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PITC柱前衍生HPLC测定复方氨基酸注射液中18种氨基酸的含量
目的：建立柱前衍生高效液相色谱法同时测定复方氨基酸注射液（18AA）中18种氨基酸含量的方法。方法：样品采用异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生，以Unitary-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）为色谱柱，检测波长为254 nm，醋酸钠缓冲盐及乙腈、甲醇和水的混合体系为流动相，梯度洗脱。结果：优化了衍生试剂用量、衍生时间、缓冲盐浓度以及pH值和柱温等影响因素，终在40 min内实现了18种氨基酸的分离，在9~1021μg·mL-1浓度范围内线性关系良好，且相关系数大于0.9977，平均回收率为92.6%~110.7%，相对标准偏差（RSD）为0.01%~5.68%。其定量限（LOQ，S/N=10）为0.02~13.41μg·mL-1。结论：该方法操作简便、灵敏度高、准确度和精密度好，可用于复方氨基酸注射液中氨基酸的含量测定。
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异硫氰酸苯酯柱前衍生化HPLC测定盐酸氨基葡萄糖的含量
目的:采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定复方制剂中盐酸氨基葡萄糖的含量.方法:以氨基半乳糖为内标,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,采用Agilent TC C18(4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相10 mmol· L-1pH 5.8的磷酸盐缓冲液-乙腈(90∶10),检测波长254 nm,流速0.8 mL· min -1,柱温30℃.结果:盐酸氨基葡萄糖质量浓度在350～550 mg·L -1,经衍生化后其衍生物峰面积与内标衍生物峰面积的比值与盐酸氨基葡萄糖浓度呈线性相关(r =0.999 1).制剂中盐酸氨基葡萄糖含量测定的平均回收率98.3％ (RSD 2.3％).结论:异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定结果准确灵敏、方法可靠,适用于复方制剂中等复杂样品中盐酸氨基葡萄糖的含量测定.
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PITC柱前衍生HPLC测定柴胡炮制前后17种氨基酸含量
目的:建立一种同时测定鳖血柴胡中17种氨基酸含量的方法,为该药材的质量控制提供参考.方法:以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,采用Prevail C18色谱柱,流动相[乙腈-水(4∶1)]-[乙酸钠缓冲溶液(pH 6.5)-乙腈(97∶3)]梯度洗脱,检测波长254 nm,测定柴胡炮制前后氨基酸的含量.结果:17种氨基酸在32 min内可良好分离;样品平均加样回收率93.4％～107.1％,RSD 1.8％ ～3.9％.结论:与其他柱前衍生测定氨基酸含量的方法相比,该方法具有可操作性强、成本低、易推广等优势,可作为柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法.
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柱前衍生HPLC同时测定驴胶补血颗粒中6种水解氨基酸
目的:建立柱前衍生反相高效液相色谱法同时测定驴胶补血颗粒中6种水解氨基酸含量的方法.方法:采用Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm),异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长254nm,柱温30℃.结果:L-谷氨酸的线性范围0.169 ～1.014 μg(r =0.9995),平均回收率101.43％,RSD 3.20％；L-羟脯氨酸的线性范围0.178～ 1.068 μg(r =0.999 9),平均回收率101.23％,RSD 3.25％；甘氨酸的线性范围0.381～2.286 μg(r=0.9995),平均回收率102.87％,RSD 2.32％;L-丙氨酸的线性范围为0.162 ～0.972 μg(r=0.999 5),平均回收率102.37％,RSD 3.36％；L-精氨酸的线性范围0.118 ～0.708 μg(r =0.999 6),平均回收率102.73％,RSD 2.41％；L-脯氨酸的线性范围0.253 ～ 1.518 μg(r =0.9999),平均回收率98.69％,RSD 2.34％.结论:建立的方法可靠,可用于驴胶补血颗粒中氨基酸的含量检测.
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柱前衍生RP-HPLC测定仙灵骨葆胶囊中16种氨基酸
目的:建立柱前衍生RP-HPLC同时测定仙灵骨葆胶囊中16种氨基酸的方法.方法:以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生剂,用高效液相色谱测定仙灵骨葆胶囊中水解氨基酸的量.采用Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以乙腈-0.1 mol·L-1乙酸钠溶液-乙酸(7∶93∶0.05)为流动相A,乙腈-水(80∶20)为流动相B进行梯度洗脱,体积流量1 mL· min-,检测波长254 nm,柱温40℃.结果:33 min内可完成仙灵骨葆胶囊中16种氨基酸的分离测定,线性关系良好(r＞0.9968),回收率97.5％～100.7％,RSD＜ 5％.结论:该方法简便快速、准确可靠,可用于仙灵骨葆胶囊中氨基酸的含量测定.
