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XIAP和caspase-9在子痫前期患者胎盘中的表达
目的 探讨抑制凋亡蛋白XIAP及caspase-9的表达与胎盘滋养细胞凋亡的关系.方法 选取2013年4至12月于山西医科大学第二临床医院妇产科住院分娩的孕妇,其中25例子痫前期重度患者作为研究组,另外选取25例正常晚期妊娠妇女作为正常对照组,收集患者全部临床资料和分娩时的胎盘组织.用免疫组织化学二步法及Western blot检测XIAP和caspase-9在胎盘组织中的定位及表达,并用BI-2000医学图像分析系统对图片进行处理.统计分析采用SPSS 17.0两独立样本t检验进行统计学处理.结果 两组临床资料的比较:研究组与正常对照组在年龄(t=-0.95,P＞0.05)及孕龄(t=1.99,P＞0.05)上差异无统计学意义;在收缩压(t=-8.64,P＜0.01)、舒张压(t=-8.09,P＜0.01)、新生儿出生体重(t=6.59,P＜0.01)、新生儿评分(t=7.56,P＜0.01)之间差异有统计学意义.免疫组化检测结果:两组孕妇胎盘滋养细胞的胞质中均可见XIAP和caspase-9的阳性表达.子痫前期组胎盘滋养细胞中XIAP的表达的OD值显著低于正常对照组(0.23±0.03 vs.0.34±0.04,t=-11.12,P＜0.01);caSpase-9的表达高于正常组(0.32±0.04 vs.0.26±0.05,t=-5.23,P＜0.01).Western blot检测结果:子痫前期组胎盘滋养细胞中XIAP的表达低于正常对照组(灰度值0.36±0.14 vs.0.96±0.43,t=-3.00,P＜0.05);子痫前期组胎盘滋养细胞中caspase-9的表达高于正常对照组(灰度值2.58±0.47 vs.1.66±0.19,t=-3.69,P＜0.05).结论 子痫前期重度患者胎盘滋养细胞的胞质中抑制凋亡蛋白XIAP的表达下调,caspase-9表达升高,提示XIAP通过影响caspase-9导致滋养细胞凋亡增加可能与子痫前期的发病有关.
关键词： X连锁凋亡抑制蛋白质 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 胎盘 子痫前期 滋养细胞 -
高糖和光损伤对人视网膜色素上皮细胞HIF-1α、Caspase-9表达的影响
目的 探讨高浓度葡萄糖和光损伤对体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Caspase-9蛋白表达的影响.方法 体外培养人RPE(ARPE-19),(2000±500)Lux光照建立光损伤模型,给予25 mmol/L葡萄糖模拟高糖环境,通过MTT法检测细胞活力.免疫细胞化学、免疫荧光染色和双标荧光染色法观察各组细胞HIF-1α、Caspase-9蛋白的表达,酶联免疫吸附试验定量分析各组细胞HIF-1α、Caspase-9蛋白的表达.结果 (2000±500)Lux光照及25 mmol/L高糖均可引起体外培养的人RPE细胞活性下降,高糖联合光损伤的RPE细胞活力低.正常对照组无HIF-1α、Caspase-9表达,免疫细胞化学染色和双标免疫荧光染色显示光损伤、高糖、高糖联合光损伤均可诱导RPE细胞HIF-1α、Caspase-9蛋白的表达.酶联免疫吸附试验检测结果显示,光损伤和高糖均可使HIF-1α、Caspase-9蛋白表达增加,高糖组的RPE细胞HIF-1α、Caspase-9蛋白表达低于高糖联合光损伤组,但高于光损伤组(P<0.01).结论 (2000±500)Lux光照可导致体外培养人RPE细胞的损伤,高浓度葡萄糖可加重RPE细胞光损伤,高糖可使光损伤诱导的RPE细胞HIF-1α、Caspase-9蛋白表达增加.
