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As2O3诱导KB和Tca8113细胞分化与包壳蛋白表达的关系
目的 探讨As2O,对人口腔鳞癌KB和Tca8113细胞诱导分化的作用与包壳蛋白(involucrin)表达的关系.方法 用免疫荧光技术观察As2O3诱导KB和Tca8113细胞分化前后包壳蛋白的表达和变化.结果 包壳蛋白在As2O3,对人口腔鳞癌KB和Tca8113细胞诱导分化后比其诱导分化前包壳蛋白表达增高.结论 As2O3诱导口腔鳞癌分化可导致包壳蛋白表达增高,其作用机理尚不清楚.
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口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞中透明质酸酶的表达及意义
目的 探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)Tca8113细胞中透明质酸(HAase)表达及意义.方法 以正常人牙龈上皮细胞作对照,采用RT.PCR、免疫荧光技术检测人OSCC Tea8113细胞株中HAase的mRNA水平及其蛋白表达.结果 HAase主要在Tca8113细胞和正常上皮细胞胞浆内表达;HAase mRNA的半定量检测表明,Tea8113细胞内HAase的表达强度比相对应的正常牙龈上皮细胞内HAase的表达强度显著增高,差异有统计学意义.结论 细胞胞浆中HAase的表达水平可能与细胞的恶变有关.
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阿霉素对Tca8113细胞端粒酶活性及端粒结合蛋白表达的影响
目的 观察阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡对端粒酶活性及端粒结合蛋白(TRF)表达的影响;探讨端粒酶和TRF在细胞凋亡途径中的作用机制.方法 通过Tca8113细胞MTT实验,确定后续实验中阿霉素作用浓度.将Tca8113培养细胞分成用药组和对照组,培养5 d和7 d后,利用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用Giemsa 染色进行凋亡形态学观察;通过端粒酶酶联免疫吸附实验对端粒酶活性进行定性和定量分析;利用免疫组化和免疫荧光标记法分别检测TRF表达和表达水平.结果 5 μg/ml阿霉素作为后续研究的作用浓度.在5 μg/ml阿霉素作用5 d和7 d后,用药组细胞凋亡率分别为(36.4±1.7)%和(54.2±2.1)%,与对照组比较差异有统计学意义(P ＜ 0.05);Giemsa 染色显示用药组出现明显凋亡细胞;TRAP检测结果表明,用药组端粒酶活性降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);端粒酶活性随阿霉素作用时间延长而降低(P ＜ 0.05);用药组与对照组细胞均有TRF表达,在细胞核内呈均匀蓝染状态,而在诱导凋亡细胞核和凋亡小体内呈点状弥散分布,但两组间TRF表达水平差异无统计学意义(P ＞ 0.05).结论 阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡使其细胞内端粒酶活性受抑制,TRF表达特点发生改变,但未改变TRF表达水平.
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PCNA对口腔鳞癌细胞凋亡和增殖的影响
目的 探讨增殖细胞核抗原(PCNA)基因对口腔鳞癌细胞TCA8113增殖和凋亡的影响.方法 构建PCNA高表达以及RNA干扰载体,分别采用Western blotting或定量PCR检测其表达水平.将其转染TCA8113口腔鳞癌细胞使PCNA高表达或沉默后,采用MTT实验检测PCNA对TCA8113细胞增殖的影响,通过AnnexinV/PI染色、流式细胞仪检测细胞凋亡情况,分析PCNA高表达或沉默对细胞凋亡的影响.结果 成功构建PCNA高表达和PCNA干扰载体,分别转染TCA8113细胞后,Western blotting和定量PCR检测到PCNA的高表达或低表达.MTT增殖实验结果显示,PCNA高表达可促进TCA81 13细胞增殖,24、48、72h时PCNA高表达组细胞的存活率均明显高于对照组(P＜0.05).PCNA沉默可有效抑制TCA8113细胞增殖,24、48、72h时PCNA沉默组细胞的存活率均明显低于对照组(P＜0.05).在顺铂诱导细胞凋亡过程中,PCNA高表达可明显抑制凋亡,PCNA沉默则显著促进凋亡.结论 PCNA基因参与口腔鳞癌细胞TCA8113的增殖和凋亡,能显著增强TCA8113对化疗药物顺铂的敏感性.
