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北京市西城区2009-2012年度乙型流感病毒病原学监测分析
目的 分析北京市西城区2009-2012年乙型流感病毒的病原学监测结果,为制定预防控制措施提供依据.方法 由两家哨点医院每周随机采集流感样病例的咽拭子共30 ～40份,提取病毒RNA,应用real-time RT-PCR方法进行检测.结果 2009-2010年度乙型流感病毒总阳性检出率为29.7％,2010-2011年度总阳性检出率为5.1％,2011-2012年度总阳性率为19.4％.2009-2010年度和2011-2012年度均出现乙型流感流行高峰.老年人群乙型流感病毒阳性检出率比较高 结论 乙型流感经过二年的流行变迁,其流行强度经过第二年度的减弱后,在第三年度有反弹的趋势,应加强流感病毒病原学的监测管理,并以老年人为重点人群,尽快采取切实有效的预防控制措施以保护广大人群身体健康.
关键词： 乙型流感 病原学监测 Real-time RT-PCR -
济宁市4428例手足口病患者流行病学特征分析
目的 分析济宁市手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)患者肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒感染状况及患者流行病学特征.方法 采集2010年3月～2011年8月济宁市传染病医院收治的4428例手足口病患者便标本,并收集患者诊疗信息.采用Real-time RT-PCR 法检测便标本.结果 4428例患者男女性别比1.9∶1,年龄主要集中在6个月～5岁(93.54％,4142/4428).EV71总阳性率63.84％ (2827/4428),其中重型EV71阳性率为83.81％(761/908).结论 济宁市手足口病发病高峰在检测期间内为4～8月,致病病原体以EV71为主,2011年EV71阳性构成比高于2010年.
关键词： 手足口病 肠道病毒71型 Real-time RT-PCR -
TaqMan探针实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测新布尼亚病毒L基因方法的建立与应用
目的 建立敏感、特异、实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)方法,用于新布尼亚病毒的核酸检测.方法 以新布尼亚病毒L基因为靶基因设计引物以及TaqMan探针,建立real-time RT-PCR方法,并对舟山市岱山县50份临床疑似患者血清、血浆、25份正常人群血清和从患者血清中分离到的2株病毒样本进行了检测鉴定,并验证了方法的特异性、敏感性和重复性.结果 建立的real-time RT-PCR具有良好的特异性,标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2 =0.999),低检出浓度为1拷贝/μl,重复性评估批内变异系数均＜1.0％.在103份检测标本中,50份临床病例血清血浆标本,30份为阳性,健康人群血清25份和28份鼠肺、鼠肾均为阴性,8份病毒分离培养血样中2份为阳性.结论 本研究建立的real-time RT-PCR方法具有较高的特异性、敏感性和重复性,可用于人与动物新布尼亚病毒核酸的快速检测、病毒分离培养的初步鉴定等.
关键词： Real-time RT-PCR 新布尼亚病毒 核酸检测 -
哈尔滨市中东呼吸综合征疫情风险评估及实验室检测分析
目的:评估哈尔滨中东呼吸综合征(MERS)疫情发生的可能性,对可疑病例进行病原学检测.方法:采用风险矩阵法对哈尔滨市发生MERS疫情的可能性进行了风险评估,应用并联实验法对可疑病例开展病原学检测.结果:哈尔滨发生MERS疫情的风险分值为7,风险等级为高级;对10位韩国直飞哈尔滨的疑似病例进行检测,检测结果均为阴性.结论:开展疫情的风险评估并进行可疑病例的实验室病原学检验,对于监测和控制新发传染病具有重要意义.
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检测粪便中GGⅡ型诺如病毒Real-time RT-PCR方法的建立
诺如病毒是世界急性胃肠炎的重要病原之一.为加强其控制,通过序列比对设计出针对GGⅡ型诺如病毒保守序列的特异性引物与探针,建立了TaqManReal-timeRT-PCR方法.结果显示,此方法对诺如病毒核酸检测高度特异,与轮状病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒等无交叉反应,低检出限可达102拷贝,线性范围为109～102拷贝,标准曲线的相关系数为-1.00.针对标准品质粒检测的批内实验变异系数为0.28%～1.63%(n=6)、批间实验为0.28%～1.05%(n=3),对同一样品分6次进行RNA提取和逆转录,其变异系数为3.88%.对212份临床腹泻标本分别用常规RT-PCR和本文建立的TaqMan Real-time PCR进行检测,发现后者检出率略高于前者.这些结果提示此研究建立的诺如病毒的TaqMan Real-time RT-PCR检测方法可用于临床腹泻粪便标本的检测.
