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白蛋白过负荷对足细胞骨架蛋白α-actinin-4的影响
目的：观察足细胞损伤及药物干预后细胞骨架蛋白mRNA的变化，以进一步研究足细胞病的发病机制。方法：体外培养条件永生化小鼠足细胞，设立分组：对照组、足细胞损伤组（BSA 20mg/ml）、地塞米松组（地塞米松0.1umol/L+白蛋白20mg/ml），分别于12h、24h、48h检测足细胞内α-actinin4 mRNA表达变化。结果：足细胞损伤组足细胞内α-actinin4 mRNA水平随时间变化逐渐降低，地塞米松组先降低后升高。结论：地塞米松可以改善足细胞损伤后骨架蛋白α-actinin-4的mRNA表达的变化。
关键词： 足细胞 α-actinin-4 白蛋白 -
利拉鲁肽抑制高糖诱导足细胞损伤的作用
目的 探讨利拉鲁肽抑制高糖诱导足细胞损伤的作用机制.方法 培养小鼠肾脏足细胞MPC5,按照培养条件分为对照组(Mock)、高糖组(HG,10、20、30、40 mmol/L)和30 mmol/L D-葡萄糖+不同浓度利拉鲁肽组(1、10、50、100 nmol/L).干预36 h后收集足细胞,RT-PCR检测Grem1 mRNA的表达,免疫印迹检测Nephrin表达.结果 给予30 mmol/L葡萄糖作用36 h后,Grem1 mRNA表达明显升高,同时Nephrin表达水平降低(P<0.01).在高糖条件下给予不同浓度的利拉鲁肽,结果表明利拉鲁肽部分逆转高糖上述作用,且存在剂量依赖性.结论 利拉鲁肽可抑制高糖诱导的足细胞损伤.
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线粒体钙单向转运体拮抗剂钌红对阿霉素肾病模型大鼠的保护作用
目的 探讨钌红(ruthenium red,RR)对阿霉素大鼠肾病模型肾脏病理的改善作用及可能机制.方法 32只SD大鼠分生理盐水对照组、RR对照组、阿霉素(adriamycin,ADR)组和ADR+ RR组.予以尾静脉注射1次ADR建立大鼠肾病模型,分别予RR对照组和ADR+ RR组腹腔注射RR 2周.在ADR注射后6周处死大鼠,分析RR对肾小球病变的保护作用.进而在体外培养的小鼠足细胞系分析RR对ADR诱导的足细胞凋亡和线粒体Ca2+的影响.结果 与ADR组比较,ADR+ RR组大鼠肾小球新月体样病变指数降低(P=0.024).与ADR组足细胞比较,ADR+ RR组小鼠足细胞凋亡率降低(3.23％±0.95％ vs 13.62％±0.92％,P=0.028,n=3),线粒体Ca2+降低(P=0.000,n=12).结论 线粒体钙单向转运体拮抗剂钌红可显著改善ADR肾病模型大鼠肾脏病理改变,拮抗ADR诱导的小鼠足细胞线粒体Ca2+超载和足细胞凋亡.
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滋肾活血丸对DN大鼠肾脏保护作用的研究
目的 观察滋肾活血丸对DN大鼠肾脏的保护作用及足细胞损伤的影响.方法 40只大鼠随机分为对照组、模型组、滋肾活血丸组、苯那普利组,每组各10只,测定生化指标;光镜检查肾组织病理变化,电镜及免疫荧光法检测肾组织及尿液中足细胞变化等并进行观察.结果 实验12周后,模型组大鼠血糖、24小时尿蛋白定量、BUN、Scr较正常对照组明显增高(P＜0.05);滋肾活血丸组和苯那普利组与模型组比较大鼠24 h尿蛋白定量、BUN、Scr均有不同程度降低(P＜0.05),但滋肾活血丸组远期疗效更为显著.结论 滋肾活血丸可减轻糖尿病肾病大鼠足细胞损伤,具有一定的肾保护作用.
