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WWOX基因转染后对卵巢上皮性癌细胞周期的调控
WWOX基因是2000年由Bednarek等[1]应用鸟枪基因测序技术(shot gun sequencing)分离并鉴定出的新的抑癌基因.国内外学者对WWOX基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)发生、发展中的作用进行了一些初步研究[2-3],但其具体作用机制尚不明确.
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WWOX蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其意义
WWOX基因是近年来发现的一个新的抑癌基因,位于染色体16q23.3-24.1区域,跨越了整个常见染色体脆性位点FRA16D,该脆性位点易在香烟等物质作用下发生基因变异,故WWOX基因一出现就成为肺癌发病机制研究的热点.我们从非小细胞肺癌组织及相应癌旁正常组织中提取蛋白,采用免疫组化及免疫印迹分析方法检测WWOX蛋白在非小细胞肺癌中的表达,并探讨其与非小细胞肺癌临床病理指标之间的关系.
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WWOX基因对卵巢癌PEO1细胞黏附能力的影响
目的 观察WWOX基因转染细胞对卵巢癌PEO1细胞黏附能力的影响,并探讨其作用机制.方法 利用已构建的WWOX转染细胞、质粒转染细胞及PEO1母细胞进行黏附实验,观察不同细胞对纤粘连蛋白(Fn)介导的细胞黏附性.利用整合素α和β介导的细胞黏附实验,筛选出与卵巢癌细胞黏附有关的整合素.利用筛选出的整合素,进行封闭卵巢癌细胞表面整合素的功能实验,流式细胞检测整合素的表达情况.结果 在Fn包被的培养孔中培养2 h后,WWOX转染细胞对Fn的细胞黏附性明显低于PEO1母细胞和质粒转染细胞(均P<0.01).在质粒转染细胞中,整合素α2和α3的表达明显高于WWOX转染细胞(均P<0.05),而整合素β1、β2的表达无明显变化(P>0.05);封闭整合素α3后,所有转染细胞对Fn的黏附性明显降低,与非特异性抗体IgG相比,差异有统计学意义(P<0.05),而封闭整合素α2后,与非特异性抗体IgC相比,差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞检测结果显示,在WWOX转染细胞中,整合素α3的表达明显低于质粒转染细胞(P<0.05).结论 WWOX基因通过调节卵巢癌细胞与细胞外基质的相互作用,降低整合素α3活性,进而降低卵巢癌细胞对Fn介导的黏附性.
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WWOX基因在乳腺癌发生过程中的表达及其意义
目的：研究抑癌基因WWOX在乳腺癌发生过程中不同阶段的表达及乳腺癌治疗过程中的作用与意义。方法：采用免疫组化SABC法对乳腺正常组织23例、12例乳腺原位癌和45例乳腺浸润癌组织中WWOX的蛋白表达进行分析，并结合临床病理学资料进行研究。结果：26.1%（6/23）正常乳腺组织、50.0%（6/12）乳腺原位癌、64.4%（29/45）乳腺浸润癌组织中WWOX基因蛋白表达降低或缺失，各期间的差异有统计学意义（P<0.01）。WWOX在Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级乳腺浸润癌组织分期的降低与缺失表达率分别为38.5%、61.1%和92.9%，各期间的差异有统计学意义（P<0.05）。结论：抑癌基因WWOX随着乳腺癌发生过程不同阶段中，基因表达降低或缺失逐渐升高，提示WWOX在乳腺癌发生发展过程中具有重要作用。
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WWOX基因与肿瘤的相关性研究进展
目前临床认为肿瘤属于基因性疾病,原癌基因激活、抑癌基因功能丧失以及一些修饰基因功能改变,共同导致肿瘤发生、发展,其中抑癌基因失活被认为是非常重要致癌因素.WWOX是新近发现的一个抑癌基因,定位于人常染色体普通脆性位点FRA16D (16q23-32q24.1)处.近年有研究证实,染色体脆性位点抑癌基因在致癌环境中暴露,极易引起DNA损伤致基因失活,促进肿瘤发生、发展[1].诸多实验表明,WWOX基因表达下调或者缺失与上皮恶性肿瘤有着密切的关系,如卵巢癌、乳腺癌、肺癌、食管癌及骨肉瘤等[1-2].对抑癌基因的研究现已成为肿瘤专业探讨的热点.本文就WWOX基因的结构、在肿瘤中的作用及其与肿瘤的关系进行综述如下.