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西妥昔单抗对人舌癌细胞系Tca8113的放射增敏作用
目的 探讨西妥昔单抗( C225)对人舌癌Tca8113细胞系的放射增敏作用.方法 体外培养人舌癌Tca8113细胞系,C225组用西妥昔单抗(C225) 100 nmol/L处理后,6MVX射线不同剂量(0、2、4、6、8和10 Gy)照射C225组和单纯照射组,照射后用细胞计数法及四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖率,集落形成实验计算克隆数,采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡.结果 不同照射剂量时C225+照射组的细胞生长抑制率均高于单纯照射组(t=-15.6～-3.0,P ＜0.05)；C225+照射组的放射生物学参数值(D0、Dq、N、SF2)较单纯照射组低.C225+照射组的SER为1.353;C225+照射组的G0/G1期细胞比例在4、6、8 Gy时均高于单纯照射组(t=-7.64、-7.89、-4.78,P＜0.05).随着照射剂量升高,C225+照射组和单纯照射组的细胞早期凋亡率皆先升高后下降,4 Gy时两组差异大[(7.96±0.36)％和(4.13±0.29)％,t- 12.75,P＜0.01].结论 C225对人舌癌Tca8113细胞系具有放射增敏作用.C225可能通过Go/G.期阻滞和诱导凋亡来增加人舌癌Tca8113细胞系的放射敏感性.
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5-氨基酮戊酸对人舌麟癌Tca8113细胞株体外光动力杀伤作用的基础研究
目的 初步研究体外5-氨基酮戊酸介导的光动力疗法对人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤效应.方法 体外培养Tca8113细胞,以5-氨基酮戊酸为光敏剂,半导体激光治疗仪给予光动力疗法,采用MTT法检测光敏剂不同孵育时间、不同光敏剂浓度对Tca8113细胞抑制率的影响.结果 5-ALA-PDT作用后,Tca8113细胞生长受到抑制,孵育时间和浓度效应关系显著(P＜0.05).药物佳作用浓度为1 mmol/l,佳孵育时间为6h.结论 5-氨基酮戊酸-光动力疗法能有效杀伤Tca8113细胞,光敏剂孵育时间、光敏剂浓度是影响疗效的重要因素.
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PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对Tca8113细胞增殖活性的影响
目的 探讨PDK/AKT通路特异性抑制剂LY294002对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖活性的影响.方法 用不同药物浓度的LY294002(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)处理Tca8113细胞,MTT法检测对照组和实验组在不同的作用时间(24h、48h、72h、96h)下,Tca8113细胞的OD值,计算增殖抑制率,绘制Tca8113细胞浓度-抑制率曲线及时间-抑制率曲线.结果 随药物浓度的增加及作用时间的延长,Tca8113细胞的OD值逐渐减小,增殖抑制率逐渐增大(P<0.01).结论 LY294002对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与LY294002的药物浓度及作用时间呈正相关.
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大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及细胞周期的影响
[目的]研究大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡以及细胞周期的影响并初探其机制.[方法]取对数生长期Tca8113细胞设空白对照组、大蒜素(50、25、12.5μg/mL)组和顺铂(40μg/mL)组,给药48 h后流式细胞术分析细胞周期的改变并检测细胞凋亡状况,逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关调控蛋白周期蛋白(cyclin B1、cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶(CDK1、CDK2)表达.[结果]与空白对照组比较,大蒜素(50、25μg/mL)组细胞周期G2/M期比例显著提高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达显著下调且Bax mRNA表达显著上调(P<0.05或P<0.01),Bax/Bcl-2值显著提高(P<0.01),cyclin B1蛋白和CDK1蛋白显著上调、cyclin D1蛋白和CDK2蛋白显著下调(P<0.05或P<0.01).[结论]大蒜素具有促进人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡、阻滞细胞有丝分裂的作用,其机制可能与大蒜素影响凋亡相关调控基因及细胞周期相关调控蛋白表达有关.