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温阳活血利水方对阿霉素肾病大鼠肾脏足细胞CD2AP、synatopodin、α-actinin-4表达的影响
目的 观察温阳活血利水法治疗对足细胞CD2AP、synatopodin、α-actinin-4表达的影响,以探讨其疗效的作用机制.方法 用阿霉素(ADR)诱导一种类似人类微小病变肾病模型,1周后分别用温阳活血方和强的松治疗,持续4周,并设空白对照组(正常组)、病理对照组(造模组).观察实验大鼠的一般情况;检测大鼠24小时尿蛋白定量;检测总蛋白、白蛋白、总胆固醇、三酰甘油的水平;采用免疫荧光染色测定大鼠肾小球CD2AP、synatopodin、α-actinin-4表达;光学显微镜观察肾组织形态学变化;电镜下观察足细胞足突的变化.结果 模型组24小时尿蛋白定量明显升高(P＜0.01),血清总蛋白、白蛋白明显降低(P＜0.01),血清脂质水平升高(P＜0.01),CD2AP、synatopodin蛋白表达明显减少,α-actinin-4表达分布不均匀,足突融合明显.两个治疗组均能降低24小时尿蛋白定量,升高血清总蛋白、白蛋白水平(P＜0.01).温阳活血利水方能降低血清脂质水平(P＜0.01).两个治疗组均能改善肾组织中CD2AP、synatopodin蛋白的表达减少,改善α-actinin-4表达分布异常,改善其肾组织的病理改变.结论 温阳活血利水法能使阿霉素肾病综合征大鼠CD2AP、Synaptopodin表达下降及α-actinin-4分布异常,从而有助于稳定actin骨架,改善足细胞融合,减少蛋白尿.
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芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究
目的 探讨芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达的影响.方法 随机选取10只健康雄性SD大鼠为正常组,其余30只采用腹腔注射大剂量链脲佐菌素(60 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组以及芪卫颗粒组,将西药组按缬沙坦10 mmg/(kg·d)灌胃、芪卫颗粒组按生药10g/(kg·d)灌胃,连续给药.于给药第24周检测大鼠血肌酐、血尿素氮及内生肌酐清除率;24周后将大鼠处死,采用PAS染色法将肾组织染色,在光镜下观察大鼠肾组织病理改变;采用western blot法检测肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达情况.结果 与正常组相比,模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平显著升高,内生肌酐清除率及足细胞nephrin表达水平显著下降(P＜0.05);与模型组相比,各给药组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降,内生肌酐清除率及nephrin表达水平明显上调(P＜0.05).结论 芪卫颗粒能够上调糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞nephrin的表达,减轻足细胞损伤,保护肾功能,延缓糖尿病肾病的发生发展.
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保肾通络方对早期糖尿病肾病大鼠尿蛋白及尿Nephrin、Podocin排泄的影响
目的 观察不同剂量的保肾通络方对早期糖尿病肾病大鼠尿蛋白、尿 Nephrin、尿Podocin排泄的影响,探讨本方对糖尿病肾病的作用机制及佳剂量.方法 将链脲佐菌素(streptozocin,STZ)建立的早期糖尿病肾病大鼠模型随机分为正常组、模型组及中药高、中、低剂量组.用药8周后,检测各组大鼠血糖、尿糖、尿白蛋白及尿Nephrin、Podocin的水平,并将尿Nephrin、Podocin的排泄浓度与尿白蛋白做相关性分析.结果 药物干预8周后,中药各剂量组大鼠的血糖、尿糖、尿白蛋白水平较模型组有降低趋势,但组间差异无统计学意义(P>0.05);中药各剂量组大鼠尿Nephrin、Podocin排泄均低于模型组,其中中药中剂量组、中药高剂量组尿Nephrin排泄明显低于模型组(P<0.05),但二者组间差异无统计学意义(P>0.05);Pearson相关分析显示尿Nephrin、尿Podocin排泄呈正相关(r=0.517,P<0.05),且二者均与尿白蛋白水平呈正相关(r=0.746,P<0.05).结论 保肾通络方对早期糖尿病肾病大鼠足细胞可能存在保护作用,其中对尿Nephrin排泄的影响可能先于尿白蛋白出现.
