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Omi/HtrA2及Caspase-8在结直肠癌组织中的表达及其意义
目的：研究结直肠癌中 Omi/HtrA2（丝氨酸蛋白酶）和 Caspase-8的表达与预后的关系及其临床意义。方法用免疫组化检测96例结直肠癌组织，39例癌旁组织中Omi/HtrA2及Caspase-8的表达，并分析其与结直肠癌的临床病理特征及预后的关系。结果癌组织中Omi/HtrA2的强表达率72.9%（70/96）明显高于癌旁组织中的强表达率33.3%（13/39，P＜0.05）。癌组织中Caspase-8的强表达率77.0%（74/96）明显高于癌旁组织中的强表达率33.3%（13/39，P＜0.05）。结直肠癌组织中Omi/HtrA2的表达与病理分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关（P＜0.05），与年龄、性别、浸润深度、辅助化疗及肿瘤大小无关（P＞0.05）；Caspase-8的表达与淋巴结转相关（P＜0.05），与年龄、性别、肿瘤大小、病理分化程度、浸润深度、辅助化疗及TNM分期无关（P＞0.05）。Omi/HtrA2及Caspase-8在癌组织中的表达进行相关性分析显示二者没有相关性，均与预后不相关（P＞0.05）。结论结直肠癌中Omi/HtrA2及Caspase-8均强表达，二者无相关性；Omi/HtrA2的表达与病理分化程度、淋巴结转移及 TNM 分期有关；Caspase-8的表达与淋巴结转移有关；Omi/HtrA2和Caspase-8均不是影响其预后的因素。
关键词： 结直肠肿瘤 丝氨酸内肽酶类 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 细胞凋亡 预后 -
兔肝VX2肿瘤射频消融术后残癌中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达变化的意义
目的 探讨兔肝脏VX2肿瘤射频消融(RFA)治疗术后残余瘤组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(caspase-8)表达变化的意义.方法 超声引导下将VX2肿瘤细胞接种于23只新西兰白兔肝脏内,行RFA治疗,人为造成肿瘤组织残余,应用免疫组化方法检测治疗后残癌组织中caspase-8的表达情况.结果 RFA术前caspase-8在兔肝VX2肿瘤组织中呈低表达,为(9.4±2.3)％,治疗后即刻组残存瘤组织中的阳性表达率为(12.6±2.9)％；治疗1周后caspase-8于残存瘤组织中的阳性表达率为(45.8±12.8)％；治疗2周后的阳性表达率为(76.7±15.5)％.治疗后4周组的阳性表达率为(96.6±18.3)％.结论 RFA可诱导兔肝VX2肿瘤残余瘤组织中的肿瘤细胞凋亡,从而起到进一步的治疗作用.
关键词： 导管消融术 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 细胞凋亡 VX2肿瘤 -
消旋-3-正丁基苯酞对帕金森病大鼠脑组织Bax、Caspase-8和TH表达的影响
目的：观察消旋-3-正丁基苯酞（丁苯酞）对帕金森病（PD）模型鼠黑质Bax、Caspase-8、TH表达的影响，进一步明确丁苯酞对PD模型鼠脑保护作用及其机制。方法90只SD大鼠随机分为三组，模型PD对照组30只：采用立体定向注入6-羟多巴法造模；消旋-3-正丁基苯酞组30只：立体定向注入6-羟多巴，对模型鼠进行丁苯酞灌胃4周；正常对照组30只：立体定向注入抗坏血酸生理盐水。各组动物处死后行脑组织快速冰冻切片并采用免疫组化法分别检测黑质的Bax、Caspase-8、TH阳性细胞数，用原位杂交法分别检测Bax mRNA、Caspase-8 mRNA、TH mRNA的阳性细胞数。结果 NBP组免疫组化法分别检测黑质的Bax、Caspase-8、TH阳性细胞数分别为35.1±6.4，21.4±5.7，95.8±9.4；原位杂交法分别检测Bax mRNA、Caspase-8 mRNA、TH mRNA的阳性细胞数分别为23.7±6.3，16.9±7.3，48.8±7.5。与PD组相比，消旋-3-正丁基苯酞组免疫组化和原位杂交均显示术侧黑质Bax、Caspase-8阳性神经元数量较PD组均明显降低。而TH阳性神经元数量较PD组明显增多。结论正丁苯酞对PD模型鼠脑有保护作用且可能与降低Bax、Caspase-8的表达，增加TH的表达有关。
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细胞程序性死亡与心肌再灌注损伤的研究进展
心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病发展过程涉及多种细胞死亡形式,包括坏死、凋亡及自噬等.既往认为坏死是被动的不受信号转导调控的过程,而目前研究认为至少有一部分坏死是受信号调节的,程序性坏死是一种依赖于受体相互作用蛋白激酶(RIPK)3的细胞死亡,这种死亡过程由特定的信号转导分子所驱动,其特点是形成以RIPK1和RIPK3为核心的坏死小体.程序性坏死参与调控心肌再灌注损伤的研究成为热点问题.如果能够同时抑制程序性坏死和凋亡,那么有可能在大程度上保护心肌缺血再灌注损伤.
