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郑州市主要生活饮用水源微囊藻细胞毒素特征分析
目的 分析郑州市主要生活饮用水源微囊藻细胞毒素特征.方法 以西流湖和黄河花园口段某调蓄池作为调查现场,采用96孔板结和极限稀释法对采集藻细胞进行分离纯化;应用全细胞PCR方法检测所分离微囊藻细胞株藻青蛋白基因中间序列(PC*IGS)和微囊藻毒素多肽合成酶基因B(mcyB),并对提取毒素应用固相萃取(SPE)高效液相色谱(HPLC)法进行检测.结果 自西流湖分离的XLH细胞株和黄河花园口调蓄池分离的2株微囊藻细胞BM1、BM2,PC-IGS、mcyB基因扩增均为阳性;mcyB基因序列测定结果与Genbank中报道的mcy基因同源性达99%;HPLC检测3株藻细胞所含毒素异构体主要为MC-LR,占毒素总量的质量百分比分别为97.9%、98.6%和99.3%.结论 自郑州市主要生活饮用水源分离的3株微囊藻细胞均为产毒株,产生毒素异构体主要为毒性较大的MC-LR.
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黄河花园口某调蓄池产毒微囊藻和微囊藻毒素污染监测
目的 了解黄河花园口某调蓄池浮游藻类、蓝藻、产毒微囊藻和微囊藻毒素污染情况.方法 从2005年3月～2006年1月,用2.5L有机玻璃采水器在该调蓄池共采样15次.采用血细胞计数板法计数浮游藻类细胞密度,用全细胞PCR检测产毒微囊藻的藻青蛋白基因中间序列和微囊藻毒素合成酶基因,用ELISA法检测水体微囊藻毒素浓度,并对全细胞PCR和ELISA阳性结果进行比较.结果 该调蓄池浮游藻类主要是硅藻、绿藻、蓝藻和裸藻,其他藻类较少;优势藻门有随季节变化逐渐演替的规律,总藻细胞密度和蓝藻细胞密度夏秋季较高.藻青蛋白基因中间序列和微囊藻毒素合成酶基因从2005年7月至11月PCR检测结果阳性;微囊藻毒素从6月份开始检出,其变化范围在0～0.251 μg/L之间,夏季高;全细胞PCR与ELISA的阳性结果没有差异.结论 黄河花园口某调蓄池有产毒微囊藻和微囊藻毒素污染,全细胞PCR可以用于自然水体中产毒微囊藻的快速检测.
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武汉东湖微囊藻毒素污染及其在鱼体内的动态研究
目的了解武汉东湖微囊藻毒素污染水平及其在鱼体内的富集状况.方法2000年7月和10月,采集了湖边和湖中的水样和鱼样,用ELISA法对样品的微囊藻毒素(MC)进行测定.结果各采样点都有蓝藻的污染,蓝藻已成为东湖的优势藻种.10月份水中MC含量,显著高于7月份水中MC含量(P＜0.05);肝脏中MC含量,显著高于肌肉中MC含量(P＜0.05).
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微囊藻的分离纯化培养及产毒特性鉴定
目的 建立微囊藻的分离纯化培养方法,并鉴定其生长和产毒特性.方法 采用96孔板结合极限稀释法,对郑州市西流湖微囊藻进行分离纯化培养;用倒置显微镜观察分离微囊藻株的细胞学和生长特点;用可见分光光度法测定分离微囊藻培养液的吸光度,并绘制分离藻株的生长曲线,计算其生长速率常数和倍增时间;用全细胞PCR和ELISA鉴定分离微囊藻株的产毒性,用ELISA测定其微囊藻毒素粗提物的浓度,并计算其产毒量.结果 成功从郑州市西流湖分离出2株微囊藻Microcystis XLH6和Microcystis XLH10,其生长曲线均呈"S"型,生长速率常数均呈先迅速升高然后逐渐降低的趋势;一个生长周期内Micmcystis XLH6 和Microcystis XLH10的平均生长速率常数分别为0.294和0.345,平均倍增时间分别为82h和70h.全细胞PCR和ELISA结果均为阳性,2株微囊藻均为产毒株,冻干藻细胞Microcystis XLH6和Micmcvstis XLH10的微囊藻毒素产量分别为1.0μg/mg和2.4μg/mg.结论 郑州市西流湖有产毒微囊藻污染,96孔细胞培养板可用于分离纯化微囊藻.