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PITC柱前衍生HPLC法测定茺蔚子中游离和水解氨基酸的含量
目的:建立PITC柱前衍生H PLC法同时测定茺蔚子药材中游离和水解氨基酸含量的方法.方法:采用超声法提取游离氨基酸,6mol/L酸水解茺蔚子蛋白,以PITC为柱前衍生试剂,采用HPLC法测定茺蔚子药材中氨基酸的峰面积并计算其含量.结果:18种氨基酸的分离良好,空白无干扰,线性关系良好,精密度RSD在0.25％-1.38％之间,重复性RSD在0.47％-1.86％之间,稳定性RSD在o.32％-1.68％之间,平均回收率在95.48％-101.48％之间且RSD均小于5％,游离和水解氨基酸的含量分别为0.4525％、10.0293％.结论:该方法简便、快捷,能准确地测定茺蔚子中游离和水解氨基酸的含量,为茺蔚子的质量控制提供了理论依据.
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异硫氰酸苯酯柱前衍生反相高效液相色谱法测定复序橐吾中21种氨基酸的含量
目的:测定复序橐吾中游离和水解氨基酸的含量.方法:以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定复序橐吾中氨基酸的含量.结果:21种氨基酸的检测浓度线性范围为0.0022-2.1000μmol/L,精密度RSD在0.38％-1.05％之间;稳定性RSD在0.46％-1.28％之间;游离氨基酸和水解氨基酸的重复性RSD在1.20％-2.38％和0.86％-2.43％之间;游离氨基酸和水解氨基酸的加样平均回收率分别在97.89％-101.05％和98.04％-103.03％之间且RSD均小于4％,游离和水解氨基酸的含量分别为0.2307％和8.7943％.结论:复序橐吾中含有21种氨基酸,并确定了其含量.
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柱前衍生化RP-HPLC测定鸡内金中16种氨基酸的含量
采用酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生化后进行HPLC分析.采用Ultimate Prime C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A0.1 mol·L-1醋酸钠溶液(调pH至6.5)-乙腈(93∶7),流动相B乙腈-水(8∶2);流速1.0 mL· min-1;柱温40℃;检测波长254 nm;梯度洗脱.氨基酸衍生溶液在36 h内保持稳定,16种氨基酸线性相关系数均大于0.9995,加样回收率在98.01％～101.8％.该方法操作简便,精密度和重复性良好,可用于鸡内金中16种水解氨基酸含量的测定.
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板蓝根超微粉体二元指纹图谱研究
目的:建立13批板蓝根超微粉体水溶性成分和氨基酸柱前衍生化双重HPLC指纹图谱.方法:采用RP-HPLC梯度洗脱,选择Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)；水溶性成分HPLC指纹图谱的流动相乙腈-0.1％磷酸水溶液,流速0.5 mL·min-1,柱温20℃,进样量10 μL；氨基酸成分HPLC指纹图谱样品经异硫氰酸苯酯试剂柱前衍生化处理后进样,流动相0.1 mol·L-1醋酸钠缓冲溶液(pH 6.5)-乙腈,流速1.0 mL.min-,柱温30℃,进样量5μL；检测波长均为254nm.采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2.0版)”处理分析,建立板蓝根指纹图谱,同时测定了4种主要成分含量,并进行SPSS系统聚类分析.结果:建立了板蓝根超微粉体水溶性成分和氨基酸成分指纹图谱共有模式,确认了腺苷、表告依春和15种氨基酸的特征峰.聚类分析表明,不同产地板蓝根药材其主要成分含量存在差异.结论:建立了板蓝根超微粉体双重指纹图谱,色谱图中各个峰分离度较好、特征明显,为现阶段板蓝根超微粉体质量控制提供了科学依据.
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柱前衍生化RP-HPLC法测定中药全蝎中16种氨基酸含量
目的:建立柱前衍生化RP-HPLC法测定中药全蝎中16种氨基酸的含量的方法.方法:采用酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生化后进行HPLC分析.采用UltimatePrime C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相A为0.1 mol·L-1醋酸钠溶液(调pH至6.5)-乙腈(93∶7);流动相B为乙腈-水(8∶2);流速为1.0 mL· min-;柱温为40℃;检测波长为254 nm;梯度洗脱.结果:氨基酸衍生溶液在36 h内保持稳定,16种氨基酸在线性范围内相关系数r均＞0.999 5,加样回收率(n=9)在93.3％ ～ 104.6％之间.结论:所建立的检测方法可靠,精密度和重复性良好,可用于全蝎中水解氨基酸的含量测定.
