首页 > 文献资料
-
肌肽在医药领域的应用及其研究概况
肽是一种由氨基酸组成的生物大分子.近年来,随着分子生物学的发展,大大促进了生物学与医学、药学等各学科之间的相互渗透,肽也因此而成为非常重要的生化药物,越来越多地应用于临床,且已显示出了良好效果.其中人们对激素类活性肽如下丘脑、垂体、胃肠道等分泌的一些肽类物质研究的较早且成果较多,相应的药物也已临床应用到了高血压、糖尿病、癌症、胃肠道病、精神病等疾病的预防及诊疗[1].
-
高效毛细管电泳法测定肌肽含量方法的研究
目的 建立肌肽原料药的含量测定和杂质检查方法,为其质量控制提供快速、有效的分析手段.方法 色谱柱为河北永年光导纤维厂的未涂层石英毛细管(75 m I.D.×65 cm),流动相:100 mmol·L-1 Na2B4O7-H3BO3缓冲溶液,重力进样,检测波长为200 nm.考察了不同流动相下药物的色谱峰,同时进行了专属性、线性关系、精密度等项的考察.结果 肌肽在在40.0~100.0 g·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9991),RSD为1.2%,低检测限为2 ng.相关杂质、中间体与肌肽分离良好.结论 该法专属性强,结果准确,重现性好,可用作肌肽含量测定和相关物质控制的方法.
-
肌肽精制工艺条件优化试验研究
目的对肌肽精制过程中的丁艺条件进行试验研究.方法 通过设计三因素三水平的正交试验,摸索优选佳精制工艺条件.结果 确定精制工艺参数活性炭用量为肌肽粗品的3%,脱色反应时间为30min,醇沉步骤乙醇用量为滤液量的120%.结论 该方法重现性好、收率较高,适用于原料药的实际生产.
-
肌肽对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用
本研究采用过氧化氢和谷氨酸纳作用于PC12细胞,成功的制作了氧化应激损伤的细胞模型.将培养的细胞进行分组:正常对照组; 损伤组; 分别给予过氧化氢和谷氨酸钠; 肌肽保护组,同损伤组的制备,但予先加入肌肽.用MTT法检测了各组细胞的生长状态并测定了LDH活性,观察了细胞形态和蛋白电泳等 .结果表明:在保护组,MTT的测定结果高于损伤组,LDH低于损伤组,其细胞生长状态和蛋白质电泳结果也与损伤组有显著差异,证明了肌肽对PC12细胞的氧化应激损伤有明显保护作用.
-
肌肽减轻H2O2诱导的N2a细胞损伤
目的 探究肌肽对H2O2诱导的N2a细胞损伤的保护作用及其机制.方法 将N2a细胞分为对照组、损伤组(给予H2O2)和肌肽保护组(预先加入肌肽).用相差显微镜观察了细胞形态,用免疫荧光染色和免疫印迹实验检测细胞AKT1和FAS-L的蛋白表达.结果 肌肽显著增加了N2a细胞增殖能力(P＜0.05);与对照组比较,H2O2损伤组细胞形态发生明显改变,细胞皱缩,胞膜变厚并出现发泡现象;而肌肽保护组细胞形态较损伤组明显改善;免疫荧光染色和免疫印迹实验显示,损伤组AKT1的表达显著低于对照组,FAS-L的表达显著高于对照组.而肌肽保护组AKT1的表达显著高于对照组,FAS-L的表达显著低于对照组(P＜0.05).结论 肌肽能够减轻N2a细胞对H2O2诱导的细胞损伤.
-
肌肽对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
肌肽(carnosine)即β-丙氨酰-L-组氨酸,近几年发现其具有抗氧化,抗自由基作用.因而提出肌肽是继SOD、VitE之后的又一内源性自由基清除剂和抗氧化剂[1].缺血性脑中风是我国及发达国家老年人群中的第三大死亡原因,也是中老年人致残和痴呆的重要原因之一.尽管治疗缺血性脑中风的药物不断问世,但缺血性中风的预后仍然令人失望.因此,寻找治疗脑缺血损伤更有效的神经保护剂已成为临床医学领域的重要研究课题.本研究制作大鼠全脑不完全缺血模型,借以观察肌肽是否具神经保护作用.
