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活血化瘀方对脑缺血大鼠海马组织Apaf-1/Caspase信号通路的影响
目的:探讨活血化瘀方丹红注射液对脑缺血大鼠海马组织凋亡蛋白酶活化因子1(Apaf-1)/天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)通路的影响.方法:SD雄性大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、丹红注射液组.采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法制备大鼠脑缺血模型,检测神经功能评分、脑梗死体积,应用HE染色观察海马组织病理形态学改变,TUNEL荧光染色检测海马CA1区神经细胞凋亡,Western blot法检测海马组织Apaf-1、Caspase-9、Caspase-3、Bax、Bel-2蛋白的表达变化.结果:与假手术组比较,缺血性脑卒中大鼠神经功能缺失,脑梗死体积增加(P＜0.001),海马组织细胞受损明显,海马CA1区TUNEL阳性细胞数显著增加(P＜0.01),Apaf-1、Caspase-9、Caspase-3、Bax蛋白表达增加(P＜0.01,P＜0.05),Bcl-2表达降低(P＜0.05);丹红注射液干预后,神经功能评分显著降低,脑梗死体积明显减小(P＜0.05),海马组织细胞受损有所改善,TUNEL阳性细胞数显著降低(P＜0.01)Apaf-1、Caspase-9、Caspase-3及Bax蛋白表达显著降低(P＜0.05),Bcl-2表达显著增加(P＜0.05).结论:丹红注射液能够抑制大鼠海马组织Apaf-1介导的Caspase通路,从而抑制缺血性脑卒中大鼠海马神经细胞的凋亡,推测活血化瘀方可能通过调控Apaf-1抑制内源性神经细胞凋亡途径.
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肝素结合性表皮生长因子样生长因子在坏死性小肠结肠炎新生大鼠线粒体途径细胞凋亡中的作用
目的 探讨肝素结合性表皮生长因子样生长因子(heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor,HB-EGF)在新生儿坏死性小肠结肠炎(neonatal necrotizing enterocolitis,NEC)新生大鼠模型线粒体途径细胞凋亡中的作用. 方法 新生无特定病原体Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,每组10只.NEC模型组:采用代乳品人工喂养,并给予100％氮气缺氧90 s,4℃冷刺激10 min,每天2次,连续3 d；HB-EGF干预组:在NEC模型组基础上予HB-EGF灌胃,每次800 μg/kg,每天4次,连续3d.正常对照组:鼠乳喂养3d,不予任何干预.大鼠生后72h禁食12h后处死.取回肠末端组织,HE染色观察病理改变并评分；电镜下观察线粒体超微结构变化；免疫组织化学方法检测细胞色素C含量；Western印迹技术检测凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)及凋亡肽酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1,APAF-1)的表达.组间差异比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验,P＜0.05为差异有统计学意义. 结果 (1)HB-EGF干预组NEC发生率为2/10,低于模型组(9/10),差异有统计学意义(x2=7.27,P＜0.01)；对照组未发生NEC.(2)NEC模型组线粒体在肠上皮细胞及肌层细胞中存在明显肿胀,基质内有多数电子透亮区,线粒体超微结构严重损伤.HB-EGF干预组有少量线粒体肿胀,损伤较NEC模型组减轻.(3)NEC模型组回肠组织细胞色素C表达较对照组增强,差异有统计学意义(0.030±0.018与0.002±0.001,q=6.15,P＜0.01),HB-EGF干预组回肠组织细胞色素C表达(0.014±0.018)较NEC模型组减弱,差异有统计学意义(q=3.53,P＜0.05).NEC模型组的APAF-1表达较对照组增强(1.364±0.299与0.215±0.033,q=15.31,P＜0.05),AIF表达也增强(0.181±0.050与0.127±0.045,q=3.71,P＜0.05)；与NEC模型组比较,HB-EGF干预组APAF-1的表达(0.455±0.123)减低(q=4.04,P＜0.05),AIF的表达(0.289±0.045)则明显增强(q=7.32,P＜0.05). 结论 HB-EGF能降低新生大鼠NEC发生率,其机制之一可能是通过下调APAF-1表达而减少新生大鼠线粒体途径细胞凋亡.