关键词： Real-time RT-PCR 人类杯状病毒 诺如病毒 检测 -
2016年云南省哨点医院标本流感病毒流行病学调查及血凝素基因特征分析
了解2016年度云南省哨点医院标本流感病毒的流行情况及其血凝素基因分子特征.对哨点医院采集的22 514份标本使用real-time RT-PCR方法筛选阳性,MDCK细胞进行病毒分离,SPSS软件进行统计分析.选取其中各亚型流感病毒共43株进行基因测序,使用MEGA5.0软件分析其血凝素基因特征.2016年共检出阳性标本1 310份(阳性率为5.82％),全年有两个流行高峰.甲型H1N1亚型流感病毒属于6B.2和6B.1分支;H3亚型流感病毒主要为3C.2a分支;Bv型流感病毒为1A和1B支系,By型则均属于Yamagata 3支系.部分毒株发生糖基化位点数量改变.2016年云南省流感病毒主要以Bv亚型为主,By、H3与甲型H1N1共流行的流行特点.各亚型流感病毒HA基因未发生明显变异,疫苗株仍具有保护作用.应继续加强流感监测,控制流感流行风险.
关键词： 流感病毒 Real-time RT-PCR 血凝素 -
TaqMan MGB Real-time RT-PCR 检测西尼罗病毒方法的建立
目的 建立一种灵敏、特异、高效的西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)感染诊断和流行病学调查的实验室检测方法. 方法 用C6/36细胞培养WNV并用Vero细胞蚀斑法滴定病毒浓度;根据WNV C蛋白基因组保守序列,设计一套特异性引物和TaqMan MGB探针,用细胞培养病毒液进行方法的条件优化;用不同病毒评价方法的特异性,用系列浓度病毒稀释液和染毒蚊子评价方法的灵敏性. 结果 建立的TaqMan MGB Real-time RT-PCR方法可检出低于0.01 PFU的WNV RNA,并可检出只含3只染毒蚊的标本;用该方法检测4种血清型登革病毒标准毒株、日本脑炎病毒、麻疹病毒、基孔肯亚病毒均为阴性. 结论 新建TaqMan MGB Real-time RT-PCR方法具有极高的特异性和灵敏性,是实验室早期诊断WNV感染和调查媒介携带WNV情况的理想方法.
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一起甲型H1N1流感疫情病原检测及其HA与NA基因特性研究
目的 确认引起一起流感暴发疫情的病原,阐明该病原的血凝素基因(HA)和神经氨酸酶基因(NA)的特性.方法 疫情中早出现流感样症状病例的咽拭子样本用real-time RT-PCR方法检测甲型H1N1流感病毒核酸,采用鸡胚分离法进行病毒培养,选取两病毒分离株进行HA和NA核苷酸序列测定,并进行基因特性分析.结果 此次流感疫情是由甲型H1N1流感病毒引起的,其HA和NA基因均与参比毒株的HA和NA基因高度同源,NA基因没有发生H274Y突变.结论 本研究的甲型H1N1流感病毒分离株为疫苗亲本株和中国分离株的类似株,对神经氨酸酶抑制剂类药物(如达菲)敏感.
关键词： 甲型H1N1流感 Real-time RT-PCR HA基因 NA基因 -
mir-21在食管鳞癌中的表达及其与临床病理行为的关系
目的:探讨原发性食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中mir-21的表达及其与ESCC临床病理行为的关系.方法:应用Real-time RT-PCR法及2-△△CT分析法检测ESCC患者组织及相对应癌旁组织中mir-21的表达及其与ESCC临床病理行为的关系.结果:96例ESCC标本中,40例(41.6％)mir-21存在高表达,mir-21高表达与患者分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(均P＜0.05).结论:在原发性ESCC中,mir-21有较高的表达率,与肿瘤的分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关,可能在ESCC的发生发展中有重要作用.
