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2014年北京地区成人呼吸道感染常见病原体IgM抗体检测分析
目的 探讨北京地区成人急性呼吸道感染(ARI)患者9种常见病毒的感染情况,分析病原体流行病学特征.方法 采用ELISA法检测1887例ARI患者巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、柯萨奇病毒(CVB),单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型(HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ),腺病毒3、7和11型(ADV3、ADV7和ADV11)及风疹病毒(RV)等9种病原体IgM抗体.结果 1887例标本中共检出阳性706例,总感染率为37.41％(706/1887),其中CMV感染率高为10.92％,其次为HSV-Ⅰ(9.59％),其它病原体检出率由高到低依次为ADV7、ADV11、EBV、ADV3、HSV-Ⅱ、CVB和RV.混合感染者有260例,占36.83％ (260/706).10月份感染率高,4月份感染率低,且各病原体的流行季节也不同.病例以中青年感染者居多,不同性别间感染率差异无显著性.结论 2014年北京地区存在多种病原体流行,以CMV、HSV-Ⅰ和ADV7为主要病原体,各病原体流行有季节性特点.
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多种传染病高通量ELISA检测的系统化标准化的早期实验研究
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记.结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性.在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开.再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上.此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例.加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析.由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度.要使ELISA测定得到准确的结果,不论是定性的还是定量的,必须严格按照规定的方法制备试剂和实施测定.此外,测定的实施中,各个步骤操作的标准化与否,也是直接影响测定结果准确性的重要因素.本研究的目的是通过对高通量ELISA法检测系统对多种传染性疾病(主要是HIV、HCV、TP、HBsAg)标本的检测进行研究,主要进行全自动免疫分析仪与其他全自动酶免分析系统的结果差异分析,以及临界值的合理界定,比较两套系统的优劣,实现ELISA检测标准化.
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妊娠早期感染犬弓首线虫对仔鼠免疫状态的影响
目的 研究母体妊娠早期感染犬弓首线虫,是否影响仔鼠的体液免疫功能.方法 取犬弓首线虫子宫段虫卵培养至感染期,不同剂量(生理盐水、1×103个、3×103个虫卵)感染受孕三天的雌鼠,待仔鼠6周龄时攻击感染(0.5×103个虫卵、生理盐水),实验共分6组,动态检测各组仔鼠血清细胞因子(IL-2,IL-4,IL-10,IFN-γ)的表达.结果 各组仔鼠血清细胞因子有差异,具有统计学意义(P＜0.05);各细胞因子之间变化规律不同:Th1细胞产生的细胞因子IL-2在攻击感染早期呈上升趋势,4周达到高峰,以后逐渐下降;IFN-γ在攻击感染早期呈上升趋势,第2周达到高峰后逐渐下降.Th2细胞产生的细胞因子IL-4和IL-10攻击后呈下降趋势,且下降趋势在早期下降明显,后期逐渐放缓.结论 妊娠早期感染孕鼠会影响仔鼠的体液免疫调节能力,且可诱导仔鼠对后天感染产生明显保护性免疫记忆;仔鼠的获得性免疫,在攻击感染的早期可能以Th2免疫占优势.
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ELISA测定常山县1982～1996年健康人群血清流脑抗体
本文报告ELISA测定浙江常山县1982～1996年度收集的1 491份健康人血清流脑抗体的结果.在流行前期采集的样本中A群脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)抗体GMT明显低于流行期的,≤2岁组的抗体阳性率和GMT显著低于6～9和10～15岁组,B群Nm抗体GMT较A群Nm抗体稍低,无显著差异,在部分年龄组中A和B群Nm抗体滴度呈线性相关.携带Nm未使A、B群Nm抗体GMT增高.健康人群血清中A群Nm抗体GMT的改变与流脑发病率之间未显示明显的线性相关.建议在流行前期开展人群抗体水平监测,在作ELISA测定时,同时抽样作杀菌抗体测定.
