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Twist转录因子、E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白在乳腺癌中的表达及意义
目的 观察上皮间质转化因子Twist转录因子(简称Twist)和相关蛋白E-和N-钙黏蛋白(cadherin)在乳腺癌中的表达及其与患者临床病理指标的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测56例浸润性导管癌、38例浸润性小叶癌和41例导管内癌以及10例正常乳腺组织中Twist、E-和N-cadherin的表达.结果 (1)三种病理类型乳腺癌组织中,Twist阳性率分别为46.4%(26/56)、79.0%(30/38)和26.8%(11/41),其中浸润性小叶癌中Twist阳性率显著高于浸润性导管癌和导管内癌(分别P=0.002、0.000);E-cadherin阳性率分别为78.6%(44/56)、29.0%(11/38)和80.5%(33/41),其中浸润性导管癌和导管内癌中E-cadherin阳性率显著高于浸润性小叶癌(均P=0.000);N-cadherin阳性率分别为53.6%(30/56)、68.4%(30/56)和31.7%(13/41),其中在浸润性导管癌和浸润性小叶癌中的阳性表达显著高于导管内癌(分别P=0.033、0.001).(2)135例乳腺癌组织中Twist和E-cadherin表达呈显著负相关性(P=0.005,Spearman相关系数-0.239);Twist和N-cadherin 表达呈显著正相关性(P=0.000,Spearman相关系数0.319).(3)乳腺浸润性导管癌差分化组中N-cadherin阳性率显著高于中分化和高分化组(P=0.004).(4)乳腺浸润性小叶癌淋巴结转移组中Twist阳性率显著高于淋巴结未转移组(P=0.037).结论 三种蛋白在三种乳腺癌组织中的表达差异较大.Twist阳性表达与乳腺浸润性小叶癌淋巴结转移相关.N-cadherin阳性率与乳腺浸润性导管癌组织学分级相关.检测这三个指标可为研究乳腺癌的进展和转移机制及评判其生物学行为提供有价值的参考.
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Twist2在神经胶质瘤中的表达及其意义
目的 探讨Twist2在神经胶质瘤中的表达意义及其是否通过上皮间质转化参与胶质瘤的恶性转化.方法 采用免疫组织化学法检测60例脑胶质瘤(包括WHO Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级各20例)及20例非肿瘤脑组织中Twist2蛋白的表达水平;采用即时荧光定量PCR法和Western blot分别检测61例胶质瘤(WHO Ⅱ级16例、Ⅲ级21例、Ⅳ级24例)和12例瘤旁新鲜组织中Twist2 mRNA和蛋白的表达水平,同时应用Western blot分别检测各组新鲜组织标本中E-cadherin、N-cadherin、波形蛋白表达水平.结果 免疫组织化学法结果显示:Twist2在胶质瘤中的表达阳性率为90%(54/60),在非肿瘤脑组织中为30%(6/20),两者差异有统计学意义(P<0.01);在胶质瘤WHO Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级中的表达阳性率分别为75%(15/20)、95%(19/20)、100%(20/20).WHO Ⅳ级、Ⅲ级显著高于Ⅱ级(P<0.01),WHOⅣ级与Ⅲ级的表达,差异无统计学意义(P>0.05).即时荧光定量PCR法和Western blot结果显示:Twist2在胶质瘤中的表达水平明显高于瘤旁组织(P<0.01);且WHOⅣ级、Ⅲ级中的表达均明显高于Ⅱ级,差异有统计学意义(P<0.01);胶质瘤WHOⅣ级和Ⅲ级比较,差异无统计学意义(P>0.05);Western blot检测上皮间质转化中关键蛋白表达水平结果:新鲜胶质瘤组织中E-cadherin蛋白表达水平与Twist2呈负相关(r=-0.972,P<0.01);N-cadherin、波形蛋白表达水平与Twist2均呈正相关(r=0.971,P<0.01;r=0.968,P<0.01).结论 Twist2在人神经胶质细胞瘤中存在表达,且与胶质瘤恶性等级呈正相关,其可能通过上皮间质转化参与胶质瘤的恶性进程.