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半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8、受体作用蛋白及核因子-κBp65在口腔扁平苔藓中的表达及意义
目的 探讨口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(caspase-8)、受体作用蛋白(receptor interacting protein,RIP)、核因子-KB(nuclear factor-kB,NF-kB)p65的表达及其与细胞凋亡的关系.方法 采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)、SP免疫组化法检测30例OLP及15例正常口腔黏膜(正常黏膜组)中caspase-8、RIP、NF-kBp65的表达及细胞凋亡情况.结果 OLP中上皮细胞凋亡指数(6.76±2.32)明显高于正常对照组(2.10±0.42),而固有层的凋亡指数(1.75±0.74)明显低于正常对照组(6.10±0.96),差异均有统计学意义(P<0.05).OLP的上皮层角质细胞caspase-8、RIP、NF-kBp65的阳性率分别为97%(29/30)、87%(26/30)及93%(28/30),均显著高于正常黏膜组(P<0.01).固有层淋巴细胞caspase-8、RIP、NF-p65的阳性率分别为100%(30/30)、90%(27/30)及80%(24/30),均明显高于正常黏膜组(P<0.01).OLP的上皮角质细胞和固有层淋巴细胞caspase-8、RIP、NF-kB065表达水平分别与其自身凋亡指数(apototic index,AI)正相关.OLP上皮层中RIP、NF-kBp65和caspase-8的表达均互为正相关关系,三者在固有层的表达亦互为正相关关系,固有层淋巴细胞NF-kB阳性表达强弱与上皮细胞AJ呈正相关.结论 OLP中同时存在角质细胞凋亡亢进及固有层淋巴细胞凋亡的减少,这种凋亡的异常可能与OLP的发生、发展密切相关.OLP中caspase-8、RIP和NF-kBp65高表达,提示caspase-8、RIP和NF-kB065在口腔扁平苔藓的发病中起一定作用.
关键词： 扁平苔藓 口腔 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 NF-kB 受体作用蛋白 -
脂多糖与干扰素α联用诱导白血病U937细胞凋亡及其机制
目的:探讨Toll样受体配体内毒素脂多糖(LPS)与干扰素(IFN)-α联用对白血病U937细胞凋亡的作用及其对caspase-8基因表达的影响.方法:将200μgL的LPS和(或)2000 U/mL的IFN-α作用于U937细胞,MTT检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测作用48 h后U937细胞中caspase-8 mRNA的表达.结果:LPS与IFN-α联用较单用LPS、IFN-α能明显抑制U937细胞增殖、增加细胞凋亡率(P＜0.01),且各药物组较对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).LPS与IFN-α联用48 h后,caspase-8mRNA的表达水平较IFN-α组、LPS组和对照组均升高(P＜0.01).结论:LPS与IFN-α联用能有效抑制白血病细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与caspase-8的激活有关.
