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河北省卢龙县1999～2001年婴幼儿杯状病毒腹泻流行病学研究
目的研究河北省卢龙县5岁以下婴幼儿杯状病毒腹泻的流行特点.方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测人类杯状病毒(HuCVs).部分阳性标本的PCR产物经克隆测序,结合参考毒株相应的核苷酸序列进行进化分析.利用住院腹泻患者粪便样本中HuCVs的检出率,估计HuCVs腹泻住院率.结果HuCVs检出率为31.6%,住院患者HuCVs阳性率为17.5%,主要分布在3～17月龄婴幼儿,发病主要集中在冬季.11株测序病毒之间的核苷酸序列同源性为55.1%～100%,均属于诺瓦克病毒(NLV)GⅡ遗传组.卢龙县2000年HuCVs流行株为NLV GⅡ-4和GⅡ-7,2001年为NLV GⅡ-3和GⅡ-7.初步估计HuCVs腹泻患者住院率为3.6‰.结论河北省卢龙县婴幼儿中存在不同基因型杯状病毒感染,以NLV GⅡ组毒株为主,其疾病负担仅次于轮状病毒.
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检测粪便中GGⅡ型诺如病毒Real-time RT-PCR方法的建立
诺如病毒是世界急性胃肠炎的重要病原之一.为加强其控制,通过序列比对设计出针对GGⅡ型诺如病毒保守序列的特异性引物与探针,建立了TaqManReal-timeRT-PCR方法.结果显示,此方法对诺如病毒核酸检测高度特异,与轮状病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒等无交叉反应,低检出限可达102拷贝,线性范围为109～102拷贝,标准曲线的相关系数为-1.00.针对标准品质粒检测的批内实验变异系数为0.28%～1.63%(n=6)、批间实验为0.28%～1.05%(n=3),对同一样品分6次进行RNA提取和逆转录,其变异系数为3.88%.对212份临床腹泻标本分别用常规RT-PCR和本文建立的TaqMan Real-time PCR进行检测,发现后者检出率略高于前者.这些结果提示此研究建立的诺如病毒的TaqMan Real-time RT-PCR检测方法可用于临床腹泻粪便标本的检测.
关键词： Real-time RT-PCR 人类杯状病毒 诺如病毒 检测 -
济南地区婴幼儿腹泻病杯状病毒的流行特征
目的阐明山东济南地区婴幼儿腹泻中杯状病毒感染的流行状况及其特征. 方法收集济南市儿童医院婴幼儿病毒性腹泻粪便标本,使用杯状病毒特异性引物对标本进行RT-PCR检测.将杯状病毒阳性PCR产物纯化后,进行克隆和序列分析,使用BioEdit 和MEGA 软件与GenBank 中的参考株进行核苷酸序列同源性分析并绘制系统进化树. 结果在212 例病毒性腹泻标本中,杯状病毒RT-PCR 阳性62 例,检出率为29.25%.经序列分析,所有杯状病毒均为诺如病毒基因组Ⅱ型. 结论杯状病毒是山东地区婴幼儿腹泻病的主要病原之一,目前以诺如病毒基因组Ⅱ型毒株流行为主.
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2009-2010年南京地区腹泻婴幼儿中人类杯状病毒感染流行病学特点分析
目的 研究南京地区5岁及以下腹泻患儿人类杯状病毒感染的分子流行病学特点.方法 2009年7月至 2010年6月在南京儿童医院共采集1~59个月的腹泻患儿粪便标本300份,采用多重RT-PCR方法检测人类杯状病毒 (诺如 病毒、札如病毒).结果 300份标本中71份检出人杯状病毒,检出率23.67%.其中,诺如病毒67份,其中58份为GⅡ/4 基因型(2006b亚型),8份为GⅡ/3基因型,1份为GⅡ/12基因型;扎如病毒4份,其中2份为GI/1基因型,GI/2和GⅡ/1基因 型各1份.结论 人类杯状病毒是南京地区腹泻婴幼儿中的主要病原体之一,主要的流行优势株是诺如病毒GⅡ/4基因型 (2006b亚型).
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福州市2017年人杯状病毒急性胃肠炎暴发疫情特征
目的 探讨福州市人杯状病毒(human caliciviruses,HuCV)引起的急性胃肠炎事件的流行特征.方法 用描述流行病学方法对疫情资料进行分析.结果 2017年福州市共发生20起HuCV引起397例的急性胃肠炎事件,均分布在小学和托幼机构,其中发生在农村有14起;以冬春季多发(11月至3月).397例的主要临床症状发生率:呕吐95.5％、腹痛30.5％和腹泻26.7％;≥7岁组病例呕吐、腹泻和腹痛均高于3～6岁组;诺如病毒引起的腹痛(28.2％)、发热(7.7％)少于扎如病毒(54.3％和37.1％);共采集150份标本,检出诺如病毒65份(43.3％,全为GⅡ型)、札如病毒21份(14.0％)、未检出64份(42.7％).结论 福州市HuCV感染冬春季多发,防控重点在农村小学及托幼机构;人杯状病毒是引起学校和托幼机构急性胃肠炎事件的主要病原,特别是GⅡ型诺如病毒.