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小鼠肝炎病毒核酸快速检测方法的建立和应用
为满足口岸对入境噬齿类动物快速检疫的需要,建立小鼠肝炎病毒(Mouse hepatitis virus,MHV)快速核酸检测方法.方法 使用引物和TaqMan荧光探针设计软件,针对MHV保守基因设计引物和探针,建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR方法检测噬齿类动物临床样本中MHV的方法.结果 本研究建立的RT-PCR和Real-time RT-PCR检测MHV方法具有良好的特异性和敏感性,通过将建立的方法应用于MHV阳性鼠临床样品的检测,证实两种MHV核酸检测方法具有良好的稳定性.结论 本研究建立的RT-PCR和Real-time RT-PCR检测MHV的方法,适用于动物粪便、尿液等易于获得样本的检测.
关键词： 小鼠肝炎病毒 RT-PCR Real-time RT-PCR -
吉林地区首例甲型H1N1型流感患者的实验室检测
全球性甲型H1N1流感进入中国内地以来,中国疾病预防控制中心加强了全国范围内的甲型H1N1型流感监测力度,流感的预警级别也从4级提升到5级,快速准确地提供甲型H1N1的实验室检测结果 ,对流感的流行趋势及流行株是否有变异有着重要的作用.
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丹参多酚酸盐对实验性肝硬化大鼠肝组织TNF-α和IL-6mRNA的表达影响
目的:观察丹参多酚酸盐对肝硬化大鼠肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达影响.方法:SD大鼠40％ CCL4-橄榄油溶液建立肝硬化大鼠模型,随机分成4组:模型组、丹参多酚酸盐治疗低、中、高剂量组,分别每天腹腔注射葡萄糖溶液、丹参多酚酸盐12、24、48 mg/kg 2周.另取10只大鼠正常对照.治疗结束后观察各组大鼠死亡率,肝组织外观,光度法测门静脉血内毒素水平,光镜下观察病理形态学改变,Real-time RT-PCR法检测肝脏组织TNF-α和IL-6 mRNA的表达变化.结果:模型组大鼠死亡率42.86％,丹参多酚酸盐高剂量组无死亡率；与正常组比较,模型组内毒素水平显著升高(P＜0.01),经丹参多酚酸盐治疗后低剂量组内毒素水平降低(P＜0.05),丹参多酚酸盐中剂量组与高剂量组显著降低(P＜0.01).丹参多酚酸盐治疗组肝脏色泽、质地、边缘、表面光滑度及组织病理较模型对照组有明显改善.高剂量组TNF-αmRNA和各治疗组IL-6mRNA表达量与模型组相比有显著统计学差异(P＜0.01),中剂量组TNF-αmRNA表达量与模型组相比有统计学差异(P＜0.05).结论:丹参多酚酸盐降低肝硬化大鼠死亡率,改善肝硬化大鼠肝组织炎症程度,抑制肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达.
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辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖分化的影响
背景:辛伐他汀对正常大鼠骨代谢及骨髓基质干细胞增殖分化影响的报道目前不多.目的:观察辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖、分化的影响,及其在此过程中Smad1,2,7 mRNA表达水平的变化.方法:16只6周龄雌性SD大鼠按体质量随机均分成2组,对照组每天灌胃蒸馏水,实验组灌胃辛伐他汀20 mg/(kg·d),持续9周.于后一次灌胃的第2天取左侧股骨行骨密度和骨组织形态计量学测定;取右侧股骨和胫骨骨髓基质细胞向成骨方向诱导培养,并采用CCK-8法检测定向成骨分化中的骨髓基质干细胞的增殖能力;细胞培养第16,28天检测碱性磷酸酶比活性、碱性磷酸酶染色阳性细胞比;细胞培养第21天,提取总RNA,采用Real-time RT-PCR检测Smad1,2,7的mRNA表达.结果与结论:辛伐他汀体内给药干预9周后,大鼠骨量和骨密度无显著变化,体外培养骨髓基质干细胞所有检测基因mRNA水平、细胞增殖能力、细胞外基质矿化能力、碱性磷酸酶比活性、碱性磷酸酶染色阳性细胞比两组间差异均无显著性意义 (P > 0.05).结果显示20 mg/(kg·d)辛伐他汀体内给药9周对大鼠骨量及骨髓基质干细胞的增殖和分化及Smad1,2,7的表达无显著作用.
