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JNK信号通路在异烟肼诱导L-02细胞凋亡中的作用及槲皮素干预作用
目的 探讨JNK信号通路在INH诱导L-02细胞凋亡中的作用及槲皮素的干预作用.方法 建立INH肝细胞L-02损伤模型,实验分为未处理对照组、INH模型组、槲皮素低剂量及高剂量组.应用MTT法检测L-02细胞存活率,利用Hoechst 33258荧光染色法评价细胞凋亡情况,采用Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 9和JNK蛋白的表达.结果 与未处理对照组相比,INH模型组细胞存活率明显降低,细胞凋亡率明显增高,细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低,而Bax、Caspase 3、Caspase 9和p-JNK蛋白表达明显增加.槲皮素能明显增加细胞存活率,明显降低了细胞的凋亡率,槲皮素高剂量组细胞Bcl-2蛋白表达明显增高,而Bax、Caspase 3、Caspase 9和p-JNK蛋白表达明显减少.结论 JNK信号通路在INH诱导L-02细胞凋亡中发挥了重要作用;槲皮素对INH诱导L-02细胞凋亡有保护作用,可能与其调节凋亡相关蛋白的表达,抑制JNK信号通路有关.
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JNK信号通路在脑缺血耐受诱导中的作用及疏血通脉胶囊预处理对其调控作用研究＊
目的：研究JNK信号通路在脑缺血耐受诱导中的作用，并观察疏血通脉胶囊预处理对其调控作用。方法：对大鼠进行3 min脑缺血预处理，诱导大鼠产生脑缺血耐受，24 h后建立大鼠脑缺血再灌注模型（缺血预处理组），应用免疫印迹法观察JNK、P-JNK在大鼠脑缺血预处理模型中的表达情况，并与假手术组、脑缺血再灌注组、疏血通脉胶囊组的表达水平进行比较，应用 Tunel法检测神经元凋亡数量，观察JNK、P-JNK的表达水平与神经元凋亡的相关性。结果：与模型组相比，缺血预处理组及疏血通脉胶囊组P-JNK表达水平均明显下降（P约0.05），同时神经元凋亡数量明显减少（P约0.05）。结论：脑缺血预处理能够减少脑缺血再灌注后神经元的凋亡，改善神经功能，其机制与 JNK信号通路抑制有关，疏血通脉胶囊预处理可能通过抑制该通路起到脑保护作用。
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电针“大椎”“命门”对脊髓损伤大鼠神经元细胞凋亡及JNK信号通路相关蛋白表达的影响
目的:观察督脉电针对脊髓损伤(SCI)大鼠不同时间窗下神经元细胞凋亡及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-c-Jun)表达的影响,探讨督脉电针在脊髓损伤与修复过程中的作用机制.方法:SD大鼠随机分为3个时间窗组(术后1、3、7d组),每个时间窗组再随机分3个组:正常对照组、模型组和督脉电针组.采用改良式的Allen's打击法复制脊髓损伤模型.督脉电针组选取“大椎”“命门”进行电针干预,每日1次,每次20 min,连续治疗至相应天数.采用BBB评分法评估大鼠后肢运动神经功能的变化,TUNEL法检测各组大鼠受损脊髓神经元细胞凋亡数量,Western blot法检测各组脊髓损伤组织中p-c-Jun蛋白的表达情况.结果:BBB评分结果显示,模型组评分显著低于正常对照组(P＜0.01),术后3、7d督脉电针组BBB分值均高于模型组(P＜0.05,P＜0.01).与正常对照组相比,在3个时间窗下,模型组大鼠受损脊髓组织内凋亡阳性细胞数目均显著升高(P＜0.01);与模型组相比,在3个时间窗下,督脉电针组较模型组凋亡细胞显著减少(P＜0.01).与正常对照组相比,在3个时间窗下,模型组大鼠受损脊髓组织内p-c-Jun蛋白表达均显著升高(P＜0.05,P＜0.01);与模型组相比,术后3、7d督脉电针组大鼠受损脊髓组织中p-c-Jun表达显著降低(P＜0.01,P＜0.05).结论:脊髓损伤后受损脊髓组织中p-c-Jun蛋白表达水平升高;督脉电针可以改善脊髓损伤大鼠运动神经功能,其对脊髓损伤的保护作用机制可能与下调受损脊髓组织中p-c-Jun蛋白表达有关.