-
L-肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护机制
目的 探讨L-肌肽对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)凋亡保护的作用机制.方法 在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上加入肌肽,采用MTT比色法检测肌肽对H2O2抑制PC12细胞增殖的影响;RT-PCR法检测凋亡相关基因Caspase-3 mRNA的表达变化;免疫组织化学SABC法检测Caspase-3蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 不同浓度的肌肽对H2O2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用,20 mmol/L浓度时达大值(P<0.05);20 mmol/L的肌肽作用于PC12细胞可降低其Caspase-3 mRNA的表达及Caspase-3蛋白的表达,流式细胞仪检测显示,肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡.结论 肌肽对H2O2损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能是通过抑制Caspase-3的表达来抑制PC12细胞的凋亡而实现的.
-
肌肽抗衰老机制的研究进展
衰老是生命体的自然规律,皮肤衰老在其中有着特殊的意义.随着对皮肤衰老机制的逐步深入研究,抗衰老的各种方式也应运而生.肌肽(β-丙氨酸和L-组氨酸)存在于人体的肌肉及脑部,其抗衰老机制如抗氧化、抑制端粒缩短、减少线粒体损伤、抗糖基化、抗肿瘤等逐渐被发掘,参与对细胞自噬、细胞凋亡及去乙酰化酶的调节作用也在不断研究中.该文针对肌肽抗衰老机制的研究作一综述.
-
L-肌肽对大鼠硒性白内障的影响
目的 研究L-肌肽防治大鼠硒性白内障的作用.方法 实验研究.用亚硒酸钠制作大鼠白内障模型,分为3组,每组9只,分别用50 g/L、20 g/L的L-肌肽滴眼液及生理盐水滴眼3周,观察大鼠晶状体变化情况.将大鼠白内障晶状体体外培养,分别加入1.00、0.10及0.01 g/L的L-肌肽无血清营养液,培养1周,观察大鼠晶状体变化.再将培养的大鼠白内障晶状体进行双向电泳实验.采用方差分析对各组间的均数进行比较.结果 大鼠用药1周,50g/L、20g/L的L-肌肽组和对照组的晶状体病变度数分别为2.22±0.65、2.39±0.98及2.83±0.38;50 g/L的L-肌肽组病变轻于对照组,差异有统计学意义(P=0.013).用药2周和3周,3组间晶状体病变差异无统计学意义(P>0.05).大鼠自内障晶状体培养1周,1.00、0.10及0.01 g/L的L-肌肽组晶状体病变与对照组差异无统计学意义(P>0.05).双向电泳结果显示:药物组蛋白总数为182,对照组为161,药物组高相对分子质量蛋白数量减少,低相对分子质量蛋白数量增多.结论 50 g/L的L-肌肽可抑制大鼠白内障早期病变的发展;肌肽在体外可使大鼠白内障品状体蛋白发生变化,对白内障晶状体病变程度作用不明显.
-
肌肽对小鼠放射性肺损伤的防治作用
目的 了解肌肽对小鼠放射性肺损伤的防治作用.方法 近交系C57/BL雌性小鼠108只,随机数字表法分为对照组、单纯照射组、照射+肌肽组(15 mg·kg-1·d-1)和单纯肌肽组(15mg· kg-1·d-1),对照组共18只,其他各组每组30只.采用10 MV X射线经前胸单次照射小鼠肺脏中平面13 Gy,全肺照射.两肌肽组灌胃给予15 mg·kg-1 ·d-1肌肽,照射前30 min给药1次,以后1次/d至实验结束,对照组给予相应同体积生理盐水.在照射后7、28和56 d处死后取部分肺组织HE染色,部分肺组织行超氧化物歧化酶(SOD)检测,同时ELISA法测定血清中TGF-β1、TNF-α.结果 受照射组(单纯照射组、照射+肌肽组)在照射后56 d均表现出不同程度的放射性肺炎病理变化,照射+给药组较单纯照射组炎症反应明显较轻.各组间不同时段血清中TGF-β1水平差异有统计学意义(F=10.65、3.70、4.04,P＜0.05);各组间不同时段血清中TNF-α水平差异有统计学意义(F =39.55、53.38、4.01,P＜0.05);各组间不同时段肺组织中SOD水平差异有统计学意义(F=4.33、4.19、3.34,P＜0.05).照射+肌肽组较同期的单纯照射组,肺组织中SOD水平明显较高,血清中TGF-β1、TNF-α明显降低.结论 肌肽通过保护SOD,降低TGF-β1和TNF-α水平起到预防并减轻小鼠放射性肺损伤的作用.