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野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡及caspase-8表达的影响
目的：探讨野黄芩苷诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的可能机制。方法将体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞分成对照组和不同浓度野黄芩苷组（浓度分别为80、120、160 mg/L），每组设3个复孔。采用Tunel检测细胞凋亡情况；采用免疫细胞化学法和Western blot法检测caspase-8蛋白表达情况。结果（1）80、120、160 mg/L 野黄芩苷组 Tca8113细胞凋亡率高于对照组[（17.63±0.25）%、（36.23±0.36）%、（51.84±0.58）% vs（4.45±0.27）%，P<0.05]。（2）与对照组相比，80、120、160 mg/L野黄芩苷组caspase-8蛋白的表达增加（0.283±0.040 vs 0.474±0.031、0.592±0.077、0.781±0.020，P<0.05）。结论野黄芩苷能明显诱导舌鳞癌细胞Tca8113的凋亡，可能与上调caspase-8蛋白表达有关。
关键词： 舌肿瘤 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 野黄芩苷 Tca8113细胞 -
表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞外信号调节激酶抑制作用的研究
目的了解表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞状细胞癌细胞细胞外信号调节激酶(ERK)的抑制作用.方法采用免疫细胞化学以及Western blot方法研究Tca8113细胞在不同浓度AG1487状态下,细胞外信号调节激酶的表达情况.结果免疫细胞化学结果显示:AG1487可明显抑制细胞核内活化ERK的表达,但对细胞质内全部ERK的表达没有明显影响;Western blot结果进一步证实,AG1487可抑制活化ERK的表达,并且,活化ERK的表达与AG1487存在剂量依赖关系.结论表皮生长因子受体抑制剂AG1487可明显抑制其MAPK信号通路,进而对细胞的分裂增殖产生抑制作用.
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JSH-23对人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响
目的 探讨JSH-23阻断NF-κB信号通路后人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的情况及NF-κB信号通路相关凋亡抑制基因Bcl-2的表达变化,进而为临床舌鳞癌的干预和治疗寻找新的药物提供实验依据.方法 采用体外培养人舌癌Tca8113细胞的方法,经不同浓度JSH-23作用不同时间后,用MTT法、RT-PCR及Western blot等方法检测JSH-23对Tca8113细胞增殖、凋亡的影响.采用SPSS13.0统计软件对数据进行方差分析及t检验.结果 Tca8113细胞经JSH-23作用后,增殖受到明显抑制,20 μmol/L JSH-23作用48 h时,抑制作用为显著,细胞生长抑制率达到60.45％.同时,Bcl-2凋亡抑制基因表达减少,与对照组相比,JSH-23作用48 h后,Bcl-2表达显著减少47.85％,差异有统计学意义(P＜0.05);Bcl-2蛋白含量也明显减少,作用48 h后,Bcl-2蛋白表达相对光密度值分别下降50.93％ (P ＜0.01).结论 JSH-23作为NF-κB信号通路抑制剂,可以明显抑制人舌鳞癌细胞的增殖,同时显著下调Bcl-2基因及蛋白的表达.
关键词： 舌鳞癌 Tca8113细胞 NF-kappa B JSH-23 Bcl-2 -
人舌鳞癌裸鼠移植瘤模型的建立
目的 为抑癌药物的研究建立人舌鳞癌动物模型.方法 选4-6周裸鼠24只,在其皮下接种体外培养的人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞,建立人舌鳞癌移植瘤模型.结果 用本法可成功建立舌癌动物模型.成癌率为98.5%.组织病理学检查示组织呈低分化鳞癌表现.结论 本模型能较客观地反映了人舌鳞癌的生物学行为,为舌癌的生物学、治疗学研究,提供了一个良好动物模型.
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土贝母制剂诱导Tca8113细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响
目的 探讨土贝母制剂对Tca8113细胞(人舌癌细胞株)诱导分化机制,为舌癌治疗提供依据.方法 应用MTT(塞唑蓝)比色法和流式细胞仪检测不同浓度的土贝母制剂对Tca8113细胞增殖抑制率及细胞周期各相的变化和凋亡率,并通过电子显微镜观察其亚细胞结构改变.结果 土贝母制剂对Tca8113细胞细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性,流式细胞仪分析G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,亚细胞结构,细胞空化.线粒体肿胀,染色质趋边凝集.结论 土贝母制剂能够抑制Tca8113细胞增殖,阻止G1期细胞向S期的转化进程,诱导Tca8113细胞凋亡.