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含0.1%苯甲酸钠的17氨基酸对照品水溶液的稳定性考察
目的:考察17种氨基酸在0.1%苯甲酸钠的水溶液中的稳定性.方法:将17氨基酸对照品配制成含0.1%苯甲酸钠的水溶液,采用异硫氰酸苯酯柱前衍生,用高效液相色谱法分别在0,1,1.5,2,2.5,3月以其为对照品测定已知含量的氨基酸原料的含量,将其所测的结果与氨基酸原料的含量进行相对偏差分析,通过两者之间的相对偏差值来考察17氨基酸对照品水溶液的稳定性.结果:所有氨基酸原料的相对偏差值均在0.05%～1.1%之间.结论:0.1%苯甲酸钠的17氨基酸对照品水溶液在0～5 ℃的储存条件下,3个月内均保持着良好的稳定性,可用于18氨基酸的含量检验.
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PITC柱前衍生化法测定保健食品中牛磺酸的含量
目的 建立液相色谱法测定保健食品中牛磺酸含量的方法.方法 采用C18色谱柱,以异硫氰酸苯酯(PITC)做为柱前衍生化试剂,以醋酸钠缓冲液-乙腈-水体系为流动相,流速为1.0mL·min-1,在254nm波长处检测.结果 牛磺酸在0.28～0.95μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9998),液体、固体保健食品的平均回收率均为95.6％,RSD分别为1.5％和0.8％(n=6).结论 该方法结果准确,稳定可靠,重复性好.
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异硫氰酸苯酯法测定清开灵注射液中氨基酸的含量
目的 建立准确测定清开灵注射液中氨基酸含量的方法.方法 采用异硫氰酸苯酯为衍生化试剂,清开灵注射液衍生化反应后,进行HPLC分析.色谱柱为Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为0.1 mol/L醋酸钠-乙腈(pH 6.5) (93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,流速为1 mL/min；检测波长为254 nm.结果 该方法可以对清开灵注射液中20种氨基酸准确定量,其浓度在0.019 ～24.855 g/L范围内,线性关系良好(r=0.999 7～0.999 9).方法重复性的RSD(％)在0.766％ ～4.49％之间；20种氨基酸的加样回收率在92.2％ ～ 106.8％之间.结论 该方法准确、可靠、灵敏,可用于清开灵注射液中氨基酸的含量测定.
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柱前衍生化RP-HPLC测定铁皮石斛鲜品中的氨基酸的含量
目的 测定铁皮石斛鲜品中氨基酸的含量.方法 样品以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析.采用CAPCELL PAK C18 SG300(250mm ×4.6mm,5μm)色谱柱,柱温为25℃；流动相A为0.05mol/L醋酸钠缓冲液(以醋酸调pH值至6.5)-乙腈(1∶1),流动相B为0.05mol/L醋酸钠缓冲液(以醋酸调pH值至6.5),梯度洗脱,流速为0.6ml/min；检测波长为254nm.结果 15种氨基酸浓度在0.077 ～2.042 μg范围内呈良好的线性关系(r:0.9994～0.9999),平均回收率为94.3％～107.7％.结论 本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于铁皮石斛中氨基酸的检测.
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HPLC测定盐酸氨基葡萄糖的柱前衍生化条件的响应面优化
目的 优化盐酸氨基葡萄糖的柱前衍生反应条件及其含量测定的高效液相色谱条件.方法 以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,采用响应面优化PITC浓度、时间及介质pH值等反应条件；采用C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水,流速为1.0 ml/min,梯度洗脱,检测波长245 nm.结果 佳衍生化反应条件为:取0.5ml供试品溶液,加入2.5 ml pH 7.14的PBS溶液,室温放置15 min,再加入2.0 ml 0.25％ PITC试剂,于80℃水浴41.75min后迅速冷至4℃,用流动相定容至10 ml.在该色谱条件下,盐酸氨基葡萄糖衍生物的保留时间为7.5 min,在50～500 μg/ml浓度内呈良好线性(r=0.9983),回收率为99.56％,RSD＜ 2.43％.结论 该方法操作简单、结果重复性好,适用于盐酸氨基葡萄糖制剂含量的测定.