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JNK 通路对左归丸含药血清调控 MC3T3 成骨细胞 Runx2 mRNA 表达的影响
目的:探讨c-Jun氨端激酶(JNK)信号通路在左归丸含药血清调控成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖和成骨特异转录因子核心结合因子(Runx2) mRNA表达中的作用.方法:以MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,选用JNK特异抑制剂SP 600125,实验分为空白对照组、SP 600125组、左归丸组、左归丸加SP 600125组、倍美力组、倍美力加SP 600125组.孵育48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测SP600125对左归丸含药血清干预MC3T3-E1成骨前体细胞增殖作用的影响,采用Western blot法分析JNK蛋白磷酸化水平,采用Real Time RT-PCR法检测成骨细胞特异转录因子Runx2 mRNA表达情况.结果:与空白对照组比较,左归丸含药血清组显著促进细胞增殖,明显上调p-JNK蛋白和Runx2 mRNA表达(P＜0.01)；SP600125显著抑制左归丸含药血清诱导的增殖和p-JNK蛋白表达(P＜0.01),对Runx2 mRNA表达的影响不显著.结论:JNK信号通路的激活可能参与了左归丸含药血清诱导的MC3T3-E1成骨前体细胞增殖,但左归丸含药血清诱导的Runx2mRNA高表达对JNK信号通路依赖不显著.
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降糖消渴颗粒对自发性糖尿病KKAy小鼠肾脏JNK信号通路的影响
目的:探讨降糖消渴颗粒对高脂饮食诱导自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾脏c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路.方法:将40只成模的KKAv小鼠按血糖、体质量随机分为模型组,吡格列酮组,中药高、中、低剂量组(每日分别以降糖消渴颗粒7.0、3.5、1.75g/kg体质量灌胃),每组8只,另设8只C57B L/6J]小鼠为正常组.模型组和正常组给予蒸馏水,其余组给予对应量的药液灌胃.干预10周后,检测各组小鼠空腹血糖(FBG)、血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)的含量,用RT-PCR检测肾组织JNK mRNA的表达,Western Blot检测各组小鼠JNK1、JNK2、P-JNK蛋白的表达情况,HE染色观察药物对糖尿病小鼠肾脏病理改变的影响.结果:与正常组小鼠比较,模型组小鼠FBG、BUN与Scr水平显著上升(P＜0.05),ALB、TP水平明显下降(P＜0.05),而JNK mRNA及JNK1、JNK2、P-JNK蛋白表达明显上调;药物干预10周后能够显著降低FBG、BUN与Scr水平,升高ALB、TP水平,与模型组比较差异具有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);各给药组较模型组的JNK mRNA及JNK1、JNK2、P-JNK蛋白表达则表现出下调的趋势(P＜0.01,P＜0.05);HE染色显示降糖消渴颗粒对肾脏病理改变有一定的保护作用.结论:降糖消渴颗粒对糖尿病小鼠肾损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与抑制JNK信号通路激活有关.
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生脉注射液含药鼠血清对人胃癌细胞多药耐药性的逆转作用及可能机制
目的:探索生脉注射液含药血清对人胃癌SGC7901/VCR细胞周期、MDR表达及JNK信号通路的影响.方法:常规培养人胃癌耐药细胞SGC7901/VCR;采用血清药理学方法制备生脉注射液含药鼠血清;应用WesternBlot检测生脉含药血清对p-糖蛋白(P-gp)以及c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通路中c-Jun63/73磷酸化水平的影响;RT-PCR检测多药耐药基因MDR1、MRP1 mRNA的表达.结果:生脉含药血清能使耐药细胞SGC7901/VCR周期阻滞于DNA合成前,干扰细胞周期,抑制耐药细胞的增殖.生脉含药血清能够有效逆转耐药细胞SGC7901/VCR的多药耐药性,减小化疗药物的有效作用剂量,增强化疗药物的抗肿瘤作用.结论:生脉注射液能够有效逆转胃癌细胞多药耐药性,增强化疗药物的敏感性及减少其不良反应.