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某老年护理院诺如病毒性胃肠炎暴发原因分析
诺如病毒(Norovirus,NoV)属于人类杯状病毒,是引起人类非细菌性急性胃肠炎的重要病原体.NoV与流感病毒相似,具有传染性强、传播迅速快,能够感染所有的年龄组人群,特别是免疫力低下的老年人,感染后极易引起暴发,成为难以控制的胃肠炎疾病,Ralph Baric等[1]称之为"胃肠性流感".随着检测技术发展,近年来老年护理院内由NoV引起的急性胃肠炎暴发的报道越来越多[2-4],严重影响到老年人的身心健康.为此对某老年护理院于2010年1月发生的一起急性胃肠炎疫情进行分析,为今后老年人NoV性胃肠炎暴发的病原体分析与防控提供参考依据.
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诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan-MGB探针实时荧光PCR的检测研究
目的 建立特异、灵敏的诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测方法.方法 根据GenBank诺如病毒遗传组Ⅱ型代表株保守序列设计特异引物对和TaqManMGB探针,调整引物、探针浓度,优化佳反应条件,建立一步法实时荧光PCR快速检测反应体系,进行灵敏度、特异性、稳定性试验,以评价反应体系,并与引物P289/P290常规RT-PCR进行灵敏度比较.结果 诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测时限短,仅1h就出结果;低检出下限为100拷贝/mL,比引物P 289/P 290常规RT-PCR灵敏度高100倍;与轮状病毒、腺病毒、星状病毒、甲肝病毒无交叉反应;4份核酸含量不同的标本重复检测5次,平均Ct值变异系数范围0.96%～2.27%.结论 诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速、特异、灵敏、稳定性好,可应用于突发公共卫生应急检测,提高快速检测能力.
关键词： 人类杯状病毒 诺如病毒 实时荧光PCR 逆转录PCR Taqman MGB探针 -
某高校不同地域学员诺如病毒抗体阳性水平的调查研究
目的 拟初步了解NVs感染在我国是否普遍存在,以丰富NVs感染的流行病学信息.方法 利用酶联免疫吸附试验检测不同省份学员血清中的诺如病毒rNV、rMX和r387特异性IgG抗体水平.结果 来自于22个省、直辖市、自治区的学员血清中均检出rNV、rMX和r387 IgG抗体.不同地域学员rNV、rMX和r387 IgG抗体阳性率,仅rMX抗体阳性率在不同地域间有显著性差异.结论 我国在广泛的空间存在NVs的感染,NVs抗体阳性率与不同地区的社会经济及生活卫生条件有关,不同的基因型的NVs可能在我国的分布有所不同.
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诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR的研究
目的 建立诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR快速、特异、灵敏的检测方法,为疾病预防控制提供可靠的依据.方法 根据GenBank诺如病毒遗传组Ⅰ型代表株保守序列设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立一步法实时荧光RT-PCR快速检测反应体系,优化反应条件,评价反应体系的灵敏度、特异性、重复性.并与常规RT-PCR比较.结果 诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR检测时限短.仅1 h就出结果 ,与轮状病毒、腺病毒、星状病毒、甲肝病毒、诺如病毒遗传组Ⅱ型无交叉反应,低检出下限为100拷贝/反应.比常规RT-PCR灵敏100倍,5份浓度不同的诺如病毒遗传组Ⅰ型标本重复检测5次,平均Ct值变异系数范围为0.39%～1.02%.结论 诺如病毒遗传组Ⅰ型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR快速、特异、灵敏、重复性好,可应用于突发公共卫生应急检测和诺如病毒遗传组Ⅰ型监测,提高快速检测能力.
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两株诺瓦克样病毒新亚型的鉴定
目的对在广州检出的人类杯状病毒(HuCVs)毒株进行分子生物学鉴定,以确定其是否为新亚型.方法选择检出的HuCVs进行克隆、转化和序列分析,使用PHYLIP进行核酸序列同源性比较,经Treeview1.5绘制进化树.结果206份病毒性腹泻标本检出HuCVs18份,检出率为8.74%(18/206),经序列分析证实均为NVs GⅡ毒株.任选其中6株进行PCR产物的克隆和测序,与GenBank中的参考株比较并绘制遗传进化树,其中HuCV/NVGⅡ003/2003/CHN(32282)、HuCV/NVGⅡ004/2003/CHN(32283)与基因文库中病毒的高同源性分别为83%和87%.结论广州存在其他国家或地区没有报道过的诺瓦克样病毒新亚型毒株.
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广州地区扎幌样病毒的检出及基因型分析
目的了解广州腹泻儿童是否存在扎幌样病毒(Sapporo-like virus,SLV)感染.方法在2003年秋冬季腹泻流行期间在南方医院儿科收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本,并采用半套式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测.纯化阳性标本PCR产物并测序,然后将其同GenBank中的参比毒株序列比较.结果收集的169份标本中有1份SLV(CH03354)PCR扩增阳性,检出率为0.59%,同源性分析表明该毒株属于SLVGⅠ-1群.结论广州地区存在SLV所致感染,本次实验检出毒株基因型与安徽毒株不同,说明我国不同地区可能存在不同的SLV基因型.