-
高谷氨酸环境下肌肽对星形胶质细胞谷氨酸转运体-1表达及活性的正调节作用
目的 探讨肌肽在高浓度谷氨酸作用下对星形胶质细胞谷氨酸转运体-1(GLT-1)和谷氨酸-天冬氨酸转运体(GLAST)的表达及活性的影响.方法 胶质原纤维酸性蛋白免疫染色法鉴定培养的星形胶质细胞纯度.谷氨酸10 mmol·L-1作用星形胶质细胞24,48和72 h,MTT法和细胞核荧光双染法检测细胞存活率及细胞死亡模式.肌肽5 mmol·L-1预处理30 min后,加入谷氨酸10 mmol· L-1作用24 h,采用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR分别检测GLT-1和GLAST蛋白及mRNA表达.采用实时荧光定量PCR检测肌肽5 mmol·L-1单独作用1～5 d后,GLT-1 mRNA和GLAST mRNA表达.肌肽5 mmol·L-1预处理30 min再加谷氨酸10 mmol·L-1作用30 min后,用高效液相色谱法检测胞外上清液谷氨酸含量.结果 培养的星形胶质细胞纯度在95％以上.谷氨酸10 mmol·L-1攻击48 h内不影响星形胶质细胞存活,而攻击72 h星形胶质细胞存活率下降至82.0％,细胞凋亡率增加至24.7％.肌肽5 mmol·L-1预处理30 min,则能显著上调高谷氨酸环境下星形胶质细胞GLT-1 mRNA及蛋白的表达(P＜0.05),但不影响GLAST的表达.肌肽单独处理1～5d不影响GLT-1和GLAST mRNA的表达.肌肽预处理能显著提高星形胶质细胞对胞外谷氨酸的摄取能力.结论 在高浓度谷氨酸条件下,肌肽能促进星形胶质细胞对胞外谷氨酸的快速摄取,同时上调GLT-1的表达,但不影响GLAST的表达.
-
肌肽对高糖诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用
目的 探讨肌肽对高糖诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 SH-SY5Y细胞用含葡萄糖50 mmol·L-1的高糖培养液和肌肽0.6,3和15 mmol· L-1的培养液培养48 h,相差显微镜下观察细胞形态的变化;MTT比色法测定细胞存活率;Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;CDFH-DA探针法检测细胞中活性氧(ROS)的水平,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)的含量.结果 与正常组(低糖培养基)相比,高糖组细胞存活率明显降低(P ＜0.01);Hoechst33258染色发现细胞核固缩裂解,呈凋亡特征性改变;细胞凋亡率、细胞中ROS的水平、上清液中8-OHdG的分泌量明显升高(P＜0.01).与高糖组相比,肌肽0.6,3和15 mmol·L-1组细胞存活率明显升高(P＜0.01);Hoechst33258染色发现细胞核核固缩裂解减少,形态明显改善;细胞凋亡率分别降低至(20.65±1.13)％,(14.95±0.64)％和(9.95±0.61)％(P＜0.01);细胞中ROS的水平分别降低至(182±16)％,(168±15)％和(140±10)％(P＜0.05);上清液中8-OHdG的分泌量均明显降低,分别为2.780 ±0.154,2.136 ±0.100和(1.864 ±0.151)μg·L-1(P＜0.01).单纯肌肽组的细胞存活率、细胞核形态以及细胞凋亡率与正常组相比无显著差异,细胞中ROS水平和上清液中8-OHdG的分泌量均有所降低,分别为(88±9)％和(0.380 ±0.023)μg·L-1(P＜0.05).甘露醇组的各项指标与正常组相比无显著差异.结论 肌肽对高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与肌肽的抗氧化作用有关.
