精液白细胞与不育症之间关系探讨

目的 以瑞-姬染色方法,油镜精细观察,区分精液中生精细胞与白细胞,探讨精液白细胞的检出率与不育症之间关系,以提供临床参考. 方法 293例精液采用瑞-姬染色,油镜进行白细胞及其他细胞形态分类,并进行统计处理.结果 293例不育症精液中检出白细胞阳性136例占46.4%;阴性157例占53.6%.年度精液白细胞阳性率1990年为13.8%;1993年为21.5%;1997年为34.1%;2006年为46.4%,说明有逐渐增加趋势.对2006年136例精液白细胞数量分布统计,以≤5个者多占70.6%;6～20个占8.9%;21～40个占3.4%;＞40个占1.3%.1～4个组与5～9个组、＞20个组比较,有显著差异(P＜0.001).56例精液与前列腺液进行白细胞对照观察,两者均有白细胞者为48.2%(27/56).精液中非生精细胞检出率,以前列腺上皮细胞高为27.3%;其次是吞噬细胞为23.5%;再次是淋巴细胞为10.8%;支持细胞和间质细胞均为8.1%. 结论 精液白细胞有逐年增加趋势,影响精液质量造成不育症,实验室应认真检测,以油镜观察≤5个者,可考虑来源于精液;＞5个者应检查前列腺,临床应注意其来源,对症治疗.

原位杂交检测HOXA-10基因在人子宫内膜的表达

目的：探讨正常生育妇女月经周期不同时期子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞中HOXA-10基因的表达。方法：采用原位杂交的方法。结果：HOXA-10基因在子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞均有表达；中晚分泌期的表达高于增殖期及分泌早期，且间质细胞的表达高于腺上皮细胞。结论：(1)HOXA-10基因在分泌中期子宫内膜高表达提示其可能在人胚胎着床过程中起某种作用。(2)HOXA-10基因可能在人子宫内膜蜕膜化过程中有重要作用。

孕激素在男子的作用

孕激素对女性的生理学和病理生理已有很多的研究及实际的临床应用，但对男子的影响直至近年方引起关注。睾丸的间质细胞(Leydig细胞)和肾上腺组织均能合成与分泌少量的孕酮，以往对其在男性体内的功能认识远不够，临床除治疗前列腺疾病、与雄激素合用作为男性避孕药外，尚有许多其他的生理及药理作用。本文对孕激素在男子中枢及周围神经系统、脂质代谢及心血管系统、骨骼代谢、生殖系统及性行为等方面的研究进展进行综述。

睾丸间质干细胞分化和移植

睾丸间质细胞是男性体内合成雄激素的主要细胞，胚胎发育期中肾胚的间质细胞及生精小管周成纤维样细胞可能是睾丸间质细胞的干细胞。在胚胎期间质干细胞分化为胎儿型间质细胞；出生后间质干细胞经间质祖细胞、未成熟间质细胞分化为成熟间质细胞。老年期间质细胞数量可能不变，但雄激素合成下降。间充质干细胞及脂肪干细胞等干细胞经诱导可分化为分泌雄激素的睾丸间质细胞，因此，间质干细胞移植可望成为治疗男性性腺功能不全和中老年雄激素缺乏的创新方法，本文对睾丸间质干细胞的分化及移植方面研究进行综述。

羊睾丸提取液对小鼠受损睾丸间质细胞一氧化氮合酶活性的影响

许多物理因素、化学因素以及某些药物和毒物等均可引起睾丸损伤,导致男性不育.近年来,对受损睾丸间质细胞一氧化氮合酶(NOS)与生殖之间的关系报道甚多,如刘明毅等[1]发现铅会直接作用在间质细胞,通过抑制间质细胞NOS活性而导致睾酮的产量减少,造成精子数量明显降低,影响生育能力;Ruffoli等[2]发现受损睾丸间质细胞NOS活性的降低直接引起雄激素合成与分泌的降低.然而对受损睾丸NOS的保护及修复研究尚少报道.业已证明,羊睾丸提取液中含有多种微量元素,对人的生殖系统及内分泌有明显影响[3].本研究运用醋酸铅制备小鼠睾丸损伤模型后,给予治疗剂量的羊睾丸提取液,观察睾丸间质细胞NOS活性的变化,探讨羊睾丸提取液对受损睾丸的修复与保护作用.

