白细胞介素8基因多态性与河南省汉族人群胃癌关系的研究

全球约25％的癌症与慢性感染或炎症有关[1],后者也是导致胃癌发生的重要因素之一[2].在慢性炎症发展为胃癌的病变过程中,炎症细胞因子起到了很重要的作用[3].白细胞介素8(IL-8)主要由中性粒细胞产生,属于趋化因子超家族,是一种中性粒细胞趋化因子和活化因子[4],并具有促进有丝分裂、诱导新生血管形成以及促进细胞运动等重要生物活性,与肿瘤的发生、生长和肿瘤浸润及转移密切相关[5].编码IL-8的基因位于染色体4q13-q21,含有4个外显子、3个内含子和1个近侧启动区[6],其编码序列上存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,其中- 251 A/T( rs4073)位点和781C/T( rs2227306)位点与IL-8的转录水平有关[7-8].笔者采用1∶1配对病例-对照研究,探讨IL-8 -251A/T、781C/T位点多态性在河南省汉族人群胃癌发病中的作用,现将结果报道如下.

118 麻黄汤对高转移性骨肉瘤细胞运动的抑制作用

启膈方对人胃癌MGC细胞增殖、运动能力及分泌MMP-2、MMP-9酶活性的影响

目的 观察启膈方对人胃癌MGC细胞增殖能力、运动能力及分泌基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9活性的抑制作用.方法 体外培养人胃癌MGC细胞,随机分为启膈方小、中、大剂量组及5-氟尿嘧啶(5-FU)组、空白对照组,共5组.启膈方小、中、大剂量组加入不同浓度的中药,其终浓度为35、70、140 mg/mL;5-FU组加入5-FU使其终浓度为50 μg/mL,空白对照组加入PBS.分别用MTT法检测肿瘤细胞的增殖,琼脂滴法检测肿瘤细胞运动能力,明胶酶谱法检测肿瘤细胞分泌MMP-2、MMP-9的活性.结果 启膈方对MGC细胞体外增殖有明显的抑制作用,并随着药物浓度增加其抑制作用更加明显.启膈方各剂量组、5-Fu组运动能力较对照组明显弱,运动速度慢,差异有统计学意义(P＜0.05).启膈方各剂量组细胞分泌MMP-2、MMP-9活性明显较空白对照组减弱(P＜0.05),其中MMP-2活性减弱更明显(P＜0.01).结论 启膈方可通过抑制MGC肿瘤细胞的增殖、运动能力及MMP-2、MMP-9的活性来抑制转移.

用共聚集显微镜测量细胞内游离钙

钙离子是细胞内的第二信使， 在细胞的生命活动中起着重要作用， 它参与调节细胞功能， 如肌肉收缩、细胞运动、信息传递、物质代谢等。胞内钙离子大部分为结合钙， 主要贮存于肌浆网、内质网和线粒体等细胞器的钙库内。 胞浆内的游离钙作为第二信使，广泛参与、调节多种生理和病理过程，测定胞浆内游离钙在生理、病理和药理学上均具有重要意义。 用共聚焦显微镜可以对胞内游离钙进行定位、定量分析， 并能监测其动态变化。 本文主要介绍用共聚焦显微镜测量细胞内游离钙的原理、方法和意义。

透明质酸在巨噬细胞的分布以及对细胞黏附和迁移的影响

目的研究巨噬细胞的透明质酸(HA)分布以及HA对于巨噬细胞黏附和迁移,探讨HA的作用机制. 方法用聚集蛋白聚糖标记后,在光镜和共聚焦激光扫描显微镜下观察巨噬细胞内外的HA分布. 结果巨噬细胞产生HA.静止细胞的HA多位于细胞表面、细胞膜下和核周.游走细胞内的HA主要分布在伪足、尾部和核周,细胞外的HA主要分布于伪足和尾部周围.巨噬细胞表面HA和底物HA增加细胞黏附,促进细胞迁移,但游离HA降低细胞黏附. 结论 HA在巨噬细胞的分布有特征性.细胞自身产生的HA和底物HA促进巨噬细胞黏附和迁移,而游离HA降低巨噬细胞的黏附.