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大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后半胱氨酸蛋白酶9及热休克蛋白-90的表达
目的 探讨大鼠半胱氨酸蛋白酶9(Caspase-9)及热休克蛋白-90(HSP-90)的表达.方法 将200～250 g的SD雄性大鼠随机分为正常对照组、假手术组和局灶性脑缺血再灌注组,根据各组的再灌注时间,将每个组分为4个亚组,即6、24、48、和72 h四个亚组;采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注的损伤模型,行酶联免疫学检测(ELISA)法检测大鼠Caspase-9及HSP-90的表达的变化. 结果 ELISA法观察大鼠脑细胞Caspase-9、HSP-90含量的变化,Caspase-9及HSP-90表达在假手术组为弱表达,在局灶性脑缺血再灌注组的表达在24～48 h达高峰,72 h开始下降.假手术组与正常对照组相比结果差异无统计学意义.脑缺血再灌流后,随着时间的延长凋亡细胞数逐渐增加,至48 h达高峰;在缺血半暗带区,再灌流后神经细胞HSP-90和Caspase-9表达逐渐增强,到48h阳性细胞数目多. 结论 脑缺血再灌流后神经细胞凋亡是一个动态的渐进过程.HSP-90和Caspase-9基因表达在介导细胞凋亡过程中起重要作用.
关键词： 再灌注损伤 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 热休克蛋白质类 -
半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9的研究进展
半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)是一类半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶族,该家族是执行细胞凋亡的主要酶类,近年来的研究发现,该酶参与多种疾病的发生发展,尤其是肿瘤、自身免疫性疾病和病理性瘢痕.caspase-9是该家族中的启动分子,在凋亡途径中起了重要的作用,本文综述caspase-9的结构特点、活化与调节,以及导致凋亡的机制和与临床上部分疾病的关系.
关键词： 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 细胞凋亡 疾病 -
红景天苷对宫颈癌HeLa细胞增殖抑制作用的研究
目的:探讨不同浓度红景天苷对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用及其作用机制.方法:浓度分别为5,50,500μg/mL的红景天苷体外培养HeLa细胞24 h后,应用噻唑蓝(MTT)法观察红景天苷对HeLa细胞的生长抑制作用,流式细胞技术及Hoechst核染色法观察各组HeLa细胞凋亡情况,比色法检测凋亡相关因子Caspses-3及Cas-pase-9的表达.结果:红景天苷能明显抑制HeLa细胞增殖,不同剂量(5,50,500μg/mL)红景天苷组的细胞存活率[(82.00±3.65)%,(59.33±2.39)%,(54.00±2.61)%]与阴性对照组[(97.33±3.45)%]比较降低,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞技术结果显示,红景天苷低、中、高浓度组凋亡细胞比例分别为(20.53±5.76)%、(32.43±3.53)%和(42.40±3.39)%,与阴性对照组[(1.33±0.95)%]相比升高,差异均有统计学意义(P<0.01);Hoechst33258核染色法结果显示,红景天苷能够增加凋亡细胞数量;Caspase活性检测结果显示,红景天苷能增强Caspase-3及Caspase-9表达.结论:红景天苷通过增强Caspase-3及Caspase-9表达抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,诱导其凋亡,提示红景天苷可能在宫颈癌的治疗中具有一定作用.
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神经干细胞移植对脑外伤大鼠神经功能的影响
目的 探讨神经干细胞移植对脑外伤大鼠神经功能及脑组织Caspase-3和Caspase-9表达的影响.方法 108只SD成年大鼠随机分为假手术(Sham)组、脑外伤(TBI)组和神经干细胞移植(NSC)组,每组36只.TBI和NSC组采用改良的Feeney氏法制作大鼠脑外伤动物模型,NSC组大鼠在脑外伤模型制作成功后1周在皮质处局部注射移植神经干细胞,TBI和NSC组大鼠分别在细胞移植后的第7天、14天和21天进行神经功能缺损评分(NSS);sham组仅切开头皮暴露颅骨,不实施打击.免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组大鼠脑组织Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达.结果 各时点NSC组大鼠较TBI组NSS评分均降低(P<0.01).免疫组织化学方法和Western blot均显示,与Sham组相比,TBI组大鼠脑组织的Caspase-3和Caspase-9阳性表达OD值均升高(P<0.05);而与相同时间点的TBI组大鼠相比,NSC组大鼠脑组织Caspase-3和Caspase-9的阳性表达OD值均降低,但仍高于Sham组(P<0.05).结论 神经干细胞移植后可能通过下调Caspase-3和Caspase-9的表达促进脑外伤大鼠神经功能的恢复.
