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新加良附方联合5-氟尿嘧啶对裸鼠胃癌移植瘤存活素、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响
目的：观察新加良附方联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）对人胃癌细胞（SGC-7901）裸鼠移植瘤生长抑制作用及其对肿瘤组织中存活素（Survivin）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白表达的影响。方法建立移植性人胃癌细胞（SGC-7901）裸鼠移植瘤模型，随机分为模型对照、5-Fu组及新加良附方高、中、低剂量组，联合给药组（新加良附中剂量＋5-Fu）6组。连续给药10 d，计算肿瘤抑制率，检测Survivin、Caspase-3蛋白表达。结果5-Fu组，新加良附方高、中、低剂量组和联合给药组抑瘤率分别为55.03%、56.38%、41.23%、23.09%、60.28%。与模型对照组、5-Fu组、新加良附方高剂量比较，联合用药组抑瘤率较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型对照组Caspase-3[（18464.71±7537.01）、Suvivin（63449.4±50498.8）]比较，联合给药组可上调肿瘤组织Caspase-3蛋白（77539.74±50912.5）表达、下调Suvivin 蛋白（35709.1±10404.4）（，P＜0.05或0.01）；与5-Fu组Caspase-3[（47198.89±10751.2）、Suvivin（37016.8±6024.4）]、新加良附高剂量组[Caspase-3（44213.57±7041.6）、Suvivin（38811.1±7313.0）]比较，联合给药组Caspase-3蛋白表达升高（P＜0.05）、Survivin蛋白表达下降（P＜0.05）。结论联合给药组抑瘤率、调节Caspase-3、Survivin表达均优于新加良附高剂量组、5-Fu组，两药协同更有优势。
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木香挥发油诱导人白血病细胞MV4-11凋亡及其作用机制的探讨
目的:以人急性髓性白血病MV4-11细胞为研究对象,探讨木香挥发油对MV4-11细胞增殖与凋亡抑制作用及其作用机制.方法:以质量浓度分别为3,6,12,25,50,100 mg·L-1的木香挥发油作用于人急性髓性白血病MV4-11细胞不同时间,另设空白组,采用噻唑蓝(MTT)法检测木香挥发油对其增殖抑制作用,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化,Annexin V-FITC,PI双染及PI单染法应用流式细胞术检测细胞凋亡和周期,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测蛋白激酶B(AKT),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)凋亡蛋白的表达.结果:木香挥发油对MV4-11细胞的半抑制浓度(IC50)为13.33 mg·L-1;木香挥发油作用于MV4-11细胞24h后可使细胞核皱缩,染色质凝聚,形成明显的凋亡小体;与空白组比较,木香挥发油G0/G1期和G2/M期细胞明显减少,S期细胞明显增多(P ＜0.05,P＜0.01);与空白组比较,12,25,50,100,150 mg·L-1木香挥发油能诱导MV4-11细胞凋亡(P＜0.05);与空白组比较,25,50,100,150 mg·L-1木香挥发油可抑制AKT的磷酸化,并促进Caspase-3蛋白的降解(P ＜0.05,P＜0.01).结论:木香挥发油能抑制人白血病细胞MV4-11细胞的增殖,其作用机制可能与抑制AKT活性进而诱导细胞凋亡效应有关.
关键词： 木香挥发油 凋亡 人白血病MV4-11细胞 增殖 蛋白激酶B 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
电针对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响
目的 观察电针对脑心综合征(cerebral-cardiac syndrome,CCS)大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响.方法 从70只健康SD大鼠中随机选择10只作为假手术组,其余60只用于CCS模型复制.选取造模成功的大鼠30只,分为模型组、电针组和电针非经非穴组,每组10只.采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核方法造模,假手术组向大鼠尾状核注入等量0.9％氯化钠注射液.于造模第1天开始电针,电针组选取水沟、风府、内关和心俞穴,电针非经非穴组选取臀部非经非穴点4处,每次20 min,每天1次,连续3天.假手术组和模型组仅每天抓空1次.分别采用TUNEL法和免疫组化法检测血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase -3表达.结果 假手术组偶可见TUNEL细胞,Caspase -3少量表达；模型组血肿周围组织出现较多的TUNEL阳性细胞,Caspase-3大量表达；电针组TUNEL阳性细胞和Caspase-3表达均较模型组和电针非经非穴组明显减少(P＜0.01).结论 电针可以抑制CCS大鼠脑组织细胞凋亡,其机制可能与下调血肿周围脑组织Caspase-3表达有关.