关键词： 小肠结肠炎 坏死性 胞间信号肽类和蛋白质类 凋亡蛋白酶活化因子1 细胞凋亡 线粒体 大鼠 -
前列腺癌组织凋亡蛋白酶活化因子1和bax的表达及其临床意义
目的：探讨凋亡蛋白酶活化因子1（Apaf-1）和bax在前列腺癌和前列腺增生组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法检测45例前列腺癌患者和60例前列腺增生患者Apaf-1和bax的表达。结果前列腺癌中Apaf-1和bax的阳性率分别为22.22%（10／45）、20.00%（9／45），低于前列腺增生组织的48.33%（29／60）、46.67%（28／60），差异均有统计学意义（χ2值分别为7.509、8.013，均P＜0.05）。 Apaf-1和bax的表达和前列腺癌患者年龄及是否远处转移无关（P＞0.05），与病理分级及临床分期相关（P＜0.05），Apaf-1和bax在前列腺癌组织中的表达呈正相关性（r＝0.535， P＜0.001）。结论 Apaf-1和bax可能与前列腺癌的发生、发展密切相关。
关键词： 前列腺肿瘤 前列腺增生 凋亡蛋白酶活化因子1 Bax -
细胞凋亡途径及其机制
细胞凋亡存在于多细胞生物的整个生命过程当中，可及时清除机体内多余和受损伤的细胞，维持组织器官的稳定性。真核细胞主要通过死亡受体介导的外部凋亡途径、内部线粒体途径、B粒酶介导的细胞凋亡途径以及近几年开始关注的内质网应激途径介导细胞凋亡的发生。而参与这些细胞凋亡过程的主要有4类蛋白分子，即凋亡蛋白酶（caspases）、衔接蛋白（adapter proteins）、Bcl-2和凋亡抑制蛋白（IAPs）。细胞凋亡对卵巢储备及一些妇科疾病如子宫内膜异位症、卵巢癌等的发生发展产生影响。
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食管鳞状细胞癌中Apaf-1基因启动子区甲基化状态及其与EZH2蛋白表达的关系
目的 探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)启动子区的甲基化状态及其与EZH2蛋白表达之间的相关性.方法 应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测128例食管鳞癌患者癌灶组织及相应癌旁组织的Apaf-1基因甲基化情况,应用免疫组织化学方法检测Apaf-1和EZH2的蛋白表达情况.结果 Apaf-1基因在食管鳞癌组织中的甲基化率为52.3％,显著高于癌旁正常组织的4.7％(P＜0.01),不同肿瘤TNM分期患者的Apaf-1基因甲基化率差异有统计学意义(P＜0.01).食管鳞癌组织Apaf-1蛋白表达阳性率为41.4％,显著低于相应癌旁正常组织的94.5％(P＜ 0.01).食管鳞癌组织EZH2蛋白表达阳性率为72.7％,显著高于相应癌旁正常组织的12.5％(P＜ 0.01),不同肿瘤TNM分期和组织分化程度患者的Apaf-1和EZH2蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.01).食管鳞癌中Apaf-1基因甲基化与其蛋白阳性表达率呈负相关(r=-0.722),Apaf-1与EZH2的蛋白表达呈明显的负相关(r=-0.232).结论 Apaf-1和EZH2可能共同参与了食管鳞癌的发生发展,Apsf-1基因启动子区的异常高甲基化可能是食管鳞癌中此基因失活的重要原因之一.
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反复吸入七氟醚对老龄大鼠海马组织Apaf-1和Caspase-9 mRNA表达的影响
目的 探讨反复吸入七氟醚对老龄大鼠海马组织凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA表达的影响.方法 健康Wistar大鼠30只,月龄22月,体重380～770 g,雌雄各半,随机分为4组:对照组(n=8,Ⅰ组)、2%七氟醚组(n=8,Ⅱ组)、3%七氟醚组(n=8,Ⅲ组)及颈总动脉结扎+2%七氟醚组(n=6,IV组).Ⅰ组不吸入七氟醚,Ⅱ组及Ⅲ组分别吸入2%、3%七氟醚,100 min/d,连续5 d.Ⅳ组结扎左侧颈总动脉,1周后吸入2%七氟醚,100 min/d,连续5 d.停止吸入七氟醚后第1天开始采用Morris水迷宫实验测定大鼠认知功能,4次/d,连续测定5 d(T_(1～5)),记录潜伏期、平台象限活动时间与总游泳时间的百分比(Tp/T)及撤去平台后2 min内的游泳轨迹.水迷宫实验结束后采用RT-PCR法测定海马组织Apaf-1、Caspase-9 mRNA的表达水平.结果 与T_1时比较,Ⅰ组T_(3～5)、Ⅱ组及Ⅲ组T_(2～5)时、Ⅳ组T_(4,5)时潜伏期缩短(P<0.05或0.01);与Ⅰ组比较,Ⅲ组T_1时、Ⅳ组T_(1～5),时潜伏期延长,Ⅲ组及Ⅳ组Tp/T降低,Ⅳ组Caspase-9 mRNA表达上调(P<0.05或0.01).撤去平台后,Ⅱ组大鼠游泳轨迹明显集中在平台象限(Ⅳ象限),Ⅲ组和Ⅳ组大鼠游泳轨迹明显散乱.结论 反复吸入七氟醚可导致老龄大鼠认知功能障碍,其机制与海马组织Apaf-1及Caspase-9 mRNA的表达无关.
