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酶联免疫吸附试验在食品检测中的应用分析
酶联免疫吸附技术的出现是在20世纪60年代,由免疫荧光和组织化学共同发展的一种新型的技术,初期知识用酶来代替在生物组织中标记抗体的荧光素,对其中的抗原进行鉴定和定位.随着科学技术的不断发展,酶联免疫吸附技术也逐渐的在免疫扩散和免疫电泳板的沉淀线做鉴定.1971年期间, Engvall等人利用碱性的磷酸酶标记了抗原或者抗体,建立了酶联免疫吸附技术检测系统,这一技术的建立成为了血清学实验历史中的一场革命,是十分有发展前景的新技术.酶联免疫吸附技术也是固相酶免疫测定技术中的一种.
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微量离心柱法与亲和交叉免疫电泳法检测甲胎蛋白异质体的研究
目的 比较微量离心柱法和亲和交叉免疫电泳自显影法两种方法 检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)对甲胎蛋白阳性的良恶性肝病鉴别诊断价值.方法 采用微量离心柱法和亲和交叉免疫电泳自显影法分别分析102例原发性肝癌、41例慢肝及肝硬化血清中的AFP-L3比率,比较2种方法 检测AFP-L3%对良恶性肝病鉴别诊断价值.结果 微量离心柱法和亲和电泳法对102例原发性肝癌AFP-L3%的敏感性分别是79.4%、91.2%.对41例慢肝、肝硬化AFP-L3%的特异性分别为70.7%、29.3%.亲和电泳法、微量离心柱法两种方法 检测肝癌的符合率分别为76.9%、73.4%,在ROC曲线下的面积AUC分别为0.791、0.758.4例AFP低值的原发性肝癌,采用亲和电泳方法 检测均为阴性,而采用微量离心柱方法 检测均为阳性.结论 微量离心柱法检测AFP-L3不仅操作简便、省时,而且比传统亲和电泳方法 更适合于AFP阳性良恶性肝病的鉴别诊断.
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血清蛋白电泳M蛋白阴性的骨髓瘤患者的特征学研究
目的:探讨血清蛋白电泳未检出单克隆条带,而免疫固定电泳可以检测出单克隆条带的多发性骨髓瘤患者的疾病的分型以及其生化指标的变化.方法:应用琼脂糖凝胶电泳方法和免疫沉淀方法对待测标本进行血清蛋白电泳和免疫固定电泳检测;应用全自动生化分析仪进行生化项目检测.结果:(1)实验组的骨髓瘤患者免疫固定电泳分型中,游离λ链显著高于对照组(P=0.04);(2)实验组和对照组与健康对照组相比,α2/α1比值显著升高(P=0.046,P=0.00);(3)实验组血清总蛋白和白蛋白水平显著低于对照组(P=0.00),实验组血清钙离子水平显著高于对照组(P=0.012).结论:α2/α1比值升高,总蛋白和白蛋白水平可能正常或下降,总血磷升高的怀疑为多发性骨髓瘤的患者,应推荐做免疫固定电泳检测.
关键词： 多发性骨髓瘤/血液/诊断 血蛋白电泳 免疫电泳 人类 -
免疫固定电泳法的应用--检测本-周氏蛋白
目的通过免疫固定电泳法实验检测非浓缩尿中本-周氏蛋白,并与传统检测方法-热沉淀反应法比较.方法对116例临床申请本-周氏蛋白检测的尿标本分别以免疫固定法和热沉淀反应法检测尿中本-周氏蛋白,并对20例免疫固定法检出本-周氏蛋白呈阳性的病人的尿液做尿蛋白分型定性.结果 116例标本用免疫固定电泳法测定,20例(17.24%)呈本-周氏蛋白阳性,其中8例属于κ型、12例属于λ型;用加热法测定全为阴性.20例免疫固定电泳法中本-周氏蛋白阳性的病人尿液蛋白定性呈-～++之间.结论利用免疫固定电泳法测定尿中本-周氏蛋白,具有特异性和高灵敏度,其技术作为筛选和确认本-周氏蛋白方法而受到推荐.热沉淀反应法则因检测过程中的影响因素太多,而应被取代.