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芪卫颗粒改善TGF-β1诱导的肾小球足细胞转分化的作用研究
目的 观察芪卫颗粒对转化生长因子 β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的足细胞转分化的影响.方法 以体外培养的小鼠肾小球足细胞株为研究对象,以TGF-β1(7.5 ng/mL)刺激足细胞建立转分化模型,分为正常组、模型组、芪卫颗粒组,干预24小时后,进行相关检测.采用CCK-8方法检测足细胞的活力,采用荧光定量PCR方法检测足细胞转分化相关指标Nephrin、Podocin、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和成纤维细胞特异蛋白-1(fibroblast-specific protein1,FSP-1)基因的水平,采用Western blot方法检测足细胞转分化标志蛋白Nephrin、Podocin、α-SMA和FSP-1蛋白表达的变化.结果 与正常组相比,TGF-β1诱导的模型组足细胞Nephrin和Podocin的基因和蛋白表达均减少(P<0.05),α-SMA和FSP-1的基因和蛋白表达均增加,足细胞活力下降(P<0.05);而与模型组相比,芪卫颗粒组足细胞Nephrin和Podocin的基因和蛋白表达均明显上调(P<0.05),α-SMA和FSP-1的基因和蛋白表达均有所下调(P<0.05),细胞活力有所升高.结论 TGF-β1能诱导足细胞发生转分化,芪卫颗粒能明显改善TGF-β1诱导的足细胞转分化.
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中医药对足细胞保护机制研究进展
足细胞是肾小球滤过屏障的外一层,在维持正常的肾脏滤过功能中发挥重要的作用,蛋白尿的出现与足细胞损伤密切相关.中医药在治疗多种类型的肾脏疾病中具有独特优势,临床试验及机制研究也有了较大进展,中医药能够通过调节足细胞相关蛋白的表达,抑制足细胞氧化应激,改善足细胞凋亡及自噬,并且通过多种信号通路保护足细胞.
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自噬与糖尿病肾病的研究进展
糖尿病肾病是糖尿病微血管并发症之一,是由于长期慢性高血糖导致的肾脏损害,更是导致终末期肾衰、严重威胁患者生命健康的首要原因.自噬,作为真核细胞的一种自我保护性机制,可以清除受损的细胞器或多余的蛋白质以对抗外界环境改变、维持细胞稳态发挥重要作用.目前研究发现自噬的改变与糖尿病肾病的发病机制密切相关.足细胞是肾小球脏层上皮细胞,是肾小球滤过屏障的重要组成,其损伤将导致糖尿病肾病出现大量蛋白尿、肾小球硬化.目前越来越多的研究证实足细胞损伤与其自噬功能失调有关.围绕自噬、营养感应通路、足细胞损伤与糖尿病肾病的防治为出发点,汇总国内外新研究进展,提出防治糖尿病肾病的新靶点——调控自噬,减轻足细胞损伤.
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禾肾丸对阿霉素肾病大鼠肾脏形态学的影响
目的：利用阿霉素肾病模型研究禾肾丸对大鼠肾脏形态学的影响。方法实验动物分为空白组、模型组和禾肾丸组。采用一次性尾静脉注射阿霉素6 mg/ kg，复制阿霉素肾病大鼠模型，造模成功后每日用禾肾丸灌胃，空白组及模型组以蒸馏水灌胃。（1）在造模第2周及8周处死大鼠，观察各组大鼠肾脏情况，收集24 h 尿液检测尿蛋白；（2）造模第2周及第8周取各组大鼠肾组织进行光镜观察；（3）取肾脏组织电镜下观察肾小球足细胞足突、基底膜变化。结果（1）肉眼观：禾肾丸组大鼠肾脏较模型组质地偏软，颜色鲜红，体积偏大，各组大鼠尿蛋白检测提示禾肾丸组较模型组减少；（2）通过采用 HE、Masson 染色观察各组大鼠肾脏组织形态学的改变，系膜细胞增生情况、肾小管-间质病变情况，模型组在第4周开始出现系膜细胞增生，第6周开始出现肾小球局灶节段的硬化，而禾肾丸组硬化程度较模型组轻；（3）电镜显示禾肾丸组肾脏足细胞足突融合较模型组减少，裂孔膜间隙小。结论禾肾丸对于阿霉素肾病模型具有治疗作用，保护肾小球足细胞，减轻阿霉素肾病大鼠肾组织纤维化程度。
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积雪草苷对足细胞骨架及 p38通路的影响
目的：探讨积雪草苷对阿霉素诱导的足细胞中的细胞骨架及 p38通路的影响。方法用1μmol/ L 阿霉素制造足细胞损伤模型，检测荧光显微镜观察足细胞骨架蛋白，Western blotting 检测足细胞 p38信号通路的磷酸化水平。结果与模型对照组相比，积雪草苷预孵育后足细胞骨架的结构得以很好的保存。p38抑制剂 SB203580拮抗阿霉素对足细胞的损伤，足细胞骨架结构较好。阿霉素（1μmol/ L）显著升高 p38的磷酸化水平，与空白对照组比较差异有统计学意义（P <0.05），提示阿霉素可诱导 p38通路的活化。积雪草苷预处理细胞后，能够有效地遏制阿霉素诱导的 p38通路活化，使 p38的磷酸化水平显著降低，与模型对照组比较差异有统计学意义（ P <0.05）。p38抑制剂SB203580能拮抗阿霉素诱导的足细胞 p38磷酸化，与模型对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）。结论积雪草苷可以通过抑制 p38磷酸化减少阿霉素对足细胞骨架的损伤作用。