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WWOX基因与肺癌关系的研究进展
WWOX基因位于染色体16q23.3～24.1区域,并跨越了普通染色体脆性位点FRA16D,被认为是与肺癌等肿瘤相关的抑癌基因.肺癌是目前人类发病率和病死率高的恶性肿瘤,对WWOX基因的研究将有助于临床对肺癌的早期诊断、治疗及预防.
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WWOX和NDRG-1基因与大肠癌相关性的研究进展
大肠癌是常见恶性肿瘤之一,我国大肠癌发病率呈递增趋势,而且约有1/4的患者首诊时已出现转移.大肠癌的确切病因尚没有定论.WWOX(WWdomain-containing oxidoreductase,WWOX)是2000年由Bednarek等[1]在染色体普通脆性位点(common frigal of sites,CFSs)FRA16D(16q23.3-24.1)区域克隆出的新基因.研究提示该基因可能为一个抑癌基因.
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牙龈鳞癌中WWOX基因的表达及其临床意义
目的:研究WWOX基因在牙龈鳞癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组化SP法检测70例牙龈鳞癌组织中WWOX基因的表达,并与临床病理指标结合进行分析.结果:牙龈鳞癌组织中WWOX基因的阳性率为27.14％.WWOX基因的表达与牙龈鳞癌的病理分级、淋巴结转移有相关性(P＜0.05),与临床分期明显相关(P＜0.05).WWOX基因在牙龈鳞癌中的表达呈负相关性.结论:WWOX基因参与牙龈鳞癌的发生发展过程,可作为评估牙龈鳞癌生物学行为的一项指标,用于识别高危转移和不良预后者及为判断其生物学特性提供可靠的指标.
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尼古丁对人牙龈成纤维细胞中抑癌基因WWOX表达的影响
目的 观测不同浓度尼古丁培养液对体外培养的人牙龈成纤维细胞(hmu-na gingival fibroblast,HGF)内抑癌基因WWOX转录水平的影响,从分子水平探讨吸烟对口腔肿瘤发生的影响.方法 取第5代HGF,以FBS作为空白对照组,实验组分别加入终浓度为0.01、0.1、1 μg/mL的尼古丁,标准条件下培养4天,提取细胞总RNA进行RT-PCR反应,测量基因转录水平.结果 WWOX基因mRNA在空白组的比值为0.89 720,加入尼古丁培养液后HGF中WWOX基因mRNA表达水平降低,低浓度组为0.88 650,中浓度组为0.75 320,高浓度组为0.61 760.结论 尼古丁影响了HGF中WWOXmRNA的转录,随着尼古丁浓度的增加WWOXmRNA合转录水平降低.
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膀胱移行细胞癌WWOX基因启动子区甲基化及mRNA表达及其临床意义
目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中WWOX基因启动子区CpG岛的甲基化状态以及WWOX基因表达缺陷的意义及其与CpG岛甲基化的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)分析WWOX基因启动子区甲基化状态和WWOX mRNA表达量及其二者的相关性.结果 54例膀胱癌组织中,WWOX基因启动子区的甲基化率达35.2％,而对应的癌旁正常组织中甲基化率仅为7.4％,二者差异有统计学意义(x2=12.43,P＜0.05).WWOX基因启动子区甲基化率随着癌组织分级的增加逐渐升高(P＜0.05).WWOX mRNA在膀胱癌组织中的表达量明显低于对应的癌旁正常组织中的表达量,二者差异有统计学意义(t=9.73,P＜0.05).WWOX mRNA的表达水平与WWOX基因启动子区的甲基化状态密切相关(r =0.377,P＜0.05).结论 WWOX基因表达的缺失与膀胱癌的发生有密切的关联,WWOX启动子区的异常甲基化是导致膀胱癌组织WWOX mRNA转录受阻的重要原因之一.WWOX启动子区甲基化改变在膀胱移行细胞癌的早期发生发展中有重要作用.
关键词： 膀胱癌 WWOX基因 DNA甲基化 Real-time RT-PCR -
非小细胞肺癌中WWOX蛋白、Ki67的表达及其意义
目的 探讨WWOX(WW domain-containing oxidoreductase)基因在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义.方法 用免疫组化方法检测50例鳞癌,31例腺癌及20例癌旁正常组织中WWOX基因蛋白的表达,并分析其与各临床病理指标、细胞增殖之间的关系.结果 WWOX基因在72.8%的NSCLC中失表达或表达减少,而在相邻正常肺组织中有80.0%正常表达.WWOX基因的表达与组织类型、腺癌细胞分化程度密切相关(r=0.262,r=0.457,P＜0.05),在鳞癌和低分化腺癌中WWOX基因失表达或表达减少.细胞增殖指数越高,WWOX基因表达越少,二者呈负相关(r=-0.252,P＜0.05).Ki67的表达与吸烟、组织分化、临床分期、淋巴结转移密切相关(均P＜0.05);与WWOX蛋白表达呈负相关(r=-0.252,P＜0.05).结论 WWOX蛋白在NSCLC组织中呈低表达,其表达的缺失可能在不同类型NSCLC的形成中发挥了不同的作用,而且与肿瘤的恶性程度及侵袭有关.Ki67蛋白的高表达提示预后不佳.
