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全自动固相萃取LC/MS/MS测定水中6种有机磷农药
目的 建立水中6种有机磷农药的检测方法.方法 利用全自动固相萃取前处理技术,液相色谱串联质谱的方法,选择佳的仪器条件,同时测定水中6种有机磷农药.结果 6种有机磷农药类线性关系较好,相关系数大于0.999,方法检出限在0.16～63.8 ng/L之间,回收率在84％～117％之间,相对标准偏差小于14％.结论 本实验所建立的方法灵敏度好,选择性好,准确度高.
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LC-MS/MS同时测定动物源性食品中20种游离态性激素残留
目的 建立快速、准确的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)同时测定动物源性食品中多种性激素残留的确证方法,调查深圳市售猪肉、牛肉、鸡蛋和牛奶中激素残留情况.方法 采用乙腈提取待测组分,经过正己烷去脂、HLB-NH2柱串联固相萃取净化后,采用LC-MS/MS电喷雾电离(ESI),多反应监测(MRM)模式检测,内标法定量.结果 所测样品中大都检出一定量的内源性激素,20种目标性激素的方法定量限为0.5 ～1.0μg/kg,方法平均回收率60.4％ ～ 118.2％,相对标准偏差2.5％ ～16.2％.结论 方法快速准确,可用于动物源性食品(猪肉、牛肉、鸡蛋和牛奶)中20种游离态性激素的检测.
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液相色谱串联质谱法定量检测尿中有机磷农药代谢物
目的 建立了液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法测定尿中二乙基磷酸酯、二硫代磷酸二甲酯、二硫代磷酸二乙酯、4-硝基酚、3-氯4-甲基-7-羟基香豆素和TCPY 6种有机磷农药代谢物含量的方法.方法 尿样中加入酶解液,37℃水浴4h后经oasis HLB柱固相萃取,用甲醇洗脱后离心浓缩,乙腈定容；以乙酸铵做缓冲溶液,乙腈和水为流动相等梯度洗脱,经Waters Symmetry C18 5μm (2.1mm×150mmcolumn)分离,经在线电喷雾离子源(ESI)负离子化后,采用多反应离子监测方式(MRM)选择离子对测定.结果 目标化合物的线性范围为0～ l000ng/ml,6种化合物的相关系数有5种大于0.990,加标回收率在79％～ 130％之间,RSD＜8.2％;日内、日间相对标准偏差小于15％(n=6).结论 该方法样品采集简单,特异性强,能准确、高效地检测尿样中有机磷农药代谢物.
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LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中6种独一味成分
目的:开发建立独一味药材中芹菜素、木犀草素、木犀草苷、绿原酸、毛蕊花糖苷和连翘酯苷B6种成分在大鼠血浆中的同步定量分析方法.方法:采用蛋白沉淀法进行样品前处理,选用安捷伦ZORBAXSB-C18(2.1mm × 150mm i.d.,3.5μm)色谱柱及梯度洗脱法进行色谱分离,运用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术在多重反应监测(MRM)模式下进行样品测定,并从专属性、线性范围、准确度、精密度、回收率、介质效应和稳定性等方面对方法学进行了系统的验证.结果:在13min的分析时间内,能够实现对6种目标化合物的准确定量,方法学验证中的各项指标均符合生物样品分析的要求.结论:所建立的分析方法准确、灵敏、可靠,可用于研究独一味药材给药后相应成分在大鼠血浆中的暴露情况,为药材的质量分析和控制提供科学依据,也为该药材体内过程和效应机制的研究奠定了基础.