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栝楼瞿麦汤对糖尿病肾病大鼠脂肪因子和足细胞nephrin的影响
目的:观察栝楼瞿麦汤(GLQM)对糖尿病肾病(DN)大鼠血清血脂,脂肪因子和足细胞nephrin的影响,探讨其可能的作用机制.方法:对SD大鼠采用高糖高脂饮食、单侧肾切除及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法制备DN模型.造模成功后,随机分为模型组,GLQM低(GLQM-L),中(GLQM-M),高(GLQM-H)剂量组和缬沙坦组,另设空白组.治疗组从实验开始第4周起,GLQM低、中、高剂量组分别以1.4,2.8,5.6 g·kg-1灌胃(ig),缬沙坦组4.8 ×10-3g·kg-1 ig,空白组及模型组均予2.8 g·kg-1蒸馏水ig,1次/d,连续12周.观察大鼠一般状况;全自动生化分析仪检测血清三酰甘油(TG),胆固醇(CHO),高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清脂联素(APN),瘦素(LEP)的水平;光镜下观察肾组织病理变化;电镜下观察足细胞形态变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测肾组织nephrin蛋白表达情况.结果:与模型组比较,GLQM低、中、高剂量组的TG,CHO,LDL明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),HDL明显升高(P＜0.05),GLQM中、高剂量组和缬沙坦组的LEP明显降低(P＜0.01),APN明显升高(P＜0.01).病理学检查显示,各治疗组肾组织和足细胞的病理改变较模型组均有所减轻.经栝楼瞿麦汤干预后,各中药治疗组及缬沙坦组nephrin蛋白表达水平有所上调(P＜0.05).结论:栝楼瞿麦汤可以通过改善脂代谢、干预脂肪因子以及维持nephrin的表达,减轻肾组织及足细胞的损伤,从而延缓DN病情发展.
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熊果酸对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用
目的:通过复制糖尿病肾病大鼠模型, 探讨熊果酸 (ursolic acid, UA) 对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用及其机制.方法:SPF级大鼠采用链脲霉素 (streptozocin, STZ) 及高糖高脂饲料联合复制糖尿病肾病大鼠模型, 实验分为正常组, 模型组, 阳性药组 (厄贝沙坦, 15 mg·kg-1), UA高剂量组 (UA-H, 60 mg·kg-1) 和UA低剂量组 (UA-L, 30 mg·kg-1);观察大鼠血糖、尿蛋白量、肾指数的变化, 苏木精-伊红 (hematoxylin-eosin, HE) 染色法和过碘酸-希夫 (periodic acid-schiff, PAS) 染色法观察肾脏病理变化, 酶联免疫吸附测定 (ELISA) 检测血清和肾脏中的肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α), 白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6), 白细胞介素-1β (interleukin-1β, IL-1β) 含量, 试剂盒检测肾脏组织超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase, SOD) 活性和丙二醛 (malonaldehyde, MDA) 含量, 蛋白免疫印迹法 (Western blot) 检测大鼠肾组织足细胞裂孔膜CD2相关蛋白 (CD2-associated protein, CD2AP) 和podocin蛋白的表达.结果:与正常组比较, 模型组大鼠的血糖, 24 h尿蛋白量, 血清和肾脏IL-1β, IL-6及TNF-α含量, 肾脏组织中MDA含量, 肾指数均显著增加, 体质量, 肾脏组织SOD活性, 肾脏中podocin, CD2AP蛋白表达量均显著降低 (P＜0.01);与模型组比较, UA明显降低血糖值和尿蛋白量, 肾指数, 肾脏MDA含量, 血清和肾脏IL-1β, IL-6及TNF-α水平, 能够升高模型组大鼠体质量, 肾脏SOD活性, 肾脏中podocin, CD2AP蛋白的表达 (P＜0.05, P＜0.01), 逆转糖尿病所致大鼠肾小球病变.结论:UA可通过保护肾脏足细胞作用及调节裂孔膜蛋白CD2AP和podocin表达而抑制高血糖对肾脏的病理损害、降低尿蛋白和保护肾功能.