关键词： 脑损伤 干细胞移植 神经元 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 疾病模型 动物 -
Caspase8和9在肿瘤局部微环境形成早期与调控蛋白Twist1的关联性
目的:研究Caspase 8、9在肿瘤局部微环境早期线形程序性坏死(LPPCN)及血管生成拟态(VM)形成中对上皮一间充质转变(EMT)调控蛋白Twist1表达的影响.方法:将96只C57BL小鼠随机分为Caspase 8抑制剂组、Cas-pase9抑制剂组、Caspase 8,9抑制剂联合用药组(联合组)和对照组,制备小鼠荷瘤模型.采用免疫组织化学法检测EMT调控蛋白Twist1在LPPCN和VM周围第1～4层肿瘤细胞的表达水平.结果:4组LPPCN周围第1～4层肿瘤细胞Twist1核阳性染色指数差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且呈递减趋势;对于同层肿瘤细胞,联合组和对照组的细胞核Twist1阳性染色指数比较差别有统计学意义(均P<0.01).LPPCN、VM周围第1～4层肿瘤细胞、同一层不同组的肿瘤细胞浆Twist1阳性染色指数差异均无统计学意义(均P>0.05);VM周围第1～4层肿瘤细胞、同一层不同组的肿瘤细胞核Twist1阳性染色指数差异均无统计学意义(均P>0.05).结论:Caspase 8、9介导的凋亡机制启动与EMT发生存在关联性.
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香芹酚诱导非小细胞肺癌1299细胞凋亡的实验研究
目的：探讨香芹酚（CV）对人非小细胞肺癌（NSCLC）NCI-H1299细胞的增殖、凋亡及侵袭的作用及可能机制。方法以不同浓度的CV（20、40、60、80μmol/L）处理NCI-H1299细胞，以未经CV处理的细胞为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率；流式细胞术检测各组细胞凋亡率；Transwell法检测40μmol/L CV处理组和对照组细胞侵袭能力；实时荧光定量PCR及Western blot检测40μmol/L CV处理组和对照组的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-9、基质金属蛋白酶（MMP）-9、TIMP-1的mRNA及蛋白水平的表达变化。结果与对照组比较，CV各处理组NCI-H1299细胞存活率均明显降低，而凋亡率增加（P＜0.05），但抑制效应均不呈浓度依赖性（P＞0.05）。CV处理组侵袭细胞数（40.67±3.63）个明显低于对照组（76.00±5.78）个（P＜0.01）。CV处理组较对照组caspase-9、TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平均增高，MMP-9的mRNA和蛋白表达水平均降低（P＜0.01）。结论CV可诱导人NSCLC NCI-H1299细胞凋亡，抑制其侵袭，作用机制可能与caspase-9的活性增加及MMP-9的下调有关。
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反复吸入七氟醚对老龄大鼠海马组织Apaf-1和Caspase-9 mRNA表达的影响
目的 探讨反复吸入七氟醚对老龄大鼠海马组织凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA表达的影响.方法 健康Wistar大鼠30只,月龄22月,体重380～770 g,雌雄各半,随机分为4组:对照组(n=8,Ⅰ组)、2%七氟醚组(n=8,Ⅱ组)、3%七氟醚组(n=8,Ⅲ组)及颈总动脉结扎+2%七氟醚组(n=6,IV组).Ⅰ组不吸入七氟醚,Ⅱ组及Ⅲ组分别吸入2%、3%七氟醚,100 min/d,连续5 d.Ⅳ组结扎左侧颈总动脉,1周后吸入2%七氟醚,100 min/d,连续5 d.停止吸入七氟醚后第1天开始采用Morris水迷宫实验测定大鼠认知功能,4次/d,连续测定5 d(T_(1～5)),记录潜伏期、平台象限活动时间与总游泳时间的百分比(Tp/T)及撤去平台后2 min内的游泳轨迹.水迷宫实验结束后采用RT-PCR法测定海马组织Apaf-1、Caspase-9 mRNA的表达水平.结果 与T_1时比较,Ⅰ组T_(3～5)、Ⅱ组及Ⅲ组T_(2～5)时、Ⅳ组T_(4,5)时潜伏期缩短(P<0.05或0.01);与Ⅰ组比较,Ⅲ组T_1时、Ⅳ组T_(1～5),时潜伏期延长,Ⅲ组及Ⅳ组Tp/T降低,Ⅳ组Caspase-9 mRNA表达上调(P<0.05或0.01).撤去平台后,Ⅱ组大鼠游泳轨迹明显集中在平台象限(Ⅳ象限),Ⅲ组和Ⅳ组大鼠游泳轨迹明显散乱.结论 反复吸入七氟醚可导致老龄大鼠认知功能障碍,其机制与海马组织Apaf-1及Caspase-9 mRNA的表达无关.