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膀胱移行细胞癌WWOX基因启动子区甲基化及mRNA表达及其临床意义
目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中WWOX基因启动子区CpG岛的甲基化状态以及WWOX基因表达缺陷的意义及其与CpG岛甲基化的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)分析WWOX基因启动子区甲基化状态和WWOX mRNA表达量及其二者的相关性.结果 54例膀胱癌组织中,WWOX基因启动子区的甲基化率达35.2％,而对应的癌旁正常组织中甲基化率仅为7.4％,二者差异有统计学意义(x2=12.43,P＜0.05).WWOX基因启动子区甲基化率随着癌组织分级的增加逐渐升高(P＜0.05).WWOX mRNA在膀胱癌组织中的表达量明显低于对应的癌旁正常组织中的表达量,二者差异有统计学意义(t=9.73,P＜0.05).WWOX mRNA的表达水平与WWOX基因启动子区的甲基化状态密切相关(r =0.377,P＜0.05).结论 WWOX基因表达的缺失与膀胱癌的发生有密切的关联,WWOX启动子区的异常甲基化是导致膀胱癌组织WWOX mRNA转录受阻的重要原因之一.WWOX启动子区甲基化改变在膀胱移行细胞癌的早期发生发展中有重要作用.
关键词： 膀胱癌 WWOX基因 DNA甲基化 Real-time RT-PCR -
2012-2013年阿拉善盟流感病原学检测结果分析
目的 分析2012-2013年内蒙古阿拉善盟地区流感病毒核酸检测结果,为防控工作提供科学依据.方法 对国家级流感监测哨点医院(阿拉善盟中心医院)及三旗两区疾控中心送检的流感样病例(ILI)标本采用Real-Time RT-PCR方法进行流感病毒核酸检测.结果 2012-2013年内蒙古阿拉善盟地区共检测流感样病例(ILI)咽拭子407份,流感病毒核酸阳性63份,阳性率为15.48％.其中:季节性H3 25份,检出率为6.14％;甲型H1N1 24份,检出率为5.90％;B型流感14份,检出率为3.44％.结论 2012-2013年阿拉善盟地区主要流行季节性H3和甲型H1N1流感,伴有乙型流感散发.该地区流感流行呈冬春季高发的特点.流感的发病人群以0～19岁年龄段为主,是流感防控的重点人群.
关键词： 流行性感冒 流感病毒核酸 检测 Real-time RT-PCR -
非小细胞肺癌组织中miR-19b与miR-20a的表达及临床意义
目的:检测miR-19b与miR-20a在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,探讨两者与肺癌临床病理的关系.方法:选择我院NSCLC肺癌患者50例,使用Real-time RT-PCR法对其癌组织及癌旁正常组织中miR-19b和miR-20a的含量进行检测,并利用2(-△△CT)法处理结果,分析与临床病理资料的关系.结果:相对于内参U6,miR-19b基因在NSCLC组织中的表达量明显低于癌旁正常组织,而miR-20a基因在NSCLC组织中的表达量明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P＜0.05);在NSCLC组织标本中,miR-19b基因表达量在临床分期Ⅰ-Ⅱ的标本中明显高于临床分期Ⅲ,而miR-20a基因表达量在临床分期Ⅰ-Ⅱ的标本中明显低于临床分期Ⅲ,差异均就有统计学意义(P＜0.05);miR-19b基因表达量在肿瘤病理低分化组织中明显低于肿瘤病理高分化组织,而miR-20a基因表达量在肿瘤病理低分化组织中明显高于肿瘤病理高分化组织,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论:miR-19b低表达和miR-20a高表达与NSCLC的临床分期、病理分级具有密切关系,早期检测有助于NSCLC诊断和治疗.
