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Shh、Ptch1、Smo、Gli1在机械损伤大鼠子宫内膜的表达及意义
目的:研究Sonic Hedgehog(Hh)信号通路关键蛋白Shh、Ptch1、Smo、Gli1在机械损伤后大鼠子宫内膜的表达及意义.方法:将24只8周龄wistar大鼠随机分为正常组(6只)及实验组(18只).实验组大鼠采用机械刮宫法建立大鼠子宫内膜损伤模型,分别于子宫机械损伤后24h、72h和7d各取6只大鼠子宫行苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组织化学染色和实时定量多聚核苷酸链式反应(PCR)检测.结果:子宫内膜机械损伤后24h时大鼠子宫内膜结构破坏,子宫内膜上皮缺失,腺体减少;损伤后72h时大鼠子宫腔被薄层内膜上皮覆盖;损伤后7d子宫内膜较正常内膜薄,腺体明显减少,子宫腔形态差.Masson染色结果显示大鼠子宫内膜机械损伤后7d胶原纤维较正常大鼠子宫内膜明显增加.免疫组化结果显示Shh、Smo、Ptch1及Gli1染色主要位于子宫腺体及内膜周围.Shh在各组大鼠均无表达.Smo在刮宫后24h表达很弱,72h后表达逐渐增强.Ptch1在刮宫后24h为弱表达,72h后表达量明显上升.Gli1在刮宫后72h及7d表达量明显增加.实时定量PCR结果显示Shh mRNA在各组各时间点大鼠子宫均无表达.与正常组子宫内膜相比刮宫后24h Smo mRNA表达量为,0.7倍,Ptch1 mRNA的表达量为1.2倍,Gli1 mRNA表达量为1.6倍(P＜0.05).刮宫后72h,Smo mRNA表达量为1.4倍(P＜0.05),Ptch1 mRNA的表达量为3.3倍(P＜0.01),Gli1 mRNA表达量为9.3倍(P＜0.01).刮宫后7d,Smo mRNA表达量为1.5倍(P＜0.05),Ptch1 mRNA的表达量为2.5倍(P＜0.05),Gli1 mRNA表达量为5.7倍(P＜0.01).大鼠子宫机械损伤后72h Ptch1和Gli1的mR-NA的表达量均高于24h的表达量,且72h Gli1的mRNA表达量显著高于7d的表达量(P＜0.01).结论:Ptch1、Smo、Gli1在机械损伤后大鼠子宫内膜均有表达,Ptch1 、Smo、Gli1的mRNA表达量的变化与大鼠子宫内膜损伤后纤维化修复相关.Hh信号通路可能参与子宫内膜损伤后纤维化修复.
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益气活血法对MNNG诱导萎缩性胃炎癌前病变大鼠hedgehog信号通路的调控作用
目的 探讨益气活血法对萎缩性胃炎癌前病变大鼠hedgehog信号通路的调控影响.方法 雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪组、三七组、黄芪三七组、Purmorphamine组、环巴明组及叶酸组,运用MNNG负荷多因素法制备萎缩性胃炎癌前病变模型.应用HE染色评价胃黏膜病理损伤,应用Western Blot、RT-PCR和量子点介导的免疫荧光化学法分别检测各组大鼠胃组织hedgehog信号通路的蛋白和基因表达水平.结果 与空白组相比,模型组大鼠血清PG Ⅰ/PGⅡ和GAS含量显著降低(P＜0.01),Shh、Ptch基因及蛋白含量均明显下调(P＜0.05,P＜0.01),Smo蛋白表达减弱(P＜0.01).与模型组相比,三七组、黄芪三七组及Purmorphamine组PG Ⅰ/PGⅡ明显升高(P＜0.01),黄芪组、三七组及黄芪三七组GAS含量显著升高(P＜0.05).三七组、黄芪三七组及叶酸组Shh蛋白表达明显升高(P＜0.05),三七组和Purmorphamine组Ptch蛋白表达增多(P＜0.05),黄芪组、三七组、黄芪三七组和Purmorphamine组Smo蛋白表达显著增强(P＜0.05,P＜0.01).结论 益气活血法可激活hedgehog信号通路,对萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜病变起到改善作用.