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广州儿童秋冬腹泻中人类杯状病毒感染的分子流行病学研究
目的了解广州某医院秋冬季儿童腹泻中人类杯状病毒(HuCV)感染的分子流行病学特点.方法连续2个秋冬季腹泻流行季节收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本.采用ELISA检测轮状病毒,RT-PCR检测HuCV.部分阳性标本PCR产物进行纯化、测序,结合参考株相应核苷酸序列进行进化分析.结果诺瓦克样病毒(Norwalk-like virus,NLVs)阳性率为12.35%(80/648),扎幌样病毒(Sapporo-like virus,SLVs)阳性率为0.31%(2/648).NLVs各月阳性率无显著性差异,主要感染2岁以下患儿.2003年流行株为GⅡ-3群和GⅡ-4群,2004年为GⅡ-4群.2株SLVs均为GI-1群.结论NLVs是广州地区秋冬季节儿童腹泻的重要病原体,其流行株为GⅡ-3群、GⅡ-4群病毒株,但在不同的时间段可能存在不同的流行优势株;广州地区存在SLVs所致感染,与我国报告的SLV基因型不同.
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75例人类杯状病毒肠炎患儿CK-MB检测结果分析
目的 探讨人类杯状病毒(HuCV)性肠炎患儿CK-MB的改变及其意义.方法 对75例人类杯状病毒性肠炎患儿做肌酸激酶同工酶(CK-MB)测定,与同期非HuCV性肠炎患儿的婴幼儿进行对比分析.结果 75例中68例(90.7%)CK-MB明显升高,两组比较差异均有高度显著性(P＜0.01).结论 HuCV感染可以引起心肌损害.敌在治疗时应作CK-MB的监测.
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河北省卢龙县1999～2005年婴幼儿杯状病毒腹泻的监测研究
[目的]研究河北省卢龙县5岁以下婴幼儿杯状病毒腹泻的流行病学特征.[方法]应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对1999～2005年间卢龙县医院和妇幼保健院住院的腹泻病人检测杯状病毒(HUCVs)并进行流行病学调查.[结果]1 075例腹泻病人的粪便样本HUCVs检测,用ELISA方法检测阳性率为38.6%,RT-PCR方法检测阳性率为25.7%,两种方法均阳性为21.2%.婴幼儿杯状病毒腹泻的年龄分布:以12～17月龄组发病多,其次为6～8月龄,9～11月龄组和3～5月龄组.季节分布:以历年1月份为发病高峰,其次是12月和2月份.[结论]河北省卢龙县杯状病毒婴幼儿腹泻发病严重程度仅次于轮状病毒腹泻,流行病学特征与轮状病毒腹泻极为相似.
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深圳地区婴幼儿人类杯状病毒感染状况及基因型分析
目的 了解深圳地区婴幼儿人类杯状病毒(HuCV)感染状况和对HuCV阳性病毒株进行基因型分析.方法 采集连续二个秋冬季腹泻流行期间来深圳儿童医院就诊的临床检验已排除寄生虫、细菌性腹泻和轮状病毒检测结果 为阴性的3岁以下腹泻患儿粪便标本226份,应用分型引物RT-PCR法检测HuCV的诺如病毒(norovirus,NoV)G Ⅰ和G Ⅱ群和扎如病毒(sappovirus,SaV),扩增产物通过1.5 g/dl琼脂糖凝胶电泳鏊定.部分阳性标本测序,结合GenBank参考株相应棱苷酸序列进行进化和型别流行特点分析.结果 HuCV阳性率11.06%(25/226),其中NoV阳性率10.62%(24/226),SaV阳性率0.44%(1/226),检测出NoV阳性株GⅡ/4群18株,G Ⅰ/3群5株,1株尚不能确定所属群(占4.17%,1/24).1株SaV为SG Ⅱ/1群.7月～24月龄为NoV高发年龄段.结论 HuCV是深圳地区婴幼儿冬季腹泻的重要病原体之一,流行株为NoV的G Ⅱ/4群,同时,还发现SaV的SG Ⅱ/1群存在.
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一起家庭聚集性诺瓦克样病毒感染的调查
目的:调查一起家庭聚集性非菌性腹泻病原、传播途径、临床表现以及病原学特性. 方法:感染者腹泻粪便及其可疑食物采用RT-PCR方法检测,并测序. 结果:患儿、患儿父亲、患儿外公粪便标本及蟹肉标本均扩增出NLVs目的片断,测序分析表明该四份标本同源性为100%. 结论:证实该起家庭聚集性非菌性腹泻为诺瓦克样病毒感染所致,并在食物中检测到诺瓦克样病毒,初步确定了其传播途径.
关键词： 人类杯状病毒 诺瓦克样病毒 家庭聚集性非菌性腹泻