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WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制
目的 探讨WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制.方法 在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将携带WWOX基因的重组质粒WWOX-pcDNA3.0及空载体pcDNA3.0分别转染至Tca8113细胞中(Tca8113/WWOX组和Tca8113/vector组),同时设未转染组(Tca8113组),采用qPCR和Western blot法检测WWOX基因在转染细胞中的表达;MTT法检测Tca8113细胞的增殖能力;克隆形成试验检测Tca8113细胞的克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;qPCR和Westem blot法检测Tca8113细胞中肿瘤相关基因BCL2绑定组件3(BCL2binding component 3,BBC3)、叉头框蛋白O1 (forkhead in rhabdom-yosarcoma,FOXO1)、凝血酶敏感素1(thrombospondin 1,THBS1)及白介素-6(interleukin-6,IL-6)基因mRNA和蛋白的表达.结果 与Tca8113/vector组和Tca8113组比较,Tca8113/WWOX组细胞中WWOX基因的mRNA和蛋白表达水平均升高,细胞增殖速度明显减慢(P＜0.001),形成克隆数明显减少(P＜0.001),细胞凋亡率明显升高(P＜0.001),细胞中BBC3和FOXO1基因的mRNA和蛋白表达水平升高,IL-6和THBS1基因的mRNA和蛋白表达水平降低.结论 WWOX基因的过表达抑制了Tca8113细胞的生长,同时促进了Tca8113细胞的凋亡,可能与调节肿瘤相关基因BBC3、FOXO1、IL-6和THBS1的表达有关.
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抑癌基因WWOX在肺腺癌细胞株A549中表达的研究
目的:检测WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因在肺腺癌细胞株A549中的变化及其意义.方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术、聚合酶链反应结合二核苷酸重复序列多态性方法、免疫印迹分析(Western blot)方法分别对WWOX基因6～8外显子在A549细胞转录本丢失、杂和性丢失(LOH)和WWOX蛋白表达异常进行检测.结果:A549细胞样本为WWOX基因6～8外显子转录本的丢失,而在对照的原代培养人气道上皮细胞样本(简称原代培养)未发现WWOX基因的6～8外显子的丢失(P<0.05);A549细胞样本中存在D16S3029及D16S3096两个微卫星位点的LOH 而对照的原代培养中无WWOX基因的杂合性丢失(P<0.05);Western blot结果显示WWOX基因在A549细胞的蛋白表达(A值为817464.90±64916.64)明显低于在原代培养中的蛋白表达(A值为2150142.00±64916.64)(P<0.01).结论:WWOX基因可能在肺腺癌的发生发展中起重要作用;转录本丢失、LOH及蛋白低表达均可能是WWOX基因在肺腺癌中的失活方式.
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WWOX 抑癌基因研究进展
WWOX 基因定位于染色体16q23.3-24.1,在卵巢癌、乳腺癌、肝细胞癌、前列腺癌及其他肿瘤中检测到其杂合性缺失及染色体重排.该基因位于染色体普通脆性位点16D, 包含9个外显子,编码414个氨基酸相对分子量为46 000大小的蛋白.原发肿瘤组织及细胞系的研究证明该基因为肿瘤抑制基因,其失活可能导致肿瘤的发生,基因敲除实验证实了上述假设.WWOX可能和c-Jun, TNF, p53, p73, AP-2γ,及E2F-1等相互作用而发挥凋亡作用.目前对于该基因是否为肿瘤抑制基因仍存在不同观点,随着研究结果的积累,WWOX基因的功能会日渐明了,并对肿瘤的诊断、治疗和预防产生积极的影响.
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PCR检测原发性肝细胞癌WWOX基因表达及意义
目的 检测染色体普通型脆性位点FRA16D(16q23.3-q24.1)上WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达及意义.方法 用RT-PCR、荧光定量PCR方法分别对40例原发性肝细胞癌癌组织(以下简称肝癌组织)、癌旁组织中WWOX基因的△6-8变异情况及其mRNA表达差异进行检测.结果 WWOX mRNA在肝癌组织的表达(0.318±0.0559)显著低于癌旁组织(1.0),P＜0.05;而且在肝癌组织中△6-8变异体的出现频率为20%(8/40),显著高于癌旁组织2.5%(1/40),P＜0.05.结论 WWOX基因的低表达、变异可能在肝癌的发生发展中起重要作用,并有可能作为肝癌的早期诊断指标之一.