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应用ELISA和IHA检测粤东梅州丘陵山区人群血清弓形虫抗体
为了解粤东丘陵山区健康人群弓形虫病的感染情况.方法:用ELISA和IHA两种血清学检测方法进行互补检测.结果:共检1 010人,血清弓形虫抗体阳性157人,阳性率为15.54%.在157例阳性中,除90例双阳性外(ELISA和IHA),还有67例单项阳性(ELISA或IHA),其中ELISA阳性而IHA阴性23例,IHA阳性而ELISA阴性44例.结论:地处粤东丘陵山区的梅州市人群弓形虫病感染率较高,应引起重视.对弓形虫病的实验诊断以选用两种血清学方法同时检测为佳.
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重组核衣壳蛋白用于肾综合征出血热病人IgG抗体检测
目的检测肾综合征出血热病人的IgG抗体及发现在我国可能存在的新的血清型.方法用五种血清型汉坦病毒核衣壳重组蛋白作抗原建立间接ELISA法,检测HFRS病人血清中特异性IgG.结果检测了91份病人血清,发现我国山东、北京地区的汉坦病毒感染以HTN血清型群为主(56.1%);首次检测到2份疑似DOB型病毒感染血清.结论我国有可能存在DOB病毒血清型.
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关于ELISA若干问题的分析
简要分析了在ELISA榆测技术应用中遇到的空白对照的设立方法、阴性对照的标准、酶标反应板的差异及孵育以及酶标仪的调零与比色、cut-off值的确定、阳性与阴性灰带率、ELISA检测试剂的标准化等一些新问题,重点探讨了ELISA检测技术中传统计算cut-off值的方式所存在的缺陷与形成原因,并提出了适宜的计算cut-off值的方式.
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流行性乙型脑炎病毒IgG抗体捕获酶联免疫吸附试验检测方法的建立
目的 利用流行性乙型脑炎(乙脑)病毒特异性单克隆抗体建立检测人血清中乙脑病毒IgG抗体的捕获ELISA方法.方法 将乙脑病毒特异性单克隆抗体包被在固相载体上,加入灭活并经过纯化的乙脑病毒抗原,再加入待测血清,经洗涤、显色等判定终检测结果.采用免疫荧光法作为对照.结果 与免疫荧光法相比较,本方法的灵敏度为5.6%,特异度为85.7%,一致性为91.3%;本方法的灵敏度和特异度高于市售的两种检测试剂.结论 本研究所建立的乙脑病毒IgG抗体捕获ELISA方法具有良好的检测性能,可以应用于正常人群血清中乙脑病毒IgG抗体的筛查.
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痢疾LPS-ELISA-SIgA诊断方法的临床应用
以LPS-ELISA-SIgA法及细菌培养法对443份粪便标本进行检测,结果显示LPS-ELISA-SIgA法的敏感度和特异度分别为91.43%和96.07%;变异系数为7.32%,约登指数为0.88.表明本法敏感性和特异性均较好,且较稳定,适合基层推广使用.
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清热化痰汤治疗痰热郁肺型小儿肺炎支原体感染支气管炎随机平行对照研究
[目的]观察清热化痰汤治疗痰热郁肺型小儿肺炎支原体感染支气管炎疗效.[方法]使用随机平行对照方法,将86例门诊患者按抛硬币法简单随机分为两组.对照组43例阿奇霉素,第1d剂量为10mg.kg-1,第2～7d剂量为5mg · kg-1,1次/d,饭前1h口服.治疗组43例清热化痰汤(麻黄蜜炙3g,苦杏仁6g,生石膏先煎10g,瓜蒌仁、百部蜜炙各6g,川黄芩3g,川贝研束冲服1.5g,桔梗、板蓝根各6g,甘草3g;体温较高加鱼腥草、金银花;咳嗽痰多加青黛、紫苑;食欲不振加陈皮、山楂;大便秘结加大黄、火麻仁;喘息甚加白果、葶苈子),1剂/d,武火煮沸后文火熬制,水煎400mL,早晚餐后30min口服,200mL/次.连续治疗7d为1疗程.观测临床症状、哮鸣音、ELISA、不良反应.治疗1疗程,判定疗效.[结果]治疗组痊愈10例,显效15例,有效18例,无效0例,总有效率100.00％.对照组痊愈8例,显效14例,有效16例,无效5例,总有效率88.37％.治疗组疗效优于对照组(P＜0.05).症状消失时间治疗组改善优于对照组(P＜0.05).[结论]清热化痰汤治疗痰热郁肺型小儿肺炎支原体感染支气管炎疗效满意,无严重不良反应,值得推广.