睾丸细胞生物学研究进展

睾丸是男性生殖腺,由生精小管和间质构成.生精小管主要由生精细胞和支持细胞组成,是精子发生场所;间质中主要是间质细胞,间质细胞合成与分泌雄激素.本文介绍睾丸3种细胞的发育分化,以及成年期睾丸细胞的结构和生物学研究进展.

大豆异黄酮对体外培养乳鼠睾丸组织Insl3、Mvh、Wt1、α-SMA表达的影响及机制研究

目的 采用睾丸体外培养模型研究大豆异黄酮对乳鼠睾丸组织Insl3、Mvh、Wt1和α-SMA表达的影响,并探讨该影响是否由雌激素受体途径介导.方法 经适应性体外培养的乳鼠睾丸组织,随机分为对照组、染料木黄酮(Gen)组、Gen+雌激素受体阻断剂ICI 182,780(Gen+ ICI)组、大豆苷元(Dai)组和Dai+ ICI组.各组分别给予相应的受试物处理并培养72 h后,苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织病理学变化,real-time PCR测定蛋白Insl3、Mvh、Wt1和α-SMA mRNA表达,免疫组化检测Mvh和α-SMA蛋白表达.结果 HE染色显示,Gen组及Gen+ ICI组部分睾丸出现病理改变.Real-time PCR显示,Insl3 mRNA表达在Dai组减少(P＜0.05),在Dai+ ICI组和Gen+ ICI组增加(P＜0.05).Mvh mRNA在Dai组、Gen组和Gen+ ICI组表达下降(P＜0.05).Dai+ ICI组与Dai组相比Insl3和Mvh mRNA表达均升高(P＜0.05).Wt1和α-SMA mRNA各组表达均无明显变化.免疫组化结果显示Mvh蛋白表达量仅在Gen组增加(P＜0.05),而α-SMA蛋白各处理组蛋白表达量均减少(P＜0.05).结论 大豆异黄酮对4种蛋白均有一定影响,其中Dai可能通过ER介导的途径影响Insl3的表达,进而影响间质细胞的功能.

邻苯二甲酸二丁酯诱导氧化应激及抑制CYP17a1干扰睾酮合成

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)导致睾丸氧化损伤与睾酮合成途径的关系及可能的机制.方法 24只健康4周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组(玉米油)及DBP低、中、高剂量组(80、200和500 mg/kg),每组6只,经灌胃染毒每日1次、连续染毒4周.染毒结束后称量动物体重及睾丸和附睾的重量,用生化方法检测睾丸匀浆中丙二醛(M DA)和活性氧自由基(ROS)的含量,抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶-1(GPx-1)的活性变化,类固醇合成酶3β-HSD1、17β-HSD3的活性,用放射免疫法测定外周血中睾酮、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)和睾丸内的睾酮(T)、雄烯二酮(ASD)的水平,用real time-qPCR方法检测StAR、P450scc、3β-HSD1、17β-HSD3、CYP17a1 mRNA水平的表达变化.结果 与对照组相比,高剂量组体重、睾丸重量明显减少(P＜0.05);循环血LH、FSH增高(P＜0.05),循环血及睾丸内睾酮、睾丸内ASD均降低(P＜0.05);MDA和ROS的含量明显升高(P＜0.05),SOD、CAT、GPx-1的活性及3β-HSD1的酶活性均明显降低(P＜0.05);StAR、P450scc、3β-HSD1、CYP17a1 mRNA降低,17β-HSD3 mRNA升高(P＜0.05).中剂量组循环血LH、FSH增高(P＜0.05),睾丸内T和ASD降低(P＜0.05);ROS升高(P＜0.05),GPx-1的活性降低(P＜0.05);3β-HSD1酶活性减少(P＜0.05);StAR、P450scc、CYP17a1 mRNA降低(P＜0.05).低剂量组所有指标未见有统计学意义的改变.结论 DBP暴露干扰了大鼠睾丸氧化/抗氧化平衡,降低了GPx-1活性,抑制CYP17a1基因的表达,降低睾丸ASD水平,终抑制间质细胞内睾酮合成.CYP17a1降低是DBP干扰睾酮合成的毒性作用机制之一.