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Caspase8和9在肿瘤局部微环境形成早期与调控蛋白Twist1的关联性
目的:研究Caspase 8、9在肿瘤局部微环境早期线形程序性坏死(LPPCN)及血管生成拟态(VM)形成中对上皮一间充质转变(EMT)调控蛋白Twist1表达的影响.方法:将96只C57BL小鼠随机分为Caspase 8抑制剂组、Cas-pase9抑制剂组、Caspase 8,9抑制剂联合用药组(联合组)和对照组,制备小鼠荷瘤模型.采用免疫组织化学法检测EMT调控蛋白Twist1在LPPCN和VM周围第1～4层肿瘤细胞的表达水平.结果:4组LPPCN周围第1～4层肿瘤细胞Twist1核阳性染色指数差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且呈递减趋势;对于同层肿瘤细胞,联合组和对照组的细胞核Twist1阳性染色指数比较差别有统计学意义(均P<0.01).LPPCN、VM周围第1～4层肿瘤细胞、同一层不同组的肿瘤细胞浆Twist1阳性染色指数差异均无统计学意义(均P>0.05);VM周围第1～4层肿瘤细胞、同一层不同组的肿瘤细胞核Twist1阳性染色指数差异均无统计学意义(均P>0.05).结论:Caspase 8、9介导的凋亡机制启动与EMT发生存在关联性.
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野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡及caspase-8表达的影响
目的：探讨野黄芩苷诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的可能机制。方法将体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞分成对照组和不同浓度野黄芩苷组（浓度分别为80、120、160 mg/L），每组设3个复孔。采用Tunel检测细胞凋亡情况；采用免疫细胞化学法和Western blot法检测caspase-8蛋白表达情况。结果（1）80、120、160 mg/L 野黄芩苷组 Tca8113细胞凋亡率高于对照组[（17.63±0.25）%、（36.23±0.36）%、（51.84±0.58）% vs（4.45±0.27）%，P<0.05]。（2）与对照组相比，80、120、160 mg/L野黄芩苷组caspase-8蛋白的表达增加（0.283±0.040 vs 0.474±0.031、0.592±0.077、0.781±0.020，P<0.05）。结论野黄芩苷能明显诱导舌鳞癌细胞Tca8113的凋亡，可能与上调caspase-8蛋白表达有关。
关键词： 舌肿瘤 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 野黄芩苷 Tca8113细胞 -
Caspase-8在慢性肝炎患者肝组织中的表达及意义
目的 探讨Caspase-8在慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎和非酒精性脂肪性肝炎中的作用及机制.方法 应用免疫组化方法对70例慢性乙型肝炎、50例慢性丙型肝炎、50例非酒精性脂肪性肝炎和15例正常肝组织进行Caspase-8检测.结果 Caspase-8在慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、非酒精性脂肪性肝炎中的表达(58.6％、64.0％、82.0％)高于其在正常肝组织中表达(13.3％),差异有统计学意义(P＜0.05)；并与肝细胞凋亡密切相关(r=0.409,P＜0.001).Caspase-8在重型肝炎中的表达阳性率高,轻型肝炎表达阳性率低,差异有统计学意义(P＜0.05).Caspase-8在不同ALT水平肝炎患者肝组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)；结论 Caspase-8活性增强导致细胞凋亡增多,在肝病理生理过程中起着重要作用.
关键词： 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 肝炎 慢性 细胞凋亡 -
NF-κB、caspase-8在胃癌中的表达和临床意义
背景:研究显示活化的转录因子NF-κB可通过抑制caspase-8表达发挥抗凋亡效应,从而参与恶性肿瘤的发生、发展过程.两者在胃癌中是否存在类似联系,目前尚不十分清楚.目的:检测NF-κB、caspase-8在胃癌中的表达并探讨其临床意义.方法:收集54例手术切除胃癌标本及其配对癌旁非癌组织,以RT-PCR和免疫组化方法检测NF-κB、caspase-8 mRNA和蛋白表达,分析两者在胃癌中的相关性以及两者与胃癌临床病理特征的关系.结果:胃癌组织中NF-κB mRNA相对表达量、NF-κB蛋白表达强度和表达阳性率显著高于癌旁非癌组织(P＜0.01),caspase-8 mRNA相对表达量、caspase-8蛋白表达强度和表达阳性率显著低于癌旁非癌组织(P＜0.01),两者在胃癌组织中的表达呈负相关(P＜0.05).胃癌组织中的NF-κB蛋白表达与肿瘤分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移有关(P＜0.01),caspase-8蛋白表达仅与肿瘤分化程度有关(P＜0.05).结论:NF-κB信号通路活化参与了胃癌的发生、发展过程,其活化可能通过下调caspase-8表达发挥抗凋亡效应.NF-κB表达可在一定程度上提示胃癌患者的预后.