关键词： 电针 脑心综合征 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡及相关调控蛋白Caspase-3表达的时空分布
目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后神经元细胞凋亡和相关调控蛋白Caspase-3表达的时间、空间分布规律.方法 SD大鼠50只,分为假手术组和SCI组,钳夹法建立SCI模型,用结晶紫(CV)染色法、TUNEL法和免疫组织化学方法观察SCI后6h、12h、24h、3d和7d损伤中心到头端0～5.00mm空间范围内脊髓神经细胞存活、凋亡以及相关调控蛋白Caspase-3的表达状况.结果 CV染色发现,SCI后6h ～7d在0～0.50mm空间范围内均未发现存活的神经细胞,在1.00～3.50ram距离内,存活的神经细胞数逐渐增加,4.00mm处达峰值;TUNEL结果发现,SCI后6h ～7d在1.05 ～4.55mm范围内,神经细胞出现凋亡,3d时在2.55mm处,细胞凋亡达高峰,7d时显著减少;免疫组织化学结果发现,SCI后6h ～ 7d在1.10～4.60mm范围内,神经元细胞出现Caspase-3阳性表达,3d在3.10mm处Caspase-3表达达到高峰,7d显著减少.结论 SCI后,凋亡的神经细胞及其相关调控蛋白Caspase-3的表达有一定的时空分布规律.
关键词： 脊髓损伤 凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 原位缺口末端标记 大鼠 -
细胞因子信号传送阻抑物-3和caspase-3在子宫内膜异位症中的表达及其相关性
目的 探讨细胞因子信号传送阻抑物(SOCS)-3和caspase-3在子宫内膜异位症中的表达及其相关性,进而了解子宫内膜异位症的发病机制.方法 采用免疫组织化学EnVision法检测32例子宫内膜异位症患者的异位内膜和在位内膜,以及30例对照组正常子宫内膜中SOCS-3和caspase-3蛋白的表达.结果 SOCS-3和caspase-3在三组子宫内膜中均有表达,且不受月经周期影响.SOCS-3在异位内膜中的评分(5.54±2.12)明显低于在位内膜(7.39±1.09,P =0.001)和对照组(7.48±1.26,P＜0.01),而在位内膜和对照组之间差异无统计学意义(p=0.756)；处于Ⅲ/Ⅳ期患者的异位内膜和在位内膜中SOCS-3表达明显低于Ⅰ/Ⅱ期(P＜0.05).caspase-3蛋白在异位内膜(3.20±1.24)和在位内膜(3.88±1.93)中的评分明显低于对照组(6.49±1.85,P＜0.01),而在位内膜和异位内膜两组之间差异无统计学意义(t=1.66,P=0.10)；不同疾病分期的caspase-3表达差异无统计学意义(P＞0.05).异位内膜中SOCS-3与caspase-3蛋白表达呈正相关(r=0.655,P＜0.01).结论 SOCS-3可能通过抑制异位子宫内膜细胞的凋亡促进子宫内膜异位症的发生发展.