小RNA干扰Akt2对U87恶性胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨转染Akt2-siRNA表达载体阻断Akt2信号转导通路对U87恶性胶质瘤细胞运动、迁移和侵袭能力的影响. 方法 利用siRNA技术,稳定转染恶性胶质瘤细胞系U87;用RT-PCR和免疫印迹技术分别检测Akt2的mRNA和蛋白的表达;划痕实验和体外侵袭实验分别检测恶性胶质瘤细胞的运动和侵袭能力;用细胞黏附实验检测细胞的黏附能力,纤维型肌动蛋白(F-actin)聚合实验检测F-actin的聚合能力;免疫印迹技术检测LIMK的磷酸化,证明Akt2影响F-actin聚合的机制. 结果 稳定转染siAkt2载体后,Akt2的mRNA和蛋白水平均下降;细胞向划痕移动的速度比对照组慢(P<0.05);侵袭并穿透基质胶(Matrigel)的细胞数量比对照组少(P<0.01);细胞内F-actin聚合比对照组减少(P<0.05);黏附实验结果显示,黏附5min、15min后,低表达Akt2的细胞比对照组的黏附数量均减少(P<0.05). 结论 Akt2基因沉默可以通过降低F-actin聚合、降低黏附于细胞外基质的能力而降低恶性胶质瘤细胞的运动和侵袭能力.

膜联蛋白A7低表达对胃癌MGC-803细胞生物学特性的影响

目的 探讨膜联蛋白A7(ANXA7)低表达对人胃癌低分化细胞MGC-803的影响.方法 将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组.采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA以脂质体转染法分别转染胃癌细胞系MGC-803细胞,空白对照组不予任何处理.转染48h后,采用Western blotting和实时定量-PCR法进行抑制效果的鉴定.检测ANXA7低表达对MGC-803细胞黏附、伸展、剥脱和迁移等生物学行为的影响.结果 靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;ANXA7表达受抑后,细胞黏附、伸展和剥脱能力降低,与阴性对照组和空白对照组相比,差异显著(P＜0.05).细胞迁移变化不显著.结论 ANXA7表达降低后MGC-803细胞行为学发生明显改变.

血管扩张刺激磷蛋白在细胞骨架调节中的作用

细胞骨架动力学的调节在细胞粘附、细胞变形、细胞移动等生理过程中是必需的.血管扩张刺激磷蛋白(vasodilator-stimulated phosphoprotein,VASP)是一种肌动蛋白结合蛋白.该蛋白包含以下结构域:EVH1(Ena/VASP homolog 1)区、EVH2(Ena/VASP homolog 2)区及PRR(proline-rich regions)区.近年来,研究发现VASP在与细胞骨架调节有关的各种细胞行为中起着重要作用,如神经细胞轴索的延伸、T细胞的移动、成纤维细胞的迁移等.VASP的磷酸化受PKG(cGMP-dependent protein kinase) 和PKA(cAMP-dependent protein kinase)的调控.在粘附斑的形成与脱落过程中,该磷酸化起着一个"开关"的作用.本文将就近20年来VASP的研究成果,特别是近年来的进展情况做一综述.