邻苯二甲酸二丁酯对F1代雄性斑马鱼性腺发育影响的研究

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对F1代雄性斑马鱼性腺发育的影响.方法 将48对成年斑马鱼随机分为4组:空白对照组、丙酮溶剂对照组、125μg/L DBP高剂量组和625μg/L DBP低荆量组.每组12对、设两个鱼缸.连续暴露于DBP 30天后,将各组的雌雄鱼交配,孵化出的F1代斑马鱼在清水中饲养至180dph.各组随机选择20条F1代雄性斑马鱼,行性腺指数(GSI)分析以及精巢组织病理学检查.结果 与对照组相比,DBP高剂量组F1代雄鱼的GSI值为5.23%±1.5%,明显低于空白对照组(6.09%±2.5%)或溶剂对照组(6.08%±1.2%)(P<0.05).精巢组织学检查表明,成年斑马鱼DBP暴露明显抑制F1代雄鱼的性腺发育.引起生精小管畸形,且精巢间质(Leydig)细胞广泛而明显的增生与精子数量减少同时存在的特征十分明确.结论 出生前暴露于DBP可使F1代斑马鱼成年后的精巢发育受到不同程度的抑制,生精小管畸形,精子数量减少及Leydig细胞大量增生同时存在于精巢中.DBP在雄性斑马鱼体内的这种抗雌激素活性与它引发雄性大鼠、狨猴和人类的睾丸反应相类似.

甘丙肽在成年雄性小鼠睾丸和附睾中的表达定位研究

目的:研究甘丙肽在成年雄性小鼠睾丸和附睾中的表达和定位,探讨甘丙肽在雄性生殖器官中的作用.方法:采用免疫组化法检测甘丙肽在睾丸和附睾组织中的表达.结果:甘丙肽在成年小鼠睾丸和附睾组织中均有表达.睾丸组织间质细胞、支持细胞和各级生精细胞呈阳性染色,主要表达于胞膜及胞质;附睾管高柱状细胞、低柱状细胞的胞膜及胞质呈阳性染色,且甘丙肽在附睾体和尾部表达较强,在头部远段表达较弱.结论:甘丙肽在成熟小鼠睾丸和附睾组织中均有表达,其生理功能尚待阐明.

子宫内膜间质肿瘤的研究进展

子宫内膜间质肿瘤(EST)是一种发病率远较平滑肌瘤少见的女性生殖道肿瘤,临床表现与一般的妇科疾病类似,易被误诊、漏诊,且其诊断只有依据肿瘤的病理形态和免疫组织化学,对该肿瘤早发现、早诊断、早治疗尤为重要.由于子宫内膜肉瘤中核分裂数量的多少并没有实际的临床预后意义,决定肿瘤的恶性程度的是肿瘤细胞的异型性和坏死.子宫内膜间质结节(ESN)子宫内膜间质结节是发病于任何年龄妇女(一般见于40 ～ 60岁)的良性肿瘤,子宫壁内的病变约占2/3,息肉样病变约占18％,该肿瘤是孤立的、边界清楚的、膨胀性生长的肉质结节,罕见情况下,局灶边缘不规则,形成指状突起,但不能＞3mm.组织学上,ESN是由均一的类似于增生期子宫内膜间质的细胞呈漩涡状围绕在血管周围,血管成分类似于非肿瘤性子宫内膜的螺旋小动脉,血管均匀分布,管腔一致,少数病例可偶见较大的厚壁血管,可出现明显的泡沫状间质细胞,局灶可出现平滑肌、骨骼肌及性索分化[1].瘤细胞对vimentin和CD10有免疫反应,通常对desmin和h-caldesmon 呈阴性反应,但当有平滑肌分化时则局灶性对actin反应.

川芎嗪和黄芪在子宫内膜异位症发生发展中对RANTES及受体的调节作用

目的 探讨益气活血化瘀中药川芎嗪和黄芪对子宫内膜异位症患者子宫内膜间质细胞趋化因子(regulated on activation,normal T cell expressed and secreted,RANTES)和受体CCR5表达水平的调节作用.方法 选择卵巢内膜样囊肿患者10例为试验组,其他子宫良性病变患者10例为对照组,分离和纯化在位和异位子宫内膜间质细胞,加入不同干扰因素(黄芪注射液、川芎嗪注射液、黄芪联合川芎嗪注射液、丹那唑),用ELISA方法和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测RANTES和CCR5表达水平.结果 (1)异位子宫内膜间质细胞表达RANTES水平与在位的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);异位子宫内膜间质细胞表达RANTES水平(ng/L)阳性对照组(13.602±3.358)较阴性对照组(0.027±0.016)明显增高(P<0.05),在位子宫内膜间质细胞表达RANTES水平阳性对照组(12.850±7.997)较阴性对照组(0.027±0.016)明显增高(P<0.05).加入不同中药干预因素后,异位子宫内膜间质细胞表达RANTES水平较阳性对照组明显下降(P<0.05).(2)异位子宫内膜间质细胞表达CCR5水平(0.759±0.039)较在位子宫内膜(0.249±0.026)明显增高(P<0.05).异位子宫内膜间质细胞表达CCR5水平阳性对照组(0.759±0.039)较阴性对照组(0.478±0.094)明显增高(P<0.01),在位子宫内膜间质细胞表达CCR5水平阳性对照组(0.249±0.026)较阴性对照组(0.131±0.021)明显增高(P<0.01).加入不同中药干预因素后,CCR5表达水平较阳性对照组均明显下降(P<0.01).结论 子宫内膜异位症患者异位子宫内膜较在位子宫内膜间质细胞表达CCR5水平高.川芎嗪和黄芪对子宫内膜异位症患者RANTES及其受体CCR5的自分泌作用具有明显降调节作用.

