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胰岛素对高脂饮食小鼠皮下及附睾周围来源的脂肪细胞血浆纤溶酶原激活物抑制物-1、叉头框蛋白C2及叉头框蛋白O1表达的影响
目的 研究高脂饮食喂养小鼠附睾周围和皮下来源的脂肪细胞血浆纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、叉头框蛋白C2(FOXC2)及叉头框蛋白O1 (FOXO1)表达水平,探讨不同类型肥胖的机制.方法 20只小鼠随机分为对照组和高脂组,分别给予正常饮食和高脂饮食喂养12周.取其附睾周围及皮下脂肪组织,原代培养前脂肪细胞经分化后,Western blot法测定脂肪细胞中PAI-1的蛋白表达水平,并用RT-PCR法检测胰岛素作用前后高脂组附睾周围及皮下脂肪细胞FOXC2和FOXO1的mRNA表达水平.结果 高脂组小鼠体重显著高于对照组(P＜0.05);组内比较小鼠附睾周围脂肪组织PAI-1表达显著高于皮下脂肪组织,差异有统计学意义(P＜0.05);胰岛素作用后,FOXC2 mRNA水平有所升高,附睾附近脂肪细胞升高明显,与皮下脂肪细胞相比,差异有统计学意义(P＜0.05);胰岛素作用后,FOXO1 mRNA表达有所降低,附睾附近脂肪细胞降低明显,与皮下脂肪细胞相比,差异统计学意义(P＜0.05).结论 高脂小鼠附睾周围和皮下来源的脂肪细胞的PAI-1表达不同,胰岛素作用后FOXC2及FOXO1的表达存在差别,这种差别可能是不同类型肥胖的机制之一.
关键词： 血浆纤溶酶原激活物抑制物-1 叉头框蛋白C2 叉头框蛋白O1 细胞培养 -
自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3和叉头框蛋白O1在胃癌组织中的表达及其意义
目的：探讨自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light 3，LC3）和叉头框蛋白O1（forkhead box protein O1，FoxO1）在胃癌组织中的表达及其意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测29例胃癌组织和癌旁正常组织中自噬相关基因LC3和FoxO1的表达情况，分析自噬相关基因表达水平与临床病理特征之间的相关性。结果：免疫组化结果提示LC3蛋白、FoxO1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率均高于癌旁正常组织（P＜0.01）。LC3蛋白表达水平与胃癌的分化程度、淋巴结转移、临床分期、侵及胃壁深度明显相关，与患者的性别、年龄、胃癌发生部位及大小无明显相关性；FoxO1蛋白表达水平与胃癌的分化程度明显相关，与患者的性别、年龄、胃癌发生部位、大小、淋巴结转移、临床分期、侵及胃壁深度无明显相关性。结论：自噬相关基因LC3和FoxO1在胃癌组织中表达水平增高，均与胃癌的分化程度相关，且FoxO1高表达是胃癌早期频发事件，提示自噬活动水平的上调对胃癌的发生、发展具有重要促进作用。
关键词： 胃癌 自噬 微管相关蛋白1轻链3 叉头框蛋白O1 -
WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制
目的 探讨WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制.方法 在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将携带WWOX基因的重组质粒WWOX-pcDNA3.0及空载体pcDNA3.0分别转染至Tca8113细胞中(Tca8113/WWOX组和Tca8113/vector组),同时设未转染组(Tca8113组),采用qPCR和Western blot法检测WWOX基因在转染细胞中的表达;MTT法检测Tca8113细胞的增殖能力;克隆形成试验检测Tca8113细胞的克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;qPCR和Westem blot法检测Tca8113细胞中肿瘤相关基因BCL2绑定组件3(BCL2binding component 3,BBC3)、叉头框蛋白O1 (forkhead in rhabdom-yosarcoma,FOXO1)、凝血酶敏感素1(thrombospondin 1,THBS1)及白介素-6(interleukin-6,IL-6)基因mRNA和蛋白的表达.结果 与Tca8113/vector组和Tca8113组比较,Tca8113/WWOX组细胞中WWOX基因的mRNA和蛋白表达水平均升高,细胞增殖速度明显减慢(P＜0.001),形成克隆数明显减少(P＜0.001),细胞凋亡率明显升高(P＜0.001),细胞中BBC3和FOXO1基因的mRNA和蛋白表达水平升高,IL-6和THBS1基因的mRNA和蛋白表达水平降低.结论 WWOX基因的过表达抑制了Tca8113细胞的生长,同时促进了Tca8113细胞的凋亡,可能与调节肿瘤相关基因BBC3、FOXO1、IL-6和THBS1的表达有关.