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液相色谱串联质谱法测定血清维生素A、E含量
目的 建立液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS法)测定血清维生素A和维生素E含量的方法.方法 采用硫酸锌沉淀蛋白,96孔蛋白沉淀板过滤.采用LCMS/MS[正离子电喷雾离子化(ESI+)的多反应监测模式(MRM)]氘代同位素内标法检测血清维生素A、E含量并进行相关方法学验证.结果 LC-MS/MS检测血清维生素A的批内精密度变异系数为3.2％(2.4％～3.9％),批间变异为5.5％(5.O％～6.0％);维生素E的批内精密度变异系数为4.1％(3.0％～5.1％),批间变异为8.0％(7.6％～8.3％).维生素A在0.06 ～2 μg/mL、维生素E在1.2 ～ 40μg/mL范围内线性良好,线性相关系数分别为0.9987、0.9909.维生素A、维生素E的定量限分别为0.03μg/mL、0.8μg/mL;检测限分别为0.02μg/mL and 0.01 μg/mL.维生素A低浓度回收率为107.5％,高浓度为106.9％;维生素E的低浓度回收率为91.9％,高浓度为88.4％.与液相色谱方法进行比对,两种方法的结果差异无统计学意义(P值均大于0.30)说明两种方法具有一致性.结论 LC-MS/MS检测血清维生素A及维生素E的灵敏度高,结果准确、稳定,可应用于临床分析.
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液相色谱串联质谱测定血清24,25双羟基维生素D方法的建立
目的 建立液相色谱串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)同时测定血清24,25双羟基维生素D2 [24,25-dihydroxyvitamin D2,24,25(OH)2D2]和24,25双羟维生素D3[24,25-dihydroxyvitamin D3,24,25(OH)2D3]的方法.方法 首先采用乙腈和硫酸锌溶液沉淀血清蛋白,之后加入正己烷/乙酸乙酯震荡提取24,25(OH)2D、离心后吸取上清液、氮气挥干,再用流动相重组.以稳定同位素标记的24,25(OH)2D3-d6作内标.质谱采用正离子电喷雾离子化的多离子反应监测模式,24,25(OH)2D2和24,25(OH)2D3定量离子通道选择质荷比分别为429.3→271.3和417.3→381.3;内标24,25(OH)2D3-d6离子通道m/z为423.3→387.3.以标准品峰面积与同位素内标峰面积比制作标准曲线,建立LC-MS/MS快速测定24,25(OH)2D2和24,25(OH) 2D3的方法.根据EP15-A2文件评价方法的精密度,并初步测定40例北京协和医院表观健康体检者[年龄(35±5)岁,男性18例,女性22例]血清24,25(OH)3D的含量及其与25OHD的比值.结果 本实验条件下可同时快速检测血清24,25(OH)2D2和24,25 (OH) 2D3,分析时间仅为7.5 min,特异性高,不受3-epi 24,25(OH)2D3以及1,25(OH) 2D的干扰.24,25(OH)2D2和24,25(OH)2D3与内标峰面积比与对应的浓度线性相关系数均＞0.999,24,25(OH)2D3重复性和实验室内不精密度分别为2.46％～4.81％和4.33％～7.21％,24,25(OH)2D2重复性和实验室内不精密度分别为4.90％～6.87％和5.82％～9.90％.24,25(OH)2D3和24,25(OH)2D2的加样回收率分别为91.20％～96.60％和92.8％～105.00％.24,25(OH)2D3和24,25(OH)2D2的定量限分别为0.25和0.5μg/L,检测限分别为0.125和0.25 μg/L.初步分析北京协和医院40例体检人群血清,24,25(OH)2D的平均值为(0.81±0.43) μg/L,25OHD/24,25(OH)2D比值范围为8.7～37.2,平均值为18.9±6.7,性别间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本研究成功建立了LC-MS/MS快捷、准确测定血清24,25(OH) 2D的方法.