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不同检测条件影响冷球蛋白检测结果的实验研究
目的：本研究拟通过实验观察不同检测条件对冷球蛋白定性及定量检测的影响。方法准备5例不同类型冷球蛋白血症患者的血标本，分别观察不同温度（37℃和常温20～25℃）、不同观察时间（3 d及7 d）及不同采血量（5 ml及20 ml）对冷球蛋白定性及定量检测的影响；在此基础上进一步进行冷球蛋白的分型和其他成分的检测。结果（1）分别在37℃和常温进行采血、凝血和分离血清，结果两组冷球蛋白的定性检测均为阳性，但定量检测中，常温组冷球蛋白的浓度较37℃组下降明显；（2）与观察7 d相比，仅观察3 d可能使冷球蛋白的定性检测出现假阴性，定量检测出现浓度下降；（3）与采血20 ml相比，采血5 ml可能导致冷球蛋白的定性检测出现假阴性，定量检测出现浓度下降；（4）纯化后的冷球蛋白可通过免疫固定电泳法分型，并可进一步检测其中的相关成分，有助于判断冷球蛋白的病因。结论冷球蛋白血症的诊断关键是血清冷球蛋白阳性，不同的温度、观察时间和采血量均可能对冷球蛋白的检测有影响；此外，还通过免疫固定电泳和免疫学、病毒学检测，对冷球蛋白分型和进一步寻找病因。（中华检验医学杂志，2016，39：901－905）
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血清免疫固定电泳在骨髓瘤肾脏病患者诊断中的意义
目的评价血清免疫球蛋白定量、血清蛋白电泳和血清免疫固定电泳在骨髓瘤肾病诊断和鉴别诊断中的敏感性和准确性.方法对41份骨髓瘤肾病和36份其他肾功能损害患者的血清标本,采用血清免疫球蛋白定量、血清蛋白电泳和血清免疫固定电泳同时进行检测,求其单克隆免疫球蛋白的检出率,并将结果用SPSS10.0统计软件进行分析,以此来评价方法的敏感性和准确性.结果免疫球蛋白定量不能检出单克隆成分;血清蛋白电泳对IgG和IgM型骨髓瘤检出率达100%,其他型有较大缺陷,准确性及假阳性率无法判定.除不分泌型骨髓瘤外,免疫固定电泳对表现为肾功能损害的各型骨髓瘤检出率达100%,准确性100%,对照组无一假阳性.对照组与骨髓瘤肾病组比较差异有显著意义(P<0.01).3种方法进行两两比较,相互间差异均有显著意义(P<0.01).结论血清免疫固定电泳较血清蛋白电泳和血清免疫球蛋白定量,在诊断和鉴别诊断骨髓瘤肾损害中有较高的敏感性和准确性,应作为肾脏疾病的常规检查项目在临床使用.
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凝集素亲和电泳-免疫印迹法检测甲胎蛋白变异体
甲胎蛋白(AFP)是一个公认的肝细胞癌(HCC)标记物.然而,部分慢性肝炎、肝硬化等良性肝病亦可合成少量AFP.由于糖基化过程的差异,不同疾病状况下肝细胞分泌的AFP 在糖链结构上并不相同.为了鉴别AFP是产生于恶性肝癌细胞还是良性肝病细胞,人们已建立多种 AFP糖链变异体测定方法.新近的报告表明, AFP糖链变异体测定还有助于HCC复发转移的监测和预后的判断[1,2].我们在已建立的凝集素亲和免疫电泳自显影法[3]的基础上,又建立了操作更简便、敏感度更高的凝集素亲和电泳-免疫印迹法,并初步用于良恶性肝病的AFP糖链变异体检测.