关键词： 萎缩性胃炎癌前病变 益气活血法 Hedgehog信号通路 黄芪 三七 -
黄芪甲苷、人参皂苷Rg1对慢性萎缩性胃炎大鼠Hedgehog信号通路的调控影响
目的 探讨黄芪甲苷、人参皂苷Rg1对慢性萎缩性胃炎大鼠Hedgehog信号通路的影响.方法 雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组、Purmorphamine组及叶酸组,运用幽门弹簧法制备萎缩性胃炎模型.应用HE染色评价胃黏膜病理损伤,应用Western Blot、RT-PCR和量子点介导的免疫荧光化学法分别检测各组大鼠胃组织Hedgehog信号通路的蛋白和基因表达水平.结果 与空白组相比,模型组大鼠Shh、Ptch、Gli-1基因及蛋白含量均显著降低(P<0.05),SUFU 蛋白表达明显升高(P<0.01),CyclinD1表达减弱(P<0.01).与模型组相比,人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组及叶酸组Shh蛋白表达明显升高(P<0.05),各给药组均能显著升高Ptch蛋白含量(P<0.05).人参皂苷Rg1高剂量组、Purmorphamine组Gli-1蛋白表达明显升高(P<0.05),黄芪甲苷高剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组和Purmorphamine组SUFU蛋白表达明显减弱(P<0.05).黄芪甲苷高剂量组和Purmorphamine组 CyclinD1蛋白表达增强(P<0. 05).结论 黄芪甲苷、人参皂苷 Rg1对Hedgehog信号通路关键因子有一定的激活作用,进而改善慢性萎缩性胃炎大鼠的胃黏膜病变.
关键词： 慢性萎缩性胃炎 黄芪甲苷 人参皂苷Rg1 Hedgehog信号通路 -
Hedgehog信号通路与骨质疏松症
Hedgehog信号通路是一条保守而重要的信号通路,涉及到多种细胞的增殖和分化活动.近年研究发现,Hedgehog信号通路可以通过上调Runx2和Osx等主要转录因子的表达促进间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向成骨细胞分化,并且抑制MSCs向脂肪细胞分化.Hedgehog信号通路还可以通过调节细胞周期蛋白促进成骨细胞增殖.本文综述总结了Hedgehog信号通路调节成骨细胞增殖分化的作用机制,认为Hedgehog信号通路通过促进成骨细胞增殖分化参与调节骨代谢,为骨质疏松症的治疗提供一种新思路.
关键词： Hedgehog信号通路 成骨分化 骨质疏松症 -
二氢丹参酮调控胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的作用和机制探讨
目的:观察二氢丹参酮(DHT)对胃癌细胞MGC803增殖、迁移和凋亡能力的影响,并探讨其作用的分子机制.方法:利用不同浓度的DHT处理细胞后,MTT检测细胞增殖能力,细胞划痕实验观察细胞运动能力,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,定量PCR和Western blot检测胃癌凋亡和迁移相关基因的表达情况.结果:与空白对照组比较,DHT可显著抑制MGC803细胞的体外增殖能力,降低细胞的迁移能力,诱导MGC803细胞发生凋亡,且呈现剂量依赖性.定量PCR实验结果表明,DHT可显著抑制MGC803细胞中MMP2、MMP9 mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01),降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,显著提高促凋亡蛋白PUMA的水平(p＜0.01).DHT加入后可抑制STAT3的磷酸化水平,提高FoxO3信号通路的活性,增加抑癌基因p53的蛋白表达,降低Glil mRNA表达(P＜0.01),并提高HHIP mRNA表达水平(P＜0.01).结论:DHT能够抑制胃癌细胞MGC803的增殖和迁移能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与MMP2、MMP9蛋白的表达降低、Hedgehog通路活性抑制和凋亡调控基因PUMA、STAT3、FoxO3和p53的表达水平改变有关.