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天花粉蛋白介导入肺癌A549细胞Caspase-3表达及相关JNK信号通路的研究
目的:探讨JNK信号通路在天花粉蛋白(TCS)诱导肺癌A549细胞凋亡信号分子caspase-3表达的作用及相关调节机制.方法:不同浓度的TCS处理人肺癌A549细胞,MTT法检测细胞增殖活性,免疫印迹分析JNK、p-JNK的表达.选取JNK特异性抑制剂(SP600125),按随机数字表法分为对照组、SP组、25 μMTCS组、50μMTCS组以及TCS+ SP组,PCR法检测各组细胞Caspase-3 mRNA的表达.结果:TCS对人肺癌A549细胞株的生长抑制作用明显,呈时间和剂量依赖性.随着天花粉蛋白浓度的升高,磷酸化JNK表达水平明显高于对照组(P＜0.05);而JNK表达水平与天花粉蛋白药物浓度无明显变化(P＞0.05).胞内Caspase-3 mRNA的表达量随TCS浓度增加呈上升趋势,各组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05).预先加入JNK特异性抑制剂,Caspase-3表达量相较于对照组减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:TCS可能通过抑制JNK通路的活化调控肺癌A549细胞caspase-3 mRNA表达,从而诱导细胞凋亡.
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JNK信号通路调控大鼠再生肝8种细胞的增殖和凋亡
目的 从基因转录水平了解JNK信号通路在大鼠再生肝8种细胞中的作用. 方法 用密度梯度离心和免疫磁珠等方法分离肝细胞(HC)、胆管上皮细胞( BEC)、卵圆细胞(OC)、肝星形细胞(HSC)、窦内皮细胞( SEC)、库普弗细胞(KC)、陷窝细胞(PC)、树突状细胞(DC)等8种肝脏细胞,用大鼠Genome 230 2.0芯片检测大鼠再生肝8种细胞的基因表达谱,用生物信息学和系统生物学等方法分析基因表达变化预示的JNK信号通路在调控大鼠再生肝8种细胞增殖、凋亡中的作用.用实时荧光定量PCR方法验证了芯片结果的可靠性. 结果 JNK信号通路涉及240个基因和42条途径,其中,225个基因与大鼠肝再生相关.基因协同作用分析显示,在大鼠肝再生启动阶段,JNK信号通路启动HC和KC增殖,促进OC凋亡,启动部分PC和SEC增殖和促进部分PC和SEC凋亡；在进展阶段,JNK信号通路促进HC、BEC、KC和DC增殖,促进部分PC增殖、部分PC凋亡.在终止阶段,JNK信号通路促进HC、OC和PC凋亡,促进部分KC增殖、部分KC凋亡. 结论 大鼠肝再生中JNK信号通路的42条途径和225个基因参与调控大鼠再生肝8种细胞的增殖和凋亡.
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JNK信号通路在大鼠肝再生及肝硬化的细胞增殖和凋亡中作用的比较
目的 从基因转录水平了解JNK信号通路在大鼠肝再生(LR)和肝硬化(LC)中的作用异同. 方法 采用2/3部分肝切除手术制备大鼠肝再生模型,以腹腔注射CCl4中性菜籽油溶液法建立大鼠肝硬化模型,采用大鼠Genome 230 2.0芯片检测不同时间点再生肝和肝硬化组织中JNK信号通路的基因表达谱,用生物信息学和系统生物学等方法分析基因表达谱预示的增殖和凋亡活动. 结果 JNK信号通路涉及302个基因和42条途径,大鼠Genome 230 2.0芯片含上述基因中的240个基因,其中,79个基因发生有意义表达变化,涉及LR的52个基因,LC的5个基因,有22个基因与两者相关.在大鼠LR启动阶段,途径1和16促进细胞增殖及途径22 ～ 33促进细胞凋亡作用强于对照；在进展阶段,途径1～17、34和35促进细胞增殖及途径22 ～33促进细胞凋亡作用强于对照,途径37～41抑制细胞凋亡作用弱于对照；在终止阶段,途径37、39、41和42诱导细胞凋亡作用弱于对照,同时,尚未发现途径18 ～ 21和36参与大鼠LR.而在LC发生中,JNK信号通路中的这些途径与对照相比均无显著差异.结论 JNK信号通路的37条途径调控大鼠肝再生的细胞增殖和凋亡,对大鼠肝硬化的调控作用则不显著.