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亚低温影响受损神经元蛋白质组改变的研究
目的 利用神经元损伤模型和蛋白双向凝胶电泳技术研究亚低温脑保护机制.方法 细胞裂解液浸融法建立神经元损伤模型,分别置于33℃和37℃温控培养箱中培养,测定培养上清液中乳酸脱氢酶含量,TUNEL细胞凋亡法比较两种培养温度下细胞凋亡情况.提取细胞总蛋白,蛋白双向凝胶电泳技术筛选差异蛋白质点,质谱分析法完成蛋白鉴定,Western blot方法进行蛋白质确认,统计学方法解析检测结果.结果 处于亚低温培养条件下的受损神经细胞乳酸脱氢酶水平和发生原位凋亡的细胞数量均明显低于37℃培养组(p＜0.05).利用双向凝胶电泳共筛选出14个差异蛋白质点,其中12个得到有效认证,它们参与细胞能量代谢、再生、氧化应激等多种病理生理过程.结论 亚低温通过干预调节细胞能量代谢、再生、氧化应激等多个分子事件发挥肯定的神经保护作用.
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L-肌肽对大鼠硒性白内障的影响
目的 研究L-肌肽防治大鼠硒性白内障的作用.方法 实验研究.用亚硒酸钠制作大鼠白内障模型,分为3组,每组9只,分别用50 g/L、20 g/L的L-肌肽滴眼液及生理盐水滴眼3周,观察大鼠晶状体变化情况.将大鼠白内障晶状体体外培养,分别加入1.00、0.10及0.01 g/L的L-肌肽无血清营养液,培养1周,观察大鼠晶状体变化.再将培养的大鼠白内障晶状体进行双向电泳实验.采用方差分析对各组间的均数进行比较.结果 大鼠用药1周,50g/L、20g/L的L-肌肽组和对照组的晶状体病变度数分别为2.22±0.65、2.39±0.98及2.83±0.38;50 g/L的L-肌肽组病变轻于对照组,差异有统计学意义(P=0.013).用药2周和3周,3组间晶状体病变差异无统计学意义(P>0.05).大鼠自内障晶状体培养1周,1.00、0.10及0.01 g/L的L-肌肽组晶状体病变与对照组差异无统计学意义(P>0.05).双向电泳结果显示:药物组蛋白总数为182,对照组为161,药物组高相对分子质量蛋白数量减少,低相对分子质量蛋白数量增多.结论 50 g/L的L-肌肽可抑制大鼠白内障早期病变的发展;肌肽在体外可使大鼠白内障品状体蛋白发生变化,对白内障晶状体病变程度作用不明显.
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尿微量蛋白检测的临床应用及意义
近年来尿微量蛋白的测定越来越受到重视,可帮助评估肾脏的损害程度,肾小管损伤,亦是可靠生化指标,能早期发现亚临床肾脏疾病[1].尿微量蛋白是尿中某些蛋白质的排泄呈亚临床升高,常规定性或定量方法难以检测的一种病理现象.当尿中出现微量蛋白,可反映肾脏结构与功能的轻度或早期受损.临床上尿微量蛋白检测对糖尿病和高血压引起的早期肾功能改变具有重要的诊断价值.常用测定方法包括速率散射比浊、放射免疫、免疫电泳、固相荧光免疫及酶联免疫吸附试验等.
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应用双向电泳、免疫印迹和质谱技术筛选子宫内膜异位症标志物
目的:寻找子宫内膜异位症标志物.方法:提取子宫内膜异位症和非内膜异位症子宫在位内膜总蛋白后,用双向电泳技术进行分离,Phoretix 2D软件分析凝胶图像,经数据库查询初步鉴定差异表达蛋白质.卵巢子宫内膜异位症(巧克力囊肿)组织总蛋白双向电泳后转膜,用患者血清和正常血清作为一抗行Western blot检测,比较杂交蛋白点的差异,取差异点用MALDI-TOF-MS分析,根据其肽质量指纹图谱进行数据库查询,鉴定抗原.结果:经优化条件,获得了内膜异位症和对照组的在位内膜总蛋白分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,并分析出11个差异点.利用Western blot方法比较正常人血清和患者血清与子宫内膜异位症总蛋白的杂交点,取其中3个差异点测质谱分别为波形蛋白、β-肌动蛋白、ATP合成酶β亚单位.结论:子宫内膜异位症在位内膜蛋白质表达谱与非内膜异位症者相比发生了变化,抗子宫内膜抗体可能针对波形蛋白、β-肌动蛋白、ATP合成酶β亚单位而产生.