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叉头框蛋白O1在正畸力介导的牙槽骨改建中的表达改变
目的 观察大鼠正畸牙移动牙槽骨的改建及叉头框蛋白O1(forkhead box O1,FOXO1)的表达改变,初步探讨FOXO1在正畸力介导的牙槽骨改建中的作用.方法 构建大鼠牙移动模型,左侧上颌第1磨牙在50 g力作用下近中移动.分别于牙移动1、3、7d处死大鼠.通过HE染色及免疫组织化学法观察牙移动不同时间点第1磨牙根分叉区牙槽骨的改建及FOXO1的表达水平.结果 正畸力作用后,大鼠上颌第1磨牙不断近中移动.牙移动组根分叉区牙槽骨内破骨细胞较对照组明显增加,牙移动第3d时破骨活性强.加载正畸力后,根分叉区牙槽骨内活跃的成骨细胞逐渐增加,成骨活性增强;根分叉区牙槽骨内FOXO1主要表达于成骨细胞内,且随着成骨细胞的增加,FOXO1的表达逐渐增强.结论 正畸力介导了根分叉区牙槽骨的改建,FOXO1的表达改变可能与正畸牙移动骨改建相关.
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大鼠正畸牙移动牙周组织中叉头框蛋白O1和成骨特异转录因子RUNX2的表达
目的:检测大鼠正畸牙移动牙周组织中叉头框蛋白O1 (forkhead boxO1,FoxO1)和Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达变化,初步探讨FoxO1和Runx2在正畸牙移动牙周组织改建中的作用及相互关系.方法:将40只8周龄雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为5组,建立正畸牙移动模型,以上颌左侧加力的第一磨牙为实验侧,右侧不加力的第一磨牙为对照侧.分别加力1、3、5、7、14 d后处死大鼠,解剖分离出含有第一磨牙的牙槽骨制备标本,进行苏木精-伊红(H-E)染色和FoxO1、Runx2免疫组织化学染色,利用Image ProPlus图像分析系统对染色后的切片做定量分析,采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学处理.结果:FoxO1在牙周膜主要表达于成骨细胞及成牙骨质细胞中,Runx2主要表达于成骨细胞、成纤维细胞及成牙骨质细胞中.实验组加力后,大鼠牙周组织中FoxO1和Runx2的表达增强,在3～5 d内达到峰值,而后表达降低;14 d时与对照组相比无显著差异(P＞0.05),其余组与对照组相比均有显著差异(P＜0.05).结论:FoxO1和Runx2参与了正畸牙移动中的牙周组织改建,且主要参与了成骨细胞和骨形成的过程.
关键词： 叉头框蛋白O1 成骨特异转录因子RUNX2 正畸牙移动 牙周组织改建 -
角质细胞叉头框蛋白O1基因调节血管内皮生长因子A的表达
目的 通过体外实验在角质细胞中过表达或沉默叉头框蛋白O1 (FOXO1)基因,研究其对血管内皮生长因子A (VEGF-A)蛋白水平和转录活性的影响.方法 采用体外细胞培养和转染方法,分别用ON-TARGET plusSMART pool人FOXO1 siRNA和对照siRNA (ON-TARGET plus Non-targeting Control Pool)转染人永生化牙龈角质细胞(human immortalized gingival keratinocyte,HIGK),用免疫荧光法检测HIGK中FOXO1和VEGF-A的免疫荧光强度,荧光酶素实验分别检测FOXO1过表达和FOXO1沉默时VEGF-A的活性.结果 与未转染组相比,使用FOXO1 siRNA转染的HIGK中VEGF-A的蛋白水平降低了57％ (P＜0.05).荧光酶素实验分析结果显示,在HIGK中过表达FOXO1后VEGF-A的转录活性增加了2.1倍(P＜0.05),而FOXO1沉默时VEGF-A的转录活性减少了20％～43％(P＜0.05).结论 角质细胞中FOXO1参与VEGF-A的表达调控.
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转录因子叉头框蛋白O1在牙周炎中作用的研究进展
牙周炎是由牙菌斑生物膜引起的牙周支持组织的感染性疾病,可引起牙周软硬组织破坏,导致牙齿的松动和脱落.叉头框蛋白O1(FOXO1)处于多条信号转导通路的交汇点,作为细胞中关键信号的整合者,可以调控细胞氧化应激反应、细胞周期循环、细胞凋亡和细胞自噬等生物学过程.近年来研究发现,FOXO1与蛋白激酶B、c?Jun氨基末端激酶和激活转录因子等众多蛋白相互作用,通过多重信号通路直接或间接地调控牙周组织免疫炎症反应,氧化还原反应和牙槽骨骨重建等过程,在牙周炎的发生和发展中发挥重要作用.因此,深入研究FOXO1在牙周炎发生发展中的作用和机制,对于寻找新的牙周炎治疗途径具有重要意义.