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醋酸钠林格液对休克大鼠肺炎性介质及其信号通路的影响
目的 探讨醋酸钠林格液复苏失血性休克大鼠对肺炎性介质及其JNK (c-Jun N-terminal kinase)信号通路的影响.方法 取32只SD大鼠,随机(随机数字法)分成4组:休克不复苏组(CR, n=8),生理盐水组(NR,n=8 ),乳酸钠林格液组(LR, n=8 )和醋酸钠林格液组(AR,n=8 ). CR组、NR组、LR组及AR组制备成休克模型(平均动脉压维持405 mmHg), NR组、LR组及AR组于休克后60 min应用不同液体进行30 min液体复苏,复苏后观察4h, CR组不予复苏.NR组、LR组及AR组复苏后4h取大鼠肺组织;CR组休克观察4h (若动物死亡则动物死亡即刻)后取大鼠肺组织.利用实时定量PCR检测肺组织的TNF-αmRNA、 IL-4 mRNA、IL-10 mRNA含量,应用Western Blot法检测肺组织JNK磷酸化和MKP-1乙酰化水平.多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),两两间比较采用LSD-t检验.结果 在大鼠肺组织中IL-4 mRNA表达AR组比CR组、NR组、LR组增加(CR组:0.42 ± 0.34;NR组:2.60 ± 0.66;LR组:6.24 ±2.95 ; AR组:11.08±4.24 ;P＜0.05 );在大鼠肺组织 IL-10 mRNA表达 AR组比 CR组、NR组、LR组明显增加(CR组:0.25 ± 0.25 ; NR组:2.79 ± 1.62 ; LR组:3.51 ± 1.66 ; AR 组 : 9.35±2.86 ;P＜0.01 );大鼠肺组织中TNF-αmRNA表达AR组比CR组、NR组、LR组明显降低 (CR 组 : 4.98 ± 1.26 ; NR组:2.50±0.76 ; LR组:3.87±3.00 ; AR 组 : 0.19±0.09 ;P＜0.01 ).在大鼠肺组织中JNK磷酸化水平,AR组明显低于CR组、NR组、LR组(CR组:0.52 ± 0.12;NR组: 0.42±0.08 ; LR组 : 0.30±0.08 ; AR组:0.17±0.06 ; P＜0.01 ).AR组大鼠肺组织中 MKP-1乙酰化水平比 CR组、NR组、LR组明显升高(CR 组 :0.14 ± 0.07;NR组:0.30 ± 0.07;LR组:0.37 ± 0.02; AR组:0.48±0.06 ; P＜0.01 ).相比生理盐水和乳酸钠林格液,应用醋酸钠林格液复苏失血性休克大鼠能促进MKP-1乙酰化,抑制JNK磷酸化,明显抑制肺组织的TNF-α的释放,促进抑炎因子 IL-10和IL-4的释放.结论 醋酸钠林格液复苏失血性休克大鼠可能是通过增强MKP-1的乙酰化水平抑制JNK信号通路来影响失血性休克大鼠肺炎性介质的变化,在一定程度上减轻肺组织炎症反应.