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Ezh2、Runx3和caspase-3在子宫内膜样腺癌中的表达及相关性
目的 探讨Ezh2、Runx3和caspase-3在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜样腺癌组织中的表达及相关性.方法 采用组织芯片技术和免疫组织化学SP法检测30例正常子宫内膜组织、30例单纯性增生内膜、30例复杂伴不典型增生内膜、72例子宫内膜样腺癌组织中Ezh2、Runx3和caspase-3蛋白的表达.结果 Ezh2、Runx3和caspase-3蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达率分别为83.3%(60/72)、26.4%(19/72)、33.3%(24/72);Ezh2在腺癌组织中的阳性率明显高于正常和各型增生内膜(16.7%、33.3%、63.3%;P<0.05),Runx3在腺癌组织中的阳性率明显低于正常和单纯性增生内膜(80.0%、56.7%;P<0.01),caspase-3在腺癌组织中的阳性率明显低于正常和各型增生内膜(86.7%、73.3%、63.3%;P<0.01),差异均有统计学意义.Ezh2和Runx3的阳性表达与组织分级、临床分期和肌层浸润深度均有关(均P<0.05),与淋巴结转移均无关(P>0.05);caspase-3的阳性表达与组织分级有关(P<0.05),而与临床分期、浸润深度及淋巴结转移均无关(P>0.05).Ezh2与Runx3的蛋白表达呈负相关(rs=-0.262,P<0.05).结论 Ezh2、Runx3和caspase-3可能在子宫内膜样腺癌的发生发展过程中发挥重要作用,联合检测其表达可为子宫内膜样腺癌的预后监测及新基因靶点的探寻提供依据.
关键词： 癌 子宫内膜样 免疫组织化学 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
亚低温对心肺复苏大鼠海马神经细胞活性氧及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和自噬相关蛋白轻链3的影响
目的：观察亚低温（MH）对心肺复苏（CPR）后海马神经细胞活性氧（ROS）产生量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3） mRNA和自噬相关蛋白轻链3（LC3）表达的影响。方法65只健康成年雄性SD大鼠随机数字法随机分为2组：空白对照组（BC，n＝5）；CPR组（n＝60）。CPR组制作窒息法心肺复苏模型，在自主循环恢复（ROSC）后再随机分为2组：常温CPR组（NT）和低温CPR组（HT）。NT组在ROSC后保持37℃恒温，HT组在ROSC后立即行低温32℃干预4 h。根据观察时点的不同，再将两组CPR组随机分2个亚组：即 ROSC后12 h和24 h组（NT-12，NT24，HT-12，HT-24）。到达观察时点先对存活大鼠进行神经功能缺损评分（NDS），然后立即取双侧海马组织，应用流式法检测大鼠海马单细胞悬液ROS水平。利用透射电镜观察海马神经细胞细胞核和线粒体的超微结构形态学变化。利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术测定海马神经细胞caspase-3mRNA的表达水平；蛋白免疫印迹法（WB）测定海马神经细胞LC3蛋白水平。应用SPSS 19.0软件包，计量数据以均数±标准差（x ±s）表示，两组间均数比较用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果60只大鼠中有44只（73％）成功ROSC，存活到观察时点的有33只大鼠（55％）。NT和HT组各时点的NDS明显低于BC组（F＝8.107，P＜0.05），HT-12和HT-24组的NDS与相同时点的NT组比较有显著提高（t＝9.692，P＜0.01；t＝14.374，P＜0.01）。NT和HT组各时点的ROS产生量明显高于BC组（F＝16.824，P＜0.05），而HT-12和HT-24组的升高程度则明显低于相同时点的NT组大鼠（t＝9.836，P＜0.01；t＝7.499，P＜0.01）。NT和HT组各时点的caspase-3mRNA表达量明显高于BC组（F＝24.527，P＜0.05），而HT-12和 HT-24组的升高程度则明显低于相同时点的 NT 组大鼠（t ＝6.935，P＜0.01；t＝4.317，P＜0.01）。NT 和 HT 组各时点的 LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达量明显高于 BC 组（F＝6.584，P＜0.05），而 HT-12和 HT-24组的升高程度则明显低于相同时点的 NT 组大鼠（t＝10.836，P＜0.001；t＝2.653，P＝0.02）。NT组海马神经细胞核和线粒体的形态学变化较BC组有明显改变，HT组海马神经细胞核和线粒体与相同时点NT组比较损伤有所减轻。结论 MH能减轻ROSC后大鼠脑神经细胞损伤并提高其神经功能，其机制之一是减少了CPR后大鼠神经细胞ROS的产生，并通过抑制caspase-3和LC3的表达使神经细胞凋亡和自噬减少。