关键词： 胃肿瘤 NF-κB 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 细胞凋亡 -
半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8在某些皮肤病的研究进展
半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8与死亡受体介导的凋亡密切相关.近年来,对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8参与凋亡机制的研究取得了一些进展,发现半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8除凋亡以外的其他生物学功能,如参与T细胞增殖和免疫应答、细胞黏附/迁移、血管内皮形成等.作为Fas凋亡途径关键的启动者,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8与皮肤损伤修复、瘢痕形成、扁平苔藓等密切相关,并在抗炎中发挥一定作用.
关键词： 皮肤疾病 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 细胞凋亡 -
扁平苔藓皮损中肿瘤坏死因子α和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8、3的表达
目的 研究扁平苔藓皮损中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)和Caspase-3的表达及意义.方法 采用免疫组化法和原位末端标记技术(TUNEL)检测20例扁平苔藓患者皮损和20例健康人皮肤组织中TNF-α、Caspase-8、Caspase-3的表达和细胞凋亡情况.采用SPSS 11.5统计软件,组间比较采用成组t检验,指标间相关性采用Pearson相关分析.结果 扁平苔藓组TNF-α、Caspase-8和Caspase-3的积分光密度值分别为12580±2330、11690±3520和11450±2820,均明显高于健康对照组(分别为5120±1780、3870±3360、4760±1930),两组比较,t值分别为11.38、7.19、8.76,P值均＜0.01；扁平苔藓组角质形成细胞凋亡指数(71.35±7.93),明显高于健康对照组(33.62±8.75),两组比较,t=14.29,P＜ 0.01.扁平苔藓组TNF-α、Caspase-8的表达强度与角质形成细胞凋亡指数间均呈正相关,r分别为0.72、0.75,P值均＜0.01；同时两者与Caspase-3的阳性表达也均呈正相关,r分别为0.68、0.73,P值均＜0.01.结论 TNF-α、Caspase-8和Caspase-3的高表达可能参与了扁平苔藓中角质形成细胞的凋亡.
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尖锐湿疣皮损中Caspase 8与p-Akt的表达
目的 探讨Caspase 8与p-Akt在尖锐湿疣皮损中的表达及意义.方法 收集尖锐湿疣30例、宫颈癌20例、正常皮肤(包皮)20例,采用免疫组化检测以上组织中Caspase 8及p-Akt的表达及分布.结果 Caspase 8在尖锐湿疣皮损、宫颈癌、正常皮肤中阳性率分别为23.33%、80%、90%.Caspase 8在尖锐湿疣中的表达强度显著低于正常皮肤(P<0.01)和宫颈癌组织(P<0.001).p-Akt在尖锐湿疣皮损、宫颈癌组织、正常皮肤组织中的阳性率分别为93.33%、95%、90%.p-Akt在尖锐湿疣皮损的表达强度显著高于正常皮肤组织(P<0.001),低于宫颈癌组织(P<0.001).在尖锐湿疣皮损和正常皮肤组织中,Caspase 8与p-Akt的表达无相关性.在宫颈癌中,Caspase 8与p-Akt的表达存在显著的正相关(r=0.369,P<0.05).结论 Caspase 8的凋亡启动受抑制及p-Akt的抗凋亡作用可能参与了尖锐湿疣的发生发展.