关键词： 神经胶质瘤 Twist转录因子 上皮细胞-间充质细胞转换 -
Twist 及 YB-1基因表达上调与子宫颈癌上皮间质转化的相关性
目的：探讨Twist及YB-1基因在子宫颈癌组织中表达的临床病理意义及其与上皮间质转化标志物上皮细胞钙黏蛋白（ E-cadherin ）表达的相关性。方法选取2008年1月至2013年12月202例子宫颈组织标本，包括正常子宫颈组织50例、子宫颈上皮内瘤变（CIN）100例及宫颈鳞状细胞癌（SCC）52例，采用MaxVision法检测Twist、YB-1蛋白和E-cadherin，并对各组病例的表达差异进行卡方检验、相关性分析及回归模型分析。结果 Twist蛋白胞核高表达、YB-1蛋白胞质高表达与子宫颈上皮恶性转化、子宫颈癌的组织级别进展及转移能力提高相关。 Twist、YB-1蛋白高表达与E-cadherin低表达相关。回归分析提示Twist 蛋白的胞核表达是子宫颈癌进展的独立预测因子。结论 Twist和YB-1基因在子宫颈癌中过表达与CIN癌变、子宫颈癌侵袭及转移明显相关，其机制可能是通过（YB-1）-Twist-（E-cadherin）调节关系轴来实现上皮间质转化。 Twist和YB-1蛋白过表达可以预测子宫颈癌的恶性转化和转移。
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转化生长因子β1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化过程对twist表达的影响
目的探讨转化生长因子（ transforming growth factor-β1，TGF-β1）诱导的肾小管上皮细胞间质转分化过程中twist表达的改变及意义。方法将人肾小管上皮细胞株（ human kidney tubular epithelial cell line，HKCs）细胞分为正常对照组、10 ng/ml TGF-β1组；48 h后观察细胞形态，逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR），免疫组织化学测定E-钙黏素（E-cadherin）的表达，免疫印迹测定twist的表达；同时选取不同浓度TGF-β1（0、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml）刺激HKCs细胞，48 h后测定twist的表达。结果正常体外培养的HKCs经TGF-β1培养48 h后twist蛋白表达明显增加（ P＜0.05），同时E-cadherin表达明显下降（ P＜0.05），同时TGF-β1对twist蛋白表达的影响呈浓度依赖性（ P＜0.05）。结论 TGF-β1诱导肾小管上皮细胞间质转分化过程中存在twist的激活。
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Twist-1表达促进胃癌细胞淋巴结转移的可能机制
目的 检测胃癌组织及转移淋巴结基因谱的表达变化,筛选表达差异基因,并探讨其在胃癌转移中的可能机制.方法 利用U133plus 2.0基因芯片技术检测胃癌组织和转移淋巴结组织上皮细胞的基因表达谱变化,筛选出差异基因Twist-1,Western blot法检测过表达与敲除Twist-1细胞上皮-间质转化相关蛋白( E-Cadherin、Vimentin)的表达变化.结果 与胃癌组织比较,Twist-1在淋巴转移组织中表达明显升高分别为(2.07±0.71比12.12±3.21).阴性对照、空载体对照和Twist-1表达细胞增殖吸光度分别为0.84±0.16、0.74±0.06和0.71±0.07,细胞凋亡率分别为(2.05±0.08)％、(4.31±0.07)％和(3.95±0.09)％,表达Twist-1与细胞增殖及凋亡无明显相关.但细胞迁移能力增高.结论 Twist-1基因的改变可能与胃癌转移相关,并可能通过皮-间质转化方式实现.
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转录因子Twist在胰腺癌中的表达及在上皮间质转化中的作用
目的 探讨Twist介导的上皮间质转化在胰腺癌进展中的作用.方法 采用免疫组织化学法检测42例胰腺癌组织中Twist、N-cadherin及Vimentin蛋白的表达,26例癌旁组织作为对照.结果 胰腺癌组织中Twist、N-cadherin及Vimentin蛋白的阳性表达率分别为76.2％、59.5％和57.1％.Twist、N-cadherin 及Vimentin在26例癌组织及配对癌旁组织中的阳性表达率比较,差异均有统计学意义(均P＜0.001);Twist、N-cadherin及Vimentin的表达均与肿瘤分化程度、TNM分期、神经浸润及淋巴结转移明显相关(P＜0.05).经Spearman等级相关性分析,Twist与N-cadherin及Vimentin在胰腺癌组织中的表达均呈正相关(r =0.506,P=0.001;r=0.417,P=0.006);N-cadherin及Vimentin在胰腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.462,P=0.002).结论 Twist可能通过诱导胰腺上皮细胞发生上皮间质转化促进胰腺癌侵袭转移.