关键词： 麻醉药 吸入 认知障碍 凋亡蛋白酶活化因子1 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 老年人 -
Caspase-9和Survivin在肝癌组织中的表达及意义
目的 探讨Caspase-9和Survivin在肝细胞癌(HCC)患者肝癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测92例肝癌患者肝癌组织及其对应癌旁正常肝组织中Caspase-9和Survivin的表达,并分析其表达与HCC临床恶性生物学行为的相关性.组间比较采用卡方检验,相关性分析采用Spearman等级相关法.结果 Caspase-9在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织,而Survivin在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织,差异均具有统计学意义(χ2=6.48、7.05,P<0.05).在TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、门静脉癌栓、淋巴结转移的肝癌组织中Survivin的阳性表达率明显增高(χ2=5.07、6.18、8.29,P<0.05),而在其他分组中比较差异无统计学意义;在病理分级Ⅲ～Ⅳ级的肝癌组织中Caspase-9的阳性表达率明显降低(χ2=7.63,P<0.05),而在其他分组中比较差异无统计学意义.结论 Caspase-9低表达和Survivin异常高表达均参与肝癌的发生过程,Caspase-9低表达可能与肝癌细胞恶性分化密切相关,而Survivin高表达与肝癌的浸润或远处转移等恶性发展密切相关.
关键词： 癌 肝细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 凋亡抑制蛋白质类 免疫组织化学 -
不同碘缺乏大鼠肾组织UCP2及caspase-9蛋白的表达
目的:观察不同碘缺乏大鼠肾组织UCP2、caspase-9蛋白的表达,探讨二者表达的相关性.方珐:雌性Wistar大鼠随机分为轻度缺碘组、重度缺碘组及正常对照组,总碘摄入量分别为5、1.24、10 μg/d,采用RT-PCR,免疫组化等方法检测大鼠离体肾脏UCP2及caspase-9蛋白的表达,并分析二者表达的相关性.结果:与正常对照组相比,碘缺乏大鼠肾组织UCP2基因、蛋白表达水平下降,caspase-9蛋白表达增加(P<0.05),远端肾小管、髓质肾小管改变更明显;且caspase-9蛋白表达与UCP2表达负相关.结论:碘缺乏导致大鼠肾组织UCP2表达下降,可能与凋亡蛋白caspase-9表达增加有关.
关键词： 解偶联蛋白2 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 碘缺乏 肾 细胞凋亡 -
依达拉奉对肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的保护作用
目的 探讨依达拉奉(EDA)对氧化应激诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响及可能机制.方法 用过氧化氢氧化应激建立氧化应激肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡模型细胞.将细胞分为:过氧化氢处理组(H组)、依达拉奉-过氧化氢处理组(E组)和对照组(C组).采用脂质过氧化物(MDA)、谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测A549细胞MDA、GSH的含量,同时测定三组细胞生长的抑制率、凋亡率、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3与caspase-9 mRNA及蛋白表达.结果 与C组比较,H组细胞MDA、细胞生长抑制率、凋亡指数、caspase-3与caspase-9 mRNA相对表达及蛋白表达量明显升高；而GSH明显降低(P＜0.01).与H组比较,E组细胞MDA、细胞生长抑制率、凋亡指数、caspase-3与caspase-9 mRNA相对表达及蛋白表达量明显降低；而GSH明显增高(P＜0.05).结论 依达拉奉可通过抗氧化及抗caspase-3,caspase-9引起的凋亡以保护肺泡Ⅱ型上皮细胞对抗氧化应激.