关键词： 胃癌 二氢丹参酮 细胞迁移 细胞凋亡 Hedgehog信号通路 -
黄芪、三七及其配伍对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织Hedgehog信号通路的调节作用
目的:探讨黄芪、三七及其配伍对慢性萎缩性胃炎大鼠Hedgehog(Hh)信号通路的影响.方法:雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪组、三七组、黄芪三七组及Purmorphamine组,运用幽门弹簧法制备慢性萎缩性胃炎模型.应用HE染色评价胃黏膜病理损伤,酶联免疫吸附法检测血清胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃蛋白酶元Ⅱ(PGⅡ)及胃泌素(GAS)水平,应用免疫组织化学法、Western bot和RT-PCR分别检测各组大鼠胃组织Hh信号通路的蛋白和基因表达水平.结果:与空白组比较,模型组大鼠血清PG Ⅰ/PGⅡ和GAS含量,Shh、Ptch、Gli-1基因及蛋白含量,Smo蛋白表达均显著降低(P＜0.01,P＜0.05);与模型组比较,黄芪三七组PG Ⅰ/PGⅡ明显升高(P＜0.01),黄芪组及Purmorphamine组GAS含量明显升高(P＜0.01,P＜0.05);黄芪组、三七组、黄芪三七组及Purmorphamine组Shh、Ptch、Gli-1蛋白及基因含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05),黄芪三七组及Purmorphamine组Smo蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:黄芪、三七及其配伍能明显改善慢性萎缩性胃炎大鼠的胃黏膜病变,其治疗机制可能与激活Hh信号通路有关.
关键词： 慢性萎缩性胃炎 黄芪 三七 Hedgehog信号通路 -
地五养肝胶囊对肝纤维化大鼠肝脏Hedgehog通路的调节作用
目的:探讨地五养肝胶囊(DWYG)对肝纤维化大鼠肝脏Hedgehog(Hh)信号通路的影响.方法:Wistar大鼠随机分为空白对照组、肝纤维化模型组和DWYG干预组,四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化模型.应用HE和Masson染色检测不同处理组大鼠肝组织损伤和纤维化程度;应用Western Blot和Real-time qRT-PCR分别检测不同处理组大鼠肝组织Hh信号通路的蛋白和基因表达水平.结果:与空白对照组相比,肝纤维化模型组大鼠出现明显肝组织损伤和纤维化改变,且纤维化肝组织中Shh、Gli1、Smo和Ptc的蛋白和基因表达水平显著上调(P＜0.05);而与肝纤维化模型组相比,DWYG干预可显著减轻肝组织损伤和纤维化程度,同时显著下调纤维化肝组织中Shh、Gli1、Smo和Ptc的蛋白和基因表达水平(P＜0.05).结论:DWYG抗纤维化效应与其抑制纤维化大鼠肝组织中过度活化的Hh信号通路相关.
关键词： 地五养肝胶囊 Hedgehog信号通路 肝纤维化 补肾生髓成肝 -
基于蛋白质相互作用网络探讨化痰散结方对三阴性乳腺癌Hedgehog信号通路相关蛋白Gli1的影响
目的:在构建三阴性乳腺癌(TNBC)的蛋白质相互作用网络基础上,探讨化痰散结方对TNBC MDA-MB-231细胞增殖抑制作用以及对Hedgehog(Hh)通路转录因子Gli1表达的影响.方法:筛选在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)获得TNBC相关基因;使用STRING进行文本挖掘并构建TNBC蛋白质相互作用网络;将互作数据读入C ytoscape3.4.0,分别应用插件JEPETTO 1.3.1和MCODE1.4.2实现拓扑分析和聚类分析;基于DAVID数据库富集关键通路用于表征簇的生物学重要性.针对关键通路Hh及其转录因子Gli1,采用MTT法检测化痰散结方对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率,Western blot法检测Gli1蛋白的表达情况.结果:构建了由1 537个节点(蛋白质)和23 681个边(相互作用)组成的蛋白质相互作用网络,分析得出关键通路Hh信号传导通路和基因Gli1.实验结果表明化痰散结方能抑制MDA-MB-231细胞的增殖并能降低Gli1蛋白的表达.结论:TNBC蛋白质相互作用网络是一个受多信号通路传导、多基因调控的复杂过程,其中Hh通路及其下游转录基因Gli1很可能是关键节点,而化痰散结方对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用机制之一是降低Hh通路中Gli1的表达.