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不同时期大动脉炎患者血浆差异表达蛋白的变化
目的 在血浆中筛选与大动脉炎疾病和时期相关的血浆差异表达蛋白.方法 提取各20例大动脉炎急、慢性期患者和20例健康者的血浆进行蛋白双向凝胶电泳,计算机图像软件分析筛选差异性表达的蛋白点,基质辅助激光解析电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱鉴定差异表达蛋白.并对部分蛋白采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中的含量.结果 筛选鉴定出疾病差异表达蛋白14种,包括血清淀粉样蛋白A,血清淀粉样P物质,纤维蛋白原,C3c,C4a,C7,C4结合蛋白,补体因子H-相关蛋白1,α-1酸性糖蛋白,重组激活基因蛋白1(RAG1),载脂蛋白A-Ⅰ、Ⅳ,α1-微球蛋白,转甲状腺素蛋白,结合珠蛋白;其中与大动脉炎不同时期相关的蛋白有血清淀粉样蛋白A、纤维蛋白原、转甲状腺素蛋白、结合珠蛋白.在ELJSA检测中,急性期患者血清中血清淀粉样蛋白A水平(中位数95.9 mg/L)和显著高于慢性期(中位数49.2 mg/L,P=0.009)和健康对照组(中位数23.9 mg/L,P=0.001).急性期补体C4结合蛋白C4BP(中位数88.5 mg/L)显著高于慢性期(中位数61.7mg/L,P=0.023)和正常对照(中位数32.6 mg/L,P=0.001).结论 大动脉患者血浆有多种免疫有关蛋白和急性时相蛋白的表达,有可能用于疾病不同时期的判定;补体激活,补体调节蛋白和自身抗体的产生均参与大动脉炎的免疫病理机制,对这些蛋白的进一步研究有助于阐明大动脉炎的病理机制.
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消化性溃疡、胃炎与胃癌患者幽门螺杆菌蛋白质组的差异分析
目的 初步确定胃癌和消化性溃疡、胃炎幽门螺杆菌(Hp)的差异蛋白质.方法 通过从胃镜活检胃黏膜组织中分离培养Hp,应用裂解液、超声破碎法提取Hp菌体蛋白质后经Bradford法进行菌体蛋白质定量,采用双向电泳方法获得Hp菌体蛋白质图像,运用ImageMaster5.0版图像分析软件找到胃癌与消化性溃疡、胃炎Hp的差异蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)和四极杆飞行时间电喷雾串联质谱(Q-TOF)鉴定差异蛋白质.后,通过WWW.matrixscience.com,从mascot数据库检索差异蛋白质.结果 选择胃癌、消化性溃疡和胃炎Hp各3例进行双向电泳,与胃溃疡和胃炎相比,胃癌Hp中有4个蛋白质点高表达,质谱鉴定结果为硫氧还蛋白、腺苷酸激酶、单链DNA结合蛋白和核糖体蛋白,50 S,L7/L12,其Mowse分值分别为94、286、139和132,序列覆盖率分别为77%、33%、33%和28%.结论 硫氧还蛋白具有抗氧化和抑制细胞凋亡的功能,可能与Hp的致癌作用相关,蛋白质组学研究在Hp与胃癌关系的研究领域有广泛的应用前景.