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神经酰胺通过JNK/c-Jun信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡
目的：探讨神经酰胺对胶质瘤细胞87-MG和U251自噬性死亡的作用及机制。方法采用MTT和流式细胞的方法检测不同浓度神经酰胺刺激87-MG和U251细胞后细胞存活和凋亡的改变；电镜和Western blotting技术检测自噬和JNK/c-Jun信号通路的改变，JNK药理性抑制剂SP600125特异性抑制JNK通路，观察其对神经酰胺诱导自噬死亡的影响。结果神经酰胺刺激24 h后，87-MG和U251存活呈现时间依赖性下降(P<0.05)；相应的细胞死亡数目剂量依赖性升高(P<0.05)，但凋亡性死亡比例较低；神经酰胺刺激后镜下观察到的自噬小体计数，LC3B/LC3A和Beclin-1的表达以及JNK/c-Jun的磷酸化程度都增加(P<0.05)。提前给予SP600125抑制JNK信号通路的活性后，可以阻断神经酰胺诱导的细胞自噬性死亡(P<0.05)。结论神经酰胺可诱导胶质瘤细胞87-MG和U251出现自噬性死亡，机制可能与JNK信号通路的活化有关。
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ω-3多不饱和脂肪酸抑制大鼠创伤性脑损伤后小胶质细胞介导的炎症反应
目的 研究ω-3多不饱和脂肪酸对大鼠创伤性脑损伤(TBI)后神经细胞凋亡、脑水肿、小胶质细胞活化、炎症反应及神经功能的影响,以探讨ω-3多不饱和脂肪酸对大鼠TBI的保护及机制.方法 采用改良Feeney DM法建立大鼠TBI模型,将90只SD大鼠完全随机分为假手术组(Sham组),TBI组,TBI+ c-Jun氨基末端激酶(JNK)选择性激活剂anisomycin组(TBI+ Aniso组);TBI+ ω-3多不饱和脂肪酸组(TBI+ ω-3组),TBI+ ω-3多不饱和脂肪酸+JNK选择性激活剂aniso-mycin组(TBI+ω-3+ Aniso组),分别于伤后1、3、7d进行神经行为学评分(mNSS);采用干湿重法测损伤区脑组织脑水含量;TUNEL和免疫荧光等方法测定细胞凋亡和小胶质细胞活化特异标志物IBA-1的表达;PCR、Westerrn blot等检查脑组织炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、IL-6及上游JNK信号通路JNK、p-JNK分子表达水平的变化.结果 与同期Sham组比较,其余4组细胞凋亡、脑水肿、神经细胞凋亡和炎症反应明显增高(P＜0.05);与TBI组比较,TBI+ ω-3组大鼠创伤后脑水含量降低,尤其在脑损伤3d后降低更为明显[(78.14±0.57)％比(82.31±0.81)％,P＜0.01],神经功能评分相应的改善明显(P＜0.05).ω-3多不饱和脂肪酸抑制神经细胞凋亡和小胶质细胞的活化;降低大鼠TBI后升高的炎症因子TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6mRNA及蛋白表达水平;同时抑制了炎症因子上游JNK信号通路的活化.结论 ω-3多不饱和脂肪酸明显减轻大鼠TBI后脑水肿的程度,抑制神经细胞凋亡,改善伤后神经行为,其机制可能是通过抑制JNK信号通路和小胶质细胞的活化,减轻小胶质细胞介导的中枢性炎症反应,降低TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6的表达.