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多模式肝损伤后Hedgehog信号通路的表达分析
目的初步探讨多种模式肝损伤后Hedgehog信号通路的表达及其变化，为其天然植物阻断剂和中药新药开发及中药治疗肝病提供依据。方法雄性Fisher344大鼠140只适应性喂养1周后，随机分为药物组、手术组、干细胞增生组与正常对照组。按 Gordon’s 方案分次腹腔注射倒千里光碱或对照剂，手术组和干细胞增生组择期行部分肝切除术诱导急性肝损伤与干细胞增殖，药物组、正常对照组予假手术。实时荧光定量PCR、real-time PCR及免疫组化等方法检测原代肝细胞及组织切片中Hedgehog信号通路相关成分在不同时间点的表达。结果多种因素所致肝损伤都可引起Hedgehog信号通路的异常激活，相关成分IHH、PTCH、Smo、Gli1、Gli2、Gli3 mRNA动态表达(SHH阴性)，信号分子IHH及通路激活标志(PTCH、Gli1)3个指标在时间与处理组之间存在交互效应(均P＜0.001)。免疫组化证实PTCH在蛋白水平表达，且不同损伤模式下表达持续的时间不同。结论 Hedgehog信号通路在各种肝损伤后异常激活，可能是参与调控肝损伤后反应的重要的信号通路之一。
关键词： Hedgehog信号通路 肝损伤 肝再生 大鼠 -
肝癌组织中Sufu、Hip 及Cyclin D1的表达及意义
目的 研究Sufu、Hip、Cyclin D1 在肝细胞肝癌及癌旁组织的表达情况,以及它们与肝癌临床病理特征之间的关系,探讨它们之间的相关性.方法 采用免疫组化S-P 法检测35 例肝癌及癌旁病理组织芯片中Sufu,Hip 及Cyclin D1 蛋白的表达水平.结果 35 例肝癌组织中Sufu 及Hip 蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织(P<0.05),而Cyclin D1 在肝癌组织中阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05); Sufu 蛋白在肝癌未合并肝硬化患者中表达率高(5/7,71.43%,P=0.0207),除此之外,Sufu、Hip 及CyclinD1 蛋白在肝癌中表达与肿瘤大小、AFP 含量、是否合并肝硬化、有无转移及患者年龄等资料无统计学意义( P>0.05).结论 Sufu及Hip 为Hedgehog 信号通路的两个负性调节基因,参与肝癌的发生和发展;Cyclin D1 在肝癌组织中表达增强,反应肝癌细胞增殖,但与Sufu 及Hip 表达不相关.
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莪术含药血清抑制HSCs中Shh和Gli1表达的机制研究
研究莪术含药血清抑制活化的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中Hedgehog(Hh)信号通路关键因子Shh(sonic hedgehog),Gli1(glioma-associated oncogene homolog-1)表达的机制.清洁级SD大鼠均分2组,分别给予莪术水煎剂、生理盐水灌胃取血制备含药血清.体外培养大鼠HSCs,分为7组:空白组、模型组、Hh通路抑制剂组、莪术组、Hh通路抑制剂+莪术组、Hh通路激动剂组、Hh通路激动剂+莪术组.除空白组外,其余各组均给予100μg·L-1瘦素诱导后,各组再予以相应药物干预24h,经MTT法检测HSCs增殖情况,RT-PCR法检测Shh,Gli1的mRNA表达,Western blot法检测Shh,Gli1蛋白表达及免疫荧光法检测Gli1蛋白表达.经瘦素活化的大鼠HSCs中Shh,Gli1的mRNA和蛋白表达均显著上调(与空白组比较P<0.01).Hh通路抑制剂、莪术含药血清分别干预后,Shh,Gli1的mRNA和蛋白表达显著下调(与模型组比较P<0.01);莪术含药血清与Hh通路抑制剂协同干预后,Shh,Gli1mRNA和蛋白表达显著下调(与模型组比较P<0.01);Hh通路激动剂干预后,Shh,Gli1mRNA和蛋白表达显著上调(与模型组比较P<0.01).用莪术含药血清干预Hh通路激动剂组后,Shh,Gli1mRNA和蛋白表达显著下调(与Hh通路激动剂组比较P<0.01).莪术含药血清可通过抑制瘦素诱导活化的HSCs中Shh,Gli1的表达,参与Hh信号通路抑制HSCs的活化,发挥抗肝纤维化的作用.
