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五味子乙素对两种神经瘤细胞的抑制作用
目的 初步探讨不同浓度的五味子乙素(SchB)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞及C6胶质瘤细胞生长及增殖的影响.方法 体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞及C6胶质瘤细胞,分别以1～ 13 μmol/L SchB作用于SH-SY5Y细胞及C6细胞48 h.倒置显微镜下观察两种肿瘤细胞的形态学及数量变化,四唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的SchB对细胞生长增殖的影响,酶标仪检测各组吸光度.结果 与对照组相比,9～ 13 μmol/L SchB作用48 h均可引起SH-SY5Y细胞生长增殖抑制,1～7 μmol/L SchB对SH-SY5Y细胞没有毒性作用;而5μmol/L SchB即可对C6胶质瘤细胞的生长增殖产生抑制作用.结论 SchB对SH-SY5Y细胞及C6胶质瘤细胞的生长增殖均有明显的抑制作用,且C6胶质瘤细胞对SchB的增殖抑制作用更为敏感.
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内质网通路在氯胺酮致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用初探
目的 研究内质网通路在氯胺酮(Ketamine)致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用.方法 采用0.0、12.5、25.0、50.0和100.0 μg/ml的氯胺酮处理SH-SY5Y细胞48 h时,采用MTT比色法检测细胞的生长率;荧光探针检测细胞内活性氧;流式细胞仪检测细胞凋亡和胞内钙离子浓度;Western blot检测CHOP蛋白的表达量.结果 与空白对照组相比,所有氯胺酮处理组细胞活力均显著降低,活性氧显著升高(P ＜0.05或P＜0.01);胞内钙离子浓度和CHOP蛋白表达量,除12.5 μg/ml氯胺酮处理组外均显著升高(P＜0.05或P＜0.01).与未处理对照组相比,细胞凋亡率25.0、50.0和100.0 μg/ml氯胺酮处理组显著升高(P＜0.01).结论 一定浓度氯胺酮可通过内质网通路引起人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的发生.
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柴胡皂苷d对SH-SY5Y细胞生长增殖的影响
目的 初步探讨不同浓度的柴胡皂苷d(SSd)对SH-SY5Y细胞生长增殖水平的影响.方法 体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,分别以0～ 16 μmol/L SSd作用于SH-SY5Y细胞48 h,四唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的SSd对SH-SY5Y细胞生长增殖水平的影响,酶标仪检测各组吸光度.倒置显微镜下观察各组细胞数目、形态及活性的变化.结果 与对照组相比,2～6μmol/L SSd作用48 h对SH-SY5Y细胞的生长增殖没有明显影响;8～16 μmol/LSSd对SH-SY5Y细胞生长增殖具有明显的抑制作用,并且随着SSd浓度的升高,抑制作用不断增强.结论 一定浓度的SSd对SH-SY5Y细胞的生长增殖水平有明显的抑制作用.
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五味子甲素对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞毒性作用的影响
目的 初步探讨不同浓度的五味子甲素(SchA)对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞毒性的影响.方法 体外培养多巴胺能神经细胞SH-SY5Y,四唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的MPP+对SH-SY5Y细胞增殖的影响后,检测不同浓度的SchA对SH-SY5Y细胞的影响,筛选其无毒剂量后形态学及MTT法进一步观察一定浓度的SchA对MPP+引起的SH-SY5Y细胞毒性作用是否具有保护作用.结果 与对照组相比,0.1～1.5 mmol/L MPP+染毒48 h均可引起SH-SY5Y细胞生长增殖抑制；0.5 ～5 μmoL/L SchA对SH-SY5Y细胞没有毒性作用,其中2～5μmol/L SchA均可明显抑制MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用.结论 MPP+对SH-SY5Y细胞增殖有明显的抑制作用,而一定浓度的SchA能有效抑制MPP+的细胞毒性.
