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PP2a在胃癌及癌旁组织的表达及与幽门螺杆菌感染的相关性
目的：研究蛋白磷酸酶2A（PP2a）在胃癌及癌旁正常组织中的表达及幽门螺杆菌（H.pylori）感染与胃癌组织中PP2a表达的相关性。方法入组40例胃癌患者的癌组织（胃癌组）及癌旁组织（癌旁组），2组采用免疫组织化学法检测PP2a蛋白表达情况，TUNEL法检查细胞凋亡，碳14尿素酶呼吸试验检测40例胃癌患者H.pylori感染情况。结果在胃癌组织中PP2a的阳性表达率为70%，明显低于正常胃黏膜组织中PP2a阳性表达率的90%，二者差异有统计学意义（P＜0.05）；PP2a蛋白表达与胃癌的分化程度、有无淋巴结转移有关；PP2a表达阴性组的胃癌细胞凋亡指数显著低于PP2a阳性组（P＜0.05）。胃癌患者H.pylori感染率为57.5%，H.pylori阳性胃癌组织的PP2a蛋白阳性表达率显著低于H.pylori阴性者（P＜0.05）。H.pylori感染与胃癌组织中PP2a的表达呈负相关。结论 PP2a可能参与到胃癌的发生发展过程，而H.pylori感染可能通过降低胃黏膜肿瘤抑制基因PP2a蛋白表达水平引起胃黏膜癌变。
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慢性脑缺血导致 tau 蛋白发生超磷酸化及可能的机制
目的研究大鼠慢性脑缺血过程中tau蛋白的磷酸化以及糖原合酶激酶-3β（ GSK-3β）和蛋白磷酸酶2A（ PP2A）的活性的变化。方法构建了大鼠三动脉结扎慢性脑缺血模型，通过免疫印迹的手段观察tau蛋白的磷酸化、GSK-3β和PP2A的活性，利用Morris水迷宫实验检测动物的学习与记忆能力，用组织学手段观察了大鼠海马神经元存活状况，同时研究了GSK-3β的抑制剂氯化锂对上述指标的影响。结果慢性脑缺血过程中，tau蛋白发生超磷酸化，GSK-3β的活性稍微降低，PP2A的活性大幅降低，动物学习与记忆能力显著下降，存活的海马神经元的数量大量减少。氯化锂能进一步抑制慢性脑缺血过程中GSK-3β的活性，增强PP2A的活性，降低tau蛋白的磷酸化，改善动物的学习与记忆能力，使海马神经元的数量显著增加。结论慢性脑缺血导致tau蛋白发生超磷酸化，GSK-3β和PP2A可能在其中起重要作用。超磷酸化的tau蛋白是慢性脑缺血导致脑损伤的一个重要因素。
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RNA干扰PP2A-Aα基因表达对结直肠癌细胞生物学行为的影响
目的 探讨RNA干扰PP2A-Aα基因表达对结直肠癌细胞生物学行为的影响.方法 设计了3条shRNA干扰载体并分别稳定的转染结直肠癌SW480细胞.RT-PCR方法筛选出一组干扰效率高的转染细胞进行进一步实验.应用MTT法检测干扰后结直肠癌细胞的增殖能力,应用Transwell实验检测干扰后结直肠癌细胞的运动侵袭能力.结果 转染pS-shRNA599干扰载体的SW480细胞PP2A-Aα基因表达明显降低,抑制率达72.8%.应用MTT法检测干扰后结直肠癌细胞的增殖能力明显增强(P<0.01);Transwell实验显示,干扰组细胞的穿膜细胞数明显多于对照组细胞(P<0.01).结论 PP2A-Aα基因表达降低可明显提高结直肠癌SW480细胞的增殖能力与运动侵袭能力,PP2A在结直肠癌细胞中可能扮演着肿瘤抑制剂的角色.