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运动点电针对急性脊髓损伤大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和降钙素基因相关肽表达的影响
目的:探讨运动点电针对急性脊髓损伤大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (caspase-3)和降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响.方法:将60只SD大鼠随机分为4组,每组15只A组:运动点电针组;B组:非运动点电针组;C组:模型组;D组:假手术组.采用改良的Allen法建立大鼠急性脊髓损伤模型.A、B组分别于术后立即开始下肢运动点和非运动点进行电针治疗;C、D组不做任何治疗.各组大鼠分别于1、4、7d行BBB评分,通过免疫组织化学方法(IHC)观察各组caspase-3和CGRP阳性细胞的表达情况.结果:60只SD大鼠均进入结果分析.BBB评分结果显示:A组评分明显高于B、C组(P＜0.05);免疫组化结果显示:①caspase-3的表达:损伤后各组均可见阳性细胞表达,D组仅见少量的阳性细胞.其中A、B组阳性细胞表达明显低于C组(P＜0.05);而A组的表达又明显低于B组(P＜ 0.05);②CGRP的表达:各组均可见阳性细胞表达,A、B组明显高于C组(P＜0.05),而A组又明显高于B组(P＜0.05).结论:运动点电针可抑制caspase-3和促进CGRP的表达,可能有助于脊髓功能的恢复.
关键词： 脊髓损伤 电针 运动点 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 降钙素基因相关肽 -
诊断超声对HEK-293细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨诊断超声照射对体外培养的HEK-293细胞凋亡的影响.方法 采用HEK-293细胞,构建超声照射模型,采用4个超声照射剂量浓度(0 min、10 min、20 min和30 min),每个浓度设3个平行瓶,重复三次.处理后行Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪行凋亡细胞计数;免疫细胞化学检测Caspase-3凋亡蛋白表达水平的变化.结果 Annexin V-FITC/PI双染色显示,随着超声照射剂量的增加,流式计数的细胞凋亡率增加,20 min组具有统计学意义(P<0.05),30 min组具有显著统计学意义(P<0.01);同时可使凋亡蛋白酶Caspase-3表达水平增加.结论 特定剂量的超声聚焦照射可引起部分细胞凋亡改变,并具有一定量效关系.
关键词： 超声检查 凋亡 钙磷酯结合蛋白 荧光素-5-异硫氰酸盐 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
L-肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护机制
目的 探讨L-肌肽对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)凋亡保护的作用机制.方法 在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上加入肌肽,采用MTT比色法检测肌肽对H2O2抑制PC12细胞增殖的影响;RT-PCR法检测凋亡相关基因Caspase-3 mRNA的表达变化;免疫组织化学SABC法检测Caspase-3蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 不同浓度的肌肽对H2O2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用,20 mmol/L浓度时达大值(P<0.05);20 mmol/L的肌肽作用于PC12细胞可降低其Caspase-3 mRNA的表达及Caspase-3蛋白的表达,流式细胞仪检测显示,肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡.结论 肌肽对H2O2损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能是通过抑制Caspase-3的表达来抑制PC12细胞的凋亡而实现的.