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应用亲合层析结合液相色谱串联质谱法发现结核分枝杆菌H37Rv的新的糖蛋白
目的:应用刀豆素A(ConA)亲合层析结合液相色谱串联质谱法(HPLC-MS)发现结核分枝杆菌H37Rv的新的糖蛋白.方法:收集生长2周的结核菌培养液,经过滤浓缩得到培养滤液蛋白(culture filtrate protein, CFP).应用ConA亲合层析法纯化CFP中的糖蛋白,经SDS-PAGE电泳结合考马斯亮蓝染色后,对蛋白条带进行胰蛋白酶消化.应用HPLC-MS检测消化后的糖肽结构并与结核菌H37Rv蛋白质数据库进行比对,寻找新的糖蛋白.结果:CFP经ConA亲合层析纯化后的电泳结果显示有数条蛋白条带出现,经筛选相对分子质量26×103蛋白可能为糖蛋白.酶切消化该蛋白得到的多肽在HPLC-MS上保留时间26.24 min处显示有多肽色谱峰,其对应的一级MS图提示该多肽总质量为1 467原子质量单位(AMU),二级MS图显示为多个质荷比(m/z)逐级减少为54(一个己糖的分子质量单位为162 AMU)的多肽,提示有己糖丢失.同时,MS分析肽链氨基酸序列并证实蛋白的糖基化存在.与结核菌H37Rv蛋白质数据库比对结果提示,结核菌分泌的26×103蛋白为一新的糖蛋白,即铜-锌超氧化物歧化酶.结论:应用ConA亲合层析结合HPLC-MS发现了一个新的结核分枝杆菌糖蛋白.
关键词： 液相色谱串联质谱 结核分枝杆菌 刀豆素A亲和层析 铜-锌超氧化物歧化酶 -
液相色谱串接质谱测定马饲料中的三种生物碱
本文建立了采用高效液相色谱串接质谱(LC-MS/MS)同时快速筛查和定量测定马复合饲料中三种天然痕量生物碱(吗啡、可待因、罂粟碱)的方法.样品经充分粉碎后用1 mmol/L HClO4溶液提取,并通过混合型固相萃取进行净化.采用ZORBAX Eclipse Plus-C1s (150 mmL×2.1mm ID,3.5μm)色谱柱以含0.4％甲酸的水溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,正离子多反应监测(MRM)模式下进行检测.吗啡的检出限为0.50 ng/g,定量限为1.0 ng/g；可待因的检出限为0.75 ng/g,定量限为1.5 ng/g;罂粟碱的检出限为0.20 ng/g,定量限为0.50 ng/g.三种药物空白饲料高、中、低添加浓度水平下的回收率在77.4～97.8％之间,日内、日间精密度分别不高于6.2％和7.1％,实验结果表明本方法有较好的灵敏度和精密度,可以满足马饲料中该类药物的常规检测分析.
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人体毛发中类固醇类兴奋剂的液相色谱串联质谱检测方法研究
目的:利用具有高分离效能和结构确证功能的液相色谱串联质谱来探索、建立毛发中兴奋剂(酯类、母体、代谢物)的检测和评价方法,并应用于运动员头发检测,为毛发的兴奋剂检测打下基础.方法:非脂类药物:称取50 mg头发,加入d3-睾酮作内标,使用蛋白酶K水解2小时,加入正戊烷/乙醚提取.三氯甲烷/异丙醇再次提取后两次有机相混合吹干,后用甲醇/水和正己烷除去油脂,复溶后进样分析.酯类药物:50 mg头发,加内标以及水解方法同上,加入正戊烷提取,复溶后进样分析.结果与结论:方法验证中得出线性相关系数、低检测限和低定量限满足日常定量要求和头发中检测兴奋剂灵敏度的要求;药物日间精密度＜20％,日内精密度＜20％,回收率在50％以上;基质效应在80％～120％之间,符合一般验证要求.将建立的检测方法进行方法验证和评估后,应用于运动员头发中类固醇药物的检测.
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赛马比赛中违禁药物及其检测技术研究进展
本文概括和评述赛马比赛中滥用的违禁药物的种类、性质,赛马用药的相关规定、标准及其检测技术的研究进展,为研究者开发更加高效便接的检测方法提供参考.