关键词： 尖锐湿疣 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 细胞凋亡 P-AKT -
顺铂增强TRAIL蛋白诱导Caski细胞凋亡机理研究
目的:观察顺铂对TRAIL蛋白诱导子宫颈癌Caski细胞株凋亡的调节作用,并探讨其作用机理.方法:传代培养宫颈癌Caski细胞,依照所加药物不同,将细胞分为TRAIL组、顺铂组、TRAIL+顺铂组、TRAIL序贯顺铂组、顺铂序贯TRAIL组以及空白对照组,分别于加药后不同时间应用:(1)倒置显微镜观察细胞的生长状态;(2)MTF法检测TRAIL蛋白与顺铂单用、联用以及序贯应用对Caski细胞的生长抑制率;(3)Caspase-8活性检测试剂盒检测不同用药方式对Caski细胞Caspase-8活力的影响;(4)流式细胞术检测Caski细胞TRAIL受体DR4,DR5,DcR1,DcR2的表达,以及1.0mg/L顺铂作用细胞24h后表达量的变化;(5)半定量RT-PCR分析顺铂作用细胞8h后4种受体mRNA水平的变化.结果:(1)TRAIL蛋白和顺铂对Caski细胞有不同程度的生长抑制作用;(2)100ng/ml TRAIL蛋白和1.0mg/L顺铂单用作用24h细胞生长抑制率分别为35.44%、50.26%,联合应用后增至89.66%,联合用药与单独用药差异有统计学意义(P<0.05);(3)顺铂序贯TRAIL蛋白生长抑制率79.88%,TRAIL蛋白序贯顺铂55.73%,两实验组的差异有统计学意义(P<0.01);(4)Caspase-8活力在顺铂序贯TRAIL组的表达强,为单用TRAIL组的1.52倍;(5)Caski细胞4种TRAIL受体均有表达,但表达丰度不同,顺铂可以上调死亡受体的表达;(6)顺铂处理细胞8h后DR4,DR5 mRNA表达水平明显升高,DR4为对照组的1.40倍,DR5为对照组的1.57倍,差异有统计学意义(P<0.05);(7)用顺铂处理前后DcR1,DcR2表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:Caski为TRAIL蛋白敏感细胞,顺铂通过上调死亡受体4、5表达、提高Caspase-8活性,增强TRAIL蛋白抑制子宫颈癌Caski细胞生长的作用;顺铂序贯TRAIL的配伍方式具有更强的诱导Caski细胞凋亡的作用.
关键词： TRAIL蛋白 顺铂 子宫颈肿瘤 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 凋亡 -
靶向HPV16-E5的siRNA对TRAIL诱导宫颈癌Caski细胞凋亡的影响
目的 探讨靶向人乳头瘤病毒16早期蛋白5(HPV16-E5)的siRNA对TRAIL蛋白诱导子宫颈癌Caski细胞株凋亡的调节作用.方法 HPV16-E5特异性siRNA转染48 h后,RT-PCR检测HPV16-E5 mRNA的表达;流式细胞术及caspase-8活性检测试剂盒分别检测空白对照组、siRNA-E5单独作用组、TRAIL单独作用组、siRNA-E5+TRAIL作用组、无关序列RNA+ TRAIL作用组细胞的凋亡率及caspase-8的活性水平;RT-PCR及Western blotting检测siRNA干扰后Caski细胞表面TRAIL死亡受体DR4、DR5的表达.结果 RT-PCR检测结果显示,转染48 h后,siRNA-E5组HPV16-E5 mRNA的表达较空白对照组和无关序列对照组下调(P＜0.05);siRNA-E5+ TRAIL作用组较TRAIL单独作用组相比细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),而无关序列RNA+ TRAIL作用组较TRAIL单独作用组细胞凋亡率无明显变化(P＞0.05);siRNA-E5组TRAIL受体DR4、DR5的表达较无关序列对照组、空白对照组无明显差异(P＞0.05);caspase-8活性水平在siRNA-E5+ TRAIL作用组明显较TRAIL单独作用组高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向HPV16-E5的siRNA可增强TRAIL诱导宫颈癌Caski细胞的凋亡作用,其机制与增强caspase-8的活化有关.