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鼻咽癌患者组织中WWOX和MDR1基因的表达
目的 探讨WWOX基因和MDR1基因在鼻咽癌患者中的表达及WWOX基因下调的机制.方法 采用荧光相对定量RT-PCR法检测89例鼻咽癌患者(实验组)和61例慢性鼻炎患者(对照组)鼻咽部组织中MDR1和WWOX mRNA表达水平,并用甲基化特异性PCR(MSP)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析WWOX mRNA表达下调的机制.结果 与对照组比较,实验组WWOX mRNA表达水平明显降低,MDR1 mRNA表达水平明显升高(P＜0.01).实验组临床分期Ⅲ～Ⅳ期患者较Ⅰ～Ⅱ期患者,低分化患者较高分化患者的WWOX mRNA表达量均明显降低(P均＜0.01).实验组低分化者较高分化者MDR1 mRNA表达量明显升高(P＜0.01).实验组WWOX基因启动子甲基化程度明显高于对照组(t=7.002,P＜0.01),且WWOX mRNA与启动子甲基化程度呈负相关(r=-0.594,P＜0.01).与对照组比较,实验组WWOX基因D16S504、16S3096、D16S3029微卫星位点杂合性缺失状态(LOH)明显升高(P＜0.01).WWOX mRNA与该基因LOH呈负相关(r=-0.364,P=0.013).结论 启动子甲基化是鼻咽癌患者WWOX抑癌基因表达下调的原因.MDR1基因的上调表达与鼻咽癌的组织学分化关系密切.
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抑癌基因WWOX在胃癌中的表达及其临床意义
目的 观察WWOX基因mRNA在胃癌组织中的表达情况,分析WWOX基因的表达与胃癌临床病理学指标的关系,探讨WWOX在胃癌发病中的作用.方法 采用半定量逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法 检测52例胃癌组织和配对癌旁正常胃黏膜组织标本中WWOX mRNA的表达情况.结果WWOX基凶的mRNA在胃癌组织中比癌旁正常胃黏膜组织呈现明显的低表达(Z=5.140 9,P<0.01);WWOX mRNA的表达下调与胃癌分化程度、TNM分期和浸润深度有关(P<0.05).结论 WWOX mRNA的表达降低可能参与了胃癌的发生、发展,可望作为临床评价胃癌预后的参考指标及基因治疗的新靶点.
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WWOX基因与妇科肿瘤的研究进展
WWOX基因是一个跨越了常染色体脆性位点FRA16D的基因,近年来大量研究表明其参与信号转导、细胞周期和细胞凋亡等多个环节的调控,在乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌等多种恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要作用,被认为是一个新的抑癌基因.本文对WWOX基因与妇科肿瘤的研究进展作一综述,以期为妇科肿瘤的基因治疗提供一种新思路.
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WWOX mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨WWOX(WW domain containing oxidoreductase)mRNA在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用RT-PCR技术检测39例卵巢上皮性癌、17例卵巢交界性上皮性肿瘤、29例卵巢良性上皮性肿瘤及31例正常卵巢组织中WWOX mRNA的表达,并分析其与各临床病理指标的相关性.结果 WWOX mRNA在卵巢上皮性癌及卵巢交界性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率(分别为20.5%、41.2% )及表达水平(分别为0.29±0.12、0.55±0.09)均显著低于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织(分别为68.9%、70.9%)和(0.85±0.13、0.86±0.16)(P均＜0.05);且WWOX mRNA在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率和表达水平均与手术病理分期和淋巴结转移有明显的相关性(P＜0.05).结论 WWOX mRNA在卵巢上皮性癌组织中呈低表达,其不同程度的表达缺失与卵巢上皮性肿瘤的发生发展有关.
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WWOX基因真核细胞表达载体的构建与鉴定
目的 构建人WWOX基因真核细胞表达载体.方法 采用RT-PCR方法 ,从人新鲜卵巢组织的总RNA中扩增出1245 bp的人WWOX cDNA片段, 然后用Hind III和Eco RI双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA 3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒.结果 WWOX基因的序列测定结果 与文献报道完全一致,其真核细胞表达载体被成功构建.结论 成功克隆出WWOX基因,并成功构建其真核细胞表达载体.