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抑酸药对马来酸多潘立酮在健康人体相对生物利用度的影响
目的 观察抑酸药(法莫替丁、鼠李铋镁)对马来酸多潘立酮(健胃药)在健康人体药代动力学的影响.方法 10名健康受试者未服和服用抑酸药后,单剂量口服马来酸多潘立酮10 mg,用LC/MS/MS测定血药浓度,用Win-NonLin 5.0软件计算药代动力学参数,并用Spss 12.0软件比较主要药代动力学参数.结果 未服和服用抑酸药后,单剂量口服马来酸多潘立酮,其药代动力学参数如下:tmax分别为(0.85±0.24)、(2.20±1.78)h,Cmax分别为(9.68±5.37)、(7.18±4.12)μg稬-1,AUC<0-tn分别为(38.18±19.76)、(49.96±10.35)μg穐稬-1.显示服用抑酸药后,马来酸多潘立酮的tmax延长,有显著性差异(P=0.04);AUC0-tn增加,峰浓度降低,但无显著性差异(分别为P=0.1、0.06).结论 在健康人体内,法莫替丁、鼠李铋镁不影响马来酸多潘立酮的吸收程度;但使其吸收速度减慢.
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银杏内酯B注射液在健康人体的药代动力学
目的 研究中国健康志愿者单次静滴银杏内酯B(抗脑梗塞药)的药代动力学.方法 26名健康志愿者随机分成3组,分别单次静滴银杏内酯B注射液20、40、60mg.用LC-MS-MS法测定给药后不同时间点血浆中的银杏内酯B浓度,并用DAS ver 2.0软件计算其药代动力学参数.结果 血药浓度-时间曲线符合二房室模型,药代动力学参数中,3组的t1/2z无显著性差异,并与给药剂量无关;3组的AUC0-t随给药剂量的加大而增加;3组的AUC/dose,c/dose间差异具有统计学意义.结论 在20～60mg内,银杏内酯B注射液的体内过程,基本符合线性动力学特征.
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液相色谱串联质谱法测定人血浆中比伐卢定的浓度
目的 建立测定人血浆中比伐卢定浓度的液相色谱串联质谱方法.方法 用Zorbax 300SB - C18色谱柱；流动相为甲醇-水-甲酸(55∶ 45∶ 0.45)；流速为0.8 mL· min-1；柱温为35 ℃；正离子电离、多离子反应监测进行定量分析.结果 比伐卢定线性范围为15～10000 ng·mL-1；批内、批间精密度均＜10％；低、中、高浓度QC样品提取回收率均＞98％.结论 本方法专属、灵敏、准确、快速、简便,可用于比伐卢定的临床开发研究及上市后临床应用中的浓度测定.
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液相色谱法串联质谱法测定人血浆中雌二醇含量
目的：建立血浆中雌二醇含量测定的液相色谱串联质谱方法。方法以雌二醇－d3为内标，用正己烷－甲基叔丁基醚（50∶50）对血浆中雌二醇进行提取，在碱性条件下经丹磺酰氯衍生化。色谱柱：Atlantis T3（2．1 mm ×100 mm，5．0μm），流动相：乙腈－0．1％甲酸，流速：0．5 mL? min－1，柱温：30℃，检测器：API5500，进样量：10μL。用电喷雾离子化源以正离子模式，用多重反应监测模式进行检测。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、稳定性。结果雌二醇在1．0～100．0 pg? mL－1内线性良好（ r＝0．9985），低定量下限为1．0 pg? mL－1，其标准曲线为y＝5．47×10－2 x＋4．67×10－2。日间、日内精密度均小于15％，绝对回收率在97％以上，稳定性良好。结论本方法准确度好，灵敏度高，专属性强，适用于雌二醇透皮贴片的药代动力学研究。
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西尼地平的健康人药动学研究
目的:建立西尼地平血药浓度的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测定法,研究中国健康男性受试者口服西尼地平胶囊后的血浆药动学特点.方法:20名健康男性受试者单剂量口服10 mg西尼地平胶囊,以尼莫地平为内标,采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)正离子选择性反应检测测定血浆中的西尼地平浓度,使用DAS软件计算药动学参数.结果:西尼地平在0.1～20μg·L-1范围内线性关系良好(r0.996 7),低定量限为0.10μg·L-1,日内、日间精密度(RSD)均<15%,绝对回收率80%.口服10 mg西尼地平胶囊后的主要药动学参数分别为:Cmax为(14.6±5.0)μg·L-1,Tmax为(4±1.1)h,t1/2为(11.3±5.8)h,AUC0～48 h为(77.5±31.3)h·wg·L-1,AUC0～∞为(82.2±35.8)h·μg·L-1,MRT为(12.3±5.0)h,CL/F为(144.9±64.6)L·h-1,V/F为(2 253±1 592)L.结论:建立的LC-MS/MS测定法专属准确,灵敏度高,可用于西尼地平血药浓度分析及药动学研究.