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白皮杉醇对急性脑出血大鼠的保护作用及其机制
目的 研究白皮杉醇对急性脑出血大鼠脑组织保护作用,并探讨其作用机制.方法 采用向脑组织注入自体动脉血建立急性脑出血大鼠模型,分别给予高剂量(Pic-H)、低剂量(Pic-L)白皮杉醇(200和100 mg/kg),对各组大鼠进行神经功能缺损评分,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量,原位末端标记法(TUNEL)染色检测脑细胞凋亡数,免疫印迹法(Western blot)检测脑组织中磷酸化c-Jun氨基末端激酶3(p-JNK3)、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)和磷酸化转录激活因子2(p-ATF-2)蛋白表达.结果 给予白皮杉醇后,与模型组相比,大鼠的神经功能缺损评分[Pic-L组(1.32±0.24)比(2.89±0.41),Pic-H组(0.98±0.21)比(2.89±0.41)]降低;大鼠血清中NSE的水平[Pic-L组(29.25±2.63)比(38.02±3.35) μg/L,Pic-H组(26.11±2.29)比(38.02±3.35)μg/L]降低;大鼠脑组织TUNEL阳性细胞百分比[Pic-L组(36.78±4.66)％比(62.34±6.24)％,Pic-H组(17.32±2.36)％比(62.34±6.24)％]减少;大鼠脑组织中p-JNK3蛋白表达[Pic-L组(2.67±0.21)比(4.97±0.34),Pic-H组(1.84±0.21)比(4.97±0.34)]降低;p-c-Jun蛋白表达[Pic-L组(2.17±0.19)比(3.38±0.31),Pic-H组(1.78±0.15)比(3.38±0.31)]降低;p-ATF-2蛋白表达[Pic-L组(1.79±0.13)比(2.99±0.27),Pic-H组(1.43±0.12)比(2.99±0.27)]降低;差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 白皮杉醇可能通过抑制JNK信号通路来减缓急性脑出血大鼠脑组织细胞的凋亡.
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JNK信号通路在δ氨基酮戊酸-光动力疗法诱导SW480细胞凋亡中的作用机制
目的:探讨JNK信号通路在δ氨基酮戊酸(ALA)-光动力疗法((PDT)诱导SW480细胞凋亡中的作用.方法:将SW480细胞分为空白对照组、激光照射组、ALA组及ALA-PDT组.Western blot 检测各组细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达;用SP600125(JNK抑制剂)预孵育ALAPDT组细胞,Western blot检测各组细胞的多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的表达.结果:磷酸化JND在空白对照组、激光照射组及ALA组几乎无表达,ALA-PDT后30-90min细胞表达显著高于空白对照组、激光照射组及ALA组(F=12.314,P＜0.001),其中ALAPDT后60及90min的磷酸化JNK表达显著高于ALA-PDT后30min(F=9.782,P＜0.001),各组细胞总的JNK表达无显著差异.JNK的激活能抑制ALA-PDT诱导sw480细胞凋亡.结论:JNK信号通路的激活抑制ALA-PDT诱导SW480细凋亡;JNK通路可能成为增强ALA-PDT治疗结肠癌的新靶点.
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双硫仑联合Cu抑制伯基特淋巴瘤Raji细胞移植瘤生长的动物实验
目的 探讨双硫仑(DS)联合铜(Cu)对人伯基特淋巴瘤Raji细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及分子机制.方法 每只裸鼠给予全身2GyX线照射2 min,于背部近腋下处皮下接种对数生长期Raji细胞1×107个,建立Raji细胞裸鼠移植瘤模型;18只造模成功的裸鼠按数字表法随机分为三组:对照组、DS组、DS/Cu组;观察不同用药组裸鼠移植瘤生长的情况,计算肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,比较三组移植瘤体积和质量.免疫印迹法检测不同用药组处理后移植瘤组织中p-JNK、c-jun蛋白表达.结果 DS组、DS/Cu组和对照组裸鼠移植瘤的体积分别为(67.71±2.15) mm3、(33.35±7.74) mm3、(246.40±42.88) mm3,肿瘤质量分别为(43.35±4.22)mg、(18.05±2.88)mg、(91.30±27.27)mg,三组间差异具有统计学意义(F=27.579,P=0.000;F=16.369,P=0.000).多重比较结果显示,DS组、DS/Cu组裸鼠移植瘤的体积和质量与对照组比较差异均具有统计学意义(均P＜ 0.05);DS/Cu组移植瘤体积和质量均低于DS组(均P＜ 0.05).DS组和DS/Cu组抑瘤率分别为63.48％和80.24％.DS和DS/Cu处理后移植瘤细胞出现了凋亡的改变,DS/Cu组更加明显.DS和DS/Cu处理后p-JNK、c-jun蛋白表达均上调,其中DS/Cu组上调更加明显.结论 DS/Cu可抑制伯基特淋巴瘤Raji细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与活化JNK通路有关.