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食管鳞癌miRNA-31表达与临床因素相关分析
目的 食管鳞癌miRNA-31表达水平与各临床因素的关系分析.方法 收集本院胸外科2012年1月-2013年1月手术切除的经病理医生确诊的食管鳞癌患者的癌组织以及相应癌旁组织冷冻标本40例,采用RT-PCR法检测各组织标本的miRNA-31表达水平,分析其与临床特征之间的关系.结果 食管鳞癌组织miRNA-31相对表达量与癌旁组织表达量差异显著,具有统计学意义(P<0.05).TNM分期(Ⅲ/Ⅳ)食管鳞癌的miRNA-31表达水平较TNM分期(Ⅰ/Ⅱ)明显上升,差异具有同意学意义(P<0.05).局部浸润(T3/T4)食管鳞癌miRNA-31表达水平较局部浸润(T1/T2)明显上升(P<0.05).结论食管鳞癌组织miRNA-31表达与食管鳞癌的转移性和TNM有关.
关键词： 食管鳞癌 miRNA-31 Real-time RT-PCR -
AllGlo探针Real-time RT-PCR检测发热伴血小板减少综合征病毒
目的 建立基于AllGlo探针Real-time RT-PCR技术检测发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)的方法.方法 根据SFTSV基因组S片段的相对保守序列设计引物和AllGlo探针,建立和优化Real-time RT-PCR反应体系,对其敏感性、特异性和稳定性进行评价,并检测临床疑似SFTSV病例标本,与普通RT-PCR法、病毒分离法和抗体检测法进行比较.结果 所建立AllGlo探针Real-time RT-PCR法检测SFTSV核酸,标准曲线方程为y=-3.38x +46.03(y为Ct值,x为核酸拷贝数10g值),r2＞0.998,扩增效率为97.6％,Ct值变异系数(CV)均＜1.2％,检测限为1.00×103 copy/mL.与汉坦病毒、H1N1、H3N2、登革病毒1～4型均无交叉.检测362份疑似病例标本,SFTSV核酸阳性检出率11.9％,高于普通RT-PCR法、病毒分离法和抗体检测法(P值均＜0.05).结论 建立的AllGlo探针Real-time RT-PCR法,操作简单、快速,灵敏性、特异性较高,可用于SFTSV核酸检测.
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两种核酸检测方法在猪源与人源戊型肝炎病毒监测中的应用
目的 评价两种核酸检测方法在猪源与人源的戊型肝炎病毒(HEV)监测应用的可行性.方法 收集江苏地区急性戊肝病例血液标本和屠宰场生猪胆囊标本,采用Real-time RT-PCR法和RT-PCR法进行RNA检测,对阳性检出情况和核酸序列比对结果进行分析.结果 两种方法监测急性戊肝病例和猪胆囊标本的结果完全一致,患者血清HEV RNA检出阳性率为38.94％,猪胆汁标本HEV RNA检出阳性率为4.67％.HEV-4型为2014年本省主要人源和猪源毒株,且病毒核苷酸序列同源性为83％～97％.结论 Real-time RT-PCR法快捷、简便性和RT-PCR的分型、序列分析作用相结合,可在HEV感染和传染源监测中发挥重要作用.
关键词： 戊肝病毒 Real-time RT-PCR RT-PCR 序列分析 人兽共患病 -
白癜风患者外周血白介素17和孤独核受体的表达
目的 探讨Thl7细胞在白癜风免疫发病机制中的作用.方法 采用双抗体夹心ELISA法检测白癜风患者进展期、稳定期和正常人外周血血清中白介素17(IL-17)水平;采用实时荧光定量RT-PCR方法检测外周血单一核细胞中孤独核受体(RORγt)mRNA表达水平,并分析其与疾病活动的相关性.结果 进展期与稳定期白癜风外周血中IL-17、RORγt表达水平与正常人对照组相比显著升高(P<0.01).结论 Th17细胞可能与白癜风的发病机制密切相关.