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全乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯对氧化应激导致黑素细胞损伤的保护作用研究
目的 研究全乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯(AcEGCG)对H2O2诱导的人表皮黑素细胞损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制.方法 体外培养人表皮黑素细胞,采用H2O2诱导细胞损伤模型.实验分对照组、H2O2组、不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)组和AcEGCG组.MTS法测定细胞存活率,LDH测试盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)的表达水平;Western印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase-9)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达情况.多个样本均数比较采用单因素方差分析,各样本间多重比较采用SNK-q检验.结果 与对照组相比,H2O2处理组黑素细胞存活率明显降低(22.99％±0.53％,P＜ 0.01),细胞内LDH漏出量增加(36.58％±0.73％,P＜ 0.01),细胞内ROS水平明显升高(19.08±0.57,P＜ 0.01),caspase-9和caspase-3表达升高(分别为2.65±0.079和2.36±0.057,均P＜0.01).与H2O2组相比,细胞存活率在10、20、40 μmol/L AcEGCG组(79.50％±3.62％、86.52％±5.13％、97.81％±5.21％)及EGCG组(43.19％±1.68％、63.34％±3.60％、70.82％±2.1％)明显增加(均P＜0.01),caspase-9分别降低为1.44±0.067、1.26±0.059、1.10±0.072及2.31±0.085、2.13±0.091、1.35±0.064,caspase-3分别降低为1.70±0.053、1.57±0.057、1.24±0.068及2.09±0.076、1.98±0.093、1.79±0.056,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);LDH含量均明显下降(P＜ 0.01);40 μmol/L AcEGCG或EGCG处理后,ROS含量明显下降(均P＜ 0.01).结论 AcEGCG对H2O2诱导的黑素细胞氧化应激损伤有显著的保护作用,且显著优于EGCG,可能通过清除自由基、抗氧化、降低caspase-9及caspase-3表达等途径发挥作用.
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雷公藤内酯醇诱导皮肤鳞状细胞癌细胞系A431凋亡机制的探讨
目的 探讨雷公藤内酯醇诱导体外培养皮肤鳞状细胞癌细胞系A431凋亡的作用机制.方法 将雷公藤内酯醇按不同浓度、不同作用时间分别培养A431,Annexin V-FITC/PI染色经流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光显微镜下观察FITC标记的早期凋亡细胞及PI阳性的中晚期凋亡细胞.通过分光光度计检测凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性.结果 A431细胞经1、10、100 mg/L雷公藤内酯醇作用后.在12 h 出现早期凋亡,其凋亡率与雷公藤内酯醇的浓度及作用时间有依赖关系;荧光显微镜下12 h出现早期凋亡细胞,24 h出现典型的凋亡细胞.雷公藤内酯醇作用A431细胞后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性在12 h开始增高,Caspase-3、Caspase-9的活性在24 h达到高,Caspase-3活性三个浓度组的A值分别是0.723,0.850,1.127,Caspase-9活性则为1.072,1.091,1.191,Caspase-8在18 h达到高峰,其A值分别是0.641,0.780,0.910,三项指标的活性均明显高于对照组(P<0.05).结论 雷公藤内酯醇能诱导A431细胞凋亡,其作用存在浓度及时间依赖关系.
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扁平苔藓皮损中Caspase-9和Apaf-1的表达及其与细胞凋亡的关系
目的 探讨扁平苔藓皮损中Caspase-9、Apaf-1的表达及其与细胞凋亡的关系.方法 采用DNA末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL法)和免疫组化的方法检测30例扁平苔藓皮损和30例正常人皮肤组织中细胞凋亡和Caspase-9、Apaf-1的表达情况,采用RT-PCR检测10例扁平苔藓皮损和8例正常人皮肤组织中Caspase-9 mRNA的表达情况.结果 扁平苔藓组表皮层角质形成细胞的凋亡指数(AI)为75.67 4±9.4,正常人对照组为38.15±9.6,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Caspase-9和Apaf-1表达的阳性单位分别为14.45±2.72和11.93±3.14,明显高于正常人对照组(P＜0.01);而且Caspase-9 mRNA的表达量(2.304±0.417)与正常人对照组(1.605±0.381)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).扁平苔藓皮损中Caspase-9、Apaf-1阳性表达强度均与其自身角质形成细胞的AI呈正相关(r=0.96和0.94,P＜0.01).结论 扁平苔藓皮损中角质形成细胞凋亡亢进可能与扁平苔藓的发生有关,Caspase-9、Apaf-1与角质形成细胞的凋亡关系密切.