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绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响及机制
目的:研究绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏足细胞相关分子( nephrin)、血管通透因子(VEGF)mRNA表达的影响,探讨其降低尿蛋白、保护肾脏的机制.方法:采用单侧肾切除加链脲佐菌素( STZ)注射法改良复制DN模型,实验分为正常组、模型组、治疗组(绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组)和缬沙坦组.干预4周后电镜观察肾小球超微结构改变,RT-PCR检测nephrin、VEGF mRNA表达.结果:各治疗组病理变化较模型组均有不同程度改善:足突增宽或部分融合,基底膜增厚减轻,同时nephrin mRNA表达水平较模型组明显上调(P＜0.01),VEGF表达明显抑制(P＜0.01),其中高剂量组和缬沙坦组效果类似,明显优于低剂量组(P＜0.01).结论:绞股蓝总皂苷可能通过上调足细胞相关分子nephrin表达,抑制分泌VEGF过表达,减轻足细胞超微结构改变,从而保护足细胞,降低尿蛋白,延缓肾小球硬化.
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糖肾平含药血清对高糖+LPS刺激足细胞增殖与凋亡的影响
目的:观察糖肾平含药血清对高糖环境下脂多糖(LPS)刺激足细胞增殖与凋亡的影响.方法:本实验在前期整体动物实验的基础上,进行足细胞传代培养后,将细胞种植于96孔培养板,分为正常组,高糖组,高糖+LPS组,厄贝沙坦组,糖肾平小、中、大剂量组及抑制剂组,分别在含药血清作用12、24、36、48h时,用MTT法检测各组足细胞增殖与凋亡情况.结果:高糖环境中足细胞经LPS刺激24h时增殖明显,糖肾平不同剂量组能明显抑制高糖环境中LPS刺激的足细胞增殖,与高糖组和高糖+LPS组相比,有显著性差异(P＜0.01);高糖组和高糖+LPS刺激36h时足细胞开始凋亡,48h时出现较多凋亡,糖肾平不同剂量组能明显抑制足细胞凋亡,与高糖组和高糖+LPS组相比,糖肾平大、中、小剂量组有显著性差异(P＜0.01,P＜0.05).结论:糖肾平对高糖+LPS刺激足细胞的增殖和凋亡有一定的调节作用.
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肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化大鼠Notch-PI3K/PKB通路串话及足细胞EMT的影响
目的:观察中药肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠肾脏功能、病理、足细胞及上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)标志蛋白、Notch、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)通路及其串话关键位点的影响.方法:采用左肾切除+阿霉素注射法诱发SD大鼠FSGS模型,依体质量随机分为3组,模型组、贝那普利组和肾苏Ⅱ方组.另设空白对照组,每组各12只.贝那普利组予贝那普利(9.25mg·kg-1·d-1)灌胃、肾苏Ⅱ方组予肾苏Ⅱ方(9.71g·kg-1·d-1)灌胃,空白对照、模型组予等量0.9％氯化钠溶液灌胃.检测大鼠24h尿微量蛋白(24hUpro)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB).观察肾脏病理形态学改变,分析足细胞标志CD2相关蛋白(CD2AP)及EMT标志desmin蛋白表达,Notch、PI3K/PKB通路关键位点的notch1、Hes-1、染色体10上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)、PKB基因及p-PKB蛋白表达.结果:与模型组相比,治疗第8周末开始,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组FSGS大鼠24hUpro、TP、ALB均明显改善(P＜0.05);至治疗第12周末,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组大鼠光镜、电镜肾脏病理改变明显减轻;CD2AP蛋白表达恢复与desmin蛋白表达减少明显(P＜0.05);Notch1、Hes-1、PTEN mRNA及p-PKB蛋白表达与模型组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).结论:肾苏Ⅱ方可能通过调控Notch-PI3K/PKB通路串话,阻抑足细胞EMT进程,进而延缓FSGS大鼠疾病进展.