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UVA诱导的细胞凋亡通过神经酰胺和JNK信号通路
目的探讨神经酰胺和JNK信号通路在UVA诱导的细胞凋亡中的作用.方法分别用MTT法和DNA梯形条带检测细胞死亡率和细胞凋亡;Western blot分析JNK信号通路的激活情况.结果UVA照射后,正常的淋巴细胞JY出现明显的细胞凋亡,而MS 1418细胞则没有.MS 1418来自D型Niemann-Pick病人,酸性鞘磷脂水解酶遗传性缺陷,导致神经酰胺产生受阻.给予外源性神经酰胺,两种细胞都出现明显的细胞凋亡,表明UVA诱导的细胞凋亡是通过神经酰胺介导的.UVA激活了JY而不是MS 1418细胞的JNK信号通路;给予外源性神经酰胺,两种细胞的JNK信号通路都被激活,说明神经酰胺位于JNK信号通路的上游.结论UVA诱导的细胞凋亡依赖神经酰胺和JNK信号通路.
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红花对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制
目的 研究红花对四氯化碳(CCl 4)致大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.方法 50只Wistar雄性大鼠,随机分为正常组,模型组,红花高、中、低剂量组,每组10只.红花高、中、低剂量组灌胃给药剂量分别为1、0.5、0.25 g/kg,连续给药8 d,末次给药后1 h,除正常组外,其余组大鼠一次性腹腔注射CCl 4花生油溶液致急性肝损伤.于CCl 4染毒后24 h处死动物.取血测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活力;取肝组织进行HE染色及测定肝组织中丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总抗氧化能力((T-AOC)的活力;蛋白印迹法(Western blot)检测炎性指标肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及JNK通路中JNK、p-JNK和p-c-Jun、Caspase-3、cleaved Caspase-3蛋白表达;采用RT-PCR和Western blot分别测定死亡受体凋亡途径FasL、Fas及线粒体凋亡途径Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白表达.结果 急性损伤后,模型组血清ALT、AST、ALP及肝组织的MDA水平与正常组相比明显升高(P<0.05),CAT、GSH-Px和T-AOC的水平显著下降(P<0.05),红花各剂量组同模型组相比上述指标均有统计学差异(P<0.05);HE染色表明模型组中央静脉周围多数融合坏死,易见凋亡小体,红花各剂量组凋亡小体和小坏死灶均有所减少;模型组各炎症因子及p-JNK、p-c-Jun和cleaved Caspase-3的蛋白表达与正常组相比显著增加(P<0.05),Bax、FasL、Fas的mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),而Bcl-2的mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05).红花各剂量组与模型组相比各炎症因子蛋白表达均有统计学差异(P<0.05),JNK通路Bax、p-JNK、p-c-Jun、FasL、Fas、Bcl-2蛋白表达与模型组相比均有统计学差异(P<0.05).与模型组相比,红花中、低剂量组Bax、Bcl-2 mRNA的表达有统计学差异(P<0.05),高剂量组与模型组之间无统计学差异(P>0.05).结论 红花对CCl4致大鼠急性肝损伤有保护作用,且可能是通过其抗氧化、抗炎性因子激活以及抑制JNK通路激活、减少该通路激活后诱导的凋亡来实现的.