关键词： 扁平苔癣 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 凋亡蛋白活化因子1 -
Livin与Caspase-9在非小细胞肺癌组织中的表达
目的 检测人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中Livin和Caspase-9蛋白的表达情况,并进行相关性分析.方法 采用免疫组化SP法分别检测58例NSCLC组织、50例癌旁肺组织、8例正常肺组织中Livin和Caspase-9蛋白的表达水平,并分别分析两种蛋白表达与NSCLC的组织类型、分化程度、临床分期和淋巴结转移之间的关系,以及两种蛋白在NSCLC中表达的相关性.结果 NSCLC组织中Livin蛋白的阳性表达率(65.5%)高于癌旁肺组织(26.0%)和正常肺组织(0%),差异有统计学意义(P<0.05);Livin蛋白在腺癌中的阳性表达率(87.5%)明显高于鳞癌(46.5%)及腺鳞癌(66.7%),在有淋巴结转移的NSCLC中的阳性率(83.3%)明显高于无淋巴结转移者(46.4%),差异均有统计学意义(P<0.05);而在不同分化程度及临床分期的NSCLC中的阳性率差异无统计学意义(P>0.05).NSCLC组织中Caspase-9蛋白的阳性表达率(31.0%)低于癌旁肺组织(82.0%)和正常肺组织(87.5%)(P<0.05);有淋巴结转移的NSCLC组织中Caspase-9蛋白的阳性表达率(16.7%)低于无淋巴结转移者(46.4%)(P<0.05);在不同组织学类型、分化程度、临床分期的NSCLC中的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05).两种蛋白在NSCLC组织中的表达呈负相关(R2=0.1447,=0.003).结论 NSCLC组织中Livin蛋白表达增高,并与Caspase-9蛋白的表达呈负相关.
关键词： 癌 非小细胞肺 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 免疫组织化学 -
三氯乙烯诱导人表皮角质形成细胞凋亡中依赖Caspase-9的Caspase-3激活
目的 探讨有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡过程中可能的信号通路.方法 用0.125、0.25、015、1.0、2.0 mmol/L的TCE处理NHEK4 h,并培养4、8、12、24 h,分光光度法测上清中Caspase-9和Caspase-3活性,Annexin-V/PI双染后流式细胞仪(FCM)测细胞凋亡;Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK和Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理组,用100 μmol/L ZDEVD-FMK或Z-LEHD-FMK预处理NHEK 1 h,再用2.0mmol/L TCE染毒4 h后培养至12 h.结果不同浓度TCE处理NHEK 4 h后培养不同时间,可诱导Caspase-3和Caspase-9活性升高,培养12、24 h时,各TCE处理组Caspase-3和Caspase-9活性与溶剂对照比差异有统计学意义(P<0.05).不同浓度TCE处理NHEK 4 h后培养12 h.凋亡细胞(Annexin-V+/PI-)所占百分比随TCE剂量增加而升高,除0.125 mmol/L TCE组外,其它各处理组AnnexinV+/PI-细胞所占百分比与对照组比差异均有统计学意义(P<0.05).相关分析显示Annexin-V+/PI-细胞所占百分比与Caspase-3和Caspase-9活性都呈正相关(P<0.05).100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理明显抑制2.0 mmol/L TCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加(P<0.05),对Caspase-9活性影响不明显(P>0.05).100 μmol/L Z-LEHD-FMK预处理不仅抑制2.0mmol/L TCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加,还抑制Caspase-9活性上升(P<0.01).结论 TCE诱导NHEK凋亡中,内部凋亡途径中上游关键酶Caspase-9和下游效应分子Caspase-3均激活.且Caspase-3的激活依赖Casapase-9的活化.