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内质网应激及其介导的凋亡在锰致神经毒性中的作用
目的 探讨内质网应激(ERS)及其介导的细胞凋亡在锰引起的神经毒性中的作用.方法 以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞为细胞模型,通过MTT比色法检测MnCl2对细胞存活的影响,流式细胞技术(FCM)检测MnCl2对细胞凋亡的影响,Western blot检测MnCl2作用后,细胞ERS分子伴侣BiP、Sigma-1受体(Sig-1R)、CHOP及凋亡相关蛋白Caspase-4表达的变化.结果 MnCl2可呈时间、剂量依赖性地降低细胞存活率,并诱导SH-SY5Y细胞凋亡；MnCl2上调ERS分子伴侣Bip、Sig-1R、CHOP及Caspase-4的表达.结论 MnCl2可诱导SH-SY5Y细胞发生ERS,早期的ERS对细胞具有保护性效应,持续的ERS通过上调CHOP和Cappase 12的表达介导细胞凋亡,这可能是锰神经毒性机制之一.
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MnCl2引起SH-SY5Y细胞内质网应激及Sigma-1受体的保护作用
目的 探讨内质网应激(ERS)及其介导的细胞凋亡在锰引起的神经毒性中的作用,进一步探讨Sigma-1R在锰致神经系统损害中的作用.方法 以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞为细胞模型,通过MTT比色法检测0.5、1、2、4、8和24 h处MnCl2对细胞存活的影响,流式细胞技术(FCM)检测上述时间段MnCl2对细胞凋亡的影响,Westernblot检测MnCl2作用上述时间后,细胞ERS分子伴侣GRP78、Sigma-1受体(Sigma-1R)、CHOP及凋亡相关蛋白Caspase-4表达的变化,Sigma-1R拮抗剂BD1047抑制其活性4和24 h后,检测细胞凋亡的情况.结果 MnCl2可呈时间、剂量依赖性地降低细胞存活率,并诱导SH-SY5Y细胞凋亡；MnCl2上调ERS分子伴侣GRP78、Sigma-1R、CHOP及Caspase-4的表达；加入拮抗剂BD1047后,在4和24 h细胞存活率明显下降.结论 MnCl2可诱导SH-SY5Y细胞发生ERS,ERS通过上调Sigma-1R的表达,增加细胞的存活率,这可能是预防锰神经毒性的机制之一.
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五味子甲素对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响
目的 初步研究不同浓度的五味子甲素(Schisandra A,SchA)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP+)引起的SH-SY5Y细胞凋亡的影响.方法 体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,1 mmol/L MPP+染毒同时分别给予1、3和5μmol/L SchA处理48 h,MuseTM细胞分析仪检测凋亡细胞数的变化;hoechst 33342染色后激光共聚焦显微镜进一步观察各组细胞形态的改变;Western-blot检测各组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化.结果 与对照组相比,1 mmol/L MPP+染毒48 h可引起SH-SY5Y细胞凋亡细胞数明显增多;1、3和5 μmol/L SehA干预可明显抑制1mmol/L MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,且随着SchA浓度的升高,凋亡细胞数明显减少.Western-blot实验结果显示,MPP+组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,而SchA于预组cleaved caspase-3蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 1 mmol/L MPP+可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,而一定浓度的SchA能有效抑制MPP+引起的SH-SY5Y细胞凋亡,且该作用可能是通过抑制caspase-3蛋白活化实现的.
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自噬参与锰诱导的SH-SYSY细胞毒性研究
目的 研究不同剂量的锰(Mn)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞生长增殖的影响以及诱导自噬的情况.方法 体外培养SH-SYSY细胞,以200～1 000 μmol/L MnCl2处理后进行四唑盐比色实验(MTT)观察MnCl2对细胞的抑制作用,MDC染色法检测自噬小泡形成情况,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Bclin-1的表达和活化情况.DCFH-DA染色检测活性氧(ROS)含量.结果 MTT结果 显示200～1 000 μmol/L MnCl2对细胞的生长增殖有显著的抑制作用.Western blot结果 显示MnCl2处理后LC3蛋白表达增加并且活化,Bcelin-1蛋白表达增加,细胞产生自噬小泡.与对照组相比,200、400和800 μmol/L MnCl2组ROS含量明显升高.结论 一定剂量的MnCl2对SH-SHY5Y细胞的生长增殖有明显的抑制作用,这一作用可能是通过破坏胞内氧化还原平衡导致ROS大量产生继而诱发细胞发生自噬性的死亡.