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HIF-1α、Caspase-3及Survivin在胸腺瘤中的表达及意义
目的 研究缺氧诱导因子-lα(HIF-1α)、Caspase-3及Survivin在胸腺瘤的发生、发展中的作用.方法 应用免疫组织化学SP法检测60例上皮性胸腺肿瘤和30例非肿瘤胸腺组织中HIF-1α、Caspase-3、Survivin蛋白的表达.结果 HIF-1α蛋白在胸腺瘤组织中的阳性率为61.67%(37/60),显著高于非肿瘤胸腺组织阳性率3.33%(1/30)(P<0.01);在侵袭性胸腺瘤中的阳性率为84.62%(33/39),显著高于非侵袭性胸腺瘤阳性率19.05%(4/21)(P<0.01);在恶性胸腺瘤中的阳性率为73.91%(34/46),显著高于良性(或低度恶性)胸腺瘤中的阳性率21.43%(3/14)(P<0.01).Caspase-3蛋白在胸腺瘤组织中的阳性率为28.33%(17/60),显著低于非肿瘤胸腺组织阳性率96.67%(29/30)(P<0.01);在侵袭性胸腺瘤中的阳性率为5.13%(2/39),显著低于非侵袭性胸腺瘤阳性率71.43%(15/21)(P<0.01);在恶性胸腺瘤中的阳性率为10.87%(5/46),显著低于良性(或低度恶性)胸腺瘤中的阳性率85.71%(12/14)(P<0.01).Survivin蛋白在胸腺瘤组织中的阳性率为73.33%(44/60),显著高于非肿瘤胸腺组织阳性率6.67%(2/30)(P<0.01);在侵袭性胸腺瘤中的阳性率为92.31%(36/39),显著高于非侵袭性胸腺瘤阳性率38.10%(8/21)(P<0.01).在恶性胸腺瘤中的阳性率为84.78%(39/46),显著高于良性(或低度恶性)胸腺瘤中的阳性率35.71%(5/14)(P<0.01).结论 HIF-1α、Caspase-3及Survivin与胸腺瘤的发生有关;与胸腺瘤的恶性程度及侵袭性有关.检测HIF-1α、Caspase-3与Survivin可作为判断胸腺瘤生物学行为的客观指标.
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吡咯烷二硫代氨基甲酸盐增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用及相关机制
目的 研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)联合TNF-α对宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度PDTC、TNF-α及两者联合作用对HeLa细胞生长抑制率的影响;采用光镜及DAPI法观察细胞形态学变化及凋亡情况;Western blot法检测HeLa细胞A20和caspase-3蛋白的表达.结果 PDTC(50,100 μmol/L)或TNF-α(30,60,120 mg/L)可明显抑制细胞的增殖;低浓度PDTC(25 μmol/L)不影响细胞增殖,但与TNF-α联合应用与单用TNF-α比较,细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01);光镜与DAPI染色结果显示,不同浓度药物组的细胞均有明显的细胞凋亡特征,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01);PDTC(25 μmol/L)与TNF-α(60 mg/L)联合用药与单用TNF-α(60 mg/L)或PDTC(50 μmol/L)比较,胞质A20蛋白表达无明显变化,但caspase-3蛋白的表达明显增加(P<0.05).结论 PDTC可增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,其机制可能与PDTC抑制TNF-α诱导的核转录因子NF-κB的活性,终上调凋亡蛋白caspase-3表达有关.