关键词： 麻醉药 吸入 认知障碍 凋亡蛋白酶活化因子1 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 老年人 -
基底细胞样乳腺癌组织中 Apaf-1、Caspase-9的表达变化及意义
目的：观察基底细胞样乳腺癌（BLBC）组织中凋亡蛋白酶活化因子1（Apaf-1）、细胞凋亡蛋白酶9（Caspase-9）的表达变化，并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测43例BLBC（A组）、57例non-BLBC（B组）和60例癌旁正常乳腺组织（ C组） Apaf-1、Caspase-9的表达，分析两指标间及与BLBC临床病理参数的关系。结果A、B、C组Apaf-1阳性率分别为23．3％（10/43）、49．1％（28/57）、75％（45/60），两两比较，P均＜0．01；Caspase-9阳性率分别为27．9％（12/43）、54．4％（31/57）、85％（51/60），两两比较，P均＜0．01。 Apaf-1表达与BLBC肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期有关（P均＜0．05），Caspase-9表达与BLBC淋巴结转移、临床分期有关（P均＜0．05）。BLBC组织Apaf-1与Caspase-9阳性表达呈正相关（r＝0．639，P＜0．01）。结论 BLBC组织Apaf-1、Caspase-9表达降低，两者异常表达可能与BLBC的发生、发展密切相关。
关键词： 乳腺肿瘤 基底细胞样乳腺癌 凋亡蛋白酶活化因子1 细胞凋亡蛋白酶9 -
口腔鳞状细胞癌中凋亡蛋白酶活化因子甲基化的研究
目的:探讨凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)基因的启动子区甲基化状态与口腔鳞状细胞癌(OSCC)的关系.方法:采用甲基特异性PCR的方法分别检测23例正常口腔黏膜组织和53例OSCC组织中APAF1基因的启动子区甲基化情况.结果:23例正常口腔黏膜组织中无1例检测到APAF1基因启动子区的甲基化,53例OSCC组织中有41例(77.36%)APAF1基因启动子区完全甲基化, 5例(9.43%)APAF1基因部分甲基化,总甲基化率为86.79%(46/53),与正常口腔黏膜组织甲基化率比较差异有显著性(P＜0.01).APAF1基因的甲基化与病理分级、年龄、性别无关.结论:APAF1基因启动子区的甲基化是该基因在OSCC组织中表达降低的机制之一,基因甲基化引起的基因功能静默可能与OSCC的发生有关.
关键词： 凋亡蛋白酶活化因子1 口腔鳞状细胞癌 基因甲基化 甲基特异性PCR -
Apaf-1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义
目的:探讨凋亡蛋白酶活化因子1(Apaf-1)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的mRNA与蛋白表达及其与细胞增殖的关系.方法:分别采用real-time PCR、Western blot及免疫组化法检测并比较甲状腺乳头状癌和癌旁组织中Apaf-1的mRNA及蛋白表达情况,并分析其表达水平与PTC临床病理学特征的关系;通过下调CGTHW-3细胞中Apaf-1表达量,验证Apaf-1对细胞增殖的影响.结果:在PTC组织中,Apaf-1的mRNA和蛋白表达量均显著低于癌旁组织(P<0.05);下调Apaf-1表达增强了CGTHW-3细胞的增殖活性(P<0.05).结论:Apaf-1在PTC中低表达,抑制其表达可增强CGTHW-3细胞的增殖能力.Apaf-1在甲状腺乳头状癌中可能发挥抑癌作用.
关键词： 凋亡蛋白酶活化因子1 甲状腺乳头状癌 细胞增殖 -
地西他滨对急性白血病患者甲基化凋亡蛋白酶活化因子1基因的去甲基化作用
目的 探讨地西他滨去甲基化作用治疗急性白血病患者的有效性.方法 通过甲基化特异性PCR选取10例凋亡蛋白酶活化因子1(Apaf-1)基因启动子发生甲基化的患者,经地西他滨治疗后,通过甲基化特异性PCR检测患者Apaf-1基因去甲基化状态.通过反转录PCR检测10例患者经地西他滨治疗前后骨髓单个核细胞Apaf-1基因mRNA表达情况.结果 甲基化特异性PCR检测示,10例患者经地西他滨治疗后,6例发生了去甲基化.治疗前10例患者因甲基化Apaf-1 mRNA均表达缺失,经地西他滨治疗后,4例重新表达,6例未表达.治疗后6例Apaf-1 mRNA表达缺失的患者中,4例Apaf-1基因未发生去甲基化,2例发生去甲基化,考虑可能与等位基因缺失或突变有关.结论 地西他滨通过使Apaf-1基因启动子去甲基化恢复抑癌基因的表达,发挥其凋亡中的关键因子作用.
关键词： 白血病 急性 凋亡蛋白酶活化因子1 去甲基化 地西他滨