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BNIP3介导锰经线粒体凋亡途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡的研究
目的 探讨线粒体蛋白BNIP3在锰诱导线粒体依赖的SH-SY5Y细胞凋亡中的作用.方法 取对数生长期的入神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,经MnCl2处理24 h后应用透射电子显微镜直接观察MnCl2作用下SH-SY5Y细胞的凋亡情况,使用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞线粒体膜电位(△Ψm),通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测BNIP3及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达.并使用shRNA将SH-SY5Y细胞中的BNIP3沉默,观察BNIP3对MnCl2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡、线粒体膜电位丢失(△Ψm)及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响.结果 MnCl2可使线粒体膜电位逐渐丢失(F =49.061,P＜0.01)、并使线粒体蛋白BNIP3及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达随着MnCl2浓度的提高而上升(F=334.832,F=299.902,均P＜0.01)、明显增加SH-SY5Y细胞的凋亡小体个数,上述差异均有统计学意义.沉默BNIP3(F=1.301,P=0.318,t=32.647,P＜0.01)可以减少MnCl2诱导线粒体膜电位的丢失(F=1.786,P=0.252;t=20.290,P＜0.01),减少凋亡相关蛋白Caspase-3的表达(F=2.816,P=0.168;t =22.073,P＜0.01)并使SH-SY5Y凋亡小体的个数减少,上述差异均有统计学意义.结论 在MnCl2通过线粒体凋亡途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡的过程中BNIP3起到了重要作用,这种调控机制可能是锰产生神经毒性的作用机制之一.
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锰诱导SH-SY5Y细胞线粒体自噬
目的 探讨锰能否诱导SH-SY5Y细胞发生线粒体自噬.方法 以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞为模型,不同剂量的MnCl2处理细胞24 h,通过MTT法检测MnCl2对细胞存活率的影响,流式细胞仪检测MnCl2对细胞线粒体膜电位的影响,以Mito-Tracker Green和Lyso-Tracker Red荧光探针分别标记线粒体和溶酶体,激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体和溶酶体的共定位,以表征线粒体自噬.结果 MnCl2可剂量依赖性地降低SH-SY5Y细胞存活率,并降低细胞线粒体膜电位,MnCl2诱导细胞线粒体和溶酶体共定位.结论 MnCl2可诱导SH-SY5Y细胞发生线粒体自噬,线粒体自噬可能参与锰神经毒性机制.
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梓醇外泌体对低血清培养致人神经母细胞瘤（SH-SY5Y）细胞损伤的保护作用
目的：探讨梓醇外泌体对低血清培养致人神经母细胞瘤( SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用。方法梓醇80μmol/L预处理SH-SY5Y细胞72小时后,收集细胞上清液,聚合物沉淀法提取细胞上清液外泌体；乙酰胆碱酯酶法测定外泌体含量；将提取出的外泌体加入低血清培养的SH-SY5Y细胞中,24小时后,CCK-8法测定其细胞存活率。结果与空白对照组比较,梓醇给药组细胞外泌体分泌量明显增多(P<0.05)；与空白外泌体组比较,梓醇外泌体能明显升高细胞存活率(P<0.05)。结论梓醇可以促进SH-SY5Y细胞分泌外泌体,梓醇外泌体对低血清致SH-SY5Y细胞损伤有明显的神经保护作用。
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甘松对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及成分分析
目的 通过比较甘松不同提取物对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用,筛选活性部位并进行成分分析.方法 采用体外细胞培养法,建立6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞帕金森模型.MTT法检测甘松不同提取部位对6-OHDA诱导损伤的SH-SY5Y细胞活力的影响,计算抑制率;进一步观察细胞形态明确活性提取部位对细胞生长的影响.采用 GC-MS技术对该部位进行化学成分分析.结果 甘松石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及乙醇部位均能抑制6-OHDA所致的SH-SY5Y细胞损伤,提高细胞存活率,其中石油醚部位的保护作用强,从该部位中分离鉴定出22个成分,主要为倍半萜类化合物.结论 甘松不同提取部位对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤均有一定保护作用,其中石油醚部位活性较强,主要成分为倍半萜类化合物.