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全身性淀粉样变性病合并左股骨干骨折一例报告
患者女,60岁.以左股骨干病理性骨折于2003年12月20日入院.患者于1991年行右下颌骨肿物切除,病理诊断为骨纤维异常增殖症.1998年因肋骨骨折在拍摄胸部X片时发现双肺广泛结节状阴影,未作进一步诊治.2000年为确定双肺广泛结节状阴影性质再次入院,病理活检示支气管炎,未见肿瘤细胞.此次入院后查体:呈贫血貌,体形消瘦,轻度驼背,全身未扪及肿大淋巴结,右下颌角原手术切口处有一与下颌骨相连的较大的骨性肿物,左下肢股骨干骨折.X线片示左股骨干病理性骨折、骨质疏松(图1).胸部X线片示双肺弥漫性结节影(图2).拟诊为下颌骨肿瘤广泛肺及骨转移或肺癌骨转移合并左股骨干病理性骨折.EKG示左心室高电压,ALP 420U/L;RBC 3.18×1012/L,HG 96 g/L;免疫电泳Gamma蛋白24.5%;骨髓穿刺未见恶性浆细胞.
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应用不同材质容器对硝酸银染色效果的影响
目的:比较使用不同材料的染色容器对蛋白质十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)银染显色速度及效果的影响.方法:以小鼠脑蛋白的SDS-PAGE为材料,凝胶分别在玻璃平皿、医用搪瓷盘和密胺塑料盘中进行银染,参照常规银染方法;同时采用一种优化的银染方法作为对照,在医用搪瓷盘中进行.银染后蛋白条带用Quantity One凝胶定量软件进行灰度值分析.结果:常规方法银染的凝胶,在玻璃平皿中显色快,蛋白条带灰度值高;在医用搪瓷盘中显色速度及灰度值均次之;在密胺塑料盘中显色速度及灰度值低.对照优化方法银染的凝胶,显色速度和蛋白条带灰度值远高于常规银染的凝胶.结论:对于小鼠脑蛋白的SDS-PAGE银染,常规方法中,用玻璃平皿效果好,医用搪瓷盘次之,密胺塑料盘差.优化方法可以大大提高用医用搪瓷盘银染的效果.
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免疫固定电泳技术在多发性骨髓瘤单克隆免疫球蛋白检测中的应用
目的 探讨应用免疫同定电泳技术检测多发性骨髓瘤单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的意义.方法 采用琼脂糖凝胶免疫固定电泳技术检测261份临床送检血清和尿液,其中76例为多发性骨髓瘤患者.结果 76例多发性骨髓瘤患者血清M蛋白阳性76例,阳性率为100%;尿本周蛋白阳性53例,阳性率为70%.17例血清M蛋白为轻链型患者尿本周蛋白阳性率为94%.185例非多发性骨髓瘤患者均未检出M带.结论 免疫固定电泳检测M蛋白的技术对诊断多发性骨髓瘤具有高度的敏感性和特异性,是M蛋白定性和分型的首选方法 .
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胱抑蛋白C在腰椎间盘突出症患者脑脊液中的改变可否作为神经源性疼痛的标志物?
目的:对有坐骨神经痛的腰椎间盘患者脑脊液进行蛋白质组学分析,找出改变明显的蛋白质,揭示其与神经源性疼痛的关系.方法:选择2004-05/09在上海交通大学附属第六人民医院骨科住院的有坐骨神经痛的突出型腰椎间盘突出症患者10例作为腰椎间盘突出症组,每例取2 mL脑脊液,与对照组10例志愿者的脑脊液标本经丙酮沉淀后,依次进行等电聚焦和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳;将所得凝胶银染后扫描,用PDQuest图像分析软件(Bio-Rad)进行处理,找到表达上差异明显蛋白质,进行质谱鉴定.结果:20例均进入结果分析.①在双向电泳图谱上有15个蛋白质的表达在两组间存在明显差异.其中9个蛋白质在腰椎间盘突出症组表达升高,6个降低.②用液相色谱-电喷雾离子阱-质谱鉴定其中改变明显的蛋白质为胱抑蛋白C.③酶联免疫吸附试验证实在腰椎间盘突出引起坐骨神经痛患者的脑脊液中,胱抑蛋白C的浓度明显高于对照组[(2.93±0.49),(2.26±0.34)mg/L,P＜0.01].结论:胱抑蛋白C在有坐骨神经痛的腰椎间盘突出症患者的脑脊液中的浓度明显升高,可以作为反映神经源性疼痛的一种标记物.