间充质干细胞通过CCL5/CCR5信号途径促进骨肉瘤Saos-2细胞迁移和生长

目的 研究人间充质干细胞(hMSC)对骨肉瘤Saos-2 细胞迁移与增殖的影响及其机制.方法 取传代培养的hMSC 和Saos-2 细胞,分别制备hMSC 条件培养基(MSC-CM)和Saos-2 细胞条件培养基(Saos-2-CM).采用免疫荧光细胞化学方法 和双抗体夹心ELISA 方法 分别检测hMSC CCL5 趋化因子的表达及其表达水平,蛋白质免疫印迹方法 检测Saos-2 细胞CCR5 因子的表达.按条件培养基的不同将Saos-2 细胞分为4 组:含10% 胎牛血清的α-MEM 培养基(阴性对照)、Saos-2-CM(阳性对照)、MSC-CM、含24 ng/ml 兔抗人CCL5 抗体的MSC-CM(MSC-CM/anti-CCL5 Ab),应用Transwell实验和噻唑蓝(MTT)法分别检测hMSC 对Saos-2 细胞迁移与增殖能力的影响.实验均重复3 次.结果 免疫荧光细胞化学方法 和双抗体夹心ELISA 检测显示,hMSC CCL5 因子表达阳性且其表达水平为3.68 pg/ml.蛋白质免疫印迹检测显示,Saos-2 细胞CCR5因子表达阳性.Transwell 实验和MTT 检测结果 显示,MSC-CM 能明显促进Saos-2 细胞的迁移与增殖,而MSC-CM/anti- CCL5 Ab 组Saos-2 细胞的迁移与增殖能力均明显下降,2 组间差异均有统计学意义(分别为P < 0.01,P < 0.05).结论CCL5/CCR5 信号途径在hMSC 促进Saos-2 细胞迁移与增殖过程中发挥关键作用,抑制CCL5 趋化因子的表达可明显降低Saos-2 细胞的迁移与增殖能力.

细胞生长因子对正常氧和低氧条件下犬骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的观察比较正常氧和低氧环境下，不同细胞生长因子对犬骨髓间充质干细胞迁移的影响。
　　方法抽取犬骨髓，采用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞并进行培养。在倒置显微镜下观察细胞的形态变化；取第3代细胞利用流式细胞术检测其表型特征；加入碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子-1，在正常氧和低氧条件下行迁移和划痕实验来观察细胞趋化能力。
　　结果细胞迁移情况与氧环境及细胞生长因子的存在和种类均有关联。碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子-1均能促进骨髓间充质干细胞的迁移，碱性成纤维细胞生长因子较其他细胞生长因子显示出更强的促进迁移作用，这种作用在低氧环境下更为明显。
　　结论低氧环境下骨髓间充质干细胞的迁移能力较正常氧环境下更强，碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子-1的存在均有利于骨髓间充质干细胞的迁移。

趋化因子受体CXCR4在肾癌组织中的表达及其调控机制研究

目的：研究趋化因子受体 CXCR4在肾癌患者肿瘤组织中的表达水平，探讨 CXCR4表达调控的可能机制。方法收集肾癌患者（未接受放化疗）的肿瘤组织和癌旁组织，将组织研磨后提取 RNA，采用实时定量 RT-PCR检测肿瘤组织和癌旁组织中 CXCR4的表达水平；采用实时定量 RT-PCR检测肾小管细胞 HKC以及肾癌细胞系769P和786O中 TGF-β的表达水平。复制缺陷型腺病毒Ad(E1-).sT和对照病毒感染786O细胞后24 h，采用2 ng/ml的重组人 TGF-β刺激24 h，收集细胞，采用实时定量 RT-PCR检测目的基因 CXCR4的表达水平。同时，病毒感染后24 h，采用划痕法检测786O细胞的迁移能力。结果在肾癌患者中，肿瘤组织的 CXCR4表达显著高于癌旁组织：12例患者中，有8例表达上调。与正常肾小管细胞相比，肾癌细胞系769P和786O中，CXCR4的上游分子 TGF-β表达上调。在786O细胞中，TGF-β刺激可以显著提升 CXCR4的表达水平；而 Ad(E1-).sT可以在786O细胞中高效介导 sTGF-βRIIFc的高效表达，并抑制 CXCR4的表达和细胞的迁移能力。结论 CXCR4在肾癌组织中普遍表达上调，并受到 TGF-β的调控，有望成为肾癌治疗的重要靶标。

CXCR5/CLCL13在恶性肿瘤中的研究进展

趋化因子在细胞向炎症定向迁徙中发挥重要的作用,它的功能由相应受体介导,两者的相互作用控制各种免疫细胞在循环系统与组织器官之间的定向迁徙.新研究显示趋化因子及其受体与肿瘤的发生发展有关,趋化因子通过自分泌或旁分泌方式刺激肿瘤细胞增殖和控制肿瘤细胞运动,其中趋化因子受体 CXCR5与其配体 CXCL13在多种肿瘤中异常表达且与肿瘤进展密切相关.本文就趋化因子受体 CXCR5与其配体 CXCL13在恶性肿瘤中的新进展进行综述.