-
肌肽对高糖引起的HUVECs细胞损伤的保护作用
目的 探讨肌肽对高糖环境中的人脐静脉内皮细胞的氧化损伤的减弱作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常对照组、高糖损伤组和肌肽预保护组.3-(4,5-二甲基噻唑-2)-3,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞存活率,检测各组细胞上清液中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映内皮细胞的氧化应激水平,并检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)蛋白活性.结果 MTT检测结果显示,细胞存活率随着高糖刺激时间和高糖浓度的增加而逐渐降低,而肌肽预保护组细胞的存活率显著高于高糖处理组(P＜0.05);高糖组与对照组相比,MDA、LDH含量明显增高,SOD含量显著下降,而肌肽预保护组与高糖组相比,MDA、LDH含量明显下降,SOD含量显著升高(P＜0.05).caspase-3活性检测结果显示高糖组活性比正常糖对照组显著升高(P＜0.05),而肌肽预保护组与高糖组相比,caspase-3活性显著降低(P＜0.05).结论 肌肽能够减弱高糖诱导的HUVECs细胞氧化应激损伤.
-
肌肽对小鼠的抗衰老作用
目的 研究肌肽对小鼠的抗衰老作用,以及对血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)水平的影响.方法 选择昆明种清洁级小鼠72只,雌雄各半,随机分为对照组(自来水)、衰老模型组(建立衰老模型,自来水)、维生素E组(建立衰老模型,0.6 mg/ml维生素E溶液,0.8 ml/d)、肌肽组[建立衰老模型,100 mg/(Kg·d)肌肽经口染毒],每组18只.染毒2、4周末检测小鼠血清中T3、T4、IGF-I的水平.染毒4周末测定小鼠自发活动指标(自发活动次数、自发活动站立时间)和耐力指标(抗疲劳、耐缺氧).结果 肌肽组的自发活动次数高(P＞0.05),自发活动站立时间显著高于衰老模型组(P＜0.05),各染毒组抗疲劳时间均低于对照组,但肌肽组差异无统计学意义(P＞0.05),耐缺氧时间组间差异无统计学意义(P＞0.05).肌肽组于染毒2周末时T4/T3比值低,染毒4周末时高,组间差异无统计学意义(P＞0.05).染毒4周末,肌肽组血清IGF-I水平高于对照组、维生素E组及衰老模型组(P＜0.01).结论 肌肽能够提高衰老模型小鼠的自发活动能力,使T4向T3的转化减弱,并能维持血清中较高的IGF-I水平,可能与其抗衰老作用有关.
-
新生牛肝中三种低分子化合物牛磺酸、鸟氨酸、肌肽对HL-60细胞凋亡的诱导作用
目的:研究三种新生牛肝源低分子化合物:牛磺酸、鸟氨酸、肌肽对HL-60白血病细胞增殖的抑制作用并探讨其调控机理.方法:用MTT法分别检测三种活性成分作用后HL-60细胞和正常人淋巴细胞的存活率.分别用琼脂糖凝胶电泳,顺磁共振ESR技术,免疫组化法测定其对HL-60细胞的核DNA、氧自由基活性和细胞周期蛋白水平的影响.结果:三种化合物能够有效地抑制HL-60细胞的增殖,而对正常的人淋巴细胞的生长没有抑制作用;三种化合物使HL-60细胞的核DNA产生30 kb片段,使HL-60细胞内的氧自由基活性降至痕量水平,并下调HL-60的p45/skp2的水平,而上调p27/kip的水平.结论:牛磺酸、鸟氨酸、肌肽能够通过调控细胞周期蛋白的水平而选择性的抑制肿瘤细胞的增殖.
-
肌肽对低氧所致大鼠血管内皮细胞损伤的保护作用
目的:研究肌肽对低氧所致大鼠血管内皮细胞损伤的影响.方法:建立低氧条件下大鼠血管内皮细胞损伤模型,用MTT法观察肌肽对低氧损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定细胞培养基中LDH活力,并对细胞骨架进行考马斯亮蓝R-250染色观测其细胞结构.结果:浓度为10 mmol/L～20 mmol/L肌肽孵育血管内皮细胞6 h后,可以抑制缺氧12 h和24 h引起的血管内皮细胞活性下降,同时减少LDH的释放,保持细胞骨架完整.结论:肌肤对低氧所致的血管内皮细胞损伤具有保护作用.
-
肌肽及肌肽酶基因多态性与糖尿病肾病
肌肽是一种广泛存在于组织中的内源性二肽,可通过抗氧自由基、减少晚期糖基化终末产物、抑制生长因子的产生和抑制肾素-血管紧张素系统等作用,降低肾小球毛细血管基底膜增厚和肾小球硬化,被认为是糖尿病肾病的保护因子.肌肽在体内主要通过肌肽酶水解,后者主要由CNDP1及CNDP2两种基因编码.已有多项研究显示肌肽酶基因多态性可能影响肌肽酶的水平和活性,目前相关研究主要集中于CNDP1第2外显子区的(CTG)n.对肌肽及肌肽酶基因多态性分子机制的研究,可能为糖尿病肾病的预防、诊断及治疗提供一条新途径.