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基于玄府理论探索汗法与补法治疗局灶节段硬化大鼠足细胞损伤的TRPC机制
目的:研究汗法与补法治疗嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的局灶节段硬化性肾病(FSGS)大鼠足细胞损伤的疗效及机制.方法:40只雄性Wistar大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、越婢汤组、固精方组.首剂静脉注射PAN 9mg/100g,后分别于第13、16、19、22、25天追加PAN 0.9mg/100g建立FSGS大鼠模型,8周后留取尿液、血液及肾组织标本.检测血生化指标,尿蛋白排泄,Real-time PCR、Western blotting、免疫荧光观察TRPC5、TRPC6表达与分布,激光共聚焦显微镜观察足细胞骨架蛋白F-actin,光镜观察肾小球病理改变,透射电镜观察足细胞超微结构.结果:模型组大鼠出现肾小球局灶节段硬化,TRPC5、TRPC6表达显著上调,F-actin表达减少,电镜广泛足突融合.与模型组比较,越婢汤与固精方组血清白蛋白水平升高(P＜0.05),固精方组尿蛋白排泄减少(P＜0.05),固精方组TRPC5、TRPC6蛋白、mRNA及免疫荧光表达下调(P＜0.05,P＜0.01),F-actin表达增加(P＜0.05);越婢汤组TRPC5蛋白、mRNA及免疫荧光表达下调(P＜0.05,P＜0.01),TRPC6 mRNA及免疫荧光表达下调(P,＜0.01),两组足突融合较模型组减轻.结论:越婢汤、固精方可能通过调控TRPC5及TRPC6减轻足细胞损伤,发挥FSGS治疗作用.
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丹芍颗粒Ⅲ号诱导Akt磷酸化在治疗大鼠紫癜性肾炎中的作用
目的:探讨丹芍颗粒Ⅲ号对紫癜性肾炎(HSPN)大鼠的作用机制.方法:将雄性SD大鼠随机分为5组:空白组,模型组,丹芍低、中、高剂量组,各5只,造模后丹芍各剂量组给予丹芍颗粒Ⅲ号治疗,取肾组织后送病理观察;BCA法进行大鼠24h尿蛋白定量;Western blot法检测大鼠肾组织中p-Akt蛋白量;RT-PCR法检测大鼠肾组织Akt mRNA的表达量;透射电子显微镜下观察肾小球基底膜及足细胞.结果:光镜下,模型组肾组织存在明显异常改变;丹芍各剂量组肾组织病变较模型组减轻.24h尿蛋白定量模型组显著高于空白组(P＜0.05);丹芍高、中、低剂量组均低于模型组(P＜0.05).与空白组比,模型组p-Akt蛋白灰度值比率显著下降(P＜0.01),与模型组比,丹芍高、中剂量组p-Akt蛋白比率均升高(P＜0.05).5组Akt mRNA表达不等,但两两之间差异无统计学意义.空白组肾小球基底膜清晰完整,足突未见融合,而模型组肾小球基底膜偶见增厚,但足突大部分融合,消失.丹芍各剂量组大鼠肾小球基底膜基本光滑均匀,足突融合较模型组明显减轻.结论:丹芍颗粒Ⅲ号诱导Akt蛋白的磷酸化,促进PI3K/Akt信号通路抑制肾小球足细胞融合、凋亡的作用,可能是发挥对大鼠HSPN治疗作用的机制.
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固肾方对糖尿病大鼠足细胞及其裂隙膜蛋白的作用
目的:探讨固肾方对糖尿病大鼠足细胞及其裂隙膜蛋白的影响.方法:选取雄性SD大鼠50只,用链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,造模成功后,将大鼠随机分成5组,每组10只进行实验.大鼠于造模后第24h,8、28d分别收集尿液,做24h尿蛋白定量.于给药12周后处死,取血液做肾功能检测,取肾脏组织做光镜、免疫组化检测,用电镜观察肾小球足细胞形态改变.免疫组化观察肾组织裂隙膜蛋白nephrin、podocin、CD2AP的蛋白表达.结果:造模后28d,模型组与其它各组比较尿量和蛋白量显著增高(P＜0.01).血糖、肌酐和尿素氮显著升高,白蛋白显著降低(P＜0.05,P＜0.01).光镜、电镜各组与模型组比较有明显不同.免疫组化显示模型组nephrin、podocin、CD2AP的蛋白表达降低,其他各组均有升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:中药固肾方能减少蛋白尿,降低血糖,改善肾功能,其功效可能通过保护足细胞,升高裂隙膜蛋白nephrin、podocin、CD2AP表达而改善肾小球滤过膜的通透性,从而减少蛋白尿,延缓肾功能的进展.