食管癌相关基因4在肝细胞肝癌中的表达和功能

目的了解人食管癌相关基因4（ ECRG4）在人肝细胞肝癌组织和肝癌细胞系中的表达情况，探讨ECRG4对肝癌细胞增殖、凋亡以及迁移能力的影响。方法提取24例配对肝细胞肝癌组织和癌旁肝组织的总RNA以及正常肝细胞系QSG7701和肝癌细胞系HepG2的总RNA和总蛋白，分别利用即时荧光定量PCR（ RT-qPCR）和Western blot法检测ECRG4的表达；构建ECRG4的真核表达质粒ECRG4-pcDNA3.1，转染肝癌细胞系HepG2，进行体外的细胞增殖、凋亡以及迁移实验。结果与癌旁肝组织相比，在肝细胞肝癌组织中ECRG4 mRNA表达下调或缺失（98.5％，23／24，P＜0.01）；和正常肝细胞系QSG7701相比，ECRG4 mRNA在肝癌细胞系HepG2中的表达明显下调（ P＜0.05）并且其蛋白表达水平也明显降低。转染ECRG4表达质粒后HepG2细胞的增殖和迁移能力明显低于对照组（P＜0.05），细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）。结论 ECRG4在肝细胞肝癌中表达下调，在体外肝癌细胞系中过表达ECRG4可抑制细胞的增殖和迁移，促进细胞凋亡，ECRG4可能是肝细胞肝癌潜在的抑癌基因，有望为肝细胞肝癌分子靶向治疗提供新策略。

吸引素

Mahogany一词首先被用作描写Agouti小鼠基因变异所引起的毛发颜色的改变现象[1].定位克隆Mahogany小鼠的变异基因,发现它们是一个由1428个氨基酸组成的富含胱氨酸的Ⅰ型跨膜蛋白[2,3],具有较大的细胞外微区、跨膜微区和较小的细胞内微区,小鼠、果蝇和蠕虫的吸引素结构非常相似(图1).细胞外微区具有轴突诱导和细胞黏附分子的特征;目前我们还不了解细胞内微区的具体功能.Duke-Cohan等[4]在人体血浆内发现和Mahogany细胞外微区相似的分泌性糖蛋白,在体外能"attract"激活的T淋巴细胞向单核细胞运动,因而称为吸引素(attractin,Atrn).

磷脂酶Cε1基因与肿瘤关系研究进展

磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon-1,PLCE1)是近年来发现的磷脂酶家族C的新成员,其分子结构和功能均较复杂,在细胞信号转导过程中可能起重要作用.PLCE1的激活可引起一系列的生化反应,如调节细胞生长、增殖、分化等.此外,小G蛋白的ras超家族和PLCE1之间存在相互作用,且小G蛋白家族成员绝大部分都是癌基因编码的蛋白,它们在细胞内过度表达或激活与肿瘤的发生发展关系密切,因此,PLCE1可能作为ras的直接下游效应因子影响细胞骨架改变、细胞运动、凋亡、肿瘤生成及发展等.研究表明,PLCE1基因与皮肤肿瘤、头颈部鳞癌、膀胱癌及部分消化道肿瘤的发生和发展密切相关.现对PLCE1基因及其在肿瘤中的发生机制进行综述.

上皮间质转化机制及其与肿瘤浸润转移关系的进展

上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)是指在胚胎发育过程中,上皮细胞通过一系列改变,转分化成间叶表型的细胞.有证据显示,EMT由宿主微环境诱导,经多条信号转导途径,受控于细胞内不同的转录因子,在多细胞生物体胚胎发育过程中促进细胞运动和新的组织类型生成,是一种进化上高度保守的重要机制;

胃癌中Her-2/neu过表达与基因扩增及其意义

Her-2/neu基因编码的相对分子质量185 000的蛋白质(P185)能加速细胞运动,促进癌细胞转移.已证实有Her-2/neu基因扩增的乳腺癌患者(约占乳腺癌患者25%)手术后易复发,生存期短并对常用的化疗药物如环磷酰胺、5-氟尿嘧啶等不敏感[1,2].本项研究的目的是通过双色荧光原位杂交(dual color fluorescence in situ hybridization,FISH)技术和免疫组织化学技术检测各类型胃癌细胞中Her-2/neu基因数量及蛋白表达并探讨其临床意义.