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胃腺癌组织Twist蛋白的表达及其与上皮-间质转化的关系
目的 分析胃腺癌组织中Twist蛋白的表达与临床病理参数之间的相关性及其与上皮-间质转化(EMT)的关系,探讨Twist的表达在判断患者预后中的意义.方法 采用免疫组织化学SABC法检测120例胃腺癌标本及其对应癌旁组织中Twist及EMT相关蛋白上皮钙黏素(E-cad)、神经钙黏素(N-cad)的表达情况,统计分析Twist表达与患者临床病理参数的关系及其与E-cad及N-cad表达的相关性.结果 在胃腺癌组织中Twist、E-cad、N-cad阳性率分别为59.1％(71/120)、36.6％(44/120)、47.5％(57/120),癌旁组织中阳性率分别为17.5％(21/120)、93.3％(112/120)、11.6％(14/120),两种组织间各指标阳性率差异均有统计学意义(均P＜0.05).Twist的表达与肿瘤远处转移、淋巴结转移相关,且与浸润深度呈正相关(均P＜ 0.05).Twist的表达与N-cad和E-cad的表达存在相关性(P＜0.05).结论 胃腺癌组织中Twist、E-cad、N-cad的表达与癌旁组织明显不同,并且胃腺癌组织中Twist的表达与肿瘤的生物学特征密切相关;胃癌组织中Twist蛋白表达与EMT相关蛋白E-cad表达呈负相关,而与N-cad表达呈正相关.
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Twist基因高表达诱导Hep-2细胞上皮间质转化并促进其侵袭能力的实验
目的 探讨编码位于常染色体上的碱性螺旋环-螺旋转录因子(Twist),在Hep-2细胞中的高表达对上皮细胞标记物--上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、间充质细胞标记物--神经钙黏蛋白(N-cadherin)及Hep-2细胞的侵袭能力的影响.方法 以人喉癌细胞系Hep-2为实验材料,将构建好的pcDNA3.1-Twist质粒利用脂质体2000转染于Hep-2细胞,利用Western-blotting方法检测转染pcDNA3.1-Twist的细胞中Twist、E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达情况;采用倒置相差显微镜观察转染pcDNA3.1-Twist后细胞的形态学变化;利用细胞侵袭实验,检测Twist的高表达对Hep-2细胞侵袭能力的影响.结果 Western-blotting检测发现转染pcDNA3.1-Twist的实验组细胞中Twist和N-cadherin的表达均上升,E-cadherin的表达下降,与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);倒置相差显微镜发现细胞形态由转染前的多角型、椭圆型变为运动能力更强的细长、梭型;检测高表达TWIST的Hep-2细胞的侵袭能力,发现转染TWIST实验组的穿过膜的细胞数为85.33±6.66,明显高于pcDNA3.1组及对照组穿过膜的细胞数为29.33±10.70和32.00±3.61,差异具有统计学意义(F=52.32,P＜0.05).结论 Twist能诱导Hep-2细胞上皮间充质转化现象的产生,提高Hep-2细胞的侵袭能力,可能通过调控E-cadherin和N-cadherin发挥作用.
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microRNA-214在晚期下咽鳞状细胞癌中的表达及作用机制
目的 研究microRNA-214(miR-214)在晚期下咽鳞状细胞癌(鳞癌)组织中的表达情况,及其对下咽癌FaDu细胞系侵袭、迁移、克隆形成能力的影响,并分析其可能机制.方法 利用qRT-PCR技术检测30例晚期下咽鳞癌患者肿瘤组织及正常黏膜组织中miR-214的表达;通过转染过表达载体hsa-mir-214上调FaDu细胞中miR-214的表达;采用Transwell侵袭、迁移实验和平板克隆实验,分别检测miR-214表达上调后对FaDu细胞侵袭、迁移及克隆形成能力的影响;利用Western blot检测上调miR-214表达对Twist蛋白表达的影响.结果 miR-214在晚期下咽鳞癌组织中相对表达((x)±s)为(0.311±0.206)明显低于下咽正常黏膜组织中的相对表达为(1.620±1.394),差异有统计学意义(=5.09,P＜0.05).实验组FaDu细胞转染hsa-mir-214后,miR-214的表达较阴性对照组明显上调(t=6.347,P＜0.05).Transwell迁移和侵袭实验显示,实验组FaDu细胞迁移能力及侵袭能力均明显低于对照组(t=11.6,P＜0.01;t=6.499,P＜0.05).平板克隆实验显示,实验组与对照组相比,平均克隆形成数及克隆形成率差异均无统计学意义(t=0.592,P＞0.05),miR-214对FaDu细胞增殖能力无明显影响.Western blot结果显示,miR-214上调后的实验组细胞Twist蛋白的表达明显低于对照组细胞中的表达(t=6.545,P＜0.05).结论 miR-214在晚期下咽鳞癌组织中低表达,且可明显抑制FaDu细胞的侵袭、迁移能力,其作用机制可能与抑制Twist蛋白表达有关.miR-214对FaDu细胞增殖能力无明显影响.