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在乳腺癌干细胞中Hedgehog信号通路相关基因表达增强
目的 了解Hedgehog信号通路在乳腺癌发生发展中的作用.方法 用免疫磁珠法从无血清培养的乳腺癌悬浮细胞中分选CD44+CD24-细胞和非CD44+CD24-细胞,用real-time RT-PCR法检测Hedgehog信号通路主要分子$HH、PTCH1、SMO和GLI1 mRNA在细胞中的表达,用免疫组织化学法检测上述因子在乳腺癌组织中的表达.结果 分选出的CD44+CIDA-细胞约占乳腺癌悬浮细胞总数的8.25%,分选出的CD44+CD24-细胞表达干细胞标志蛋白ALDHA1和Oct-4;SHH、PTCH1、SMO和GLI1 mRNA在CD44+CD24-细胞中的表达均高于其在非CD44+CD24-细胞中的表达(P＜0.05);SMO和GLI1蛋白在三阴性乳腺癌的表达均高于非三阴性乳腺癌组织(P＜0.05).结论 在乳腺癌干细胞CD44+CD24-细胞中Hedgehog信号通路被激活,抑制癌症干细胞中Hedgehog通路的活化可能会降低或阻止乳腺癌的复发及化疗耐受.
关键词： Hedgehog信号通路 乳腺癌 CD44+CD24-细胞 -
Hedgehog信号通路阻断剂环巴胺体外对佐剂性关节炎大鼠的关节软骨细胞增殖的影响
目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路抑制剂环巴胺体外对佐剂性关节炎大鼠(AA)模型的关节软骨细胞增殖的影响和部分机制.方法 弗氏完全佐剂诱导AA大鼠,测量关节炎指数和继发性足肿胀度,HE染色观察两组软骨组织生长情况;取AA大鼠踝关节软骨组织,采用胰蛋白酶一胶原酶法分离、培养、鉴定,环巴胺(0、0.05、0.5、5、20μmol/L)体外给药,MTT法检测AA大鼠踝关节软骨细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染检测AA大鼠踝关节软骨细胞凋亡,Western blotting检测AA大鼠踝关节软骨细胞Shh、Ptch1、Gli1的蛋白表达.结果 弗氏完全佐剂诱导后,与正常大鼠相比,AA大鼠关节炎指数和继发性足肿胀度明显升高,HE染色显示,AA大鼠踝关节软骨组织有破坏;甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原鉴定体外成功培养AA大鼠踝关节软骨细胞;体外给药环巴胺(0.05、0.5、5、20μmol/L)可升高AA模型关节软骨细胞增殖,流式细胞检测结果显示,环巴胺能降低AA模型软骨细胞凋亡率;与未用环巴胺组相比,环巴胺(0.5、5、20μmol/L)给药对AA软骨细胞中Hh信号通路相关蛋白(Shh、Ptch1、Gli1)表达显著下降.结论 弗氏完全佐剂诱导建立AA大鼠模型成立,体外给药环巴胺可抑制AA大鼠软骨细胞的增殖,抑制软骨细胞的凋亡,该作用与抑制AA大鼠软骨细胞Hh信号有关.