体外肿瘤细胞对血管内皮细胞影响的观察

目的观察肿瘤细胞与血管内皮细胞的关系及其在体外直接接触培养时内皮细胞的形态变化.方法免疫磁珠阳性选择法分离培养大鼠肺血管内皮细胞,生长至汇合状态时加入不同的肿瘤细胞(小鼠树突状细胞肉瘤细胞DCS、人胃癌细胞MGC-803、小鼠肺腺癌细胞LA795)共培养,光镜、扫描电镜、免疫组织化学、transwell 法及荧光分子传递等方法观察内皮细胞的形态、功能的变化.结果培养的内皮细胞部分呈卵石样,部分呈长梭形.长至汇合状态的内皮细胞再加入肿瘤细胞后,内皮细胞形态发生明显变化,汇合细胞中间出现许多圆形管腔样结构;肿瘤细胞往往分布在新形成的腔隙内;肿瘤细胞条件培养基可支持内皮细胞的生长,促进内皮细胞的运动;luciffer yellow 分子可直接从肿瘤细胞传递到内皮细胞.结论肿瘤细胞与内皮细胞可进行通讯,肿瘤细胞可直接引起内皮细胞结构和功能表型的改变.

不同转移潜能肿瘤细胞胸腺素β10表达水平及微丝结构的差异性研究

目的研究胸腺素β10(Thymosinβ10,Tβ10)表达水平与人类肿瘤转移潜能的相关性以及细胞内微丝骨架的变化差异.方法利用Northern-blot和细胞爬片免疫组织化学的方法检测4组9种具有不同转移潜能的人类肿瘤细胞系中Tβ10 mRNA和蛋白的表达水平;通过组织化学的方法显示细胞内微丝骨架的变化.结果 Tβ10的 mRNA和蛋白表达水平在高转移潜能的人类肺癌、黑色素瘤和乳腺癌细胞中高于相应的不/低转移肿瘤细胞;高转移性癌与不/低转移癌细胞比较,前者细胞内肌动蛋白多聚体减少,微丝骨架杂乱、模糊,而低转移癌系微丝骨架粗大、结构清晰、排列整齐.结论在所研究的人类肿瘤中,Tβ10 mRNA和蛋白表达水平与肿瘤的转移能力呈正相关性;肿瘤转移潜能的增高伴有肌动蛋白多聚体的丢失和微丝结构的解聚,微丝骨架的这种变化与Tβ10的表达增高具有相关性.

激活的固醇调节元件结合蛋白在内皮细胞移行中的作用

目的 探讨固醇调节元件结合蛋白(SREBP)在内皮细胞移行中的激活及其作用.方法 培养牛主动脉内皮细胞,应用Western blot分析、即时定量PCR、细胞移行测定、Cdc42活性测定等方法 ,研究了SREBP的激活在内皮细胞移行中的作用,以及这个过程中涉及SREBP的潜在的信号转达.结果 (1)内皮细胞移行组与非移行组相比,SREBP被显著激活(P<0.05);(2)内皮细胞移行组与非移行组相比,SREBP下游基因,低密度脂蛋白受体、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶及脂肪酸合成酶的mRNA的表达显著增加(P<0.05);(3)SREBP裂解激活蛋白RNAi和SREBP抑制剂(25-羟化胆固醇)能够明显抑制内皮细胞的移行;(4)在各种模型中SREBP的抑制导致内皮细胞移行的减少;(5)SREBP裂解激活蛋白缺陷型、S2P缺陷型及S1P缺陷型细胞株,表现为内皮细胞移行损伤;(6)抑制内皮细胞SREBP活性后,Rho、Cdc42活性也被抑制.结论 SREBP是内皮细胞移行中的关键调控分子,靶向干预SREBP将可能成为治疗异常内皮细胞移行相关疾病的一条新途径.