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降低Twist1表达可以增加鼻咽癌细胞系HNE1对紫杉醇的敏感性
目的 研究降低Twist1表达可否改变鼻咽癌细胞系HNE1对紫杉醇的敏感性.方法 用包含Twist1小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列的表达质粒转染HNE1细胞,以新霉素(400 μg/ml)筛选阳性克隆,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法鉴定Twist1蛋白的低表达.通过Annexin V-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)双标法和观察DNA降解的方法分析si-Twist1 HNE1细胞对紫杉醇的敏感性,采用实时PCR技术分析凋亡相关基因的表达,流式细胞周期分析和叫甲基偶氮唑蓝(MTT)方法分析降低Twist1表达是否影响HNE1细胞增殖.结果 Annexin V-FITC-PI双标法检测结果显示,10 ng/ml紫杉醇处理后,si-Twist1 HNE1细胞的凋亡率为40.2%,显著高于对照siRNA组的24.3%,差异有统计学意义(t=56.999,P=0.000);恢复Twist1蛋白的表达,紫杉醇引起的凋亡率在低Twist蛋白表达组为44.80%±4.80%(x±s,下同),在高表达组为27.00%±2.91%,差异有统计学意义(t=4.374,P=0.049).实时PCR实验结果显示,紫杉醇处理的HNEI细胞中si-Twist组凋亡相关蛋白B淋巴细胞(bcl)-2的相对表达量为0.28±0.05,显著低于对照siRNA组的0.57±0.08,差异有统计学意义(t=6.710,P=0.021);而bax和bcl-XL基因的转录水平没有明显改变(t值分别为2.000和1.502,P值均>0.05).MTT实验和流式细胞术检测显示Twist表达降低没有影响HNE1细胞增殖(P值均>0.05).结论 降低Twist1表达可能是通过诱导凋亡提高了细胞对化疗药物敏感性,提示Twist蛋白可望成为一项新的鼻咽癌治疗靶标.
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TWIST在紫杉醇诱导喉癌Hep-2细胞系凋亡中的作用研究
blot分析10×10-9 mol/L紫杉醇作用24 h、48 h及72 h的细胞中TWIST,mRNA和蛋白的表达均呈降低趋势,TWISTmRNA分别降低了16.7%、46.8%、76.9%,TWIST蛋白分别降低了16.4%、33.6%、69.6%,差异有统计学意义(F值分别为10.407和18.013,P值均＜0.05).结论 TWIST在Hep-2细胞中的表达有可能参与了紫杉醇诱导的细胞凋亡.
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鼠视网膜新生血管发生过程中Twist基因的表达
目的 探讨视网膜新生血管发生过程中Twist基因的表达情况.方法 对照实验研究.将40只新生C57/BL小鼠分为两组:(1)对照组,正常空气环境中饲养;(2)高氧组,在高氧环境中制作小鼠缺氧性视网膜新生血管动物模型.将出生第7天的小鼠放人氧箱,在75%浓度的高氧环境中饲养5 d后,取出氧箱.待出氧箱第12天和第17天(视网膜新生血管发生高峰时间)分别处死小鼠,制作视网膜铺片和切片,观察小鼠视网膜新生血管发生情况.应用免疫组织化学染色检测小鼠视网膜血管内皮细胞(VE)-钙黏蛋白、波形蛋白及Twist基因表达变化情况;提取全视网膜RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测VE-钙黏蛋白、波形蛋白及Twist基因表达变化情况.应用SPSS 11.5统计学软件进行数据处理,对高氧组与对照组小鼠出生后不同时间的VE-钙黏蛋白、波形蛋白、Twist基因表达的灰度值比较,采用两因素析因设计的方差分析,以P<0.05作为差异有统计学意义.结果 免疫组织化学检测结果显示,出生后第17天的小鼠,高氧组VE-钙黏蛋白表达的灰度值(65.19±8.39)与对照组(75.36±7.04)相比明显减少(F=8.616,P=0.009),波形蛋白表达的灰度值(95.09±14.13)与对照组(82.14±6.32)相比明显升高(F=6.999,P=0.016),Twist基因表达的灰度值(119.48±7.90)与对照组(93.30±6.37)相比亦明显升高(F=66.557,P=0.000).RT-PCR检测结果显示,不同处理组间波形蛋白、Twist基因表达的灰度值与检查时间存在交互作用(F=5.508,P=0.032;F=17.760,P=0.001).结论 在小鼠视网膜新生血管形成过程中,细胞转型调控的Twist基因发挥着重要作用,其作用机制可能是通过下调血管内皮细胞间的紧密连接蛋白,促进内皮细胞转型实现.