温阳生精汤含药血清对肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中雌激素分泌的影响

目的 观察温阳生精汤含药血清对腺嘌呤致雄性肾阳虚不育大鼠睾丸间质细胞中雌二醇( estradiol,E2)合成以及影响其合成的芳香化酶(cytochrome P450 aromatase,P450arom)活性、其编码基因CYP19表达的影响,从蛋白和mRNA水平探讨温阳生精汤含药血清治疗肾阳虚不育的机制.方法 将实验大鼠随机分为4组,每组5只,即正常组及温阳生精汤高、中、低浓度组.各组大鼠分别以生理盐水和高、中、低浓度中药连续灌胃10天.末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清.从肾阳虚大鼠体内分别分离并纯化睾丸间质细胞,经鉴定后原代培养,随机分为5组,即空白对照组,模型组,中药高、中、低浓度(1.2、1.0、0.8 g/mL)组,用放射免疫法测定细胞培养液中E2含量,氚水释放实验检测P450arom在细胞中的活性,同时用Western blot法和荧光定量PCR法分别测定CYP19蛋白和mRNA表达.结果 与空白对照组比较,模型组中间质细胞上清中E2的含量明显减少,同时伴随P450arom活性抑制,以及CYP19蛋白和mRNA表达的显著减少(P ＜0.01,P＜0.05).与模型组比较,经温阳生精汤含药血清干预后可显著增加间质细胞中E2合成量,上调P450arom活性,同时在蛋白和mRNA水平上调细胞中CYP19表达,并具有部分剂量依赖性(P＜0.01,P＜0.05).结论 温阳生精汤含药血清可以有效提高肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中E2的合成,并可能部分通过上调P450arom活性,提高CYP19基因表达实现,这可能是其治疗男性肾阳虚不育的机制之一.

补肾活血方对子宫自然杀伤细胞与子宫间质细胞旁分泌基因表达谱的影响

目的 观察补肾活血方对子宫自然杀伤(uterine natural killer,uNK)细胞与子宫间质细胞旁分泌基因表达谱的影响.方法 从育龄期妇女的增殖期子宫内膜提取人间质细胞,分为空白组、对照组和中药组.中药组加入DMEM/F12稀释至终浓度为2 mg/mL的补肾活血方药液,空白组和对照组加入等体积的DMEM/F12,对照组和中药组培养24 h后再加入20％无血清DMEM加80％ uNK细胞分泌提取液,于37℃,5％ CO2培养6h,提取3组细胞RNA.运用基因芯片技术检测各组间质细胞的基因表达谱,同时应用qRT-PCR和ELISA法检测筛选基因粒细胞趋化蛋白1(CXCL1)]、细胞间黏附分子-(ICAM-1)、IL-8和白血病抑制因子(leukocyte inhibitor factor,LIF)mRNA和蛋白表达.结果 与空白组比较,对照组和中药组上升4倍的差异基因表达谱基本一致,共63个基因.与对照组比较,中药组IL-15受体α(IL-15RA)上调1.27倍,血管内皮生长因子(VEGF)上调1.55倍,LIF上调1.45倍,IL-8上调1.10倍,IL-11上调1.23倍,转化生长因子-β(TGF-β)上调1.40倍,表皮生长因子(EGF)上调1.10倍,单核细胞趋化蛋白8(CCL8)上调1.13倍,运输蛋白1(TAP 1)上调1.02倍,细胞表面趋化因子受体2(CXCR2)上调1.22倍·ICAM-1上调1.15倍(P＜0.05).结论 uNK细胞旁分泌作用对提高子宫内膜容受性和种植妊娠率发挥着重要的作用,补肾活血方可改善并提高此旁分泌系统的功能.