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电针对慢性应激抑郁模型大鼠海马及血清caspase-12表达的影响
目的 观察c-jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路阻断下电针对慢性应激抑郁模型大鼠海马及血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)表达的影响,探讨针刺抗抑郁的作用机制.方法 SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、氟西汀组、模型+二甲基亚砜(DMSO)组、模型+JNK通路阻断剂SP600125(以下简称SP)组、针刺+SP组、氟西汀+SP组,每组9只.除空白组外,其余组均采用慢性应激结合孤养的方法造模.电针干预选取"内关""三阴交"穴,每次20 min,每天1次,治疗21 d;阳性对照药物给予氟西汀5 mg/kg灌胃,治疗21 d.通过旷场实验对大鼠进行行为学评价,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠海马和血清中caspase-12蛋白表达.结果实验前各组大鼠行为学检测均无统计学差异(P>0.05).实验第21天,与空白组相比,模型组的水平穿越格数、竖立次数明显降低(P<0.01);与模型组相比,针刺组能提高模型大鼠的水平穿越格数(P<0.05).与空白组比较,模型组大鼠海马caspase-12蛋白表达明显上升(P<0.01);与模型组比较,模型+DMSO组、氟西汀组、氟西汀+SP组、模型+SP组、针刺组、针刺+SP组大鼠海马caspase-12蛋白表达均下降(P<0.05).与空白组比较,模型组大鼠血清caspase-12蛋白表达降低;与模型组比较,模型+DMSO组、模型+SP组、氟西汀组、针刺+SP组大鼠血清caspase-12蛋白表达降低,而氟西汀+SP 组、针刺组大鼠caspase-12表达升高,但差异均没有统计学意义(P>0.05).结论 针刺可能是通过抑制JNK信号转导通路活性,从而降低慢性应激模型大鼠海马caspase-12蛋白表达,减少海马神经元凋亡,从而发挥抗抑郁效应.
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神经酰胺通过JNK-c-Jun信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡
目的：探讨神经酰胺对大鼠脑胶质瘤细胞C6自噬性死亡的影响及其作用机制。方法不同浓度神经酰胺作用于C6细胞后,用MTT法检测细胞的存活率,流式法检测细胞凋亡的改变；Western blotting及电镜的方法观察细胞自噬水平的改变,以及JNK及其下游靶分子c-Jun的磷酸化水平变化；后进一步借助JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK的活性,观察其对神经酰胺诱导的细胞自噬情况的影响。结果与对照组相比,神经酰胺作用24 h后,C6细胞存活率明显降低,且具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组相比,神经酰胺作用24 h后,C6细胞死亡明显升高且具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),但其中凋亡性死亡比例较低；神经酰胺作用后细胞内自噬小体数目,LC3B/LC3A的比值,Beclin-1的表达水平,以及JNK和c-Jun磷酸化水平都显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)；提前给予JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK的活性后,显著阻断神经酰胺诱导的细胞自噬。结论神经酰胺可诱导胶质瘤细胞C6发生自噬性死亡,其诱导胶质瘤细胞发生自噬的机制可能与激活JNK信号通路有关。
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截断逆挽方对慢加急性肝衰竭模型大鼠血清TNF-α、肝组织p-JNK及c-Jun的影响
目的 观察截断逆挽方对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量、肝组织磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)及转录因子c-Jun表达的影响,探讨该方干预ACLF大鼠的部分作用机制.方法 选择SPF级Wistar雄性大鼠70只,采用数字表法随机分为正常对照组、模型组、截断逆挽方组和JNK抑制剂SP600125(anthrapyrazolone)组,予猪血清免疫诱导大鼠形成肝纤维化模型,再联合D-氨基半乳糖/脂多糖(D-galactosamine/lipopolysaccharide,D-GalN/LPS)急性攻击,建立ACLF大鼠模型.截断逆挽方组在急性攻击前给予截断逆挽方连续灌胃3 d,SP600125组在急性攻击前0.5 h腹腔注射SP600125.各组大鼠分别在急性攻击后4、8、12 h取材.采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)检测血清TNF-α含量,蛋白印迹法(Western blotting,WB)检测c-Jun蛋白表达量,免疫组织化学法检测肝组织中p-JNK蛋白表达量,HE染色观察肝脏结构病理变化.结果 与正常组相比,模型组各时间点血清TNF-α浓度均升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与对应时间点模型组相比,截断逆挽方组及SP600125组4、8 h血清TNF-α含量明显降低(P<0.01),12 h有所升高;与正常组相比,模型组各时间点c-Jun、p-JNK表达量升高(P<0.01);与模型组相比,截断逆挽方组、SP600125组在4 h及8 h c-Jun、p-JNK表达减少(P<0.05),12 h表达增多.截断逆挽方组及SP600125组两两比较差异无统计学意义(P>0.05).