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Twist过表达在人腹膜间皮细胞转分化中的作用
目的 探讨twist在人腹膜间皮细胞(HPMCs)转分化中的作用.方法 取HPMCs细胞,分别用50mmol/L右旋葡萄糖(高糖组)和5.6mmol/L右旋葡萄糖(对照组)刺激48h,采用Western blotting检测twist、E-钙黏素(E-cadherin)、成纤维细胞特异性蛋白1(Fspl)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况.另采用质粒pcDNA3.1-twist(pcDNA3.1-twist组)和空载体pcDNA3.1(空载体组)分别转染常规培养的HPMCs,使HPMCs过表达twist后,采用qRT-PCR、Western blotting方法检测twist、E-cadherin、Fspl和α-SMA mRNA及蛋白的表达情况.再采用质粒twist小干扰tLNA(阳性转染组)和空载体pcDNA3.1(空载体组)分别转染50mmol/LD-葡萄糖培养48h后的HPMCs细胞,另选择未转染质粒的细胞作为亲本细胞组,采用Western blotting检测twist下调后,E-cadherin、Fspl、α-SMA蛋白水平的表达情况.结果 与对照组相比,高糖组twist、Fspl和α-SMA蛋白表达明显增加,E-cadherin表达减弱(P＜0.05).与空载体组相比,HPMCs过表达twist后,pcDNA3.1-twist组E-cadherin mRNA及蛋白表达减弱,Fspl和α-SMA mRNA及蛋白表达增强(P＜0.05).用小干扰RNA使twist沉默后,与亲本细胞组及空载体相比,E-cadherin蛋白表达增加,Fspl和α-SMA蛋白表达减弱(P＜0.05).结论 TwiSt过表达促进了HPMCs的转分化.
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转录因子Twist促进腹膜透析患者腹膜纤维化的作用机制研究
目的 探讨转录因子Twist对腹膜透析患者腹透流出液人腹膜间皮细胞(HPMCs)的作用及相关机制.方法 将腹膜透析患者透出液离心后进行HPMCs培养,检测Twist、E-cadherin、α-SMA、Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达.分别采用上调质粒pcDNA3.1-Twist和空载体pcDNA3.1转染HPMCs,检测Twist、E-cadherin、α-SMA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达.分别采用Twist的siRNA质粒和空载体pSlience转染转分化的HPMCs,检测Twist、E-cadherin、α-S MA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达.采用Bmi-1的siRNA质粒转染转分化的HPMCs,检测E-cadherin、α-SMA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达.结果 免疫荧光及Western blotting检测结果显示,随着透龄增加,E-cadherin表达降低,Twist、α-SMA及Bmi-1表达增加(P＜0.05).与空载体组相比,HPMCs过表达Twist后,E-cadherin表达减弱,Twist、α-SMA及Bmi-1表达增加(p＜0.05).用小干扰RNA使Twist沉默后,E-cadherin表达增加,Twist、α-SMA及Bmi-1表达减弱(P＜0.05).用小干扰RNA使Bmi-1沉默后,E-cadherin表达增加,α-SMA、Bmi-1表达减弱(P＜0.05).结论 Twist参与了腹膜纤维化的发生发展过程,其作用部分是通过Bmi-1促进HPMCs的转分化实现的.