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美施康定治疗多发性骨髓瘤重度疼痛1例
1病历摘要患者女性,69岁.1999年11月无明显诱因出现左下肢胀痛,伴腰痛.2001年6月上述症状逐渐加重,并出现右下肢、髋关节疼痛,乏力,行走困难.2001年7月于北京协和医院作骨髓穿刺:骨髓增生活跃,M:E=4.3:1,粒系比例增高,余未见异常.同时作血清免疫电泳及本周氏蛋白,均为阴性.查体:脊柱呈正常生理弯曲,L3、L4、L5、S1轻度压痛,右侧胫骨压痛阳性,右下肢活动受限.腰椎CT提示:L3、L4、L5、S1椎体病变,转移瘤可能性大.于中国医科大学第一附属医院作骨ECT提示:(1)多发性骨髓瘤?(2)骨质疏松.2002年2月入我院后复查:血红蛋白91g/L,红细胞计数4.24×1012/L,血沉140mm/h,碱性磷酸酶416U/L;乳酸脱氢酶LD3峰值>LD1峰值,β2微球蛋白升高达2790U/L.骨X光片:多发性溶骨性破坏.2002年3月20日在我院再次做骨活检,诊断:多发性骨髓瘤合并骨髓纤维化.患者入院以来自诉疼痛明显,以左下肢为重,不能行走,需坐轮椅,严重影响睡眠.按WHO颁布NRS分级法,该患者疼痛可判定为8分(重度),患者入院前曾口服去痛片1.0g,3次/d,强痛定片60mg/d,达半年以上,疼痛无明显减轻.
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A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量测定方法的建立
目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌(meningococcus,Men)多糖疫苗(groups A,C,Y,W135 menignococcal polysaccharide vaccine,MPV4)多糖含量的火箭免疫电泳(rocket immunoelectro-phoresis,RIE)法.方法 分别用A、C、Y、W135群Men菌液,A、C、Y、W135群Men菌液加弗氏佐剂,A、C、Y、W135群Men多糖-牛白蛋白结合物免疫家兔,制备特异性抗血清.将制备的抗血清以一定的比例加入琼脂糖凝胶制成平板,并将纯化的多糖作为定量参考品加入抗原孔进行RIE.以多糖含量和对应的RIE峰高作标准曲线并建立直线回归方程.采用优化的RIE法测定MPV4多糖含量和分子大小.结果 菌液加佐剂制备的抗血清效价较理想.在确定的电泳条件下,建立的RIE法制备的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数值均>0.98.该法特异性较好,未检出各多糖间的交叉反应.采用该法测定的3批MPV4的多糖含量、分子大小及回收率均与先前的检定结果相符,均符合质控标准.结论 建立的RIE法可作为MPV4多糖抗原含量的测定方法.
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火箭免疫电泳法定量检测4价脑膜炎球菌多糖疫苗中C群脑膜炎球菌多糖含量的方法学验证
目的 验证用火箭免疫电泳法(rocket immunoelectrophoresis,RIE)检测4价脑膜炎球菌多糖疫苗(tetravalent serogroup A/C/W135/Y meningococcal polysaccharide vaccine,MPV4)中C群多糖含量的可靠性.方法以系列浓度的C群多糖溶液为标准,采用RIE对MPV4中C群多糖含量进行重复测定.结果佳线性范围为30～86 mg/L,相关系数(r)均大于0.985;MPV4与C群多糖参比品的剂量反应曲线之间具有良好的平行性;在精密度试验中,试验内CV为6.08%～8.07%,试验间CV为7.24%～9.19%;A、W135和Y群多糖及乳糖不引起非特异性免疫反应.结论本法的线性、精密度和专属性均符合验证要求,可作为定量检测MPV4中C群多糖含量的方法.