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ELISA法与RPR法筛选梅毒的对比研究
目的 研究对比酶联免疫吸附试验ELISA与梅毒快速血浆反应素试验RPR法在筛选梅毒中的应用价值.方法 从我院于门诊、住院部、义诊期间确诊的梅毒患者中抽取63例做研究,随机分配为实验组1、实验组2.实验组1对63例梅毒患者血清实施酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测,实验组2对63例梅毒患者血清应用梅毒快速血浆反应素试验(RPR)法,分别进行基因诊断技术检测梅毒螺旋体(TP-PCR)以降低假阳性检测,对比实验室检验阳性率的结果.结果 两种检测方法下统计学显示,实验组1三个分期下梅毒检测阳性率分别是90.6％、92.6％、100％;实验组2三个分期下梅毒检测阳性率分别是78.1％、81.5％、50％,实验组1准确率明显高于实验组2,均符合统计学差异(P＜0.05).结论 酶联免疫吸附试验(ELISA)法较梅毒快速血浆反应素试验(RPR)法对梅毒检测更能提供有力诊断依据,值得在临床性疾病中推广使用.
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酶联免疫技术及其在肉品安全快速检测中的应用
对酶联免疫检测技术(ELISA)做简要介绍,并就ELISA在肉品安全快速检测中的应用进行了阐述,主要包括肉品中的兽药残留、农药残留、病原微生物、肉品疲病和掺异种肉等的快速检测.
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23例临床标本溶血对检测乙肝表面抗原影响分析
目的分析溶血对乙型肝炎表面抗原检测的影响.方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg).结果溶血标本采用ELISA 法检测HBsAg易产生假阳性.结论溶血影响乙型肝炎表面抗原的测定结果,溶血标本一般不宜做乙型肝炎表面抗原的检测.
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烟草暴露对机体氧化损伤及C-反应蛋白水平的影响
目的 通过测定吸烟和非吸烟的健康成年男性体内相关指标,探讨香烟烟雾中的有害物引起8-羟基鸟苷(8-oxoguanine,8-OHdG)、8-羟基鸟嘌DNA糖苷酶(human 8-hydroxyguanine deoxyribonucleic acid glycosidase,HOGG1)及其C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的变化.方法 采用整群抽样的方法对河南省某一地区246名18 ～ 55 (42.78±9.54)岁健康成年男性的清晨空腹静脉血进行实验室调查.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中的可替宁、8-OHdG、HOGG1和CRP的浓度,可替宁的浓度作为内暴露指标,测定的可替宁浓度按四分位数间距将样本分成1组(～2.253 μg/ml)、2组(2.252 ～ 3.159 μg/ml)、3组(3.359 ～4.211 μg/ml)和4组(4.211 μg/ml ～),测定各组内8-OHdG、HOGG1和CRP的浓度.结果 采用非参数检验比较各组血清HOGG1的浓度日=188.305,P＜0.05,即各组血清HOGG1的浓度总体分布不全相等,两两比较结果显示P值均小于0.05,且各组HOGG1的含量随着可替宁浓度的增高而增高.采用方差分析比较各组血清8-OHdG的浓度F=25.454,P＜0.05,即各组血清8-OHdG的浓度均数不全相等,两两比较结果显示,除2组和3组、3组和4组外,P＜ 0.05差异有统计学意义.采用方差分析比较各组血清CRP的浓度F=84.635,P＜0.05,即各组血清CRP的浓度均数不全相等,两两比较结果显示P值均小于0.05,且各组CRP的含量随着可替宁浓度的增高而增高.结论 体内的CRP增高,说明烟草暴露可以引起机体的炎症反应;体内8-OHdG和HOGG1水平增高,说明烟草暴露可以引起机体氧化损伤.