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Twist2和E-cadherin在宫颈鳞癌中的表达及意义
目的:研究Twist2与E-cadherin在宫颈上皮内瘤样变(CIN)及宫颈鳞状细胞癌中的表达情况,探讨其在宫颈癌变过程中的作用及意义.方法:应用蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学法检测Twist2、E-cadherin在正常宫颈组织(对照组)、CINⅠ组、CINⅡ～Ⅲ组、宫颈鳞癌组中的表达情况.结果:Twist2和E-cadherin在4组中阳性表达率比较差异有统计学意义(χ2=48.163,P=0.000;χ2=43.169,P=0.000).宫颈鳞癌Twist2、E-cadherin的阳性表达率在不同分化程度、临床分期、有无淋巴结转移组间差异有统计学意义(P＜0.05),在不同年龄间差异无统计学意义(P＞0.05).Twist2与E-cadherin在宫颈鳞癌组织中的表达呈负相关(r=-0.401,P=0.003).对照组、CIN组、宫颈鳞癌组间Twist2、E-cadherin的相对表达量差异有统计学意义(F=652.225,P=0.000;F=299.112,P=0.000).结论:Twist2、E-cadherin可能共同参与了宫颈鳞状细胞癌的恶性转化过程,联合检测Twist2与E-cadherin有助于判断宫颈癌的恶性程度及其预后.
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Caspase8和9在肿瘤局部微环境形成早期与调控蛋白Twist1的关联性
目的:研究Caspase 8、9在肿瘤局部微环境早期线形程序性坏死(LPPCN)及血管生成拟态(VM)形成中对上皮一间充质转变(EMT)调控蛋白Twist1表达的影响.方法:将96只C57BL小鼠随机分为Caspase 8抑制剂组、Cas-pase9抑制剂组、Caspase 8,9抑制剂联合用药组(联合组)和对照组,制备小鼠荷瘤模型.采用免疫组织化学法检测EMT调控蛋白Twist1在LPPCN和VM周围第1～4层肿瘤细胞的表达水平.结果:4组LPPCN周围第1～4层肿瘤细胞Twist1核阳性染色指数差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且呈递减趋势;对于同层肿瘤细胞,联合组和对照组的细胞核Twist1阳性染色指数比较差别有统计学意义(均P<0.01).LPPCN、VM周围第1～4层肿瘤细胞、同一层不同组的肿瘤细胞浆Twist1阳性染色指数差异均无统计学意义(均P>0.05);VM周围第1～4层肿瘤细胞、同一层不同组的肿瘤细胞核Twist1阳性染色指数差异均无统计学意义(均P>0.05).结论:Caspase 8、9介导的凋亡机制启动与EMT发生存在关联性.
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胆囊癌组织芯片Twist、E-cadherin和N-cadherin的表达及其临床意义
目的 探讨胆囊癌组织Twist、E-cadherin和N-cadherin的表达及其临床意义。方法 采用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测2000年至2008年间浙江省人民医院胆囊癌手术切除胆囊癌组织标本的存档蜡块79例和正常胆囊黏膜组织标本20例的Twist、E-cadherin、N-cadherin的表达情况。结果 与正常胆囊黏膜组织相比，胆囊癌组织表达Twist、N-cadherin上调，阳性率分别为68.3％和49.4％,而正常胆囊黏膜组织均为1/20。且胆囊癌组织中E-cadherin高表达者为27.8％,显著低于正常胆囊黏膜(20/20；X2＝29.31,P＜0.05)。Twist蛋白表达与胆囊癌T分类、淋巴结转移、远处脏器转移、肝十二指肠韧带侵犯、淋巴管浸润及国际抗癌联盟(U ICC)分期密切相关(P＜0.05)。E-cadherin蛋白表达与胆囊癌T分类、远处脏器转移、肝十二指肠韧带侵犯、肿瘤细胞分化程度及UICC分期密切相关(P＜0.05)。N-cadherin蛋白表达仅与胆囊癌淋巴管浸润密切相关(P＜0.05)。胆囊癌组织Twist与E-cadherin的蛋白表达呈显著负相关(P＜0.01)。79例胆囊癌患者术后均获随访，平均随访时间(30.6±14.3)个月，肿瘤组织Twist低表达和高表达患者的术后3年生存率分别为66％和7％,两组间差异有统计学意义(P＜0.01)；肿瘤组织E-cadherin低表达和高表达患者的术后3年生生率分别为25％和86％,两组间差异有统计学意义(P＜0.01)；肿瘤组织N-cadherin低表达和高表达患者的术后3年生存率分别为39％和41％,各组阳间差异无统计学意义(P＞0.05)。多因素分析结果显示,Twist表达是影响胆囊癌预后的独立指标之一。结论 Twist、E-cadherin的异常表达与胆囊癌发生发展密切相关,Twist表达是胆囊痛癌独立预后指标之一。