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胰腺癌细胞中蛋白磷酸酶2A催化性C亚基低表达对癌细胞生长的影响
目的 探讨蛋白磷酸酶2A催化性C亚基(PP2 Ac)在胰腺癌组织和细胞系中的表达水平,及其对JNK/c-Jun/AP-1信号通路的调控作用和对癌细胞生长的影响.方法 采用实时PCR检测PP2Ac表达水平,MTT法检测细胞活力,Western印迹检测蛋白表达水平和磷酸化水平,流式细胞术检测细胞周期,荧光素酶报告基因检测转录活性.结果 胰腺癌组织中PP2Ac表达水平显著低于癌旁组织,胰腺癌细胞系中PP2Ac也呈低水平表达,在胰腺癌细胞中过表达PP2Ac可抑制癌细胞生长(转染PP2Acα、PP2Acβ 48 h后可使细胞活力分别下降(24.85±4.85)％、(11.31±4.62)％;72 h后细胞活力分别下降(33.89±2.05)％、(16.66±2.81)％;PP2Ac低水平表达可上调JNK/c-Jun/AP-1通路的活性,在胰腺癌细胞中过表达PP2Ac可下调JNK、c-Jun的磷酸化水平并抑制AP-1的转录活性;采用抑制剂阻断JNK通路,可阻滞细胞周期于G2/M期,进而抑制细胞生长.结论 胰腺癌细胞中PP2Ac呈低表达,通过上调JNK/c-Jun/AP-1通路的活性促进胰腺癌细胞生长.
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SET蛋白及其对雄激素合成的调节作用
SET蛋白在多种组织细胞中表达,包括中枢神经系统、肾上腺以及性腺的类固醇合成细胞.SET蛋白是细胞内多任务因子,参与多种生物过程,包括细胞周期、细胞凋亡、核DNA复制、基因转录以及表观遗传调节、肿瘤生成和转移等,在睾丸和卵巢中参与调节雄激素合成.SET蛋白负性调节PP2A的活性,但并不改变PP2A的表达量;通过增强CYP17A1和3β-HSD的转录促进雄激素的合成.CKⅡ和SET相互结合,使SET磷酸化,增强了SET对PP2A的抑制作用;hnRNPA2通过RNP1序列与SET结合,增强SET对PP2A的抑制作用,调节雄激素合成.
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CPI-17对平滑肌细胞的调节作用及其机制
协同调控收缩是平滑肌的关键属性,其收缩功能正常,有助于维持机体整体健康；如发生功能失调,会增加疾病发病率和病死率.蛋白激酶C加强的磷酸酶抑制剂17(protein kinase C-potentiated phosphatase inhibitorof 17 ku,CPI-17)是磷酸化依赖的肌球蛋白轻链磷酸酶(myosin light chain phosphatase,MLCP)抑制蛋白,其可增加肌球蛋白轻链(20 ku myosin light chain,MLC20)磷酸化水平,增强平滑肌收缩.CPI-17功能受多种蛋白激酶和磷酸酶的调节.近年研究发现,在病理生理条件下,其表达和活性上调或下降与子宫、血管、气管、胃肠道等多种平滑肌功能密切相关.针对CPI-17对平滑肌细胞的调节作用及机制的深入研究有助于进一步阐明平滑肌功能障碍相关疾病及其功能失调的发病机制,并为其临床治疗提供新思路.
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蛋白磷酸酶2A抑制剂对胰腺癌细胞活力的影响及其机制
目的 研究蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂对胰腺癌细胞系PANC-1活力的影响及其机制.方法 用PP2A抑制剂斑蝥素和冈田酸处理PANC-1细胞.通过Western印迹检测核因子(NF) -κB通路的激活程度.通过转染PP2A活性亚基cα(PP2A cα)表达质粒、NF-κB抑制蛋白激酶(IKK)α和NF-κB抑制蛋白(IκB)α的显性负性突变体、p65干扰质粒,分别从各环节阻断NF-κB通路,通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞活力.结果 PP2A抑制剂可使IKKa磷酸化,进一步使IκBa磷酸化并降解,继而释放p65入核.过表达PP2Acα、IKKα显性负性突变体、IκBα显性负性突变体或干扰p65可分别使斑蝥素对细胞活力的抑制率下降(31.85±13.37)％、(23.48±8.98)％、(22.63±5.81)％、(20.88±3.24)％,使冈田酸对细胞活力的抑制率下降(40.17±11.65)％、(27.34±14.28)％、(24.85±3.39)％、(27.08±3.81)％.结论 PP2A抑制剂通过PP2A/IKKα/IκBα/p65依赖性通路发挥抗胰腺癌作用.
