鼠生化和病理的影响
目的 观察信号转导阻滞剂AG490、雷帕霉素对克雷伯杆菌肺炎多器官功能障碍生化和病理的影响,探讨通过信号转导阻断的途径在治疗多器官功能障碍中的作用.方法 用气管插管法制作克雷伯杆菌肺炎老龄大鼠多器官功能障碍模型,分别进行AG490皮下注射、雷帕霉素灌胃,取外周血检测各生化指标以及血气分析.结果 AG490、雷帕霉素能明显减轻肺脏、心脏、肝脏等组织病理的损伤,并明显降低LDH、CK、CK-MB、ALT、AST的含量,提高PaO2,降低PaCO2.结论 阻滞剂AG490、雷帕霉素通过阻断JAK/STAT信号转导通路,能够抑制炎症反应的过度表达,对多器官功能障碍起到保护作用,为多器官功能障碍的治疗提供一条新的思路.
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联合用药对胃癌细胞生长的抑制作用
目的 研究雷帕霉素联合阿霉素对胃癌细胞(BGC-823 )增殖抑制及凋亡的影响,并探讨机制.方法 细胞培养,通过甲基噻唑基四唑(MTT)法检测雷帕霉素(RAPA )干预组、阿霉素干预组及联合干预组对胃癌细胞系增殖抑制作用;流式细胞仪法分别检测各组细胞周期及凋亡率;western 试验检测抑癌基因p53、APC、DPC4 蛋白表达水平.结果 RAPA 能抑制胃癌细胞的增殖,其促凋亡作用弱;单独应用阿霉素及阿霉素联合20.0nmol/L RAPA 均可显著抑制胃癌细胞的增殖,且联合应用抑制率显著升高(P＜0.01); 流式细胞仪检测显示阿霉素及联合应用均可增加胃癌细胞的凋亡率(P＜0.01);western 试验提示联合应用组p53、APC、DPC4 蛋白表达水平升高.结论 RAPA 能抑制胃癌生长,mTOR 信号通路参与调控胃癌细胞的增殖与凋亡,mTOR 信号通路抑制剂RAPA 可提高抑癌基因p53、APC、DPC4 蛋白表达、增强阿霉素的抗肿瘤效应.
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大黄素抑制HBSS诱导的肾小管上皮细胞自噬的分子机制
目的:探讨大黄素(emodin)对饥饿诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)自噬的调节作用及其可能机制.方法:首先,用Western blot检测大黄素对Hank's平衡盐溶液(Hank's balanced salt solution,HBSS)饥饿诱导的细胞自噬标志性蛋白——哺乳动物同族物微管相关蛋白1轻链3 (microtubtde-associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅰ/Ⅱ表达水平的影响;其次,用红色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3 (redfluorescent protein-microtubule associated protein light chain3,RFP-LC3)质粒瞬时转染NRK-52E细胞,以HBSS(1 mL)联合巴弗洛霉素A1(10 nmol·L-1)处理,予大黄素(10 μmol·L-1)干预后,荧光显微镜下观察RFP-LC3荧光颗粒的变化;然后,以哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamyein,mTOR)抑制剂雷帕霉素(100 nmol·L-1)干预,观察阻断mTOR信号通路对大黄素抑制细胞自噬作用的影响;后,通过诱导内源性mTOR抑制蛋白DEPTOR(DEP domain-containing mTOR-interacting protein)过表达,进一步评估mTOR信号通路对大黄素抑制细胞自噬的影响.结果:HBSS饥饿可诱导NRK-52E细胞LC3Ⅱ蛋白高表达,大黄素干预后可逆转HBSS诱导的LC3Ⅱ蛋白表达增加;HBSS联合巴弗洛霉素A1处理后可引起RFP-LC3荧光颗粒数目增多,大黄素干预后可抑制其数目的增加;雷帕霉素与大黄素、HB-SS联合干预后,雷帕霉素可以恢复HBSS诱导的NRK-52E细胞LC3Ⅱ蛋白表达水平;而过表达内源性mTOR抑制蛋白DEP-TOR同样可以阻断大黄素对LC3Ⅱ蛋白表达的抑制作用.结论:大黄素可以抑制HBSS诱导的肾小管上皮细胞LC3Ⅱ蛋白表达和自噬活化,其阻断自噬的作用可能是通过mTOR信号通路介导的.