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Wortmannin 对血管性痴呆大鼠海马 CA1区自噬相关蛋白 Beclin-1及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响
目的探讨Wortmannin对血管性痴呆大鼠海马 CA1区的自噬及凋亡表达的影响及意义。方法将150只大鼠随机分为假手术组、模型组及Wortmannin组。每组又随机分为1周、2周、4周、8周和12周5个亚组（n＝10）。采用四血管阻断法制备血管性痴呆模型，应用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力，HE染色观察大鼠海马区神经元形态变化，免疫组化法检测Beclin-1及Caspase-3蛋白的表达。结果与假手术组比较，模型组出现明显学习记忆障碍，海马CA1区Beclin-1阳性表达在1周开始增多，4周达到高峰，8周开始下降，到12周仍增多；Caspase-3阳性表达在1周开始增多，2周达到高峰；4周开始下降，到12周仍增多，差异有统计学意义（ P＜0.05）；与模型组比较，Wortmannin组学习记忆障碍明显改善，海马CA1区Beclin-1及Caspase-3阳性表达减少，差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论 Wortmannin可能通过减轻自噬及凋亡对神经细胞的损伤，从而达到保护神经细胞，增强和调节学习记忆能力的作用。这可能为血管性痴呆的治疗提供一个靶点。
关键词： 自噬 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 Wortmannin Beclin-1 -
新生儿缺氧缺血性脑病血清IL-18和Caspase-3及S-100B蛋白水平检测及临床意义
目的 检测不同患病程度、不同病程阶段新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿白介素-18(IL-18)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和S-100蛋白B(S-100B蛋白)水平变化及临床意义.方法 本研究为临床实验研究,以2008年2月至2009年6月河北省儿童医院临床确诊的67例(轻度HIE 23例,中度HIE 23例,重度HIE 21例)HIE患儿为研究对象,采用ELISA法检测急性期(第1、第3天)、恢复期(第7天)血清IL-18、Caspase-3和S-100B蛋白水平,20名健康新生儿作为健康对照组.采用多因素方差分析和Pearson相关性检验进行统计学分析.结果 病程各阶段三项指标中度组和重度组均高于健康对照组[中度组IL-18水平分别为(132.15 ±9.87)、(150.31 ±15.04)、(87.91 ±9.93) ng/L,Caspase-3水平分别为(5.79±0.64)、(7.36±1.57)、(3.79 ±0.61) μg/L,S-100B蛋白水平分别为(6.82±0.61)、(9.62±1.29)、(10.76±1.64) μg/L;重度组IL-18水平分别为(160.23±16.03)、(189.86±18.32)、(107.35±13.02) ng/L,Caspase-3水平分别为(6.86±1.02)、(9.54±1.43)、(5.25±0.71) μg/L,S-100B蛋白水平分别为(8.90±0.32)、(12.54 ±0.89)、(13.53±0.75) μg/L,健康对照组IL-18水平分别为(71.08±11.52)、(72.53±11.05)、(71.93±11.30) ng/L,Caspase-3水平分别为(2.84±0.52)、(2.98±0.53)、(2.87±0.52) μg/L,S-100B蛋白水平分别为(1.50±0.25)、(1.62±0.30)、(1.53±0.29) μg/L],而且重度组高于中度组,中度组高于轻度组[IL-18水平分别为(73.46 ±4.77)、(77.59 ±4.02)、(72.87 ±6.92) ng/L,Caspase-3水平分别为(3.13±0.31)、(3.63±0.40)、(3.26 ±0.45) μg/L,S-100B蛋白水平分别为(3.68±0.40)、(5.851 ±0.63)、(6.95±0.58) μg/L];仅有S-100B蛋白水平轻度组高于健康对照组;动态变化上IL-18和Caspase-3水平中度组和重度组急性期第3天比第1天升高,恢复期降低,而S-100B蛋白水平在病程各阶段呈逐渐升高趋势.3项指标之间无相关关系(r分别为0.321、0.14、0.48,P分别为0.438、0.974、0.911).结论 IL-18、Caspase-3和S-100B蛋白均参与了HIE的病理生理过程,其浓度水平与HIE患儿病情的轻重和病程进展密切相关,病情越重血清中3项指标水平越高.动态观测三者变化趋势,将有助于HIE的早期诊断、病情监测及判断预后.
关键词： 缺氧缺血 脑 白细胞介素18 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
Caspase-3在慢性心力衰竭大鼠心肌重塑中动态表达及意义
目的 探讨慢性心力衰竭大鼠心肌内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达及意义.方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为四组,假手术组、心力衰竭1 d组、7 d组、14 d组各10只.以缩窄大鼠腹主动脉,造成左心室压力负荷,制备慢性心力衰竭大鼠模型.观察和比较成模后1 d、7 d、14 d及假手术组左心室肌重量指数,Masson染色后对比心肌胶原含量,免疫组化法测定心肌中caspase-3蛋白表达水平.结果 腹主动脉缩窄术后各组大鼠均发生左室重塑和纤维化,左心室肌重量指数、胶原含量及caspase-3蛋白表达均明显高于假手术组;caspase-3于正常心肌内表达较少,而在心力衰竭后心肌内表达则明显增多,且随着心力衰竭程度的加重而表达增多.结论 caspase-3可能参与了大鼠压力负荷性心肌重塑的发生和发展,其水平的高低与慢性心力衰竭的严重程度密切相关.