癃必消胶囊对体外培养的人前列腺增生间质细胞作用机制的实验研究

目的 研究中药癃必消胶囊对体外培养的人前列腺增生间质细胞的作用机制.方法 将雄性日本大耳白兔9只随机分为中药高剂量、低剂量组和对照组,每组3只,中药高、低剂量组分别予癃必消胶囊药粉[2.0 g/(kg·d),1.0 g/(kg·d)]灌胃,对照组予等体积生理盐水灌胃.每天灌胃2次,间隔12 h,连续3天.采用后一次灌药3 h后的血清加入细胞培养液.将含癃必消胶囊药物的兔血清加入到体外培养的人前列腺增生间质细胞中,采用TUNEL、EUSA、免疫细胞化学等相关技术检测间质细胞的增殖及凋亡水平.采用实时定量RT-PCR等技术,检测转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad7在前列腺增生间质细胞中的表达.结果 各组细胞增殖均表现出用药时间依赖性,与对照组比较,各用药组细胞增殖水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01),与低剂量组比较,高剂量组增殖降低,差异有统计学意义(P<0.01).各组培养48 h的前列腺间质细胞,在形态上并未出现明显的不良生长状况,各组间差异均无统计学意义.对照组和低剂量组未见凋亡现象,只有高剂量组出现少量凋亡细胞.低、高剂量组TGF-9,、Smad7表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01).低剂量组与高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 癃必消胶囊能降低基因TGF-β1和Smad7的表达,抑制前列腺间质细胞增殖,而对其凋亡无明显的影响.

内异消癥汤含药血清对子宫内膜异位症在位和异位内膜间质细胞增殖及分泌Ang-2的影响

目的:观察内异消癥汤含药血清对子宫内膜异位症在位和异位内膜间质细胞增殖及分泌Ang-2的影响.方法:对在位和异位内膜间质细胞进行体外分离原代培养,免疫细胞化学法鉴定.制备大鼠含药血清,分为内异消癥汤组、米非司酮组、空白血清组,用MTT法检测含药血清对间质细胞的生长抑制率,并用Elisa法检测对间质细胞分泌的Ang-2水平.结果:体外原代细胞培养方法可培养出纯度较高的间质细胞,与空白血清组相比内异消癥汤含药血清可以抑制间质细胞的增殖(P＜0.01),同时可以显著减少Ang-2的分泌水平(P＜0.01).结论:内异消癥汤含药血清可以抑制间质细胞的增殖,显著减少Ang-2的分泌水平.

草苁蓉提取物抑制HSC-T6细胞体外增殖及胶原合成

肝纤维化是各种致病因子引起慢性肝病进而发展成肝硬化的病理学基础与必经之路.肝星状细胞( Hepatic stellite cell,HSC)是一种具有多潜能的幼稚间质细胞,经过激活刺激后其表型转换形成成纤维细胞并分泌大量细胞外基质,是肝纤维化发生的细胞学基础.近年来文献报道,草苁蓉( boschniakia rossica,BR)具有抗自由基、抗脂质过氧化、抗癌、抗炎等作用,且对肝脏急慢性损伤具有保护功能[1].本实验探讨了草苁蓉乙醇提取物对培养的大鼠HSC增殖及胶原合成的抑制作用.

2.27Cajal间质细胞和5-羟色胺受体在糖尿病性胃轻瘫发病机制中的作用

目的建立糖尿病性胃轻瘫大鼠模型,对胃Cajal间质细胞的分布及超微结构变化、胃肠道自主神经病变及胃5-HT受体的表达变化进行了研究.方法健康成年雄性SD大鼠随机分为两组:糖尿病组和正常对照组,糖尿病组给予四氧嘧啶45mg/kg经静脉一次注射,正常对照组给予等量生理盐水注射,饲养3个月,对其一系列指标进行监测,包括血糖、尿糖、血清胰岛素、血清C肽、尿量、饮水量、进食量和体重.

2.152胃肠电与动力的起搏者:Cajal间质细胞的研究历史

1.13胃肠动力的细胞基础

胃肠动力性疾病常见.但迄今为止对它的病理生理学机制认识不多,这亦是目前对此类疾病有效治疗缺乏的原因之一.胃肠道是一个复杂的器官,它有1亿个以上的神经细胞和2.5亿个以上的间质细胞,并是一个贮存大量激素和旁分泌物质的化学库.消化动力包括肠神经元,平滑肌细胞和Cajal间质细胞这三类细胞的功能整合.