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不同砷化合物对人舌鳞癌细胞的毒性研究
目的 研究不同的砷化合物(一甲基亚砷酸,三氧化二砷,砷酸氢二钠,二甲基砷酸钠)对人舌鳞癌细胞株增殖的影响.方法 以人舌鳞癌细胞株(Tca8113)为研究对象,分别暴露于0.032 6 ～33.500 01μmol/L一甲基亚砷酸(CH3AsO,MMAⅢ),0～3 200.0 μmol/L三氧化二砷(As2O3,iAsⅢ),砷酸氢二纳(Na2HAsO4·7H2O,iAsv)和二甲基砷酸钠(C2H6AsO2Na·3H2O,DMAⅤ)48 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞生存率；将细胞暴露于10.00 mol/L的三氧化二砷,砷酸氢二钠和二甲基砷酸钠,0.13 μmol/L的一甲基亚砷酸,收集细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS).结果 高于一定浓度的一甲基亚胂酸(≥8.34μmol/L),三氧化二砷(≥50.00 μmol/L),砷酸氢二钠(≥1 600.00μmol/L)和二甲基砷酸钠(≥400.00μmol/L)均能够显著降低Tca8113的细胞生存率,且在一定剂量范围内具有剂量-效应关系；CH3AsO,As2O3,Na2 HAsO4·7H2O和C2H6AsO2Na·3H2O暴露48 h的Tca8113细胞的50％生存率(IC50)经计算分别为15.68、288.40、1 720.00、1 483.00 μmol/L;细胞内活性氧含量依次为CH3AsO＞ As2O3＞Na2HAsO4·7H2O＞C2H6AsO2Na·3H2O.结论 砷化合物在高于一定浓度时可以明显抑制Tca8113细胞增殖,其中MMAⅢ的毒性强；砷价态相同时,有机态砷的毒性高于无机态砷.随着药物浓度的增加,ROS也增加,其中也以MMAⅢ高.砷化合物的细胞毒性可能与诱导的氧化损伤有关.
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长春新碱对人舌癌Tca8113细胞生物学行为的影响
目的 探讨外源性长春新碱(VCR)对人舌癌细胞株Tca8113的生物学行为.方法 应用细胞培养技术观察不同浓度的VCR对Tca8113细胞的增殖抑制作用,MTT法检测Tca8113细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测不同浓度的VCR对Tca8113细胞增殖周期进程的影响,电子显微镜观察 Tca8113细胞亚细胞结构改变.结果 不同浓度的VCR对Tca8113细胞增殖均有抑制作用,其细胞增殖数量显著低于对照组,抑制率呈明显的剂量依赖性.流式细胞仪结果显示VCR主要作用于细胞周期的M期,从而使细胞有丝分裂停止于细胞中期,促进细胞凋亡,电子显微镜下可见VCR作用后的Tca8113细胞线粒体、纺锤体、微管等结构改变,可见凋亡小体.结论 VCR抗肿瘤效能主要取决于自身的药物浓度及作用时间、给药途径等,以提高其VCR的生物利用度.
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CKS1 siRNA对人舌癌Tca8113细胞中CKS1蛋白的抑制作用
目的：探讨 CKS1 siRNA 对人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞中 CKS1蛋白的干扰作用。方法设计特异性 CKS1插入序列，转入Tca8113细胞，应用免疫组化、RT－PCR、Western印迹检测Tca8113细胞中CKS1蛋白的表达。结果 CKS1 siRNA成功导入并抑制了 Tca8113细胞中CKS1蛋白的表达（P＜0．05）。结论 CKS1 siRNA能抑制Tca8113细胞中CKS1蛋白的表达，应用CKS1 siRNA治疗舌癌具有可行性。
关键词： CKS1 siRNA Tca8113细胞 免疫组化 反义RNA CKS1蛋白 -
雷公藤内酯醇对Tca 8113细胞增殖周期进程的影响
目的 观察雷公藤内酯醇(TL)对体外培养的人舌癌细胞系Tca8113细胞诱导分化机制,为人舌癌治疗提供理论依据.方法 应用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的TL对Tca8113细胞的增殖抑制率,相差显微镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测Tca8113细胞周期进程改变及凋亡率,电子显微镜观察经TL作用后的Tca8113细胞超微结构改变.结果 TL对Tca8113细胞的增殖抑制率呈明显的剂量依赖性,相差显微镜下实验组细胞贴壁不佳,并且数目减少,细胞圆缩.流式细胞仪结果显示G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞增多,细胞凋亡率升高.电子显微镜下可见细胞高度空化,线粒体肿胀,细胞核染色质趋边,可见凋亡小体.结论 TL对Tca8113细胞有显著的增殖抑制作用,阻止Tca8113细胞G1期向S期转化进程,诱导Tca8113细胞凋亡及亚细胞结构改变.