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莫西沙星对大鼠气道平滑肌细胞线粒体膜电位及凋亡的影响
目的 观察大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)在不同浓度的莫西沙星作用下，其线粒体膜电位（△Ψm）和半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3（Caspase-3）表达及细胞凋亡的变化，探讨莫西沙星促进ASMC凋亡的可能机制。方法体外原代培养大鼠ASMC，按随机数字表法分为空白对照组、莫西沙星40 mg/L组（M40组）、80 mg/L组（M80组）、120 mg/L组（M120组）和200 mg/L组（M200组），均孵育48 h后，Annexin-V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率，用JC-1荧光探针在免疫荧光显微镜下检测细胞△Ψm的变化，Western blot法检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果各莫西沙星浓度组（M40组、M80组、M120组及M200组）的细胞凋亡率分别为(2.95±0.21)％、(7.39±0.63)％、(13.39±0.40)％和(21.20±1.42)％，均明显高于空白对照组的(0.94±0.05)％(均P＜0.01)，并存在浓度依赖性(r=0.974,P＜0.01)；荧光显微镜检测显示空白对照组以红色荧光为主，随着莫西沙星浓度增大，红色/绿色荧光强度值比率(分别为6.54±0.15、4.48±0.14、2.25±0.10和1.99±0.12)逐渐降低，与空白对照组(10.02±0.20)相比差异有统计学意义（均P＜0.01），并存在药物浓度依赖性（r=-0.946,P＜0.01）；Western blot检测显示，空白对照组几乎无Caspase-3蛋白表达(0.31±0.03)，各莫西沙星浓度组Caspase-3蛋白表达(分别为0.45±0.05、0.59±0.04、0.69±0.06和0.84±0.04)均明显高于空白对照组(0.31±0.03)（均P＜0.01），同时也存在浓度依赖性(r=0.979,P＜0.01)。各组细胞凋亡率与△Ψm水平呈负相关（r=-0.887,P＜0.01），与凋亡蛋白Caspase-3水平呈正相关(r=0.955，P＜0.01)，各组细胞△Ψm水平与Caspase-3水平呈负相关(r=-0.951，P＜0.01)。结论 莫西沙星可能通过影响大鼠AΨm促进ASMC凋亡。
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法舒地尔后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护机制研究
目的 通过主动脉根部模拟冠状动脉内给药,探讨盐酸法舒地尔后适应对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护机制.方法 选择SD大鼠30只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血后适应组、法舒地尔组、法舒地尔+LY294002组(LY294002组),每组6只.各组于再灌注180 min后处死大鼠,取心肌组织用Western blot方法测定Bcl-2、Bax、caspase-3、蛋白激酶B(Akt)及磷酸化Akt的表达.结果 与缺血再灌注组比较,缺血后适应组和法舒地尔组Bcl-2表达明显升高,Bax、caspase-3表达明显降低(P＜0.05).与法舒地尔组比较,LY294002组Bcl-2表达明显降低,Bax、caspase-3表达明显升高(P＜0.05).与缺血再灌注组和LY294002组比较,法舒地尔组磷酸化Akt表达明显升高(P＜0.05).结论 盐酸法舒地尔后适应的机制可能与激活磷脂酰肌醇3-激酶Akt传导通路有关.