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柱前衍生RP-HPLC法分析淡豆豉和大豆中氨基酸
目的 分析淡豆豉Sojae Semen Preparatum和大豆Glycine max中游离及水解氨基酸.方法 用0.1 mol/L HC1作溶剂超声提取得到淡豆豉和大豆中的游离氨基酸；用6 mol/L HC1水解提取得到水解氨基酸,以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂,采用柱前衍生RP-HPLC法进行分析.结果 淡豆豉和大豆中均含有16种氨基酸,这16种氨基酸浓度在0.031～1.750 mmol/L内呈良好的线性关系,r均大于0.997 9,平均回收率91.02％～102.04％,RSD1.01％～4.81％.结论 本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,16种氨基酸能在样品杂质量较多的情况下得到分离,且采用普通C18色谱柱成本低,可广泛应用于富含氨基酸样品的分析.
关键词： 氨基酸 淡豆豉 大豆 异硫氰酸苯酯 柱前衍生高效液相色谱 -
柱前衍生-异硫氰酸苯酯法测定宁心宝胶囊中水解氨基酸
宁心宝胶囊为新鲜冬虫夏草中分离得到的麦角菌科真菌虫草头孢Cephalosporium sinensis Chensp.Nov经液体深层发酵所得菌丝体的干燥粉末制成的胶囊,具有提高窦性心率,改善窦房结、房室传导功能,改善心脏功能的作用,用于多种心律失常,房室传导阻滞,难治性缓慢型心律失常传导阻滞[1].现行标准规定了甾体化合物和氨基酸两项定性鉴别,并以每粒含氮量作为定量指标.随着大量虫草菌丝体发酵产品被开发,人工虫草产品中化学成分的整体水平接近于虫草子实体,水解后氨基酸的种类和数量也能从一个方面反映其质量优劣,这对确保其疗效是非常重要的[2].
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异硫氰酸苯酯柱前衍生法测定复方氨基酸注射液(3AA)中氨基酸含量
目的:建立采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液(3AA)的含量.方法:色谱柱:Diamonsil C18 (2)(250mm×4.6 mm,5μm)；流动相:A为0.1 mol/L醋酸钠溶液(pH 6.5)-乙腈(93:7)；B为乙腈-水(80:20)梯度洗脱,流速:1.0 ml/min；柱温:40℃；检测波长:254 nm.结果:各个氨基酸的浓度与其相应色谱峰面积的线性相关系数均达到0.999以上；各个氨基酸的浓度与其相应色谱峰面积呈良好的线性关系,回收率在98.5％～99.6％.结论:该方法适用于测定复方氨基酸注射液(3AA)的含量,具有准确、快速和灵敏度高等优点.
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毛细管电泳紫外法检测重度创伤患者血清谷氨酰胺含量的实验研究
目的 探讨重度创伤患者血清中谷氨酰胺(glutamine,Gln)含量准确、简便、快速的检测方法.方法 选择我院重度创伤10例(创伤组),分别在术前1d及术后5、10d采集静脉血制备血清.选择同期健康体检10例为对照组,同法制备血清.以四硼酸钠(20 mmol/L,pH 9.33)、十二烷基硫酸钠(166 mmol/L)和乙腈按10:10:3配置缓冲液,异硫氰酸苯酯为衍生剂,在电压15 kV、紫外吸收波长254 nm下用直径75 μm、长58 cm的右英毛细管检测两组血清Gln含量.结果 Gln浓度在0.03 ～2.00 mmol/L范围内线性关系良好,相关系数为0.9901；精密度为3.14％,平均回收率为92.99％～ 110.28％;低检测限浓度为0.01 mmol/L.对照组Gln含量0.79 mmol/L,创伤组术后5d时Gln出现相对低点,且术前1d及术后5、10 d血清Gln浓度均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 该毛细管电泳紫外法快速、准确而简便,灵敏度高,重复性好,能有效分离检测重度创伤患者血清中Gln含量.
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柱前衍生RP-HPLC法测定胸腺五肽的氨基酸组成
胸腺五肽(thymopentin,TP5)是人工合成的五肽，对应胸腺生成素Ⅱ的32-36位氨基酸，基本序列为NH2-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-COOH，它保留了胸腺生成素的有效生物活性。TP5是一种免疫调节剂,对机体免疫功能具有双向调节作用，在临床上主要用于治疗原发性和继发性免疫缺陷，也可用作各种恶性肿瘤的辅助用药[1-3]。