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苹果酵素对微囊藻的溶藻特征研究
目的 研究自制苹果酵素对微囊藻的溶解作用,并探讨其溶藻机制.方法 在微囊藻藻液中加入不同体积(0～3 ml)、不同稀释度(0～10-5倍)及经不同处理[原液、经0.22μm滤膜抽滤2次、高温灭菌(121℃、0.1 MPa灭菌20 min)、以12 000 r/min离心(离心半径3 cm)15 min、0.25％的胰蛋白酶处理15 min]的苹果酵素进行溶藻实验,测定叶绿素a的含量并计算清除率.结果 随着加入苹果酵素量的增加,叶绿素a的清除率先升高后下降,在加入0.6 ml时除藻作用强,第4天的清除率达到大,为94.48％;随稀释倍数的增加,叶绿素a的清除率先升高后下降,稀释10-1倍时的清除率强,在第4天达大,为95.27％;经过不同处理的苹果酵素都能产生溶藻作用,第4天原液、经0.22 μm滤膜抽滤2次、高温灭菌、以12 000 r/min离心(离心半径3 cm)15 rmin、0.25％的胰蛋白酶处理15 min的叶绿素a清除率分别为81.40％,84.36％,80.18％,79.52％和79.30％.结论 该苹果酵素具有溶解微囊藻的作用,其溶藻机制为产生一种耐高温的非蛋白类物质间接作用溶藻.
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藻类毒素MCLR通过受体途径致发肿瘤
为研究小鼠肝脏中是否存在MCLR受体,通过I125标记MCLR示踪,分析小鼠各脏器中MCLR的特异性分布,以及根据受体识别标准研究小鼠肝脏匀浆中MCLR的特异性结合组分.结果表明,MCLR在小鼠脏器中存在差别性分布,与肝脏匀浆中结合因子的结合符合受体特征;结论:小鼠肝脏中存在MCLR受体,提示MCLR的新的毒理途径.
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绿色微囊藻抗HIV凝集素MVL蛋白的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化绿色微囊藻抗HIV凝集素MVL蛋白,为进一步研究其生物学活性及其应用奠定基础.方法 以绿色微囊藻Microcystis viridis NIES-103基因组DNA为模板,PCR扩增MVL基因阅读框序列,并克隆至pET-30b(+)载体中,构建重组表达质粒pET-30b-MVL,经PCR、测序鉴定后,转化感受态E. Coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的蛋白采用Ni-NTA亲和柱层析纯化及复性.结果 重组表达质粒pET-30b-MVL序列完整,插入的基因片段全长345 bp,与GenBank中公布的MVL基因序列一致.重组菌的佳诱导表达条件为:诱导起始浓度A600=0.5左右,IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导温度37℃,诱导时间4 h,诱导培养基采用LB.以此条件诱导,在相对分子质量约20 000处可见目的 蛋白表达条带,表达量可占菌体总蛋白的47%,且表达蛋白主要以可溶性形式存在.纯化的重组蛋白纯度达95%以上,质谱鉴定为甘露糖结合凝集素.结论 已成功地原核表达并纯化了绿色微囊藻抗HIV凝集素MVL蛋白.
关键词： 微囊藻 凝集素 人免疫缺陷综合征病毒 原核表达 纯化 -
微囊藻毒素对人体健康影响的研究
目的:研究微囊藻毒素对人体肝脏的损伤作用.方法:采集不同程度污染微囊藻毒素的饮用水,以横断面调查方法,比较不同暴露组人群肝脏酶学指标的变化.结果:3组不同暴露人群的SGPT和γ-GT的水平不同,其间存在统计学差异(P＜0.05).结论:长期饮用受微囊藻毒素污染的沟、塘、河水可能造成肝脏功能损害.
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微囊藻毒素危害研究进展
水体的富营养化问题已成为一个全球性日趋严重问题.富营养化导致藻类过量繁殖产生的水华,一方面使水质恶化,生态系统遭到破坏;另一方面,一些藻种产生藻毒素给人类的健康造成很大的威胁.藻毒素的种类繁多、污染程度和范围也在扩大.
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福建省部分水源微囊藻毒素污染调查
目的 报告福建省部分饮用水水源微囊藻毒素污染状况调查结果,探讨饮用水水源微囊藻毒素的危害及预防措施.方法 1998,2000年在厦门同安肝癌高发区抽样采集浅井水49份、自来水4份、水库水3份,竞争酶联免疫吸附法(ELISA)测定水样中微囊藻毒素;2001年8-9月份采集福州山仔水库微囊藻水华,小鼠生物法测定微囊藻水华急性毒性,高效液相色谱法定性、定量测定微囊藻毒素类型和含量.结果 厦门同安农村饮用水水源普遍存在微囊藻毒素污染,夏季藻类生长高峰期,水库水微囊藻毒素检出率100%,浅井水检出率77.5%;同安水源中优势藻为颤藻,其次为微囊藻.福州山仔水库微囊藻水华LD50为9.9 g藻浆/kg,平均死亡时间2.5 h.每克鲜藻浆含微囊藻毒素20.5μg,主要毒素类型为MC-RR,其次为MC-LR和MC-YR.结论 福建省部分饮用水水源存在微囊藻毒素污染,山仔水库微囊藻毒素主要类型为MC-RR,有明显的肝毒性.
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RAPD技术用于快速区分微囊藻有毒与无毒株系
[目的]探索RAPD技术用于微囊藻毒性株系分型的可能性;[方法]使用微囊藻实验室建株的有毒和无毒株以及现场株系,作RAPD引物的扩增以及条带的对比;[结果]三种株系微囊藻可以扩增的RAPD引物各不相同,同种引物扩增出的条带也不相同;[结论]RAPD技术可用于微囊藻的毒性株系快速分型