关键词： 大黄素 自噬 肾小管上皮细胞 微管相关蛋白1轻链3 雷帕霉素 -
积雪草苷防治支架再狭窄的生化调节机制
目的:探讨积雪草苷能否作为生化调节剂,有效减轻内皮细胞损伤,进一步抑制支架术后内中膜增生.方法:选取原代人主动脉平滑肌细胞和主动脉成纤维细胞各1株,每株细胞设空白对照组、雷帕霉素组(Rapa)、积雪草苷组(At)、积雪草苷+雷帕霉素组.利用qRT-PCR检测平滑肌细胞和成纤维细胞TGF-β1(转化生长因子1),Smad7,Ⅰ型胶原基因表达水平,通过ELISA检测Ⅰ型胶原蛋白表达量,计算积雪草苷和雷帕霉素两药相互作用指数(CDI).另将16只中华小型猪随机分为A,B2组,前降支球囊大压力预扩后,植入同型雷帕霉素支架1枚.术后A组予生理盐水30 mL·d-1静脉注射;B组予积雪草苷30 mg·kg-1·d-1(生理盐水稀释至30 mL)静注.术后7,14 d ELISA法检测2组血浆vWF(血管性血友病因子)表达水平;术后28 d复查冠脉造影,取支架血管段组织切片及染色,计算血管面积、支架内面积、管腔面积和新生内膜面积.结果:与对照组相比,两药联合组显著上调平滑肌细胞和成纤维细胞Smad7基因,下调TGF-β1,显著抑制Ⅰ型胶原基因表达(P＜0.01);平滑肌细胞中,两药联合组与Rapa组对Ⅰ型胶原抑制无显著性差异,CDI为0.83;成纤维细胞中,两药联合组优于Rapa组,存在显著性差异(P＜0.05),CDI为0.77.小型猪术后7,14 d,B组血浆vWF水平均显著低于A组(P＜0.05);术后28 d,2组血管面积和支架内面积无统计学差异;B组管腔面积显著大于A组(P＜0.05),B组新生内膜面积显著小于A组(P＜0.05).结论:积雪草苷通过上调Smad7蛋白表达,抑制TGF-β1表达,显著减少胞外基质合成与分泌,进一步抑制支架术后内中膜增生,减轻内皮细胞损伤,是雷帕霉素的有效生化调节剂.
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大黄酸调控mTOR信号通路活性抑制肾小管上皮细胞自噬蛋白表达的分子机制
目的:探讨大黄酸抑制饥饿诱导的肾小管上皮(NRK-52E)细胞自噬蛋白的作用和分子机制.方法:用Hank's平衡盐溶液(Hank's balanced salt solution,HBSS)诱导NRK-52E细胞产生饥饿状态,在干预后的各时间点(0,0.5,1,2,6 h),首先,检测细胞自噬标志性蛋白——哺乳动物同族物微管相关蛋白1轻链3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅰ/Ⅱ的表达水平;其次,检测细胞哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达及其磷酸化水平(phos-phorylated-mTOR Ser2448,p-mTOR S2448);然后,以大黄酸(5 mg· L-1)、HBSS(1 mL)以及mTOR抑制剂雷帕霉素(100 nmol·L-1)单独或联合干预,分别检测其LC3 Ⅰ/Ⅱ,mTOR,p-mTOR S2448蛋白表达水平的变化.结果:HBSS诱导NRK-52E细胞LC3Ⅱ蛋白高表达、p-mTOR S2448蛋白低表达;大黄酸与HBSS联合干预可以逆转HBSS诱导的NRK-52E细胞LC3 Ⅱ和p-mTORS2448蛋白表达水平;雷帕霉素与大黄酸、HBSS联合干预可以恢复HBSS诱导的NRK-52E细胞LC3 Ⅱ蛋白表达水平.结论:HBSS抑制mTOR信号通路活性而诱导肾小管上皮细胞发生自噬;大黄酸调控mTOR信号通路活性而抑制肾小管上皮细胞白噬蛋白的表达,这可能就是其干预细胞自噬的作用和分子机制.