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金丝桃苷对H9C2细胞缺血再灌注损伤的作用机制
目的 探讨金丝桃苷对H9C2细胞缺血再灌注损伤的作用及可能机制.方法 采用H9C2细胞模拟缺血再灌注模型,缺血液培养45 ain,再恢复正常迭尔伯克改良伊格尔培养液培养4h.将H9C2细胞随机分为对照组,金丝桃苷组,缺血再灌注组,金丝桃苷处理+缺血再灌注组(联合组).光镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白水平,自噬相关蛋白LC3Ⅱ、Beclin1和P62以及凋亡相关蛋白裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)活性水平,TUNEL染色观察凋亡变化.结果 金丝桃苷组与对照组各项指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,缺血再灌注组凋亡指数、caspase-3活性、LC3Ⅱ和Beclin1明显增高,细胞活力、磷酸化AMPK、磷酸化mTOR和P62蛋白明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与缺血再灌注组比较,联合组细胞活力、磷酸化AMPK、磷酸化mTOR和P62蛋白明显增高,凋亡指数、caspase-3活性、LC3Ⅱ和Beclin1明显降低[(11.7±2.8)％ vs (27.6±4.5)％,1.4±0.1 vs 2.1±0.3,1.35±0.04 vs 2.17±0.07,1.30±0.18 vs 2.20±0.20,P＜0.05].结论 金丝桃苷通过激活AMPK/mTOR信号降低自噬减轻H9C2细胞缺血再灌注损伤.
关键词： 金丝桃甙 再灌注损伤 自噬 细胞死亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
尼可地尔调控半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3对猪冠状动脉微栓塞后心肌凋亡的影响
目的 探讨尼可地尔调控半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)对猪冠状动脉微栓塞(CME)后心肌凋亡的影响.方法 选择12周龄健康小型猪15只,随机分为假手术组、CME组、尼可地尔组,每组5只.模型建立后12h采用心脏超声检测心功能,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,Western blot检测活化caspase-3表达水平.结果 与假手术组比较,CME组左心室舒张末期内径(LVEDD)明显升高,CME组和尼可地尔组LVEF、左心室短轴缩短率(LVFS)及心输出量(CO)明显降低(P＜0.05);与CME组比较,尼可地尔组LVEF、LVFS及CO明显升高,LVEDD明显降低(P＜0.05).与假手术组比较,CME组肌钙蛋白Ⅰ明显升高[(0.325±0.128)ng/ml vs (0.058±0.028)ng/ml,P＜0.05];与CME组比较,尼可地尔组肌钙蛋白Ⅰ明显降低[(0.156±0.089)ng/ml vs (0.325±0.128)ng/ml,P＜0.05].与假手术组比较,CME组心肌细胞凋亡指数和活化caspase 3表达明显升高(P＜0.05);与CME组比较,尼可地尔组心肌细胞凋亡指数和活化caspase-3表达明显降低(P＜0.05).结论 尼可地尔能够通过调控caspase-3降低猪CME后心肌凋亡.
关键词： 尼可地尔 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 细胞凋亡 肌钙蛋白Ⅰ 冠状动脉血栓形成 -
左西孟旦对猪冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡的影响
目的 探讨左西孟旦对猪急性冠状动脉微栓塞(coronary microembolization,CME)后心肌细胞凋亡的影响及意义.方法 健康巴马系小型猪15只,随机分为假手术组,CME组及干预组[0.05μg/(kg·min)左西孟旦预处理24 h],每组5只.成功建立CME术后12h采用心脏超声检测心功能,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,Western blot检测活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达水平.结果 与假手术组比较,CME组LVEF[(49.82±4.23)％vs (66.72±3.22)％]、左心室短轴缩短率及心排血量下降,左心室舒张末内径增加[(39.26±1.28)mm vs(32.38±1.58)mm,P＜0.05];与CME组比较,干预组心功能明显改善(P＜0.05).与假手术组比较,CME组心肌细胞凋亡率[(10.558±2.425)％vs (0.242±0.070)％]、活化Caspase-3表达显著增加(P＜0.05);与CME组比较,干预组心肌细胞凋亡率[(6.820±1.974)％ vs (10.558±2.425)％]、活化Caspase-3表达明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 左西孟旦预处理可明显减少CME后心肌细胞凋亡,改善心功能.其机制可能是抑制心肌细胞促凋亡蛋白Caspase-3表达来实现的.