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人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞过表达WWOX基因的基因表达谱分析及WWOX基因的抑癌作用机制
目的:分析人口腔鳞状细胞癌(OSCC)Tca8113细胞过表达包含WW域的氧化还原酶(WWOX)基因的基因表达谱变化,探讨WWOX基因的抑癌作用机制.方法:Tca8113细胞分为WWOX基因过表达组和对照组.采用携带WWOX基因的pGV287-LV-WWOX慢病毒颗粒和携带空载体的pGV287-LV慢病毒颗粒分别感染2组Tca8113细胞.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting法检测2组Tca8113细胞中WWOX mRNA和蛋白表达情况.采用基因芯片技术筛选差异表达基因并进行生物学分析.采用定量PCR法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的差异表达基因的mRNA相对表达水平.结果:慢病毒感染后,WWOX基因过表达组Tca8113细胞中WWOX mRNA相对表达水平较对照组明显升高(P<0.05),WWOX基因过表达组Tca8113细胞中WWOX蛋白表达水平升高.基因芯片筛选出差异倍数(FC)1.5倍以上的基因共347个,其中表达上调171个,表达下调176个.生物信息学分析显示这些基因分布于癌症、p53信号、MAPK信号和白细胞介素2(IL-2)等多条信号传导通路.WWOX基因过表达组MAPK信号通路中的丝裂原活化蛋白激酶2(MAP2K)、孤核受体4A1(NR4A1)、双特异性磷酸酶5(DUSP5)和双特异性磷酸酶6(DUSP6)mRNA相对表达水平较对照组明显升高(P<0.05),而成纤维生长因子受体2(FGFR2)mRNA相对表达水平较对照组明显降低(P<0.05).结论:WWOX基因过表达导致Tca8113细胞的基因表达谱发生变化,WWOX基因的抑癌作用机制与调节MAPK信号途径的多个基因表达有关联.
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WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制
目的 探讨WWOX基因对Tca8113细胞生长的影响及其作用机制.方法 在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将携带WWOX基因的重组质粒WWOX-pcDNA3.0及空载体pcDNA3.0分别转染至Tca8113细胞中(Tca8113/WWOX组和Tca8113/vector组),同时设未转染组(Tca8113组),采用qPCR和Western blot法检测WWOX基因在转染细胞中的表达;MTT法检测Tca8113细胞的增殖能力;克隆形成试验检测Tca8113细胞的克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;qPCR和Westem blot法检测Tca8113细胞中肿瘤相关基因BCL2绑定组件3(BCL2binding component 3,BBC3)、叉头框蛋白O1 (forkhead in rhabdom-yosarcoma,FOXO1)、凝血酶敏感素1(thrombospondin 1,THBS1)及白介素-6(interleukin-6,IL-6)基因mRNA和蛋白的表达.结果 与Tca8113/vector组和Tca8113组比较,Tca8113/WWOX组细胞中WWOX基因的mRNA和蛋白表达水平均升高,细胞增殖速度明显减慢(P＜0.001),形成克隆数明显减少(P＜0.001),细胞凋亡率明显升高(P＜0.001),细胞中BBC3和FOXO1基因的mRNA和蛋白表达水平升高,IL-6和THBS1基因的mRNA和蛋白表达水平降低.结论 WWOX基因的过表达抑制了Tca8113细胞的生长,同时促进了Tca8113细胞的凋亡,可能与调节肿瘤相关基因BBC3、FOXO1、IL-6和THBS1的表达有关.
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雷公藤红素联合平阳霉素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响
目的:观察雷公藤红素联合平阳霉素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响.方法:对Tca8113细胞进行常规培养,应用MTr法测定不同浓度雷公藤红素、平阳霉素、雷公藤红素联合平阳霉素(联合组)对Tca8113细胞的增殖抑制作用,采用流式细胞学对Tca8113凋亡细胞进行定量分析.结果:联合组对Tca8113细胞的增殖抑制率明显高于两药物单用组,各时间点差异具有统计学意义(P＜0.05);与空白组比较,各用药组Tca8113细胞的凋亡率明显升高,联合组细胞的凋亡率明显高于两药物单用组,24、48 h比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:雷公藤红素与平阳霉素联合用药可提高Tca8113细胞增殖率和凋亡率,雷公藤红素具有化疗增敏作用.