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苦参碱诱导人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的研究
目的 观察苦参碱对人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的影响.方法 (1)苦参碱及伊马替尼对细胞增殖及自噬情况检测:分别设空白对照组、不同浓度(0.25、0.50、1.00、2.00、5.00 mg/mL)苦参碱组和(0.05、0.25、0.50、5.00、20.00 μmol/L)伊马替尼组,MTF检测K562细胞和K562/IM细胞抑制率.分别设置空白对照组、0.4 mg/mL苦参碱组和0.5 μmol/L伊马替尼组,免疫荧光激光共聚焦检测K562细胞和K562/IM细胞自噬现象,Western Blot检测细胞中自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62的表达.(2)苦参碱联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)或雷帕霉素(rapamycin,Rapa)诱导K562/IM细胞自噬及凋亡情况变化的检测:实验分6组,空白对照组、苦参碱组(0.4 mg/mL苦参碱处理)、3-MA组(5 mmol/L3-MA处理)、Rapa组(0.5 μmol/L Rapa处理)、苦参碱+3-MA组(0.4 mg/mL苦参碱+5 mmol/L3-MA处理)、苦参碱+ Rapa组(0.4 mg/mL苦参碱+0.5 iμmol/L Rapa处理),采用MTT检测细胞的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot检测细胞自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62及凋亡相关蛋白Caspase-3表达.结果 (1)苦参碱和伊马替尼作用K562、K562/IM细胞,细胞增殖受抑制明显(P＜0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ的聚集明显增加,Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高,P62蛋白表达减少(P＜0.05),以K562/IM细胞更明显(P＜0.05).(2)苦参碱组K562/IM细胞增殖抑制率(36.32±2.21)％,凋亡率(15.35±0.39)％.苦参碱+3-MA组K562/IM细胞增殖抑制率升高[(65.25±2.06)％,P＜0.01)],凋亡率升高[(21.70±0.48)％,P ＜0.05],同时Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下降,P62蛋白表达增强,Caspase-3表达增强(P＜0.05);而苦参碱+Rapa组作用则相反.结论 苦参碱和伊马替尼均可抑制K562、K562/IM细胞增殖的同时可诱导自噬,以耐药K562/IM细胞株自噬明显.通过3-MA抑制自噬可增强苦参碱对细胞K562/IM作用的敏感性,而雷帕霉素减弱苦参碱作用.
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蝎毒多肽提取物联合雷帕霉素增强H22肝癌细胞自噬作用的机制研究
目的 观察蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)联合雷帕霉素(Rapamycin)对H22肝癌肿瘤细胞自噬的增强作用并探讨其作用机制.方法 40只昆明小鼠,采用皮下接种H22肝癌肿瘤细胞悬液法建立荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、PESV高剂量组、PESV低剂量组及联合组(PESV高剂量加雷帕霉素),每组10只.PESV高、低剂量组分别予20 mg/kg、10 mg/kg的PESV灌胃,联合组予雷帕霉素(2 mg/kg)及PESV(20 mg/kg)灌胃,连续给药干预14天,隔日测量肿瘤体积,记录肿瘤生长曲线,计算抑瘤率.HE染色观察各组肿瘤组织病理变化.免疫组织化学法检测各组肿瘤组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammal target of rapamycin,mTOR)、UNC51样激酶1(UNC-51-like kinase-1,ULK1)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1 LC3A)及B淋巴细胞瘤蛋白质-2-相互作用蛋白质-1(Bec1in1)蛋白表达水平.结果 与荷瘤对照组比较,PESV高、低剂量组及联合组肿瘤生长受到明显抑制(P＜0.05);与PESV高、低剂量组比较,联合组瘤重及体积明显减小(P＜0.05),PESV高、低剂量组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学法显示,与荷瘤对照组比较,PESV高、低剂量组及联合组mTOR表达水平降低(P＜0.05),ULK1、MAP1LC3A及Beclin1蛋白表达水平升高(P ＜0.05,P＜0.01).与PESV高剂量组比较,联合组ULK1、MAP1 LC3A及Beclin1蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论 蝎毒多肽提取物联合化疗可能是通过抑制mTOR的活性,增强自噬相关蛋白ULK1、MAP1 LC3A及Beclin1的表达,促进细胞自噬从而抑制肿瘤的发展.