关键词： 子宫颈肿瘤 TRAIL蛋白 siRNA 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 -
NMNAT1对MES23.5帕金森病细胞模型Caspase8及TH蛋白表达影响
目的 探讨烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1 (NMNAT1)对帕金森病(PD)细胞模型MES23.5细胞Caspase8、酪氨酸羟化酶(TH)蛋白表达的影响.方法 将MES23.5细胞分为6组,pEGFP组以NMNAT1高表达(NMNAT1-OE)空载质粒转染MES23.5细胞;pEGFP+ MPP+组以NMNAT1-OE空载质粒转染MES23.5细胞后,再向细胞内加入1-甲基-4-苯吡啶离子(MPP+)100 mmol/L;NMNAT1-OE-+-MPP+组以NMNAT1-OE质粒转染MES23.5细胞,再向细胞内加入MPP+ 100 mmol/L;pMagic4.1组以NMNAT1 RNAi空载质粒转染MES23.5细胞;pMagic4.1+ MPP+组以NMNAT1 RNAi空载质粒转染MES23.5细胞,再加入100 mmol/L的MPP+;NMNAT1-RNAi+ MPP+组以NMNAT1 RNAi质粒转染细胞后,再加入100 mmol/L的MPP+.应用Western印迹分析方法检测各组TH、Caspase8蛋白表达.结果 pEGFP+ MPP+组、pEGFP组、NMNAT1-OE+ MPP+组TH表达依次升高,Caspase8表达依次降低,3组间比较差异有显著性(F=18.46、13.26,P＜0.05).pMagic4.1组、pMagic4.1+ MPP+组、NMNAT1-RNAi+ MPP+组TH表达依次降低,差异有显著性(F=11.78,P＜0.05);pMa-gic4.1+ MPP+组Caspase8表达高,NMNAT1-RNAi+ MPP+组次之,pMagic4.1组低,差异有显著意义(F＝17.65,P＜0.05).结论 NMNAT1可能通过抑制Caspase8的表达、同时增加TH的表达而发挥神经保护作用.
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褐藻多糖对乳腺癌细胞活性的影响及机制探讨
目的：观察褐藻多糖对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231细胞活性的影响，并探讨其作用机制。方法将对数生长期的MCF-7、MDA-MB-231细胞（观察A组、B组）分别加入100、200μg／mL褐藻多糖2 mL，对照A组、B组均加入等体积的DMEM培养基2 mL。用台盼蓝染色实验测算细胞增殖抑制率，用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡细胞，用Western blot法检测细胞Caspase-8及磷酸化细胞外调节蛋白激酶（ p-Erk ）、Erk表达。结果随着褐藻多糖浓度增加、作用时间延长，观察A组、B组细胞增殖抑制率逐渐升高（P均＜0．05）；观察A组、B组G0／G1期细胞比例升高、S期及G2期细胞比例降低，细胞凋亡率增高，褐藻多糖浓度高者变化更明显，P均＜0．05；观察A组、B组细胞Caspase-8表达升高、p-Erk表达下降，褐藻多糖浓度高者变化更明显，P均＜0．05。结论褐藻多糖可抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖，阻滞细胞周期于G0／G1期，促进细胞凋亡；该作用可能是通过上调细胞Caspase-8表达、下调p-Erk表达水平实现。
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抑制Caspase-8基因表达对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用
目的 观察抑制半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶8(Caspase-8)基因的表达对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用.方法 构建针对大鼠Caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.将Lewis大鼠随机分为3组,每组8只.(1)假手术组:麻醉后,取腹部正中切口,缝合关腹;(2)磷酸盐缓冲液(PBS液)组:阻断肝门血流前48 h经门静脉注射PBS液1 ml,然后行肝脏缺血再灌注;(3)shRNA组:阻断肝门血流前48 h经门静脉注射Caspase-8 shRNA 50 μg(总体积为1 ml),然后行肝脏缺血再灌注.肝脏缺血再灌注的方法为阻断大鼠70%入肝血流40min.于再灌注6 h、12 h、24 h、3 d、5 d、7 d时检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;检测肝组织中Caspase-8 mRNA的表达、细胞凋亡情况、丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS液组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h,血清中ALT和AST水平显著降低(P<0.05);肝组织中Caspase-8 mRNA水平、肝细胞凋亡指数(shRNA组和PBS液组分别为22.33%±4.28%和35.24%±2.33%)以及肝组织中MDA含量[shRNA组和PBS液组分别为(94.5±11.2)nmol/mg和(133.5±12.4)nmol/mg]均显著降低(P<0.05),而肝组织中SOD活性显著升高[shRNA组和PBS液组分别为(21.6±3.7)U/mg和(12.2±3.1)U/mg,P<0.05].结论 通过RNA干扰Caspase-8基因的表达可以抑制肝细胞凋亡的发生,减轻肝脏缺血再灌注损伤.
关键词： 肝脏 再灌注损伤 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 RNA干扰