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FoxO1在非小细胞肺癌中的研究进展
叉头框蛋白O1 (forkhead box protein O1,FoxO1)作为一种重要的细胞转录因子,通过调节靶基因的表达参与细胞周期阻滞、凋亡、DNA损伤修复等生物学过程,在肿瘤的发生发展及预后中起着重要的作用.FoxO1在肺、心、肝、胰腺、骨骼肌、睾丸、卵巢等人体组织中广泛表达.文章就近年来FoxO1在非小细胞肺癌中研究进展作一综述.
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血清饥饿对HT22细胞FOXO1蛋白磷酸化的影响
目的:观察血清饥饿对HT22 细胞叉头框蛋白O1(forkhead box protein O1,FOXO1)蛋白表达的影响,探讨FOXO1 蛋白在脑缺血损伤中的意义.方法:建立去血清饥饿损伤细胞模型,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测细胞损伤,四甲基偶氮盐(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力;Western Blot 检测血清饥饿对HT22 细胞FOXO1 蛋白磷酸化的影响.结果:LDH 和MTT 结果显示随着血清饥饿时间的延长,细胞损伤增加,细胞活力逐渐下降,呈时间依赖性.去血清饥饿6 h 后,FOXO1 的Ser 319 位点磷酸化降低,Ser256 和Thr24 位点的磷酸化水平增加.结论:血清饥饿诱导的神经元损伤可以导致FOXO1 蛋白的磷酸化水平发生变化.
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转录因子FOXO1在宫颈癌中的表达及意义
目的 探讨转录因子叉头框蛋白O1 (FOXO1)对人宫颈癌细胞增殖能力的影响.方法 选取宫颈癌组织样本108例和正常宫颈组织76例.采用免疫组化方法检测FOXO1在宫颈癌组织中的表达,免疫印迹方法检测转染过表达质粒或干扰质粒后不同标志物的表达变化,流式细胞术检测FOXO1对宫颈癌细胞增殖能力的影响.分析FOXO1表达与宫颈癌临床病理分期的关系.结果 FOXO1阳性表达率在官颈癌组织高于正常宫颈组织(75.9％vs.1.3％)(P＜0.01).FOXO1的表达与肿瘤分期密切相关(P＜0.05).免疫印迹显示,敲低FOXO1的表达后导致细胞周期的促进蛋白CDC25B、周期素B1和周期素D1表达下调,而细胞周期抑制蛋白p21Cip1和p27KiP1表达增加.而过表达FOXO1显著地提高宫颈癌细胞的增殖能力.结论 FOXO1在宫颈癌中表达增高;其表达增高及降低分别可产生促进宫颈癌细胞增殖及抑制细胞增殖的作用.
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Foxo1在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞的表达研究
目的 探究Foxo1在糖尿病大鼠肾脏的表达和脂质代谢的关系.方法 构建1型糖尿病大鼠模型,喂养2个月后处死,取肾脏组织,免疫组织化学和Western blot检测Foxo1、Akt和SREBP-1在肾脏的表达;油红O染色及组织脂质定量检测肾组织中脂质含量.结果 糖尿病大鼠出现明显的多饮、多食、多尿症状,体重较正常组明显下降,血糖、血甘油三酯及血尿素氮升高.免疫组织化学检测显示,磷酸化Foxo1和Foxo1表达定位于肾小管上皮细胞.Western blot检测可见与正常组大鼠相比,磷酸化Foxo1在糖尿病大鼠表达升高;而总Foxo1在两组间表达未见差异.相似地,磷酸化Akt和SREBP-1在糖尿病组大鼠表达也均明显升高.油红O染色表明脂滴沉积于糖尿病大鼠肾小管上皮细胞,定量甘油三酯测定显示糖尿病组肾脏脂质含量高于正常对照大鼠.结论 磷酸化Foxo1在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞表达升高,可能和SREBP-1上调及细胞内脂质沉积相关.