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VND3207及其代谢产物在大鼠体内的药代动力学
目的 建立液质联用(HPLC-MS/MS)方法,同时测定血浆中VND3207及其代谢产物的浓度并探讨VND3207在大鼠体内的药代动力学.方法 SD大鼠ig给予VND3207 70 mg·kg-1后,于不同时间点采集血样,血浆样品经C18反相液相色谱柱梯度洗脱,采用串联质谱正离子检测多反应监测模式对VND3207及其代谢产物丁香酸和丁香醇进行定量分析,计算VND3207及其代谢产物的药代动力学参数.结果 VND3207、丁香酸和丁香醇的定量线性范围均为2～2000 μg·L-1,低定量下限为2 μg·L-1,日内和日间精密度CV均＜15%,准确度为91.2%～110.7%.通过测定SD大鼠ig给予VND3207 70 mg·kg-1后12 h的血药浓度,计算VND3207,丁香酸和丁香醇药时曲线下面积(AUC0-∞)分别为19.37±10.56,1825.32±719.97和(9.89±1.75)mg·L-1·min;消除半衰期(T1/2)分别为78.0±44.6,114.4±17.9和(66.0±23.8)min.结论 建立了快速、灵敏、准确地同时定量大鼠血浆中VND3207,丁香酸和丁香醇液质联用分析方法.VND3207被大鼠快速吸收,其中大量VND3207被氧化为丁香酸,少量被还原为丁香醇.
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一种简单灵敏的梯度洗脱液相色谱串联质谱法用于测定兔血浆中阿霉素的含量
本研究建立和验证了测定兔血浆中阿霉素含量的液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS).采用乙酸乙酯萃取血浆样品中的阿霉素和柔红霉素(内标).以配有C18预柱(2.1 mm×10 mm,2.5 μm)的C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.5 μm)进行色谱分离,采用0.1％甲酸水溶液-乙腈二元梯度洗脱:在0-1 min,1-8 min和8-15 min两者比例分别为82:18-82:18 (v/v),82:18-50:50 (v/v)和50:50-82:18 (v/v),流速为0.4 mL/min;色谱柱柱温设定为40℃,样品进样量为10μL.液相流出液使用电喷雾离子源(ESI,正离子模式),质谱多反应监测模式检测,检测离子:阿霉素m/z 544.07→396.96,内标:m/z 528.06→321.05.阿霉素在2-600 ng/mL范围内,线性关系良好,低定量限为2 ng/mL.该方法的专属性、基质效应、提取回收率及样品稳定性均符合要求.日内准确度和日间准确度的相对误差范围分别为-2.48％～0.18％和-3.78％～1.94％.日内精密度和日间精密度的相对标准偏差值分别小于8.65％和6.41％.结果显示,该方法为检测家兔血浆中阿霉素的含量提供了一种可靠的手段.