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赭曲霉毒素A的酶联免疫检测——Ⅰ.抗原的制备
采用活性酯法制备赭曲霉毒素A(OTA)的全抗原,并以正交试验L9(34)来选择活性酯法的佳条件.通过对实验结果的统计分析得出,当OTA与牛血清白蛋白(BSA)的摩尔比为20∶1,OTA∶N-羟基琥珀酰胺∶N',N-二环乙基碳化亚胺的摩尔比为1∶2∶4,OTA的活化时间为60min,偶联时间在90min的情况下,OTA与BSA的连接比可达9.64,OTA的利用率可达48.2%.
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大肠杆菌O157多克隆抗体及食品中双抗ELISA测定方法的研究
本研究获得了抗肠出血性大肠杆菌O157:H7的多克隆抗体,建立了一种适宜食品样品检测的双抗ELISA检测方法.该方法对纯培养菌液检出限为103～104cfu/ml;只对O157菌株有特异性反应,对非O157菌株无交叉反应;经过增菌,鸡肉与牛奶染菌样品中的大肠杆菌O157的检出限均为0.1 cfu/g(cfu/ml).
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关于全自动酶联免疫分析仪的携带污染分析
目的 探讨全自动酶联免疫分析仪在加样过程中产生携带污染问题的解决方案.方法 在每个阳性标本后做两个阴性样本,依据是否对加样钢针增加强碱液冲洗,分为对照组和实验组,分析携带污染的减少情况.结果 未进行强碱液冲洗的对照组携带污染的前两个样本的阳性率分别为41.67％、16.67％;而实验组的阳性率分别为1.67％和0.00％.结论 用强碱液对加样钢针进行冲洗,可以显著地减少全自动酶联免疫分析仪在加样过程中携带污染现象的产生.
关键词： 全自动酶联免疫分析仪 携带污染 梅毒抗体 ELISA -
武汉东湖微囊藻毒素污染及其在鱼体内的动态研究
目的了解武汉东湖微囊藻毒素污染水平及其在鱼体内的富集状况.方法2000年7月和10月,采集了湖边和湖中的水样和鱼样,用ELISA法对样品的微囊藻毒素(MC)进行测定.结果各采样点都有蓝藻的污染,蓝藻已成为东湖的优势藻种.10月份水中MC含量,显著高于7月份水中MC含量(P＜0.05);肝脏中MC含量,显著高于肌肉中MC含量(P＜0.05).
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应用随机肽库筛选展示河豚毒素模拟表位噬菌体
目的 利用噬菌体随机肽库筛选展示河豚毒素(TTX)模拟抗原表位的噬菌体,并以其替代毒素建立免疫学检测方法.方法 以抗TTX单克隆抗体为靶分子,从以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ表面的随机七肽库中进行生物亲和淘选,用ELISA法鉴定阳性克隆.结果 通过4轮淘选,获得了7株能与抗TTX单克隆抗体特异性结合的噬菌体,采用间接竞争ELISA,筛选到3株能抑制TTX的阳性克隆.其中以4号噬菌体建立的免疫检测方法,线性范围为1-20ng/ml(TTX毒素浓度),R2=0.9947,检测下限为1ng/ml.结论 从噬菌体七肽库筛选到了展示TTX模拟抗原表位的噬菌体,淘选出来的噬菌体粒子可作为毒素的替代品用于免疫学检测.
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玉米赤霉烯酮ELISA定量检测试剂盒研制
目的研制玉米赤霉烯酮ELISA快速定量检测试剂盒,用以检测食品中抗玉米赤霉烯酮(ZEN).方法在ZEN单克隆抗体基础上,用间接竞争酶联免疫吸附法研究试剂盒的各项指标.结果试剂盒低检出浓度为1ng/ml,标准曲线的线性范围为1～200ng/ml,回归方程为Y=0.99-0.40X(R2=0.99);抗体对ZEN 50%的抑制浓度为16.3ng/ml;对玉米和小麦的平均加标回收率分别是96.5%和95.5%,变异系数分别是13.2%和10.9%;试剂盒4℃保质期超过6个月;对参试真菌毒素的交叉反应率均小于1%;实验室内的变异系数小于15%,实验室间变异系数小于20%;用本法与HPLC法同时检测美国维康公司玉米赤霉烯酮盲样,结果均在允许范围之内,且两种检测方法无差别.结论该试剂盒各项指标符合相关技术要求,具有快速、灵敏、稳定、专一的特点.