关键词： 三氯乙烯 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 细胞凋亡 -
Caspase-9表达对肝硬化门静脉高压中巨脾形成的作用机制探讨
目的:探讨Caspase-9在肝硬化门静脉高压巨脾中的表达及对其形成的作用机制.方法:采用免疫组织化学SP法测定50例肝硬化门静脉高压患者巨脾和15例正常人外伤脾脏组织中Caspase-9的表达情况.结果:Caspase-9在外伤脾脏及巨脾组织中阳性表达率分别为26.7%和76.0%,差异有统计学意义(P<0.05).Caspase-9阳性表达与肝功能Child分级及巨脾病理分级均呈正相关(r=0.834,P<0.05).结论:Caspase-9参与了肝硬化门静脉高压中脾肿大及脾功能亢进的发生、发展过程.
关键词： 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 高血压 门静脉 脾 -
噻吗洛尔对人多发性骨髓瘤细胞株 RPMI 8226增殖、凋亡的影响及其机制
目的：观察非选择性β-肾上腺素能受体阻断剂噻吗洛尔对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖及凋亡的影响，并探讨其可能机制。方法取对数生长期RPMI 8226细胞分为实验1、2、3、4、5、6组，分别加入终浓度为1、2．5、5、20、50、100μmol／L的噻吗洛尔培养，以不添加细胞和药物的培养液为空白对照组，以不添加药物的细胞液为阴性对照组，观察培养24、48、72 h时各组细胞增殖情况。另取适量RPMI 8226细胞，分为A、B、C组，分别加入终浓度为2．5、20、50μmol／L噻吗洛尔培养，设只加细胞培养液的对照组。取培养72 h时各组细胞，观察细胞凋亡情况，检测细胞Bax、B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、Caspase-9 mRNA和蛋白表达。结果随浓度升高，细胞增殖抑制率升高，且随干预时间增加，细胞增殖抑制率升高，P均＜0．05。培养72 h时A、B、C组及对照组细胞凋亡率分别为7．17％±0．06％、10．56％±0．65％、15．27％±0．86％、3．93％±0．25％，组间两两比较，P均＜0．05。 A、B、C组Bax mRNA及蛋白的相对表达量均高于对照组（P均＜0．05）。 B、C组Bcl-2 mRNA及蛋白的相对表达量均高于对照组（P均＜0．05）；C组Bcl-2 mRNA相对表达量高于A组（P＜0．05）。 B、C组Caspase-3 mRNA相对表达量高于A组（P均＜0．05）。 A、B、C组Caspase-9 mRNA相对表达量均高于对照组（P均＜0．05）。结论噻吗洛尔可抑制RPMI 8226细胞增殖、促进细胞凋亡，其机制可能与噻吗洛尔可上调Bax、Caspase-3、Caspase-9表达，抑制Bcl-2表达有关。
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藏红花酸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及机制探讨
目的 探讨藏红花酸对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠心肌组织的影响及其机制.方法 选择30只雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(MI/R组)及藏红花酸预处理组(CRO组)各10只.Sham组、MI/R组均予0.5%CMC-Na 10 mL/(kg·d)灌胃预处理,CRO组予0.5%藏红花酸50 mg/(kg·d)灌胃预处理.干预7 d后,MI/R组、CRO组均开胸结扎冠状动脉前降支45 min,再灌注180 min,建立心肌I/R损伤模型;Sham组开胸后,于冠状动脉前降支穿线但不予结扎.造模结束后,腹主动脉抽血分离血清,采用胶体金法测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌钙蛋白I(cTnI)水平.取心肌组织,采用HE染色法观察心肌细胞病理变化,采用免疫组织化学SV超敏两步法检测心肌细胞色素C(CytC)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)蛋白表达.结果 Sham组心肌间质无炎性细胞浸润,心肌纤维排列整齐;MI/R组可见心肌组织明显坏死区,心肌间质出现大量炎性细胞浸润;CRO组心肌组织坏死及炎细胞浸润较MI/R组明显减轻.MI/R组血清CK-MB、cTnI水平均高于Sham组,CRO组血清CK-MB、cTnI水平均低于MI/R组(P均<0.05).MI/R组心肌CytC、Caspase-9蛋白表达均高于Sham组(P均<0.05),CRO组心肌CytC、Caspase-9蛋白表达均低于MI/R组(P均<0.01).结论 藏红花酸预处理可明显减轻大鼠心肌I/R损伤,其机制可能与抑制CytC/Caspase-9蛋白表达有关.
关键词： 藏红花酸 心肌缺血 缺血再灌注损伤 细胞色素C 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9