关键词： 自噬 蝎毒多肽提取物 雷帕霉素 H22肝癌细胞移植瘤 -
低氧通过HIF-1α上调卵巢癌细胞系SKOV3中HPA的表达
目的 探讨低氧条件下卵巢癌细胞株SKOV3中低氧诱导因子-1α(HIF-1α),乙酰肝素酶(HPA)的表达变化及相互作用关系.方法 分组孵育细胞株,用免疫细胞化学定性检测HPA蛋白,Western-blot和RT-PCR检测HIF-1α、HPA蛋白和mRNA.结果 HPA蛋白定位于胞质.低氧12～36 h HIF-1α蛋白表达明显高于对照组(P<0.05),而mRNA变化不明显,HIF-1α抑制剂雷帕霉素可抑制蛋白表达水平.在低氧后各时间点HPA蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05),雷帕霉素显著抑制HPA蛋白及mRNA表达.结论 低氧可依赖HIF-1α途径增强HPA的表达,进而促进肿瘤的浸润转移.
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雷帕霉素抑制IgA肾病大鼠肾小球信号蛋白STAT3的活化
目的 探讨雷帕霉素对IgA肾病大鼠肾组织p-JAK2、STAT3、p-STAT3和PCNA表达的影响.方法 制备IgA肾病动物模型,分为对照组、IgA肾病组、氯沙坦(ls)和雷帕霉素(rapa)治疗组.监测大鼠的生化指标及用免疫组化、Western blot、RT-PCR等方法检测肾组织p-JAK2、STAT3、p-STAT3和PCNA的蛋白及mRNA的表达.结果 IgA肾病大鼠较对照组24 h尿蛋白定量明显升高、血白蛋白降低、BUN以及Cr水平明显升高(P<0.01);IgA肾病大鼠p-JAK2、STAT3、p-STAT3和PCNA蛋白及mRNA水平也显著高于对照组;雷帕霉素能显著缓解上述改变(P<0.01).结论 雷帕霉素可能通过抑制IgA肾病大鼠肾小球JAK/STAT信号途径、直接抑制STAT3的活化以及抑制系膜细胞的增殖而减轻病变程度.
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PTEN/Akt/mTOR通路增加K562/ADM细胞化疗敏感性
目的 探讨K562/ADM细胞系中PTEN/Akt/mTOR信号通路对不同化疗药物敏感性的影响.方法 K562/ADM细胞分为未转染组、转染野生型PTEN组(Ad-PTEN-GFP)、转染空载体组(Ad-GFP),并与不同浓度雷帕霉素或三氧化二砷( As2 03)联合作用.通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR检测PTEN、mTOR、BCL-2及BAXmRNA水平,Western blot检测PTEN及Akt、p-Akt蛋白水平.结果 野生型PTEN对K562/ADM细胞大增殖抑制率为32.3％,与未转染组及Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP组mTOR mRNA和p-Akt蛋白明显减低；雷帕霉素与As2 03联合应用后细胞增殖明显受抑,凋亡率(28.61％±1.46％)明显高于单药作用组(P＜0.05),BCL-2 mRNA表达降低,BAX mRNA表达增加,以联合干预组为明显.结论 PTEN/Akt/mTOR信号传导通路能够增加K562/ADM细胞对雷帕霉素及As2 03的敏感性.