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去甲斑蝥素抑制蛋白磷酸酶2Ac对Smad3-L区去磷酸化抗肾间质纤维化
目的 证实去甲斑蝥素(NCTD)具抗肾间质纤维化的作用,其抗肾间质纤维化的机制与靶向抑制蛋白磷酸酶2Ac(PP2Ac)对Smad3中间连接区(Smad3-L)的去磷酸化修饰有关.方法 常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2),转染PP2Ac shRNA质粒后,细胞分为5组:(1)空白组;(2)TGF-β1(5μg/L)组;(3) TGF-β1 +NCTD (2.5 mg/L)组;(4)TGF-β1+PP2Ac shRNA组;(5)TGF-β1+PP2Ac shRNA+NCTD组.采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测PP2Ac、纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅰ (Col-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(Ecadherin) mRNA及蛋白的表达.然后将HK-2细胞随机分为3组:(1)空白组;(2)TGF-β1组;(3)TGF-β1+NCTD组,采用免疫荧光检测pSmad3-L(Ser204)和pSmad3-L(Ser208)在HK-2细胞的分布,Western印迹检测HK-2细胞核蛋白pSmad3-L(Se204)和pSmad3-L(Ser208)的表达.结果 (1)TGF-β1促进HK-2细胞PP2Ac表达,同时上调FN、Col-Ⅰ和α-SMA的表达,下调E-cadherin 的表达.NCTD和PP2Ac shRNA均抑制PP2Ac的表达,下调FN、Col-Ⅰ和α-SMA表达,上调E-cadherin的表达.但NCTD与小干扰RNA共同作用对PP2Ac表达的抑制,以及对TGF-β1诱导的上述指标的改变程度同单纯PP2Ac小干扰RNA干预组无明显差异.(2)TGF-β1刺激HK-2细胞核内pSmad3-L(Ser204)、pSmad3-L(Ser208)表达明显增多,NCTD干预使pSmad3-L(Ser204)、pSmad3-L (Ser208)在细胞核内表达进一步增多.结论 NCTD通过抑制PP2Ac介导的Smad3-L区去磷酸化,发挥抗肾间质纤维化作用.
关键词： 肾 纤维化 蛋白质磷酸酶2 去甲斑蝥素 Smad3中间连接区 -
去甲斑蝥素通过抑制蛋白磷酸酶2Ac抗肾间质纤维化
目的 研究蛋白磷酸酶2Ac(PP2Ac)和肾间质纤维化的关系,探讨去甲斑蝥素(NCTD)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾间质纤维化的作用及其机制.方法 16只雄性SD大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)、UUO 3 d组、UUO 7 d组及UUO 14 d组,每组各4只,分别于术后1d、3d、7d、14 d处死.免疫组化法检测肾组织PP2Ac、纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的表达.20只雄性SD大鼠随机分成4组,每组5只:假手术组(Sham组)、UUO模型组、NCTD低剂量治疗组(0.05 mg·kg-1·d-1)及NCTD高剂量治疗组(0.1 mg· kg-1·d-1).从建立UUO模型前1d始,治疗组分别予以NCTD 0.05 mg· kg-1·d-1和0.1 mg·kg-1·d-1腹腔注射,Sham组和UUO模型组仅予以等量生理盐水腹腔注射,术后第14天处死大鼠.免疫组化、Western印迹和实时荧光定量PCR法检测肾组织FN、Col-Ⅰ、α-SMA、E-cadherin和PP2Ac蛋白及mRNA的表达.结果 (1)与Sham组相比,随着梗阻时间的延长,PP2Ac的表达逐渐增多,UUO 14 d表达高,同时伴随FN、Col-Ⅰ的表达升高(均P＜0.05).相关分析结果显示,PP2Ac与FN、Col-Ⅰ表达呈正相关(r=0.894和r=0.887,均P＜0.05).(2)与Sham组相比,UUO模型组FN、Col-Ⅰ、α-SMA表达明显上调,而E-cadherin表达明显下降,同时伴PP2Ac表达上调(均P＜0.05);与UUO模型组相比,NCTD组剂量依赖性抑制FN、Col-Ⅰ的表达,下调α-SMA的表达,上调E-cadherin的表达,同时抑制PP2Ac的表达(均P＜0.05).结论 PP2Ac与肾间质纤维化程度呈正相关;NCTD可抑制肾间质纤维化,其机制可能与抑制PP2Ac的表达有关.