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多囊卵巢综合征患者颗粒细胞叉头框蛋白O1 mRNA的表达与意义
目的 探讨转录因子叉头框蛋白O1(FOXO1)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞中的表达及意义.方法 采用逆转录实时定量PCR(qRT-PCR)检测67例PCOS患者(PCOS组)与63例对照患者(对照组)卵巢颗粒细胞中FOXO1的表达,并分析其临床意义.结果 PCOS组的体质量指数(BMI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、抗苗勒氏管激素(AMH)、卵巢基础卵泡数(AFC)明显高于对照组(P均<0.05),但PCOS组的卵泡刺激素(FSH)低于对照组(P<0.05).与对照患者相比,FOXO1在PCOS患者卵巢颗粒细胞中的表达下降(P<0.05).采用二元Logistic回归分析发现,FOXO1、AFC、HOMA-IR是影响PCOS的危险因素(P<0.05).结论 FOXO1在PCOS患者卵巢颗粒细胞低表达,可能在PCOS的发生发展中发挥重要作用.
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FOXO1表达上调对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨叉头框蛋白O1(FOXO1)表达上调对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法 常规培养人骨肉瘤细胞系MG-63及人成骨细胞系hFOB1.19,并用qRT-PCR法检测细胞中FOXO1 mRNA表达.将MG-63细胞随机分为FOXO1重组质粒组与NC组,分别转染pcDNA3.1-FOXO1重组质粒和空载质粒.转染后24 h,分别用qRT-PCR法、Western blotting法检测细胞中FOXO1 mRNA、蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力(吸光度值),流式细胞术测算细胞凋亡率.结果 人骨肉瘤细胞MG-63中FOXO1 mRNA相对表达量低于人成骨细胞hFOB1.19(P<0.05).转染后24 h,FOXO1重组质粒组FOXO1 mRNA及蛋白相对表达量高于NC组(P均<0.05).与NC组比较,FOXO1重组质粒组细胞增殖能力低、凋亡率高(P均<0.05).结论 FOXO1表达上调可抑制骨肉瘤细胞增殖,促进其凋亡.
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FOXO1在膀胱癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系
目的 探究叉头框蛋白O1(FOXO1)在膀胱癌(BC)组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法 选取2013年5月至2014年7月在汉川市人民医院泌尿外科行手术切除的35例膀胱癌组织标本,并选取相应的35例癌旁(距病灶1 cm处)正常组织标本作为对照组.收集入试者临床资料,并采用免疫组化法和Western blot法检测FOXO1,采用配对卡方分析不同临床资料患者的FOXO1表达情况.结果 膀胱癌组织、肌层浸润性癌(MIBC)、高/低分化、有淋巴结转移患者的FOXO1阳性表达率分别为88.57％、100.00％、100.00％/100.00％、100.00％,明显高于癌旁组织、浅表性癌(NMIBC)、低度恶性倾向、无淋巴结转移患者的FOXO1阳性表达率(分别为14.29％、73.33％、60.00％、77.78％),差异均有统计学意义(P<0.05);对照组正常组织的FOXO1表达为0.81±0.35,明显低于NMIBC组织、MIBC组织的1.16±0.54、1.90±0.46,差异均有统计学意义(P<0.05);NMIBC组织FOXO1的表达为1.16±0.54,明显低于MIBC组织的表达的1.90±0.46,差异有统计学意义(P<0.05);在不同FOXO1表达患者中,40个月存活率比较中,阴性表达的膀胱癌患者生存率为50.00％,略高于阳性表达组的32.26％,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 FOXO1在不同临床病理特征的BC患者中表现有差异,以膀胱癌组织、MIBC、高/低分化、有淋巴结转移患者的FOXO1表达阳性率较高,但FOXO1阳性及阴性表达患者生存时间相当.
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皮肤切创愈合过程中FoxO1表达与损伤时间关系
目的 检测皮肤切创愈合过程中FoxO1的表达及其时间规律性变化. 方法 建立小鼠皮肤切创模型,应用免疫组织化学技术及Western印迹法检测切创后不同时间段皮肤中FoxO1的表达. 结果 HE染色显示皮肤创口正常愈合.免疫组织化学结果显示,对照组FoxO1弱表达于表皮、毛囊、皮脂腺、血管内皮及真皮中少数的成纤维细胞;伤后6~12 h创口周边区表皮及皮肤附件FoxO1表达增强,可见浸润的中性粒细胞和少量单核细胞表达FoxO1;伤后1~3 d FoxO1以单核细胞阳性表达为主;伤后5~10 d FoxO1以新生血管内皮及成纤维细胞表达为主;伤后14 d仍有少量成纤维细胞表达FoxO1.Western印迹法检测显示,创伤各组创口皮肤的FoxO1表达量均高于对照组,其中伤后12 h和伤后7 d为FoxO1的两个表达峰值.结论 FoxO1在皮肤切创愈合过程中呈现一定的时序性变化,有望成为推断创口形成时间的生物学指标.