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乙醇抑制大鼠原代肝细胞中P70S6K和ERK1/2活性
目的 研究乙醇对原代肝细胞中P70S6K和ERK1/2活性的影响.方法 分离成年雄性SD大鼠的肝细胞,分别以0、50、100和200 mmol/L的乙醇处理4 h,或以200 mmol/L乙醇处理0、1、2和4h,用Western blot法检测P70S6K 和ERK1/2的活性.在细胞中加入100 nmol/L的mTOR特异抑制剂雷帕霉素或10 μmol/L的MEK1/2特异抑制剂U0126,培养24 h后收集细胞,用Western blot法检测P70S6K、ERK1/2及PPARγ的表达；用EMSA检测PPARγ的活性.结果 随着乙醇浓度的增加或处理时间的延长,P70S6K的表达逐渐降低；乙醇也可抑制ERK1/2的活性；U0126同时抑制ERK1/2和P70S6K的活性,而雷帕霉素虽抑制P70S6K的活性,但增强ERK1/2的活性；乙醇不影响PPARγ的表达和活性.结论 在大鼠原代肝细胞,乙醇对P70S6K的活性有抑制作用,且存在量效关系和时效关系.P70S6K的活性受ERK1/2的控制,但P70S6K也可反向调节ERK1/2.
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雷帕霉素抑制食管鳞癌细胞裸鼠移植瘤生长及mTOR/4E-BPl信号通路的活性
目的 体内观察雷帕霉素对食管鳞癌细胞牛长及mTOR/4E-BPI信号通路的影响.方法 给BALB/c裸鼠皮下注射食管鳞癌细胞株(EC9706),建立移植瘤模型,用雷帕霉素及顺铂对肿瘤进行治疗;用RT-PCR及Western blot 等观察细胞形态及信号通路中各因子的变化.结果 与对照组相比,雷帕霉素对肿瘤生长具有显著抑制作用(P<0.05),联合顺铂处理组的抑瘤作用更明显;雷帕霉素在体内降低了mTOR和p-4E-BPl的表达,并使4E-BP1的表达水平升高.结论 雷帕霉素在体内能明显抑制食管鳞癌细胞EC9706裸鼠移植瘤的生长并抑制mTOR/4E-BP1信号通路的活性.
关键词： 食管鳞癌 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 4E-BP1 雷帕霉素 -
雷帕霉素对人肾小管上皮-肌成纤维细胞转化的抑制作用
目的 探讨雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对体外培养的人肾小管上皮细胞发生上皮肌成纤维细胞转化(Epithelial-Myofibroblast Transition,EMT)的作用,以及该作用与上皮细胞中锌指蛋白(Snail)基因水平变化的关系.方法 体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为阴性对照组、转化生长因子β-1(TGF-β1)(1 μg/L)阳性对照组和TGF-β1+RAPA组.TGF-β1+RAPA组不同浓度的雷帕霉素(0.1 μg/L,1 μg/L,10 μg/L,100 μg/L)与TGF-β1(1 μg/L)共同作用,各组作用时间均为48 h.用间接免疫荧光双染、RT-PCR、Western Blot方法分别检测细胞平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)表达,同时用RT-PCR方法检测细胞Snail mRNA水平的变化.再选取大作用浓度的雷帕霉素作用不同时间(12 h、24 h、48 h、72 h),用RT-PCR、Western Blot方法检测α-SMA表达水平变化.结果 间接免疫荧光双染、RT-PCR、Western Blot方法检测均表明,TGF-β1阳性作用组较阴性对照组HKC细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平显著增强(P＜0.05),而E-cadherin表达则几乎消失,Snail mRNA表达水平显著增强(P＜0.05).与阳性对照组相比,雷帕霉素(10 μg/L,100 μg/L)与TGF-β1共同作用组HKC细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),而E-cadherin表达则有部分恢复,显著高于阳性对照组(P＜0.05),而Snail mRNA表达水平比阳性对照组显著降低(P＜0.05).雷帕霉素以浓度依赖方式抑制TGF-β1诱导的HKC细胞Snail mRNA表达.结论 应用体外培养的肾小管上皮细胞研究表明,雷帕霉素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用.此作用可能与该药诱导的Snail表达下调有关.