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青蒿素脂质纳米粒的制备及药动学评价
青蒿素(ART)是一种广泛用于治疗严重疟疾和脑型疟疾的药物.但因其口服生物利用度低影响了药物疗效.本研究将ART搭载于的纳米结构脂质载体系统(NLC),以期改善药物的药动学特征.采用高压乳匀法,并运用正交设计优化制备青蒿素脂质纳米粒(ART-NLC).得到的ART-NLC粒径,zeta电位,包封率,载药量分别为(53.06±2.11)nm,(-28.7±3.59) mV,73.9％±0.5％,11.23％±0.37％.ART-NLC在体外呈现缓释特性,且对人体红细胞未发现显著的溶血性.采用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定经尾静脉注射或腹腔注射ART-NLC后,大鼠的药物动力学参数,以ART溶液剂作为对照组.大鼠经尾静脉注射给药后,ART-NLC组的AUC0-∞ ((707.45±145.65) ng.h/mL)明显比ART组((368.98±139.58) ng.h/mL)大.ART-NLC组的MRT ((3.38±0.46) h)较ART组((1.39±0.61)h)有所延长.大鼠经腹腔注射给药后,得到相同结果.即ART-NLC组的AUC0-∞((1233.06±235.57) ng·h/mL)和MRT ((4.97±0.69)h)都比ARTAUC0-∞((871.17±234.03) ng.h/mL)和MRT ((1.75±0.31)h)大.大鼠经尾静脉和腹腔注射给药后,ART-NLC组的AUC0-∞ (P＜0.05)和MRT (P＜0.001)较ART组均显著性增加.
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盐酸戊乙奎醚片在健康人体内的药动学和生物利用度
目的 研究盐酸戊乙奎醚单次口服后在健康人体内的药动学和生物利用度.方法 采用开放、随机、交叉试验设计.药动学及生物利用度实验分别选择符合入选标准的健康成年受试者12和20例,均男、女各半.单次口服药动学试验按ABC、BCA、CAB 3种给药序列随机分配受试者,每个序列组4例;该试验完成后第14天进行多次口服药动学试验,连续给药7d.生物利用度分析按BD、DB 2种给药序列随机分配受试者,每个序列组10例.按规定时间采集血样和尿样,采用液相色谱串联质谱进行样本分析.结果 11例受试者完成药动学试验.在0.4～0.8 mg的实验剂量范围内,单次口服的盐酸戊乙奎醚片血药浓度-时间曲线呈剂量依赖性增长.血浆和尿样盐酸戊乙奎醚的线性范围分别是0.1～8 ng·mL-1,1～100 ng·mL-1.方法 准确度均在85％ ～ 115％内.多次给药后,ρmax和AUC比单次给药明显增加(P＜0.01),Vd和CL显著降低(P＜0.01).盐酸戊乙奎醚片的相对生物利用度为(72.44±21.03)％.盐酸戊乙奎醚在健康受试者体内以原药形式经泌尿系统的平均累积排泄率占给药剂量的(4.98±1.10)％.结论 盐酸戊乙奎醚口服后在中国健康人体内具有线性药动学特征,并以泌尿系统外途径或代谢物形式排出.
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LC-MS/MS法测定血浆中姜黄素的血药浓度
目的 建立测定姜黄素血药浓度的方法.方法 采用高效液相色谱-质谱联用法对姜黄素的血药浓度进行测定,采用固定相为Hypersil GOLD C18柱,以甲醇-水为流动相,进行梯度洗脱,流速为0.2 mL·min-1,柱温为35℃；质谱采用高温电喷雾离子源,以选择反应监测模式进行定量分析,血浆样品用乙腈直接沉淀处理.结果 姜黄素在2.5～187.5 ng· mL-1范围内呈良好的线性关系.日内、日间RSD均小于15％(n=5).结论 本方法操作简单、灵敏度高、分析时间短,适用于姜黄素血药浓度监测及药代动力学研究.