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连二亚硫酸钠诱导SY5Y细胞缺糖缺氧模型及泽泻白术药对的作用观察
目的:建立连二亚硫酸钠(Na2S2O4)诱导SH-SY5Y神经细胞缺氧缺糖损伤模型,进行提取物筛选,对筛选出的有活性提取物初步探讨其对神经细胞的保护作用.方法:CCK-8检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放,超氧化歧化酶活性(SOD),丙二醛含量(MDA),荧光探针负载法检测细胞内活性氧(ROS)和细胞内钙离子([Ca2+]i)荧光强度.结果:连二亚硫酸钠诱导SH-SY5Y细胞损伤模型上进行提取物初筛,发现泽泻白术药对提取物有一定活性.与模型组比较,提取物组细胞的LDH释放降低,SOD活性升高,MDA含量降低,细胞内ROS水平和[Ca2+]i荧光强度均减弱.结论:泽泻白术药对提取物对连二亚硫酸钠致SH-SY5Y神经细胞损伤有一定的脑保护作用.
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39个中药材提取物对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用筛选研究
目的:以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,建立β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导细胞损伤的阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)体外细胞筛选模型,并将其应用于筛选39个中药材提取物中的抗神经细胞损伤活性组分.方法:采用CCK-8法进行活性初筛,CCK-8法和Hoechst33342/PI双染色分析法复筛活性组分.结果:初筛和复筛结果一致表明,39个药材提取物中黄柏40％乙醇部位(HB40)和95％乙醇部位(HB95)有较好的抗Aβ损伤活性.结论:提示黄柏有潜在的治疗抗阿尔茨海默病的药用价值.
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牵正散合大补阴丸对MPP+诱导的SH-SY5 Y细胞帕金森病模型线粒体的保护作用
目的：探讨牵正散合大补阴丸（ QZS&DBYW）对1-甲基-4-苯基吡啶（ MPP+）诱导的帕金森病（ PD）细胞模型线粒体的影响，为深入探讨中药防治PD提供实验依据。方法选择人多巴胺能神经母细胞瘤SH-SY5Y，用MPP+处理建立PD细胞模型，采用QZS&DBYW干预。CCK-8法检测各组细胞存活率，MitoTracker Red CMXRos（ MTR）对活细胞线粒体标记，共聚焦显微镜观察，ImageJ软件测量线粒体形态因子和长宽比。结果 MPP+处理后细胞存活率有明显下降， QZS&DBYW干预不会明显改变细胞存活率。相较于空白对照组，模型组细胞出现大量空泡，线粒体长宽比显著降低，线粒体碎片明显增多。单独施用低浓度QZS&DBYW后线粒体分支增加，而高浓度中药使线粒体更为短小。低浓度QZS&DBYW治疗组可增加PD细胞的线粒体长度。结论牵正散和大补阴丸两方合用可减少线粒体的碎裂，在一定程度上对PD细胞模型线粒体有一定保护作用。
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芦丁对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用
目的:研究芦丁对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤模型,实验分为空白组,MPP+损伤模型组,芦丁干预组.模型组用1 mmol·L-MPP+处理细胞48 h,干预组在MPP+损伤基础上,给予不同质量浓度芦丁(50,100,200,300 mg·L-1).噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Hoechst 33342染色观察细胞核形态变化;2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针标记法观察细胞内活性氧(ROS)的变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞色素C(Cyt-C)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组中细胞活性显著降低(P＜0.01),Hoechst 33342染色下可见细胞胞体变小、核皱缩,细胞ROS显著升高(P＜0.01),线粒体膜电位显著降低(P＜0.01).Western blot结果表明,模型组Cyt-C含量升高(P＜0.01),p-ERK1/2水平降低(P＜0.01).与模型组比较,预先4h给予不同浓度的芦丁(100,200,300 mg·L-1)能明显改善SH-SY5Y细胞的活性(P ＜0.05,P＜0.01),抑制ROS升高(P＜0.01),并恢复线粒体膜高能电位(P＜0.05).Western blot结果显示,芦丁能够抑制MPP+引起的Cyt-C蛋白升高(P＜0.01)和p-ERK1/2蛋白降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:芦丁对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著的保护作用,其机制可能与抗氧化应激有关.