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Hedgehog信号通路调控Twist高表达乳腺肿瘤干细胞样细胞的富集及迁移
目的:探讨阻断Hedgehog信号通路对Twist高表达乳腺癌干细胞样细胞微球体富集及其迁移的影响.方法:分别采用蛋白质印迹法和微球体细胞形成实验检测正常乳腺上皮MCF-10A细胞、乳腺癌MCF-7和HS578T细胞中Twist蛋白的表达水平及微球体细胞形成能力.蛋白质印迹法检测MCF-10A、MCF-7和HS578T微球体细胞中Twist、GLI1家族锌指蛋白(GLI family zinc finger 1,GLI1)和音猬因子(Sonic Hedgehog,SHh)蛋白的表达情况.采用不同浓度的Hedgehog信号通路特异性抑制剂GDC-0449(10、20和30 μmol/L)处理Twist蛋白表达水平高的乳腺癌HS578T微球体细胞96 h,分别采用微球体细胞形成实验和Transwell小室法检测GDC-0449对HS578T微球体细胞再成球能力和迁移能力的影响,并进一步采用蛋白质印迹法检测HS578T微球体细胞中GLI1、性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)和八聚体绑定转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)蛋白的表达情况.结果:乳腺癌HS578T细胞中Twist蛋白的表达水平明显高于MCF-10A和MCF-7细胞(P值均＜0.05),且具有强的微球体形成能力(P值均＜0.05).HS578T微球体细胞中Twist、GLI1和SHh蛋白水平均明显高于MCF-10A和MCF-7微球体细胞(P值均＜0.05);经抑制剂GDC-0449处理后,乳腺癌HS578T微球体细胞的成球能力及迁移能力均明显降低(P值均＜0.05),GLI1、SOX2和OCT4蛋白的表达水平明显下调(P值均＜0.05).结论:阻断Hedgehog信号通路的活化可抑制Twist高表达乳腺癌细胞微球体的形成及迁移能力.
关键词： 乳腺肿瘤 肿瘤干细胞 Twist转录因子 Hedgehog信号通路 细胞运动 -
上皮-间质转化及其干性作用与肿瘤
上皮-间质转化(EMT)参与肿瘤转移过程,Twist作为关键调控因子在EMT中发挥重要作用,放疗、化疗和多种细胞因子均可诱导Twist介导的EMT.研究表明,肿瘤细胞可能通过EMT转变为肿瘤干细胞样细胞,并进一步导致放化疗抵抗、肿瘤血管形成及远处转移,对肿瘤的预后产生巨大影响,EMT有望成为肿瘤治疗的重要靶点.
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Twist基因在结肠癌Lovo细胞奥沙利铂、氟尿嘧啶耐药中的作用
目的 探讨Twist基因在结肠癌Lovo细胞奥沙利铂、氟尿嘧啶耐药中的作用.方法 体外将siRNA-Twist、pcDNA-Twist分别转染结肠癌Lovo细胞,通过Western blot和RT-PCR方法检测细胞Twist的表达.不同浓度奥沙利铂和氟尿嘧啶、不同作用时间作用于Lovo细胞,MTT法检测细胞增殖及半数抑制浓度(IC50).流式细胞术检测Lovo细胞凋亡情况.结果 siRNA-Twist转染Lovo细胞48 h后,细胞的Twist基因表达明显降低,而pcD-NA-Twist转染后,细胞的Twist基因表达明显升高.奥沙利铂、氟尿嘧啶均呈时间、剂量依赖性抑制Lovo细胞增殖.在IC50浓度奥沙利铂和IC50浓度氟尿嘧啶作用各组Lovo细胞48 h后,siRNA-Twist组细胞生长抑制率、凋亡率明显高于空白对照组及siRNA-Control组(P＜0.05),细胞对药物耐药性降低;而pcDNA-Trwist组细胞生长抑制率、凋亡率明显低于空白对照组及pcDNA-Control组(P＜0.05),细胞对药物耐药性升高.结论 Twist基因在结肠癌Lovo细胞奥沙利铂、氟尿嘧啶耐药中发挥正向作用.