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Hedgehog信号通路促进血吸虫病肝纤维化的新机制及其药物治疗
慢性血吸虫病对机体造成的病理损害以血吸虫病肝纤维化为突出,然而目前对血吸虫病造成肝纤维化的发病机制仍缺乏足够的认识,也缺乏有效的抗肝纤维化药物.本文主要阐述了Hedgehog信号通路参与血吸虫病肝纤维化发病机制的新研究进展,并探讨了相应的药物干预手段.Hedgehog信号通路抑制剂可能会是血吸虫病肝纤维化患者的福音.
关键词： Hedgehog信号通路 血吸虫病 肝纤维化 综述 -
Hedgehog信号通路介导白血病干细胞耐药
耐药与复发是当前急性白血病治疗的瓶颈,逆转白血病干细胞(LSC)耐药,清除体内残留LSC是治愈白血病的关键.近来研究发现,异常激活的Hedgehog(HH)信号通路在多种肿瘤发生发展中发挥重要作用,同时也是LSC产生多重耐药的关键机制之一.本文简要叙述HH信号通路介导LSC耐药的机制,为清除体内残留LSC提供新思路.
关键词： 白血病干细胞 耐药 Hedgehog信号通路 -
三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞Hedgehog通路的影响
目的:探讨三氧化二砷对慢性髓系白血病(CML)细胞Hedgehog信号通路的影响.方法:采用MTT法及流式细胞术测定细胞的凋亡,Western blot检测Hedgehog通路中PTCH及SMO蛋白表达,real-time PCR检测PTCH及SMO基因mRNA的表达.结果:三氧化二砷可诱导K562细胞凋亡,佳浓度为2μmol/L,佳作用时间为24h.在该浓度及时间点作用下Hedgehog通路中PTCH及SMO蛋白和mRNA表达下调.结论:三氧化二砷可降低Hedgehog通路中PTCH及SMO基因表达.
关键词： 慢性粒细胞白血病 三氧化二砷 Hedgehog信号通路 -
Gli1在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及意义
目的:探讨Hedgehog信号通路转录因子Gli1在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者白血病细胞中的表达及其临床意义.方法:选取确诊的初治ALL 32例,复发ALL 6例,同时选取健康体检者15例作为正常对照.采用实时荧光定量PCR及Western blot方法检测ALL患者及正常对照者骨髓单个核细胞Gli1 mRNA的表达水平,比较Gli1 mRNA与ALL患者临床参数的关系.结果:Gli1 mRNA在初治及复发ALL患者组中的表达较正常对照组明显升高(P＜0.05).24例初治ALL诱导化疗后获得完全缓解患者Gli1 mRNA表达水平显著低于化疗前(P＜0.05),而4例未缓解者的Gli1 mRNA水平较治疗前无明显差异(P＞0.05).相关性分析显示,Gli1 mRNA水平与ALL患者外周血白细胞数呈正相关(R=0.725,P＜0.05).Western blot检测也发现,初治及复发ALl患者中Gli1蛋白表达较正常对照者显著升高,治疗缓解后Gli1蛋白相对表达量降低(P＜0.05).结论:Gli1 mRNA及蛋白在初治和复发ALL患者中高表达,其表达水平变化可能与ALL的疗效及预后有关.
关键词： 急性淋巴细胞白血病 Hedgehog信号通路 Gil1 -
Hedgehog信号通路异常对多发性骨髓瘤化疗耐药的影响
目的:探讨Hedgehog信号过度活化与多发性骨髓瘤耐药的关系.方法:以浓度梯度递增法建立骨髓瘤耐药细胞株RPMI8226/R,实验分为RPMI8226/R,RPMI8226/S,GANT61+ RPMI8226/R和GANT61+ RPMI8226/S4组,用CCK8法检测4组细胞的增殖抑制率;RT-PCR检测RPMI8226/S和RPMI8226/R耐药前后Gli1,Gli2,Shh,Ihh,Smo和Sufu mRNA表达的变化;Western blot法检测耐药蛋白Cyclin D1,P21和BCL-2及MDR相关信号通路蛋白p-Akt,p-MAPK和STAT3在耐药前后两组细胞的表达.加入不同浓度的GANT61后,Western blot法检测RPMI8226/R,RPMI8226/S组细胞Gli2的表达.结果:Shh、Ihh、Smo、Gli2在RPMI8226/R中表达明显升高,Sufu抑制子则相反,Hedgehog通路下游靶点相关蛋白在RPMI 8226/R中的表达显著高于RPMI8226/S,GANT61体外处理之后,骨髓瘤细胞中Gli2表达量显著减低,GANT61对Gli2表达的减低作用在RPMI8226/R细胞中较RPMI8226/S细胞更为显著,GANT61处理后RPMI8226/R细胞对DOX的敏感性(IC50)由7.11±0.061μmol/L升为0.99±0.053 μmol/L,相应的耐药指数从5.51降至1.69.结论:Hedgehog信号通路的活化与多发性骨髓瘤的耐药密切相关,GANT61能够阻断Hedgehog信号通路,因此后者可能成为临床克服MM的化疗耐药的一种新的治疗靶点.