-
肌肽对局灶性脑缺血大鼠bcl-2、bax表达的影响
目的：研究肌肽对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质区B淋巴细胞瘤/白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关蛋白X （bax）表达的影响。方法30只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和肌肽组，每组10只。模型组和肌肽组以线栓法制作大鼠永久性脑缺血模型，肌肽组于造模后予肌肽水溶液灌胃[1000 mg/(kg·d)]，其余2组予等量生理盐水灌胃。分别于造模后清醒时、24 h、72 h通过神经功能缺损评分观察神经功能，于72 h采用2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色观察脑梗死体积、HE染色观察病理形态学改变，并用免疫组化法检测bcl-2和bax表达。结果肌肽组神经功能评分72 h较模型组降低（P＜0.05）；脑组织缺血损伤病理学改变轻于模型组；脑梗死体积72 h较模型组减小（P＜0.01）；脑缺血后72 h与假手术组相比，模型组bcl-2表达下降、bax表达上升、bcl-2/bax比值下降（均P＜0.05）；经肌肽处理后bcl-2表达上升、bax表达下降，bcl-2/bax比值上升（P＜0.01或P＜0.05）。结论肌肽处理能提高bcl-2表达、降低bax表达及提高bcl-2/bax比值，这可能是肌肽发挥神经保护作用的分子机制之一。
-
肌肽预处理对缺氧缺血后大鼠认知功能的影响
目的 探讨肌肽预处理对缺氧缺血后大鼠认知功能的影响.方法 SD大鼠36只,出生后7d结扎并切断左侧颈总动脉,吸入8％氧氮混合气2h即制成缺氧缺血(HI)模型,随机将SD大鼠分为3组(每组12只):(1)肌肽预处理组:在HI诱导前30 min腹腔注射肌肽1次250mg/kg;(2)HI组:在相同条件下用等容积的生理盐水代替;(3)假手术组:不接受任何治疗和处理.大鼠在HI后21～26 d通过Morris水迷宫实验的定位航行试验及空间探索实验,评价肌肽对大鼠游泳时间、距离及在目标象限游泳时间的百分比的影响.结果 肌肽预处理降低了HI大鼠的游泳时间和游泳距离,增加了HI大鼠在目标象限游泳时间的百分比.结论 肌肽预处理改善了HI大鼠的认知功能,从而有效地发挥了神经保护作用.
-
肌肽对缺氧缺血性脑损伤大鼠凋亡生化指标的影响
目的 探讨肌肽对缺氧缺血性后大鼠脑组织凋亡生化指标的影响.方法 SD大鼠42只,出生后7 d结扎并切断左侧颈总动脉,吸入8%氧氮混合气2 h即制成缺氧缺血(HI)模型,随机将SD大鼠分为3组:(1)肌肽预处理组:在HI诱导前30 min腹腔注射肌肽1次250 mg/kg;(2)HI组:在相同条件下用等容积的生理盐水代替;(3)假手术组:不接受任何治疗和处理.大鼠在HI后24 h被处死,用TUNEL法检测缺氧缺血侧大脑皮质及海马CA1区神经细胞的凋亡,通过Real-time PCR及Wastern blotting方法检测肌肽对HI大鼠脑组织AIF、Caspase-3基因及蛋白表达的影响.结果 TUNEL染色结果显示:HI组大脑皮质的原位末端标记阳性细胞数明显高于肌肽预处理组,差异有统计学意义(P＜0.01);HI组海马CA1区的TUNEL阳性细胞数亦明显多于肌肽预处理组,差异有统计学意义(P＜0.01).Real-time PCR结果表明:HI组动物的AIF mRNA表达及Caspase-3 mRNA水平高于肌肽预处理组,差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫印迹结果表明:HI组动物的AIF蛋白及Caspase-3水平高于预处理组,差异均有统计学意义(P＜0.01);肌肽预处理组AIF和Caspse-3蛋白水平低于HI组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肌肽可有效减轻HI后大鼠脑组织细胞凋亡,从而发挥神经保护作用.