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土家药延龄草抗SH-SY5Y细胞谷氨酸损伤有效部位筛选研究
目的:筛选土家药延龄草中抗SH-SY5Y细胞谷氨酸(Glu)损伤的有效部位.方法:Bliss法测定延龄草不同部位提取物的1％致死量(LD1)和半数致死量(LD50),建立Glu损伤SH-SY5Y细胞模型,筛选延龄草中抗SH-SY5Y细胞Glu损伤的有效部位,以形态学、细胞存活率和LDH漏出率为指标评价延龄草有效部位对Glu损伤细胞的保护作用.结果:TTM1为抗SH-SY5Y细胞Glu损伤的有效部位,能显著改善Glu损伤细胞的形态,5.0、10.0、20.0μg/mL的TTM1提高损伤细胞的存活率(P＜0.05,P＜0.001),2.5、5.0、10.0、20.0μg/mL的TTM1可显著降低损伤细胞的LDH漏出率(P＜0.05,P＜0.001).结论:延龄草TTM1对Glu损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用.
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干姜、大黄、丹参水提物对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的药性学比较研究
目的:研究干姜、大黄、丹参水提物对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响.方法:体外培养SH-SY5Y细胞,建立Aβ25-35致SH-SY5Y细胞凋亡的模型,同时给予干姜、大黄、丹参水提物进行干预.应用MTT比色法检测细胞活力、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:50 μmol·L-1 Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞72 h,MTT值降低到(65.69±3.26)％,凋亡率增加到(45.17±3.84)％(P＜0.01 vs.control).干姜水提物能明显改善以上凋亡特性,显著升高MTT值,降低凋亡率；大黄和丹参水提物则对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡无保护作用.结论:干姜对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的保护作用,而大黄和丹参却无此保护作用,中药药性不同,其抗凋亡作用亦不同.
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三七皂苷R1对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用
目的:探讨三七皂苷R1对Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护机制.方法:MTT法检测细胞存活率;PI/Annexin V双染流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中Bax,Bcl-2的表达;ELISA法检测caspase-3,caspase-8及caspase-9的酶活性.结果:6.25,12.5,25,50,100 nmol·L-1的三七皂苷R1对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡均有一定保护作用,并呈剂量依赖关系;PI/Annexin V双染流式细胞术检测结果表明Aβ1-42可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,6.25～ 100 nmol·L-1的三七皂苷R1可显著降低细胞凋亡率.Westem blot结果显示,6.25～100 nmol·L-1的三七皂苷R1可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;ELISA分析显示不同剂量的三七皂苷R1可抑制Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞caspase-3和caspase-9的激活,但对caspase-8的激活没有影响.结论:三七皂苷R1通过抑制线粒体相关的凋亡通路激活,减少Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡.
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伴侣自吞噬在MPP+损伤的SH-SY5Y细胞中的影响及葛根素的干预作用
目的:研究葛根素通过分子伴侣自吞噬途径保护MPP+损伤的SH-SY5Y细胞.方法:以1 mmol·L-1 MPP+损伤SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型.采用CCK-8染色检测不同浓度的葛根素对MPP+损伤的SH-SY5Y细胞存活率的影响;透射电镜、AO染色观察自噬体的形成及检测溶酶体活性的变化;RT-PCR检测Lamp2a,Hsc70 mRNA表达的变化,Western blotting法检测细胞内Lamp2a,Hsc70,α-synuclein蛋白的表达.结果:在12.5 ～ 50.0 μmol·L-1,预先30 min加入葛根素可以保护SH-SY5Y细胞抵抗MPP+诱导的损伤,并呈一定的量效关系;AO染色和电子显微镜检测25.0,50.0μmol·L-1葛根素作用于1 mmol · L-1MPP+损伤的SH-SY5Y细胞,细胞内出现自噬体,并且随着葛根素剂量的增加,胞质中形成的自噬体增多;流式细胞术检测结果显示50.0 μmol·L-1葛根素可以拮抗1 mmol·L-1 MPP+诱导的SH-SY5Y细胞内ROS水平的增加,阻止氧化损伤的发生;RT-PCR和Western blotting结果表明在12.5～50.0 μmol·L-1葛根素通过上调细胞内Hsc70,Lamp2a mRNA和蛋白水平保护MPP+造成的SH-SY5Y细胞损伤并抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞α-synuclein蛋白的积聚.结论:葛根素可以拮抗MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其保护机制可能与干预分子伴侣自吞噬途径有关.