关键词： Hedgehog信号通路 骨髓瘤 耐药 -
三氧化二砷联合伊曲康唑对多发性骨髓瘤细胞Hedgehog信号通路的影响及抗肿瘤活性实验研究
目的:探讨三氧化二砷(ATO)联合伊曲康唑(ITRA)协同抑制多发性骨髓瘤NCI-H929细胞HH信号通路的抗肿瘤作用.方法:应用MTT法检测两药联合对NCI-H929细胞增殖的抑制作用.用多发性骨髓瘤NCI-H929细胞株局部成瘤小鼠模型,观察给药后平均瘤重、瘤重抑制率、肿瘤体积的变化并分析荷瘤小鼠生存情况.ELISA法检测M蛋白,qPCR和Westem blot检测Hedgehog信号通路中Ptch、SMO和Gli表达,以及Gli下游靶标基因cy-clinD1和BCL-2表达水平变化.结果:ATO联合ITRA与单一给药相比能更显著地抑制NCI-H929细胞增殖.体内实验发现,两药联合应用可更显著地抑制肿瘤生长,降低肿瘤负荷,延迟荷瘤小鼠的生存期.两药联合可显著地下调Hedgehog信号通路下游的关键分子Gli1表达,继而可导致Gli1下游靶标基因cyclinD1和BCL-2等表达水平显著地降低.结论:ATO联合ITRA具有更强地抑制多发性骨髓瘤NCI-H929细胞生长作用.两药协同作用显著地下调Hedgehog信号通路下游的关键分子Glil表达,而抑制靶标基因的过表达可能是其作用机制之一.
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Hedgehog信号通路在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义
Hedgehog(Hh)信号通路在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要调控作用.本研究探讨Hh信号通路中Glil和Gli2在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)中的表达及意义.分别采用实时定量RT-PCR和免疫组织化学的方法分析检测18例NHL和10例淋巴结反应性增生组织中Glil、Gli2 mRNA和蛋白表达水平.结果表明,NHL组织中Glil和Gli2 mRNA中位表达水平经β-actin校正后分别为2.05和2.31,明显高于淋巴结反应性增生组织(分别为0.82和0.89),且Glil与Gli2 mRNA表达水平呈正相关(r=0.63,p＜0.01),Gli2 mRNA水平与NHL临床分期(p=0.03)具有相关性；Glil和Gli2蛋白在NHL中的阳性率分别为80％和68％,明显高于对照组,且Glil和Gli2蛋白表达呈正相关(r =0.62,p＜0.05)；Glil和Gli2蛋白表达均与NHL分期相关(p=0.05,p=O.0l),而Glil和Gli2基因及蛋白表达水平与NHL患者年龄比例、性别比例、B症状及分型方面无明显相关性(P＞0.05).结论:Hh信号通路中Glil和Gli2在NHL患者组织中高表达,并对NHL患者临床分期及预后具有指导意义.进一步时Hh信号通路在NHL中作用机制的深入探讨将有助于揭示NHL的发生、发展的机理,并有望成为NHL未来治疗的重要突破点.
关键词： 非霍奇金淋巴瘤 Hedgehog信号通路 Glil Gli2
